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金钱鱼MHC Ⅱ β基因结构、多态性与组织表达分析 被引量：5
1
作者 王晓冰 刘至治 +2 位作者 李强 张璐菲 张俊彬 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期21-33,共13页
为探究金钱鱼（Scatophagusargus）MHCⅡβ基因的结构和特性，采用同源克隆和RACE等技术，在获得cDNA全序列的基础上，分析其内含子序列、基因多态性和组织表达情况。结果表明，金钱鱼MHCⅡβ基因cDNA序列全长1172bp，其中5＇UTR长34bp... 为探究金钱鱼（Scatophagusargus）MHCⅡβ基因的结构和特性，采用同源克隆和RACE等技术，在获得cDNA全序列的基础上，分析其内含子序列、基因多态性和组织表达情况。结果表明，金钱鱼MHCⅡβ基因cDNA序列全长1172bp，其中5＇UTR长34bp，3＇UTR长388bp，开放阅读框（ORF）长750bp，编码249个氨基酸，包含信号肽、B1结构域、p2结构域、连接肽（CP）、跨膜区（TM）和胞质区（cYT）；MHCⅡβ基因由6个外显子和5个内含子组成，其中内含子3将p2结构域分开。从43尾金钱鱼的209个有效克隆中，获得209条不同的核苷酸序列，可归为48个等位基因主型，分别命名为Scar-DXB＊0101～Scar-DXB＊4801，揭示金钱鱼MHCⅡβ基因的多态性很丰富。RT-PCR检测发现，金钱鱼MHCIIB基因在所检测的11种组织中均有表达，其中在脾、鳃、肠和皮肤中表达量较高，在肾、胃、心脏表达量中等，而在眼、脑、肝、肌肉中表达量较低。对健康金钱鱼人工感染嗜水气单胞菌后，发现其MHCIID基因在肝、脾、鳃、肾等组织中的表达量均发生了不同程度的变化，证明该基因在金钱鱼免疫反应中有重要作用。在NJ法构建的系统树中，金钱鱼与舌齿鲈、大西洋鲑等硬骨鱼类的亲缘关系相对较近，而与铰口鲨、原鸡、小鼠、人等的亲缘关系则依次渐远。 展开更多
关键词 金钱鱼 mhc ⅱβ基因 基因结构 多态性 组织表达
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卵形鲳鲹MHCⅡβ基因的克隆与表达分析 被引量：5
2
作者 于文博 朱克诚 +4 位作者 郭华阳 张楠 孙潇潇 吴娜 张殿昌 《南方水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期69-79,共11页
为探究卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)的结构和作用,利用RACE技术克隆获得MHCⅡβ基因的全序列,其长度为1 472 bp,开放阅读框(ORF)747 bp,编码248个氨基酸,分为信号肽区、肽... 为探究卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)的结构和作用,利用RACE技术克隆获得MHCⅡβ基因的全序列,其长度为1 472 bp,开放阅读框(ORF)747 bp,编码248个氨基酸,分为信号肽区、肽结合区、Ig样区、跨膜区、胞质区。通过NJ法构建的系统进化树分析显示卵形鲳鲹独立聚为一支,与其他鱼类亲缘关系较近,与两栖类和哺乳类的亲缘关系较远。利用同源性比对发现其与大口黑鲈(Micropterus salmoides)亲缘关系较近,同源性达到79%。qRT-PCR分析表明MHCⅡβmRNA在卵形鲳鲹13个组织中均有表达,在脾和头肾中表达量较高,在鳍中表达量最低。感染美人鱼发光杆菌(Photobacterium damselae)3 h后,卵形鲳鯵MHCⅡβmRNA在肠中显著上调表达;感染12 h后在肝中上调表达;感染24 h后在脾和头肾中显著上调表达,以上研究表明MHCⅡβ基因参与了卵形鲳鲹的免疫反应。 展开更多
关键词 卵形鲳鲹 mhcⅱβ 序列分析 基因表达
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稀有鮈鲫MHCⅡβ基因克隆及鲁氏耶尔森菌感染后的表达分析
3
作者 郑宗林 张进 +6 位作者 徐靖琳 刘伟 于文博 方媛林 张景森 段聪 周朝伟 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期147-156,共10页
为探究稀有鮈鲫MHCⅡβ基因的分子特征及其表达特点,采用PCR扩增技术获得了稀有鮈鲫MHCⅡβcDNA序列810 bp,包括开放阅读框(ORF)759 bp,编码252个氨基酸。生物信息分析表明,MHCⅡβ氨基酸序列存在4个保守的半胱氨酸残基和GXXGXXXGXXXXXX... 为探究稀有鮈鲫MHCⅡβ基因的分子特征及其表达特点,采用PCR扩增技术获得了稀有鮈鲫MHCⅡβcDNA序列810 bp,包括开放阅读框(ORF)759 bp,编码252个氨基酸。生物信息分析表明,MHCⅡβ氨基酸序列存在4个保守的半胱氨酸残基和GXXGXXXGXXXXXXG结构,与其他亲缘鱼类的一致性为51.78%~80.56%,其编码的蛋白质分子包括1个信号肽、1个MHCⅡβ(β-1)结构域、1个IGc1(β-2)结构域和1个跨膜螺旋区域。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)结果显示,MHCⅡβ在脾脏表达量最高,头肾、鳃、皮肤表达量较高。人工感染鲁氏耶尔森菌后,6 h时在头肾表达呈显著上调,肝脏中在12 h开始出现极显著上调,皮肤中在24 h和48 h表达极显著,鳃中在6~24 h表达极显著,脾脏中则是在6 h出现极显著下调,于96 h接近对照组表达水平。初步研究表明,MHCⅡβ在鱼类抵御细菌感染的免疫反应中发挥着重要作用,为进一步揭示稀有鮈鲫MHC家族的功能提供了参考依据。 展开更多
