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高致病性PRRSV GD疫苗株与野毒株双重荧光定量RT-PCR鉴别方法的建立 被引量:4
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作者 张文利 孙丰廷 +3 位作者 王海光 刘灿 英聪 宁宜宝 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期898-902,共5页
为建立一种能够快速鉴别检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GDr180疫苗株与GD野毒株的双重荧光定量RT-PCR方法,本研究在PPRSV的Nsp2基因和Orf7基因区域分别设计不同荧光标记的MGB探针及特异性引物。这两种MGB探针能够分别特异结合GD野... 为建立一种能够快速鉴别检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GDr180疫苗株与GD野毒株的双重荧光定量RT-PCR方法,本研究在PPRSV的Nsp2基因和Orf7基因区域分别设计不同荧光标记的MGB探针及特异性引物。这两种MGB探针能够分别特异结合GD野毒株和GDr180疫苗株。通过对PRRSV培养液、感染猪血清和组织样品检测证明了该方法的可行性;采用双重实时荧光定量RT-PCR方法检测PRRSV GDr180疫苗株和GD强毒株时敏感性分别达到19.4拷贝/μL和34.2拷贝/μL;该方法与PRRSV其他8个病毒株和猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型和猪细小病毒不发生交叉反应,表明该方法具有良好的特异性;因此可以用于PRRSV GDr180疫苗株与野毒株的鉴别检测。 展开更多
关键词 高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗GDr180 双重荧光RT-PCR mgb探针 鉴别检测
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应用TaqMan MGB探针检测小麦印度腥黑穗病菌和黑麦草腥黑穗病菌 被引量:14
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作者 章桂明 程颖慧 +2 位作者 王颖 杨伟东 易建平 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期142-151,共10页
以小麦印度腥黑穗病菌9个菌株和黑麦草腥黑穗病菌5个菌株及其近似种或相关种:稻粒黑粉菌、狼尾草腥黑粉菌、狗尾草腥黑粉菌、苏玛特腥黑粉菌、狐尾草腥黑粉菌、小麦网腥黑穗病菌和小麦矮化腥黑穗病菌共9种22个菌株为研究对象,通过序列... 以小麦印度腥黑穗病菌9个菌株和黑麦草腥黑穗病菌5个菌株及其近似种或相关种:稻粒黑粉菌、狼尾草腥黑粉菌、狗尾草腥黑粉菌、苏玛特腥黑粉菌、狐尾草腥黑粉菌、小麦网腥黑穗病菌和小麦矮化腥黑穗病菌共9种22个菌株为研究对象,通过序列比对分析,设计了检测小麦印度腥黑穗病菌及黑麦草腥黑穗病菌的TaqM an MGB实时荧光PCR引物和探针,优化了反应条件,筛选出特异性探针,分别建立了小麦印度腥黑穗病菌和黑麦草腥黑穗病菌实时荧光单重PCR和实时荧光双重PCR检测方法,其中实时荧光双重PCR检测方法实现了在同一PCR管中仅用5μL的反应体系,进行1次PCR反应就能特异性检测出小麦印度腥黑穗病菌或黑麦草腥黑穗病菌。本研究所建立的检测方法特异性强、结果可靠、检测速度快、成本明显降低,在实际应用中具有推广价值。 展开更多
关键词 小麦印度腥黑穗病菌 黑麦草腥黑穗病菌 TAQMAN mgb探针 荧光单重PcR 荧光双重PCR
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TaqMan—MGB探针实时荧光聚合酶链反应快速检测非小细胞肺癌表皮生长因子受体基因突变 被引量:11
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作者 周彩存 周崧雯 +2 位作者 潘虹 粟波 高志强 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期119-123,共5页
