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基于MDCKⅡ细胞的中药成分体外肾毒性评价
被引量：
10
1
作者
刘庆
王旗
+1 位作者
杨秀伟
张宝旭
《中国药理学与毒理学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第6期521-528,共8页
目的用狗肾近端小管上皮（MDCKⅡ）细胞系研究中药成分的肾毒性，探讨其作为评价中药成分肾毒性体内动物实验替代方法的可能性。方法以氯化汞（HgCl2）为阳性对照，研究已知有肾毒性的马兜铃酸Ⅰ（AAⅠ）和马兜铃酸Ⅱ（AAⅡ），以及未...
目的用狗肾近端小管上皮（MDCKⅡ）细胞系研究中药成分的肾毒性，探讨其作为评价中药成分肾毒性体内动物实验替代方法的可能性。方法以氯化汞（HgCl2）为阳性对照，研究已知有肾毒性的马兜铃酸Ⅰ（AAⅠ）和马兜铃酸Ⅱ（AAⅡ），以及未见肾毒性报道的苦参碱、氧化苦参碱和肉豆蔻醚对MDCKⅡ细胞的毒性作用。用MTT法检测细胞存活；倒置显微镜观察细胞形态改变；乳酸脱氢酶（LDH）释放实验检测细胞膜损伤；流式细胞术分析细胞周期及细胞凋亡，用Hoechst33258染色法观察凋亡细胞形态变化。结果AAⅠ和AAⅡ分别与MDCKⅡ细胞作用24，48和72h细胞存活均被明显抑制，AAⅠ的IC50值分别为（63．4±6．6），（44．8±6．0）和（37．3±4．6）μmol·L^-1，AAⅡ的IC50值分另4为（125．7±6．2），（106．7±20．4）和（94．2±9．7）μmol·L^-1；在5—300μmol·L^-1时AAⅠ和AAⅡ分别与MDCKⅡ 细胞作用24h，LDH的释放率明显增高；AAⅠ（75μmol·L^-1）和AAⅡ（150μmol·L^-1）分别与MDCKⅡ细胞作用24h，倒置显微镜下可见细胞收缩变圆，部分细胞破裂脱落；用流式细胞仪和Ho-echst33258染色法观察亦发现，AAⅠ和AAⅡ均可使细胞周期S期阻滞，诱导MDCKⅡ细胞发生凋亡。苦参碱、氧化苦参碱和肉豆蔻醚在2～10mmol·L^-1浓度范围内分别与MDCKⅡ细胞作用24h，对上述指标均无明显影响。结论 MDCKⅡ细胞系对有肾毒性的AAⅠ和AAⅡ和未见肾毒性报道的苦参碱、氧化苦参碱和肉豆蔻醚的反应不同，可用于中药成分体外肾毒性评价。
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关键词
肾
毒性
mdck
ⅱ
细胞
中草药
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职称材料
构建MDCK Ⅱ-hMDR1-hCYP3A4共表达体系
2
作者
黄洁琼
徐云婷
+2 位作者
李佳俊
汪维鹏
张洪建
《药物生物技术》
CAS
2017年第4期289-293,共5页
构建MDCK-hMDR1-CYP3A4双转表达体系,研究CYP3A4和P-gp之间的相互作用。根据基因文库合成CYP3A4基因编码片段,连接到pc DNA3.1/Hypgro表达载体,进行测序。验证正确的重组质粒pc DNA3.1/Hypgro/h CYP3A4转染MDCK-MOCK细胞以及MDCK-hMDR1...
