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鸭MHCⅡα基因的表达纯化与抗体制备
被引量：
1
1
作者
张舒婕
邓干臻
+4 位作者
龚炎长
杨庆磊
胡福利
杨桓
彭秀丽
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第4期464-467,共4页
根据NCBI上已发表的序列自行设计引物,通过RT-PCR从北京鸭脾脏的总RNA中扩增得到鸭MHCⅡα基因,将其克隆至pMD18-T,经酶切分析及序列测定鉴定后,进一步亚克隆至原核表达载体pET-28a。转化大肠杆菌BL21中诱导表达。电洗脱纯化蛋白,用于...
根据NCBI上已发表的序列自行设计引物,通过RT-PCR从北京鸭脾脏的总RNA中扩增得到鸭MHCⅡα基因,将其克隆至pMD18-T,经酶切分析及序列测定鉴定后,进一步亚克隆至原核表达载体pET-28a。转化大肠杆菌BL21中诱导表达。电洗脱纯化蛋白,用于免疫昆明小鼠制备多克隆抗体。结果表明:克隆了鸭MHCⅡα基因,大小为633 bp,经核苷酸测序与已登录的基因序列同源性为99%;成功构建了原核表达载体,融合蛋白得到了高效表达且纯化后纯度可达90%,制备的鼠抗鸭MHCⅡα多克隆抗体经酶联免疫吸附试验(ELISA)与免疫印迹法(Western-blot)证实了抗体的效价高、特异性强,研究结果为研究鸭MHCⅡ分子奠定了基础。
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关键词
:鸭
mhc
ⅱ
α
基因
克隆
原核表达
纯化
多克隆抗体
下载PDF
职称材料
中华鳖MHCⅡα基因cDNA的克隆及组织表达分析
2
作者
童正飞
葛玲瑞
+6 位作者
胡亚洲
杨涛
涂开发
王佩
周先文
王晓清
熊钢
《渔业科学进展》
CSCD
北大核心
2021年第6期102-108,共7页
为了探究中华鳖(Pelodiscus sinensis)的主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)的结构和功能,本研究利用RACE技术成功克隆获得中华鳖MHCⅡα基因的cDNA全长序列,其长度为1296 bp,开放阅读框(ORF)为807 bp,共编码...
为了探究中华鳖(Pelodiscus sinensis)的主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)的结构和功能,本研究利用RACE技术成功克隆获得中华鳖MHCⅡα基因的cDNA全长序列,其长度为1296 bp,开放阅读框(ORF)为807 bp,共编码268个氨基酸,分为信号肽序列、Ⅱ类组织相容性抗原α结构域、IGc1结构域及跨膜结构域4个功能结构域。通过NJ法构建的系统进化树分析显示,中华鳖与西部锦龟(Chrysemys picta bellii)亲缘较近,而与哺乳类、鸟类及鱼类亲缘关系较远。荧光定量PCR结果显示,MHCⅡαmRNA在中华鳖8个组织中均有表达,在脾、心、肝及肠组织中表达水平较高,在肌肉组织中表达量最低。感染嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)12 h后,中华鳖MHCⅡαmRNA在肝和肠组织中的表达显著上调;感染1 d时,在脾组织中的表达显著上调;感染1 d及5 d时,在肾组织中的表达显著上调。研究表明,中华鳖MHCⅡα基因参与了中华鳖免疫反应。
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关键词
中华鳖
mhc
ⅱ
α
序列分析
基因表达
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职称材料
题名
鸭MHCⅡα基因的表达纯化与抗体制备
被引量：
1
1
作者
张舒婕
邓干臻
龚炎长
杨庆磊
胡福利
杨桓
彭秀丽
机构
华中农业大学教育部动物遗传育种与繁殖重点实验室
出处
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第4期464-467,共4页
基金
湖北省"十一五"重大科攻关资助项目(2006AA202-A03)
文摘
根据NCBI上已发表的序列自行设计引物,通过RT-PCR从北京鸭脾脏的总RNA中扩增得到鸭MHCⅡα基因,将其克隆至pMD18-T,经酶切分析及序列测定鉴定后,进一步亚克隆至原核表达载体pET-28a。转化大肠杆菌BL21中诱导表达。电洗脱纯化蛋白,用于免疫昆明小鼠制备多克隆抗体。结果表明:克隆了鸭MHCⅡα基因,大小为633 bp,经核苷酸测序与已登录的基因序列同源性为99%;成功构建了原核表达载体,融合蛋白得到了高效表达且纯化后纯度可达90%,制备的鼠抗鸭MHCⅡα多克隆抗体经酶联免疫吸附试验(ELISA)与免疫印迹法(Western-blot)证实了抗体的效价高、特异性强,研究结果为研究鸭MHCⅡ分子奠定了基础。
关键词
:鸭
mhc
ⅱ
α
基因
克隆
原核表达
纯化
多克隆抗体
Keywords
duck
mhc
ⅱ
α
gene
cloning
protokaryotic
expression
purification
polyclonal
antibody
分类号
S852.2 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
中华鳖MHCⅡα基因cDNA的克隆及组织表达分析
2
作者
童正飞
葛玲瑞
胡亚洲
杨涛
涂开发
王佩
周先文
王晓清
熊钢
机构
湖南农业大学动物科学技术学院
湖南生物机电职业技术学院
湖南省水产产业技术体系
出处
《渔业科学进展》
CSCD
北大核心
2021年第6期102-108,共7页
基金
国家重点研究开发项目-蓝色粮仓(2018YFD0900200)
湖南省自然科学基金青年基金项目(2018JJ3265)
+1 种基金
国家自然科学基金(31672640)
湖南省教育厅资助科研项目(18C0170)共同资助。
文摘
为了探究中华鳖(Pelodiscus sinensis)的主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)的结构和功能,本研究利用RACE技术成功克隆获得中华鳖MHCⅡα基因的cDNA全长序列,其长度为1296 bp,开放阅读框(ORF)为807 bp,共编码268个氨基酸,分为信号肽序列、Ⅱ类组织相容性抗原α结构域、IGc1结构域及跨膜结构域4个功能结构域。通过NJ法构建的系统进化树分析显示,中华鳖与西部锦龟(Chrysemys picta bellii)亲缘较近,而与哺乳类、鸟类及鱼类亲缘关系较远。荧光定量PCR结果显示,MHCⅡαmRNA在中华鳖8个组织中均有表达,在脾、心、肝及肠组织中表达水平较高,在肌肉组织中表达量最低。感染嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)12 h后,中华鳖MHCⅡαmRNA在肝和肠组织中的表达显著上调;感染1 d时,在脾组织中的表达显著上调;感染1 d及5 d时,在肾组织中的表达显著上调。研究表明,中华鳖MHCⅡα基因参与了中华鳖免疫反应。
关键词
中华鳖
mhc
ⅱ
α
序列分析
基因表达
Keywords
Pelodiscus
sinensis
mhc
ⅱ
α
Sequence
analysis
gene
expression
分类号
S917.4 [农业科学—水产科学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
鸭MHCⅡα基因的表达纯化与抗体制备
张舒婕
邓干臻
龚炎长
杨庆磊
胡福利
杨桓
彭秀丽
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009
1
下载PDF
职称材料
2
中华鳖MHCⅡα基因cDNA的克隆及组织表达分析
童正飞
葛玲瑞
胡亚洲
杨涛
涂开发
王佩
周先文
王晓清
熊钢
《渔业科学进展》
CSCD
北大核心
2021
0
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职称材料
已选择
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