目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)瘤组织表皮生长因子受体(EGFR)基因突变及TaqMan MGB探针实时荧光PCR快速检测EGFR突变的诊断价值。方法应用聚合酶链(PCR)反应,对80例手术切除NSCLC瘤组织EGFR基因的第18、19和21外显子片段进行扩增... 目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)瘤组织表皮生长因子受体(EGFR)基因突变及TaqMan MGB探针实时荧光PCR快速检测EGFR突变的诊断价值。方法应用聚合酶链(PCR)反应,对80例手术切除NSCLC瘤组织EGFR基因的第18、19和21外显子片段进行扩增和测序,Chromas软件分析基因突变。设计EGFR突变位点的TaqMan MGB探针,采用实时PCR检测瘤组织EGFR突变,并与测序结果比较。实时PCR的敏感性与特异性评价,用不同混合数量的PC-9细胞(19外显子缺失)为阳性参照。结果21例NSCLC瘤组织存在EGFR基因突变,总体突变率为26.3%。其中13例为EGFR第19外显子阅读框内多核苷酸的缺失,8例为第21外显子2573位核苷酸点突变。诊断的特异性与敏感性均为100%。当PC-9突变型细胞仅占10%时或PC-9细胞数低达50只时,PCR仍然检测到EGFR基因突变的存在。女性、不吸烟和肺腺癌患者EGFR基因突变率显著高于男性、吸烟和非腺癌患者(P<0.05)。EGFR基因突变与患者年龄、TNM分期等因素无关。结论NSCLC存在EGFR基因的突变或缺失,其中以女性、腺癌和不吸烟患者突变率较高。TaqMan MGB探针联合实时PCR可有效地检测出EGFR基因突变,操作简便,易于临床推广。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 表皮生长因子受体基因 TAQMAN mgb探针 聚合酶链反应 外显子
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Taqman-MGB实时荧光PCR定量检测转基因玉米MON863 被引量:2
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作者 王凤军 冯俊丽 +2 位作者 张祥林 王菁 王鹏举 《分析试验室》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期5-8,共4页
运用实时荧光聚合酶链式反应技术(polymerase chain reaction,PCR)对转基因玉米MON863进行品种特异性检测和定量分析。通过设计玉米内源基因和外源基因边界序列特异性引物和Taqman-MGB探针,验证了内源基因的物种特异性和外源基因边界序... 运用实时荧光聚合酶链式反应技术(polymerase chain reaction,PCR)对转基因玉米MON863进行品种特异性检测和定量分析。通过设计玉米内源基因和外源基因边界序列特异性引物和Taqman-MGB探针,验证了内源基因的物种特异性和外源基因边界序列的品种特异性。利用已知转基因百分含量的MON863玉米作为标准品,进行荧光定量反应,建立定量标准曲线,通过标准曲线对玉米样品MON863玉米成份进行含量分析。结果表明,该方法重复性好,检测特异性强,最低检测限浓度达到0.001 ng/μL,即14个拷贝。由于使用实时荧光PCR技术,检测周期短,操作简便,可广泛运用于转基因玉米MON863的进出口检测和转基因产品的含量分析。 展开更多
关键词 转基因玉米MON863 品系特异性 实时荧光PCR TAQMAN-mgb探针
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PTPN22基因1123G>C单核苷酸多态性与系统性红斑狼疮相关性的研究 被引量:2
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作者 冯雪 李永哲 +6 位作者 张吉林 秦绪珍 张洋 包书萌 佟大伟 张蜀澜 胡朝军 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期6-10,共5页
