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Runx1促进BMP9诱导的间充质干细胞MEFs的成骨分化 被引量:4
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作者 吉彩霞 刘晓骅 +2 位作者 徐丽 董超群 罗进勇 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期10-17,共8页
目的:研究Runx1在骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic proteins 9,BMP9)诱导小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)成骨分化中的作用。方法:用BMP9腺病毒感染MEFs细胞,利用RT-PCR和Western blot分别在mRNA和蛋白质水... 目的:研究Runx1在骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic proteins 9,BMP9)诱导小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)成骨分化中的作用。方法:用BMP9腺病毒感染MEFs细胞,利用RT-PCR和Western blot分别在mRNA和蛋白质水平检测Runx1的内源性表达;构建过表达Runx1的重组腺病毒Ad-Runx1,并在mRNA和蛋白质水平验证Ad-Runx1的效果;用Ad-Runx1和BMP9条件培养基共处理MEFs,检测成骨早期指标碱性磷酸酶(ALP)染色和活性,茜素红S染色检测成骨晚期指标钙盐沉积;RT-PCR和Western blot分别检测成骨关键转录因子Runx2在mRNA和蛋白质水平的变化。结果:Ad-BMP9处理MEFs细胞后,可使Runx1在mRNA和蛋白质水平表达上调;构建的Ad-Runx1处理MEFs后,可使Runx1在mRNA和蛋白质水平表达上调;Ad-Runx1处理BMP9诱导的MEFs细胞后,增强了ALP活性和钙盐沉积以及Runx2在mRNA和蛋白质水平的表达。结论:Runx1可以促进BMP9诱导的间充质干细胞MEFs的成骨分化。 展开更多
关键词 mefs RUNX1 骨形态发生蛋白9 成骨分化
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低氧微环境对胎鼠成纤维细胞HIF-1α和PTEN表达及细胞周期的影响 被引量:4
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作者 赵丹 唐嘉茵 +1 位作者 王艳艳 刘慧雯 《解剖科学进展》 CAS 2012年第4期305-309,共5页
目的探讨低氧条件下HIF-1α和PTEN在胎鼠成纤维(MEFs)细胞增殖、分化中可能的调控作用,以及低氧对细胞周期的影响。方法低氧条件(5%O_295%N_2)下培养MEFs不同时间(0、2、4、6、8h)后,应用免疫细胞化学、RT-PCR检测方法,观察MEFs中HIF-1... 目的探讨低氧条件下HIF-1α和PTEN在胎鼠成纤维(MEFs)细胞增殖、分化中可能的调控作用,以及低氧对细胞周期的影响。方法低氧条件(5%O_295%N_2)下培养MEFs不同时间(0、2、4、6、8h)后,应用免疫细胞化学、RT-PCR检测方法,观察MEFs中HIF-1α和PTEN的表达并检测其细胞周期。结果免疫组化结果表明,HIF-1α及PTEN蛋白的表达均随低氧时间增长而逐渐增强。RT-PCR结果显示,HIF-1αmRNA吸光度值常氧组为(0.93±0.06),低氧2~4h组达高峰分别为(1.46±0.05)和(2.30±0.05),随后开始下降;PTENmRNA吸光度值常氧组为(0.78±0.08),低氧2~6h组逐渐达到高峰分别(1.10±0.11)和(1.61±0.23),8h开始呈现下降趋势(<0.05)。流式细胞仪分析显示,随着低氧时间延长,G0/G1期细胞从(86.72±0.41)%上升至(92.41±1.10)%,低氧使MEFs细胞周期阻滞于G1/G0期。结论低氧微环境阻滞MEFs细胞周期于G0/G1期可能与PTEN和HIF-1α过表达相关。 展开更多
关键词 低氧 PTEN HIF-1Α 细胞周期 胎鼠成纤维细胞
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泛素结合酶E2变体蛋白对MEFs细胞衰老的影响
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作者 徐舜 骆诗凌 +2 位作者 谢健鸿 刘新光 袁源 《广东医科大学学报》 2023年第3期255-258,共4页
目的探讨泛素结合酶E2变体蛋白(UBE2V1)对MEFs细胞衰老的影响。方法Western blot检测UBE2V1在年轻(2月龄)和年老小鼠(24月龄)各组织中的表达差异,以荧光定量PCR及Western blot检测UBE2V1在年轻和衰老MEFs细胞中表达的差异,荧光定量PCR和... 目的探讨泛素结合酶E2变体蛋白(UBE2V1)对MEFs细胞衰老的影响。方法Western blot检测UBE2V1在年轻(2月龄)和年老小鼠(24月龄)各组织中的表达差异,以荧光定量PCR及Western blot检测UBE2V1在年轻和衰老MEFs细胞中表达的差异,荧光定量PCR和Western blot验证Ube2v1基因的siRNA沉默效果,β-半乳糖苷酶染色检测Ube2v1表达下调对MEFs细胞衰老的影响,Edu和Alarmar Blue检测Ube2v1基因沉默后MEFs细胞增殖能力的变化。结果UBE2V1在衰老小鼠的心脏、肝脏、肾脏和脑组织中表达下调,同时在衰老的MEFs细胞中也明显表达下调,在年轻细胞中沉默Ube2v1基因后β-半乳糖苷酶染色结果显示衰老的细胞数量明显增加,且Edu和Alarmar Blue检测发现Ube2v1基因沉默后MEFs细胞增殖能力显著下降。结论沉默Ube2v1可通过抑制MEFs细胞增殖,从而促进细胞衰老。 展开更多