关键词 稀有鮈鲫 mhcⅱβ 细菌感染 基因表达
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鸭MHCⅡβ基因的克隆、表达及多克隆抗体的制备 被引量：2
4
作者 张舒婕 龚炎长 +5 位作者 俸艳萍 李世军 杨庆磊 胡福利 杨桓 彭秀丽 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1612-1615,共4页
据NCBI上已发表的序列设计引物,通过RT-PCR从北京鸭脾脏的总RNA中扩增得到MHCⅡβ基因,将其克隆至pMD18-T载体上,经酶切分析及测序鉴定后,进一步亚克隆至原核表达载体pGEX-KG中,转化大肠杆菌BL21中诱导表达。蛋白纯化后,免疫昆明小鼠制... 据NCBI上已发表的序列设计引物,通过RT-PCR从北京鸭脾脏的总RNA中扩增得到MHCⅡβ基因,将其克隆至pMD18-T载体上,经酶切分析及测序鉴定后,进一步亚克隆至原核表达载体pGEX-KG中,转化大肠杆菌BL21中诱导表达。蛋白纯化后,免疫昆明小鼠制备多克隆抗体,经1∶100倍稀释后用于Western blot分析。结果表明:克隆得到了鸭MHCⅡβ链基因,大小为798 bp,经核苷酸测序与已登录的基因序列同源性为92%;成功构建了原核表达载体,融合蛋白得到了高效表达且纯化后纯度达95%。制备的鼠抗鸭MHCⅡβ多克隆抗体,经酶联免疫吸附实验(ELISA)与免疫印迹法(Western blot)证实抗体的效价高、特异性强,为深入研究鸭MHCⅡ奠定了基础。 展开更多
关键词 鸭 mhcⅱβ基因 克隆 原核表达 多克隆抗体
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溯河洄游型刀鲚MHCⅡβ基因克隆的初步研究
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作者 轩中亚 姜涛 +2 位作者 刘洪波 陈修报 杨健 《海洋渔业》 CSCD 北大核心 2022年第2期178-186,共9页
主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)是脊椎动物中高度多态的基因家族,其编码的蛋白质是适应性免疫的重要组件,其中MHCⅡβ基因表达的蛋白主要参与外源性抗体的呈递,与生物抗性及生态适应性具有重要关系。使用R... 主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)是脊椎动物中高度多态的基因家族,其编码的蛋白质是适应性免疫的重要组件,其中MHCⅡβ基因表达的蛋白主要参与外源性抗体的呈递,与生物抗性及生态适应性具有重要关系。使用RACE技术首次克隆了溯河洄游型刀鲚(Coilia nasus)MHCⅡβ基因,全长为917 bp,开放阅读框的长度为765 bp,共编码254个氨基酸。通过同源性分析和分子系统进化分析发现,刀鲚MHCⅡβ氨基酸序列与其他硬骨鱼类和哺乳类的相似性在32.09%~71.79%,和鲱形目的鱼类同源性最高(71.79%)。研究结果可为溯河洄游型刀鲚MHCⅡ基因相关的多态性及生态适应等机制的研究提供理论基础。 展开更多
关键词 洄游型刀鲚 mhcⅱβ基因 CDNA全序列 生态抗性 生态适应性
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西伯利亚鲟MHCⅡβ基因克隆、组织分布及细菌感染后的表达变化 被引量：5
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作者 田照辉 徐绍刚 +4 位作者 胡红霞 王巍 董颖 东天 孙爱 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期56-62,共7页
为研究鲟鱼主要组织相容性复合体(Major histocompatibility complex,MHC)基因的分子特征和表达,利用RACE技术克隆获得了西伯利亚鲟Acipernser baerii MHCⅡβ cDNA序列1443 bp,包括开放阅读框(OFR)801 bp,编码184个氨基酸。Blast分析显... 为研究鲟鱼主要组织相容性复合体(Major histocompatibility complex,MHC)基因的分子特征和表达,利用RACE技术克隆获得了西伯利亚鲟Acipernser baerii MHCⅡβ cDNA序列1443 bp,包括开放阅读框(OFR)801 bp,编码184个氨基酸。Blast分析显示,由MHCⅡβcDNA基因推导的氨基酸序列同其他物种的一致性为46%～83%,通过Smart站点分析,该序列具有SMART MHC_Ⅱ_beta结构域、SMART IGc1结构域和跨膜螺旋结构域;实时定量分析表明,正常情况下MHCⅡβ mRNA在西伯利亚鲟10种组织中均有表达,其中脾、头肾和血液中表达量较高,皮肤和肉中表达量极低(P<0.05);感染维氏气单胞菌Aeromonas veronii 40 h后,脾脏中MHCⅡβ mRNA的表达量显著低于未感染的对照组(P<0.05),直至93 h时恢复至对照组水平且有显著性变化(P<0.05)。研究表明,MHCⅡβ基因参与了西伯利亚鲟的免疫反应。 展开更多
关键词 西伯利亚鲟 主要组织相容性复合体基因( mhcⅱβ) 实时定量 细菌感染
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