为探讨蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型22(protein tyrosine phosphatase nonreceptor 22,PTPN22)基因1123G>C(rs2488457)单核苷酸多态性(SNP)与系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)的相关性。采用Taqman-MGB探针建立了1123G... 为探讨蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型22(protein tyrosine phosphatase nonreceptor 22,PTPN22)基因1123G>C(rs2488457)单核苷酸多态性(SNP)与系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)的相关性。采用Taqman-MGB探针建立了1123G>C位点的实时荧光定量PCR的分型方法,对104例SLE患者、105例其他风湿病患者、101例健康体检者进行分型。同时采用间接免疫荧光法检测抗核抗体(ANA)、抗双链DNA(dsDNA)抗体。结果显示SLE组PTPN22基因SNP CC基因型与其他风湿病组及健康对照组有显著性差异(P<0.05),SLE组PTPN22基因CC基因型(基因频率:0.221)明显高于其他风湿病组(包括AS、SS、PBC组)、健康对照组(基因频率:0.030),其他风湿病组PTPN22基因SNPCC基因型与健康对照组无统计学意义(P>0.05),SLE组C等位基因频率为0.447明显高于其他风湿病组和健康对照组。此结果符合Hardy-Weinberg平衡定律。SLE组PTPN22各基因型ANA、抗ds DNA抗体差异无统计学意义(P>0.05)。因而PTPN22基因SNP与SLE患者有一定的相关性,由于SLE患者地区和种族差异,PTPN22基因变异位点可能不同。 展开更多
关键词 红斑狼疮 系统性 PTPN22 多态性 单核苷酸 TAQMAN-mgb探针
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TaqMan-MGB探针检测GSTP1外显子5 SNP可行性研究 被引量:2
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作者 张薇 单可人 +8 位作者 吴昌学 李毅 肖雁 赵艳 齐晓岚 谢渊 何燕 官志忠 任锡麟 《现代生物医学进展》 CAS 2006年第12期24-26,30,共4页
目的:评估TaqMan-MGB探针基因分型方法检测已知SNP的可行性,并与传统的PCR-RFLP方法比较。方法:高通量的TaqMan-MGB探针基因分型方法已被用来检测单核苷酸多态性(SNP)。在321例样本中,同时用TaqMan-MGB探针基因分型方法和PCR-RFLP方法检... 目的:评估TaqMan-MGB探针基因分型方法检测已知SNP的可行性,并与传统的PCR-RFLP方法比较。方法:高通量的TaqMan-MGB探针基因分型方法已被用来检测单核苷酸多态性(SNP)。在321例样本中,同时用TaqMan-MGB探针基因分型方法和PCR-RFLP方法检测GSTP1外显子5 SNP。结果:2种方法所得结果完全一致。野生型(AA)226例(70.4%),杂合子(AG)92例(28.7%),纯合突变型3例(0.9%)。结论:TaqMan-MGB探针基因分型方法是一种能快速、高度特异性、高度自动化检测SNP的方法,可用于大规模的基因分型。 展开更多
关键词 TAQMAN-mgb探针 单核苷酸多态性 GSTP1基因 PCR-RFLP方法
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检测牛感染犬新孢子虫的TaqMan-MGB Real-time PCR方法的建立
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作者 陈千林 刘梦丽 +4 位作者 许正茂 王振宝 吉尔格力 史亚明 巴音查汗 《中国农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期58-64,共7页
为建立牛感染犬新孢子虫的Real-time PCR检测方法,根据犬新孢子虫Nc2基因保守序列设计特异性检测引物和TaqMan-MGB探针,建立新孢子虫病TaqMan-MGB Real-time PCR检测方法。PCR扩增产物约为150bp,与预期片段大小相符;Real-time PCR扩增表... 为建立牛感染犬新孢子虫的Real-time PCR检测方法,根据犬新孢子虫Nc2基因保守序列设计特异性检测引物和TaqMan-MGB探针,建立新孢子虫病TaqMan-MGB Real-time PCR检测方法。PCR扩增产物约为150bp,与预期片段大小相符;Real-time PCR扩增表明,Ct值与梯度稀释的阳性质粒模板呈良好的线性关系;当检测牛源性弓形虫、牛环形泰勒和牛巴贝斯等虫种阳性DNA时均为阴性;经3D数字PCR判定,Real-time PCR方法的最低有效检测量为6.41拷贝/μL,灵敏性是常规PCR的1 000倍;重复性试验的组内平均变异系数为1.108%,组间为2.732%;本方法与《新孢子虫病检疫技术规范》(SN/T 3499-2013)的检测符合率为100%(46/46)。该Real-time PCR方法可用于早期诊断和日常监测家畜感染犬新孢子虫。 展开更多