关键词 UBE2V1 mefs 衰老
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穿透性Sox2蛋白的质粒构建及功能鉴定 被引量:1
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作者 丁道芳 王瑧 +3 位作者 李晓锋 徐乐勤 梁倩倩 王拥军 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1671-1674,共4页
目的构建具有细胞性穿透性的9R-Sox2蛋白的重组质粒,使其在293T细胞中表达,并对所表达的9R-Sox2蛋白的功能进行鉴定。方法从小鼠胚胎干细胞中扩增Sox2基因,并且在其N端加上9个精氨酸短肽,此融合基因连接到pPYCAG载体上,pPYCAG-9R-Sox2和... 目的构建具有细胞性穿透性的9R-Sox2蛋白的重组质粒,使其在293T细胞中表达,并对所表达的9R-Sox2蛋白的功能进行鉴定。方法从小鼠胚胎干细胞中扩增Sox2基因,并且在其N端加上9个精氨酸短肽,此融合基因连接到pPYCAG载体上,pPYCAG-9R-Sox2和pPYCAG分别转染到293T细胞中。3 d后,对转染细胞用嘌呤霉素筛选,1周后筛选得到阳性克隆细胞株,对其进行细胞免疫荧光鉴定。表达9R-Sox2蛋白的细胞株进行裂解,取细胞裂解液加入至小鼠胚胎成纤维细胞的培养基中进行通透。48 h后,小鼠胚胎成纤维细胞进行细胞免疫荧光检测,并提取蛋白Western blot检测PCNA表达。结果用Sox2抗体进行细胞免疫荧光鉴定,结果均显示所有细胞表达9R-Sox2。在细胞裂解液处理的成纤维细胞,细胞免疫荧光结果显示9R-Sox2蛋白定位在细胞核,表明9R-Sox2构建和翻译正确。同时经含9R-Sox2的细胞裂解液处理的成纤维细胞,PCNA表达明显上调。结论成功构建表达9R-Sox2融合蛋白的pPYCAG-9R-Sox2重组质粒,并证明具有细胞通透及促细胞增殖功能。 展开更多
关键词 穿透性 9R-Sox2 细胞免疫荧光 WESTERN BLOT 增殖细胞核抗原 小鼠胚胎成纤维细胞
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慢病毒介导的外源基因体外投递系统的建立 被引量:19
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作者 贾俊双 孙妍 +1 位作者 肖东 姚开泰 《热带医学杂志》 CAS 2008年第10期1028-1029,1037,F0004,共4页
目的针对不同哺乳类细胞建立相应的慢病毒体外感染体系,以建立慢病毒介导的外源基因体外投递系统。方法按Invitrogen公司推荐的标准程序进行慢病毒(携带EGFP基因)包装(脂质体介导的瞬时转染)、超速离心浓缩和保存等,随后用病毒上清或浓... 目的针对不同哺乳类细胞建立相应的慢病毒体外感染体系,以建立慢病毒介导的外源基因体外投递系统。方法按Invitrogen公司推荐的标准程序进行慢病毒(携带EGFP基因)包装(脂质体介导的瞬时转染)、超速离心浓缩和保存等,随后用病毒上清或浓缩后的病毒感染293FT细胞,24~48h后荧光显微镜下观察是否见绿色荧光以证实慢病毒是否成功生产;将携带EGFP基因的病毒上清或浓缩后的病毒分别加入内含293FT细胞、小鼠ES细胞、小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)或小鼠睾丸生殖细胞的培养板孔内,感染6~12h后,用相应培养基替换感染液,数天后荧光显微镜下观察是否见绿色荧光以证实慢病毒是否成功感染不同哺乳类细胞。结果按标准程序生产的携带EGFP基因慢病毒(病毒上清或浓缩后的病毒)成功高效率感染293FT细胞、MEFs或小鼠睾丸生殖细胞;用浓缩后的病毒(携带EGFP基因)感染小鼠ES细胞,亦可获得EGFP阳性的ES细胞克隆。结论熟练掌握了慢病毒包装、浓缩及鉴定等技术,同时针对不同哺乳类细胞建立了相应的慢病毒介导的外源基因体外传递系统,这些为相关后续研究打下了良好的基础。 展开更多
关键词 慢病毒 293FT细胞 小鼠胚胎干细胞 小鼠胚胎成纤维细胞 小鼠睾丸生殖细胞
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业绩预告及时性与可靠性的权衡--基于经济政策不确定性视角 被引量:2
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作者 宋云玲 宋衍蘅 《管理评论》 CSSCI 北大核心 2022年第1期268-282,共15页
本文以A股公司为样本,分析了经济政策不确定性对业绩预告及时性与可靠性的影响。本文发现,当公司可以选择业绩预告披露时间时,管理层会权衡及时性与可靠性,在经济政策不确定性较高时推迟业绩预告的披露。当公司不能选择业绩预告披露时间... 本文以A股公司为样本,分析了经济政策不确定性对业绩预告及时性与可靠性的影响。本文发现,当公司可以选择业绩预告披露时间时,管理层会权衡及时性与可靠性,在经济政策不确定性较高时推迟业绩预告的披露。当公司不能选择业绩预告披露时间时,经济政策不确定性越高,业绩预告的准确度越低。进一步的分析显示,经济政策不确定性影响业绩预告准确度的路径是乐观偏差。本文还发现,如果公司的业绩预测难度比较高,那么,经济政策不确定性对业绩预告准确度的影响更强烈;但是,管理层业绩预测能力却并不会对经济政策不确定性与业绩预告准确度之间的关系产生显著影响。本文认为,监管部门应考虑赋予公司一定的披露时间选择权,引导管理层根据宏观经济环境和企业基本面等因素在一定范围内自主选择披露时间。 展开更多