关键词 新孢子虫病 REAL-TIME PCR 3D数字PCR TAQMAN-mgb探针 Nc2基因
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鹦鹉热嗜性衣原体特异性TaqMan-MGB探针荧光定量PCR检测方法的建立与应用 被引量:6
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作者 冯悦 张忠华 +1 位作者 龚福明 柳陈坚 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1041-1044,1058,共5页
目的建立一种特异、灵敏、重复性好的鹦鹉热嗜性衣原体的TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法。方法利用鹦鹉热嗜性衣原体MOMP基因的特异保守序列设计引物和MGB探针,通过优化,获得最佳反应体系与反应条件,同时进行特异性、重复性、灵敏性评价... 目的建立一种特异、灵敏、重复性好的鹦鹉热嗜性衣原体的TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法。方法利用鹦鹉热嗜性衣原体MOMP基因的特异保守序列设计引物和MGB探针,通过优化,获得最佳反应体系与反应条件,同时进行特异性、重复性、灵敏性评价与Spike-test实验进行临床应用性评价,利用该检测方法对禽鸟类粪便样品进行检测,并与常规PCR检测方法进行比较。结果该方法在0.01pg^100pg范围内线性相关系数为0.999,扩增效率为97.7%;对鹦鹉热嗜性衣原体菌株检测结果均呈现阳性,而非鹦鹉热嗜性衣原体菌株及其它衣原体菌株为阴性;重复性试验中,变异系数为0.317%~0.563%;检测灵敏性为0.01pg;Spike-test试验中最低检出量为25个EB;该方法对禽鸟类粪便样品的检出率为14.3%(40/282),高于常规PCR检测法的7.4%(21/282)。结论本文所建立的Taqman-MGB荧光定量PCR检测法是一种灵敏、高效、稳定,可在嗜性衣原体属中准确检测鹦鹉热嗜性衣原体的方法,该方法的建立更有意于今后对禽鸟类实施鹦鹉热的临床诊断与分子流行病学研究。 展开更多
关键词 鹦鹉热嗜性衣原体 荧光定量PCR mgb探针 MOMP基因
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基于牛结节性皮肤病病毒ORF61基因荧光定量检测方法的建立
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作者 马春玲 任善会 +7 位作者 杨雪 蔺玉刚 李积雲 王相伟 殷相平 孙跃峰 万学瑞 陈豪泰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期1800-1809,共10页
基于国内流行的牛结节性皮肤病病毒(lumpy skin disease virus, LSDV)的基因组序列,建立了靶向ORF61基因的MGB探针荧光定量PCR检测方法。本研究基于LSDV基因序列设计出带有MGB探针的特异性荧光定量PCR引物,并进行特异性和灵敏性筛选验... 基于国内流行的牛结节性皮肤病病毒(lumpy skin disease virus, LSDV)的基因组序列,建立了靶向ORF61基因的MGB探针荧光定量PCR检测方法。本研究基于LSDV基因序列设计出带有MGB探针的特异性荧光定量PCR引物,并进行特异性和灵敏性筛选验证。最终,筛选得到靶向于LSDV ORF61基因的一对qPCR引物;利用pCAGGS-ORF61真核表达质粒,获得标准曲线y=-3.287 5x+47.87,线性相关系数R^(2)=0.998 6,扩增效率达101%;荧光定量PCR特异性、重复性和灵敏性试验结果表明,该引物的特异性高、重复性良好和灵敏度高等优点;该引物的最低检测限为6.71拷贝·μL^(-1),各批次内与批次间重复性结果的变异系数均小于2%。以上结果表明,作者建立特异性LSDV的荧光定量PCR检测方法,为LSD预防和控制提供有效的检测手段。 展开更多
关键词 牛结节性皮肤病病毒 ORF61 mgb探针 荧光定量PCR
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一步法MGB荧光定量RT-PCR检测埃博拉病毒扎伊尔亚型和苏丹亚型方法的建立 被引量:5
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作者 刘阳 史子学 +3 位作者 王水明 刘学辉 马玉堃 马志永 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期343-346,350,共5页
目的为了建立一种快速准确的检测埃博拉病毒(EBOV)亚型的方法。方法本研究根据GenBank中公布的EBOV NP基因序列,设计引物和MGB探针,通过优化反应条件,建立了一种检测EBOV扎伊尔亚型和苏丹亚型的一步法MGB荧光定量RT-PCR方法。结果以体... 目的为了建立一种快速准确的检测埃博拉病毒(EBOV)亚型的方法。方法本研究根据GenBank中公布的EBOV NP基因序列,设计引物和MGB探针,通过优化反应条件,建立了一种检测EBOV扎伊尔亚型和苏丹亚型的一步法MGB荧光定量RT-PCR方法。结果以体外转录的EBOV RNA为模板进行试验,该方法检测的灵敏度可以达到1.0×103个拷贝/μL,检测范围达到8个数量级为103~1010。建立的方法对马尔堡病毒(MARV)、登革病毒(DENV)、新疆出血热病毒(XHFV)、乙型脑炎病毒(JEV)、流感病毒(H1N1和H3N2)和猪繁殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)E基因组RNA无非特异性扩增。结论本文将荧光定量RT-PCR技术用于埃博拉病毒的定量检测中,并且建立了EBOV扎伊尔亚型和苏丹亚型荧光定量RT-PCR检测方法,具有一定的创新性。该方法的建立对加快我国EBOV诊断技术的研究具有重要推动作用。 展开更多
关键词 埃博拉病毒 荧光定量RT-PCR mgb探针 检测
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新型鸭呼肠孤病毒一步法TaqMan-MGB荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用 被引量:5
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作者 云涛 华炯钢 +3 位作者 叶伟成 倪征 陈柳 张存 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2020年第4期571-576,共6页
为建立一种快速、敏感和特异性检测新型鸭呼肠孤病毒(novel duck reovirus,NDRV)的方法,本研究根据GenBank数据库中NDRV S3基因保守序列设计1对特异性引物和1条MGB荧光探针,建立了一种检测NDRV的一步法MGB荧光定量RT-PCR方法,对其特异... 为建立一种快速、敏感和特异性检测新型鸭呼肠孤病毒(novel duck reovirus,NDRV)的方法,本研究根据GenBank数据库中NDRV S3基因保守序列设计1对特异性引物和1条MGB荧光探针,建立了一种检测NDRV的一步法MGB荧光定量RT-PCR方法,对其特异性、敏感性和重复性进行检验,并与普通RT-PCR进行比较。结果显示,扩增标准曲线相关系数为0.999,扩增产物的熔解曲线仅出现单特异峰。该方法对经典鸭呼肠孤病毒、H9N2禽流感病毒、鸭坦布苏病毒、A型鸭肝炎病毒、鸭新城疫病毒、鸭瘟病毒及番鸭细小病毒均未检测到信号,对NDRV的最小检出量为10拷贝·μL^-1。组内和组间变异系数均小于2%,重复性好。此外,利用该方法对239份疑似新型呼肠孤病毒病样品进行检测,常规RT-PCR检测时有75份为阳性,一步法TaqMan-MGB荧光定量RT-PCR方法检测时有100份为阳性,而且常规RT-PCR检测出的阳性样品用一步法TaqMan-MGB荧光定量RT-PCR检测时均为阳性,符合率为100%。该检测方法的建立为NDRV早期快速检测及定量分析提供新的方法。 展开更多
关键词 新型鸭呼肠孤病毒 mgb探针 荧光定量RT-PCR 检测方法
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捕食性天敌昆虫控害作用定量评价方法 被引量:5
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作者 张桂芬 吕志创 万方浩 《应用昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期299-301,共3页