关键词 业绩预告及时性 业绩预告准确度 管理层选择权 经济政策不确定性 路径分析
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A MICROFABRICATED METAL GRATING OSCILLATOR FOR ELECTRIC FIELD DETECTION
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作者 Deng Kai Xia Shanhong +2 位作者 Gong Chao Chen Shaofeng Bai Qiang 《Journal of Electronics(China)》 2005年第5期564-568,共5页
This letter proposes a novel design of a Micro Electro Mechanical System (MEMS) device featuring a metal grating vibratory mierostructure driven by electrostatic force to sense the spatial electric field. Due to the... This letter proposes a novel design of a Micro Electro Mechanical System (MEMS) device featuring a metal grating vibratory mierostructure driven by electrostatic force to sense the spatial electric field. Due to the advantages in slide-film damping and large vibration amplitude, such a device makes atmospheric packaging a low-cost option for practical manufacture. In this letter, we present the operating principles and specifications, the design structure, as well as the finite element simulation. Computational analysis shows that our design obtains good results in device parameters setting, while its simplicity and low-cost features make it an attractive solution for applications. 展开更多
关键词 Miniature Electric Field Sensor(mefs Anodic bonding Deep Reactive Ion Etching(DRIE)
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LPS激活TLR4抑制BMP9诱导iMEFs成骨分化 被引量:3
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作者 郭杨柳 陈思成 +4 位作者 李亚 范梦恬 孙艳婷 李汪 施琼 《基础医学与临床》 CSCD 2017年第1期25-31,共7页
目的研究脂多糖(LPS)激活的Toll样受体4(TLR4)信号对骨形态发生蛋白9(BMP9)诱导永生化小鼠胚胎成纤维细胞(i MEFs)成骨分化的影响。方法细胞免疫荧光检测TLR4/NF-κB信号通路的激活;LPS,BAY11-7082和BMP9处理iMEFs,ALP染色和活性检测i M... 目的研究脂多糖(LPS)激活的Toll样受体4(TLR4)信号对骨形态发生蛋白9(BMP9)诱导永生化小鼠胚胎成纤维细胞(i MEFs)成骨分化的影响。方法细胞免疫荧光检测TLR4/NF-κB信号通路的激活;LPS,BAY11-7082和BMP9处理iMEFs,ALP染色和活性检测i MEFs早期成骨分化能力;茜素红S染色检测晚期成骨分化能力;半定量PCR和Western blot检测晚期成骨基因OCN和OPN表达;Western blot检测Smad1/5/8磷酸化水平;半定量PCR和Western blot检测成骨关键转录因子Runx2和Dlx5的表达。结果 LPS成功激活TLR4/NF-κB信号通路;LPS抑制BMP9诱导的ALP染色和活性(P<0.01)、钙盐沉积、OCN的mRNA和蛋白质表达(P<0.05)、OPN的mRNA(P<0.01)和蛋白质(P<0.05)表达、Smad1/5/8信号通路激活(P<0.01)、Runx2的mRNA和蛋白质表达(P<0.05)、Dlx5的mRNA(P<0.01)和蛋白质(P<0.05)表达,BAY11-7082可以部分逆转LPS的抑制作用(P<0.05)。结论 LPS激活TLR4可以通过NF-κB信号通路抑制BMP9诱导的iMEFs成骨分化。 展开更多
关键词 TLR4 骨形态发生蛋白9 imefs 成骨分化