天敌昆虫田间捕食作用与能力的研究,通常采用田间种群数量调查与分析的方法或笼罩试验来评价其控制作用,但往往与实际情况不符,尤其是对可捕食多种猎物的非专食性天敌,很难说明其在田间对某一特定猎物的控制作用究竟有多大,而分子生物... 天敌昆虫田间捕食作用与能力的研究,通常采用田间种群数量调查与分析的方法或笼罩试验来评价其控制作用,但往往与实际情况不符,尤其是对可捕食多种猎物的非专食性天敌,很难说明其在田间对某一特定猎物的控制作用究竟有多大,而分子生物学技术为捕食者-猎物关系评价研究提供了新途径。本文系统介绍了基于种特异性SS-PCR标记技术和TaqMan-MGB实时荧光定量PCR技术的捕食性天敌控害作用定量评价方法及其优缺点,旨在为害虫天敌的种类筛选及其保护利用提供技术指导。 展开更多
关键词 捕食性天敌昆虫 定量评价 控害作用 种特异性标记 TaqMan实时荧光定量PCR mgb探针
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MGB探针标记-实时荧光PCR方法检测细菌int1基因和ISCR1元件方法的建立 被引量:3
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作者 车洁 赵晓菲 +2 位作者 卢金星 李娟 陈霞 《疾病监测》 CAS 2017年第10期878-882,共5页
目的 建立一种快速、准确检测细菌中ISCR1复合型Ⅰ型整合子的MGB探针二重实时荧光PCR方法。方法 根据ISCR1复合型Ⅰ型整合子中int1基因和ISCR1元件序列设计特异性引物和探针,在多种经常携带有2种多耐药相关基因元件的细菌中检测其特异性... 目的 建立一种快速、准确检测细菌中ISCR1复合型Ⅰ型整合子的MGB探针二重实时荧光PCR方法。方法 根据ISCR1复合型Ⅰ型整合子中int1基因和ISCR1元件序列设计特异性引物和探针,在多种经常携带有2种多耐药相关基因元件的细菌中检测其特异性;使用含有2种基因元件特异性序列的重组质粒标准品评价建立方法的灵敏度。结果 建立的MGB二重探针实时荧光PCR检测方法特异性好,携带2种基因元件或单独含有ISCR1或者int1的实验菌株均出现相应特异性扩增曲线,对2种基因元件均不含的菌株进行试验扩增时,均未见出现特异性扩增曲线。对2种基因元件都存在的实验菌株的扩增中,亦不存在由于2套引物/探针相互影响而造成的干扰扩增。根据标准质粒样品构建的标准曲线可确定其对int1基因和ISCR1元件的检测灵敏度分别为5.89×10~1拷贝/μl和4.13×10~1拷贝/μl。结论本研究成功建立了MGB二重探针实时荧光PCR快速检测方法。 展开更多
关键词 ISCR1复合型Ⅰ型整合子 int1基因 ISCR1元件 实时荧光PCR mgb探针
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PCR-荧光探针法检测乙型肝炎病毒YMDD变异与DNA序列分析法的比较 被引量:3
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作者 张东华 于德敏 +2 位作者 金根娣 姜节洪 张欣欣 《检验医学》 CAS 北大核心 2011年第1期5-8,共4页
目的评估聚合酶链反应(PCR)-荧光探针法用于乙型肝炎病毒基因聚合酶区YMDD变异检测的敏感性、特异性和准确性。方法采用PCR-荧光探针法和DNA序列分析法,平行比对检测202份标本中HBVYMDD变异情况。结果以DNA序列检测分析为相对标准,PCR-... 目的评估聚合酶链反应(PCR)-荧光探针法用于乙型肝炎病毒基因聚合酶区YMDD变异检测的敏感性、特异性和准确性。方法采用PCR-荧光探针法和DNA序列分析法,平行比对检测202份标本中HBVYMDD变异情况。结果以DNA序列检测分析为相对标准,PCR-荧光探针法检测YMDD变异的相对灵敏度为99.06%,相对特异性为97.92%,YMDD变异位点检测的准确性为98.51%。PCR-荧光探针法检测YMDD位点混合变异株稍优于序列分析法。结论 PCR-荧光探针法与DNA序列分析法检测HBV YMDD变异具有较好的一致性,说明对单个位点变异的检测该方法临床应用性能较好。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 YMDD变异 序列分析 mgb探针
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茎环法RT-qPCR定量检测细胞抗猪瘟病毒siRNA的表达 被引量:3