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FKBP52在重组腺相关病毒载体胞内转运中的作用研究 被引量:2
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作者 吴剑卿 赵卫红 +1 位作者 程蕴琳 殷凯生 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期1474-1479,共6页
目的探讨细胞质中FKBP52对重组腺相关病毒(AAV)介导的基因转导效率的作用。方法测定AAV在FKBP52-野生型(WT)、FKBP52-杂合型(HE)及FKBP52-基因敲除(KO)鼠胚纤维母细胞(MEFs)中的基因转导效率,观察羟基脲(HU)对不同基因型MEFs中AAV转导... 目的探讨细胞质中FKBP52对重组腺相关病毒(AAV)介导的基因转导效率的作用。方法测定AAV在FKBP52-野生型(WT)、FKBP52-杂合型(HE)及FKBP52-基因敲除(KO)鼠胚纤维母细胞(MEFs)中的基因转导效率,观察羟基脲(HU)对不同基因型MEFs中AAV转导效率的影响。采用流式细胞术、EMSA、Southernblot、免疫沉淀、West-ernblot等方法分析FKBP52对AAV在细胞内转运的作用。结果传统的单链AAV不能有效地转导FKBP52-WTMEFs,在FKBP52-HE及FKBP52-KOMEFs中的转导效率也未见明显增加。在这些细胞中,AAV不能有效地转运至细胞核。HU处理后能使AAV在WTMEFs中的转导效率提高25倍,但是在KOMEFs中AAV转导效率仅提高4倍。为避免AAV第二链合成的影响,进一步采用自身互补的AAV(scAAV)载体进行研究,结果发现,HU能使WTMEFsscAAV基因转导效率增强23倍,但在KOMEFs中转导效率仅增加4倍。提示,HU处理后KOMEFs中转导效率未增加的原因并非由于AAV第二链的合成障碍所致。HU处理后,59%的AAV基因组DNA出现在WTMEFs细胞核,KOMEFs细胞核中为28%,提示HU介导的AAV转运通路在KOMEFs中存在缺陷。转染FKBP52表达质粒的KOMEFs经HU处理后,AAV所介导的基因转导效率恢复至WTMEFs的水平,且直接与其转运至细胞核的转运功能改善相吻合。结论作为一种细胞分子伴侣蛋白,FKBP52能促进AAV在细胞内转运,有益于重组AAV载体在人类基因治疗中的应用。 展开更多
关键词 腺相关病毒 鼠胚纤维母细胞 FKS06结合蛋白 细胞内转运 基因表达
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HP1α在Zmpste24-缺陷早老小鼠胚胎成纤维细胞中表达和磷酸化水平升高 被引量:1
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作者 刘佳 周光前 +5 位作者 尹献辉 刘宝华 郑慧玲 李雪芹 王优雅 王子梅 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期624-629,共6页
本实验旨在研究异染色质蛋白1(heterochromatin protein 1,HP1)在Zmpste24基因敲除早老小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)中的表达量和磷酸化水平,探索异染色质功能异常与早老发病机制的内在联系.首先取雄雌Zmpste2... 本实验旨在研究异染色质蛋白1(heterochromatin protein 1,HP1)在Zmpste24基因敲除早老小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)中的表达量和磷酸化水平,探索异染色质功能异常与早老发病机制的内在联系.首先取雄雌Zmpste24杂合子小鼠胚胎,原代培养MEFs;分别用PCR和Western印迹检测MEFs基因型和A型核纤层蛋白(laminA)表达以区分野生型与Zmpste24-缺陷型早老细胞;用与衰老相关的β-半乳糖苷酶染色法(senescence associated-β-galactosidase assay,SA-β-gal)确定早老细胞出现衰老表型的传代数.用Western印迹和phos-tagWestern印迹分别检测HP1在Zmpste24+/+和Zmpste24-/-MEFs中表达量和磷酸化水平的差异.实验结果显示,Zmpste24-/-MEFs中存在异常的LaminA,且在传代培养第5代出现明显的细胞衰老现象.选用培养至第3代或第4代的MEFs细胞进行下述实验发现,Zmpste24-/-MEFs中HP1α表达量明显高于Zmpste24+/+MEFs,而HP1β未发现明显升高;Zmpste24+/+MEFs中HP1α以非磷酸化状态为主,但在Zmpste24-/-MEFs中磷酸化HP1α比例明显升高;2种细胞中均未检测到磷酸化HP1β.本研究结果证明,HP1α在Zmpste24-缺陷型早老小鼠传代早期MEFs中的表达量和磷酸化水平均有升高,提示HP1α参与A型核纤层蛋白相关的早老小鼠发病机制. 展开更多
关键词 异染色质蛋白1(HP1) A型核纤层蛋白 早老症 小鼠胚胎成纤维细胞 蛋白质磷酸化
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Major government customer and management earnings forecasts
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作者 Agnes C.S.Cheng Wenli Huang Shaojun Zhang 《Frontiers of Business Research in China》 2020年第3期350-369,共20页