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作者 刘帅 李江南 +3 位作者 袁婷 杨凡力 逄大欣 涂长春 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期26-36,共11页
RNAi(RNA interference)已成为特异抗病毒治疗研究的热点,但siRNA(small interfering RNA)的定量检测仍是评价RNAi抗病毒效果的瓶颈。为了检测抗CSFV特异siRNA分子(siN1和siN2)在细胞中的表达水平,设计并以交叉组合方法筛选了具有较高... RNAi(RNA interference)已成为特异抗病毒治疗研究的热点,但siRNA(small interfering RNA)的定量检测仍是评价RNAi抗病毒效果的瓶颈。为了检测抗CSFV特异siRNA分子(siN1和siN2)在细胞中的表达水平,设计并以交叉组合方法筛选了具有较高特异性和灵敏度的siRNA特异茎环引物(SLP-N1-6和SLP-N2-8),成功地建立了最优的siN1和siN2的茎环法RT-qPCR检测方法。该方法表现出良好的特异性和较高的灵敏度,能检测出102至108个拷贝的siRNA,至少可达7个数量级的检测范围,平行性好(Rsq=0.999),扩增效率高(Eff.=98.2%)。茎环法RT-qPCR能准确地定量检测抗CSFV的PK-15细胞克隆的siN1/siN2表达水平,可结合常规的检测病毒水平的间接免疫荧光和TCID50等技术定量评价RNAi抗CSFV的有效性,为未来抗猪瘟转基因猪的抗病毒效果评价提供了先进的检测技术。 展开更多
关键词 抗猪瘟病毒小干扰RNA 茎环引物 mgb探针 实时定量PCR
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MGB探针检测广州地区汉族人群糖尿病亚甲基四氢叶酸还原酶基因677C→T多态性 被引量:3
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作者 史成军 何蕴韶 +4 位作者 程钢 王伟毅 刘娟 徐杰 符立梧 《中国糖尿病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期258-260,共3页
186例T2DM,46例T1DM和110例正常对照的研究显示,糖尿病微血管病变与MTHFR基因677C→T多态性的显著相关性,仅见于T2DM,不见于T1DM。TaqMan-MGB探针技术是检测677C→T多态性的良好平台。
关键词 糖尿病 亚甲基四氢叶酸还原酶 基因 mgb探针
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微生物酶制剂中转基因微生物的实时荧光PCR检测方法 被引量:1
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作者 张清平 张奕南 曲勤凤 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期70-72,76,共4页
针对微生物酶制剂中残留转基因微生物的检测问题,根据醇氧化酶-1(AOX1)启动子基因的序列信息设计一对引物及一条MGB探针,建立了转基因微生物的实时荧光PCR筛选检测方法。实验结果表明,该方法灵敏度达到1pg,可以准确判定生产线上不同分... 针对微生物酶制剂中残留转基因微生物的检测问题,根据醇氧化酶-1(AOX1)启动子基因的序列信息设计一对引物及一条MGB探针,建立了转基因微生物的实时荧光PCR筛选检测方法。实验结果表明,该方法灵敏度达到1pg,可以准确判定生产线上不同分离阶段的微生物酶制剂中的转基因微生物残留情况。该方法准确度和灵敏度高,操作方便,可作为微生物酶制剂中转基因微生物分离状况的监测方法,也可为其他转基因微生物检测研究提供借鉴和参考。 展开更多
关键词 微生物酶制剂 转基因微生物 实时荧光PCR 醇氧化酶-1启动子 mgb探针
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应用MGB探针检测人丙型肝炎病毒的基因型 被引量:1
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作者 陈泽惠 李欣钰 +3 位作者 肖湘文 丁渭 刘淑园 陈华云 《湖北民族学院学报(医学版)》 2014年第2期8-10,共3页
目的检测血浆或血清样本中人丙型肝炎病毒(HCV)的基因型,建立了基于MGB探针的实时荧光定量PCR检测体系。方法在HCV基因组型特异性碱基的聚集区域设计荧光定量PCR引物及探针,为保证特征特异性及高分辨率,选择设计MGB探针,然后将PCR扩增... 目的检测血浆或血清样本中人丙型肝炎病毒(HCV)的基因型,建立了基于MGB探针的实时荧光定量PCR检测体系。方法在HCV基因组型特异性碱基的聚集区域设计荧光定量PCR引物及探针,为保证特征特异性及高分辨率,选择设计MGB探针,然后将PCR扩增的产物先进行基因克隆,而后制备病毒样颗粒做为阳性质控品,从而建立完整的MGB探针法的荧光定量PCR检测体系,最后对该检测体系进行方法学评价。结果成功建立了基于MGB探针的HCV荧光定量PCR的基因分型检测体系。方法学评价显示,该检测体系的灵敏度达100IU/mL;重复性好;特异性良好,以多种血浆病毒的核酸样品为模板进行检测时结果全为阴性。结论本研究建立基于MGB探针的HCV荧光定量PCR的基因分型检测方法,可定性检测血浆或血清样本及血液制品中的人丙型肝炎病毒HCV的基因型及含量,对于该疾病的研究及临床治疗都具有重要的意义。 展开更多
关键词 人丙型肝炎病毒HCV mgb探针 荧光定量PCR
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应用MGB探针检测人乙型肝炎病毒的基因型
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作者 陈泽惠 李欣钰 +3 位作者 肖湘文 丁渭 刘淑园 陈华云 《分子诊断与治疗杂志》 2014年第4期250-253,共4页
目的检测血浆或血清样本中人乙型肝炎病毒HBV的基因型,建立了基于MGB探针的实时荧光定量PCR检测体系。方法在HBV基因组型特异性碱基的聚集区域设计荧光定量PCR引物及探针,为保证特征特异性及高分辨率,选择设计MGB探针,然后将PCR扩增的... 目的检测血浆或血清样本中人乙型肝炎病毒HBV的基因型,建立了基于MGB探针的实时荧光定量PCR检测体系。方法在HBV基因组型特异性碱基的聚集区域设计荧光定量PCR引物及探针,为保证特征特异性及高分辨率,选择设计MGB探针,然后将PCR扩增的产物纯化后进行基因克隆,克隆成功后提取的质粒制备为阳性质控品,从而建立完整的MGB探针法的荧光定量PCR检测体系,最后对该检测体系进行方法学评价。结果成功建立了基于MGB探针的HBV荧光定量PCR的基因分型检测体系。方法学评价显示,该检测体系的灵敏度达50 IU/mL;重复性好;特异性良好,以多种血浆病毒的核酸样品为模板进行检测时结果全为阴性。结论本研究建立基于MGB探针的HBV荧光定量PCR的基因分型检测方法,可以很好地定性的检测血浆或血清样本及血液制品中的人乙型肝炎病毒HBV的基因型及含量,对于该疾病的临床治疗具有重要的意义。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒HBV mgb探针 荧光定量PCR
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施马伦贝格病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立及应用
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作者 王建昌 王金凤 +2 位作者 段永生 张永宁 李静 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1765-1769,共5页
依据施马伦贝格病毒(Schmallenberg virus,SBV)S基因保守序列,设计了特异性引物和MGB荧光探针,建立了SBV实时荧光RT-PCR检测方法,构建标准曲线,进行特异性、敏感性和重复性等试验评价,并对绵羊和牛全血样品进行了检测。结果表明,所建立... 依据施马伦贝格病毒(Schmallenberg virus,SBV)S基因保守序列,设计了特异性引物和MGB荧光探针,建立了SBV实时荧光RT-PCR检测方法,构建标准曲线,进行特异性、敏感性和重复性等试验评价,并对绵羊和牛全血样品进行了检测。结果表明,所建立的SBV检测方法模板浓度与Ct值呈现良好的线性关系,相关系数R2为0.998;特异性强,仅对SBV RNA出现特异性扩增曲线;灵敏度高,对SBV RNA的检测灵敏度为10copies;重复性好,重复检测灵敏度CV<3%;对临床样品的检测均为SBV阴性。所建立的SBV实时荧光RT-PCR方法可以为SBV的诊断和流行病学调查提供一种快速、特异、敏感的检测手段。 展开更多
关键词 施马伦贝格病毒 S基因 mgb探针
原文传递
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