This paper examines whether customer base composition in the US,that is,whether a firm's major customers are government entities or publicly traded companies,affects the properties of its management earnings forec... This paper examines whether customer base composition in the US,that is,whether a firm's major customers are government entities or publicly traded companies,affects the properties of its management earnings forecasts(MEFs).Using a sample of 1,168 MEFs from 1998 to 2014,we find that firms whose major customers are government entities(i.e.,govemment suppliers)issue more precise and more accurate MEFs than firms whose major customers are public companies(i.e.,corporate suppliers).Moreover,when managers disclose negative information to the market,earnings forecasts issued by government suppliers have greater price impact than those issued by corporate suppliers.Collectively,our empirical results suggest that having major govemment customers has a positive impact on the quality of MEFs. 展开更多
关键词 Customer-supplier relationship Demand uncertainty Government supplier Information spillover Management earnings forecasts(mefs)
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SHP-2激活突变促进小鼠MEFs细胞粘附迁移及增殖能力
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作者 陈丹蕾 陈卓 +2 位作者 陈吉 杨翠 汪思应 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2013年第6期8-12,I0001,共6页
目的探讨SHP-2D61G/+和SHP-2D61G/D61G激活突变对小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)粘附迁移及增殖能力的影响,并研究其发生的机制。方法雌雄小鼠合笼交配建立SHP-2D61G/+、SHP-2D61G/D61G激活突变的小鼠MEFs细胞,并以SV40T抗原进行永生化;细胞... 目的探讨SHP-2D61G/+和SHP-2D61G/D61G激活突变对小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)粘附迁移及增殖能力的影响,并研究其发生的机制。方法雌雄小鼠合笼交配建立SHP-2D61G/+、SHP-2D61G/D61G激活突变的小鼠MEFs细胞,并以SV40T抗原进行永生化;细胞粘附实验检测SHP-2D61G/+、SHP-2D61G/D61G激活突变对MEFs细胞粘附能力的影响;Transwell体外迁移实验检测SHP-2D61G/+、SHP-2D61G/D61G激活突变对MEFs细胞的迁移能力的影响;MTT法检测SHP-2D61G/+、SHP-2D61G/D61G激活突变对MEFs细胞增殖能力的影响;Western Blot法检测p-ERK的表达水平。结果 (1)与对照组相比,SHP-2D61G/+、SHP-2D61G/D61G激活突变组小鼠MEFs细胞粘附的细胞数明显增多,差异具有统计学意义;(2)与对照组相比SHP-2D61G/+、SHP-2D61G/D61G激活突变组MEFs细胞迁移的细胞数增加,差异具有统计学意义;(3)MTT结果显示,SHP-2D61G/+、SHP-2D61G/D61G激活突变的小鼠MEFs细胞增殖能力较对照组强,差异具有统计学意义;(4)Western Blot结果显示与对照组相比,无论是刚刚贴壁还是贴壁后30 min和60 min SHP-2D61G/+、SHP-2D61G/D61G激活突变组其p-ERK的表达水平都增加。结论 SHP-2D61G/+、SHP-2D61G/D61G激活突变促进小鼠MEFs细胞粘附迁移及增殖能力,其发生机制主要与p-ERK的表达水平增加有关。 展开更多
关键词 SHP-2酪氨酸磷酸酶 激活突变 mefs细胞
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