构建MDCK-hMDR1-CYP3A4双转表达体系,研究CYP3A4和P-gp之间的相互作用。根据基因文库合成CYP3A4基因编码片段,连接到pc DNA3.1/Hypgro表达载体,进行测序。验证正确的重组质粒pc DNA3.1/Hypgro/h CYP3A4转染MDCK-MOCK细胞以及MDCK-hMDR1细胞,经潮霉素B(Hygromycin B)加压筛选阳性克隆,获得稳定高表达人CYP3A4的MDCK-h CYP3A4单转以及MDCK-hMDR1-h CYP3A4双转稳转细胞株。结果显示相比于空白细胞(MDCK-MOCK)以及阴性细胞(MDCK-MDR1),CYP3A4在MDCK-h CYP3A4、MDCK-hMDR1-h CYP3A4细胞中的表达更稳定并且活性显著增强。MTT结果表明,在MOCK、MDCK-MDR1、MDCK-CYP3A4以及MDCK-MDR1-CYP3A4 4种细胞系中,苏尼替尼的IC_(50)值分别为2.832,5.717,3.628,6.561μmol/L,而伯舒替尼的IC_(50)值分别为0.712 6,4.413,2.184,7.010μmol/L。由于苏尼替尼和博苏替尼是CYP3A4以及P-gp的共同底物,CYP3A4的代谢活性以及P-gp的外排功能共同作用使得苏尼替尼和博苏替尼毒性降低,因而MDCK-hMDR1-h CYP3A4双转细胞株IC_(50)值比MDCK-hMDR1、MDCK-h CYP3A4明显增大。以上结果说明了构建的稳定单转MDCK-h CYP3A4以及MDCK-hMDR1-h CYP3A4双转细胞株是具有功能的,并且CYP3A4与P-gp之间的作用是相互影响的,同时该模型的建立也为药物的转运与代谢研究提供更全面的研究技术与思路。
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关键词
P-糖蛋白
代谢酶CYP3A4
共表达
mdck
ⅱ
细胞
细胞毒性
相互作用
原文传递
题名
基于MDCKⅡ细胞的中药成分体外肾毒性评价
被引量：
10
1
作者
刘庆
王旗
杨秀伟
张宝旭
机构
北京大学公共卫生学院毒理学系
北京大学药学院天然药物及仿生药物国家重点实验室
出处
《中国药理学与毒理学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第6期521-528,共8页
基金
北京科技计划项目(Z0004105040311)~~
文摘
目的用狗肾近端小管上皮（MDCKⅡ）细胞系研究中药成分的肾毒性，探讨其作为评价中药成分肾毒性体内动物实验替代方法的可能性。方法以氯化汞（HgCl2）为阳性对照，研究已知有肾毒性的马兜铃酸Ⅰ（AAⅠ）和马兜铃酸Ⅱ（AAⅡ），以及未见肾毒性报道的苦参碱、氧化苦参碱和肉豆蔻醚对MDCKⅡ细胞的毒性作用。用MTT法检测细胞存活；倒置显微镜观察细胞形态改变；乳酸脱氢酶（LDH）释放实验检测细胞膜损伤；流式细胞术分析细胞周期及细胞凋亡，用Hoechst33258染色法观察凋亡细胞形态变化。结果AAⅠ和AAⅡ分别与MDCKⅡ细胞作用24，48和72h细胞存活均被明显抑制，AAⅠ的IC50值分别为（63．4±6．6），（44．8±6．0）和（37．3±4．6）μmol·L^-1，AAⅡ的IC50值分另4为（125．7±6．2），（106．7±20．4）和（94．2±9．7）μmol·L^-1；在5—300μmol·L^-1时AAⅠ和AAⅡ分别与MDCKⅡ 细胞作用24h，LDH的释放率明显增高；AAⅠ（75μmol·L^-1）和AAⅡ（150μmol·L^-1）分别与MDCKⅡ细胞作用24h，倒置显微镜下可见细胞收缩变圆，部分细胞破裂脱落；用流式细胞仪和Ho-echst33258染色法观察亦发现，AAⅠ和AAⅡ均可使细胞周期S期阻滞，诱导MDCKⅡ细胞发生凋亡。苦参碱、氧化苦参碱和肉豆蔻醚在2～10mmol·L^-1浓度范围内分别与MDCKⅡ细胞作用24h，对上述指标均无明显影响。结论 MDCKⅡ细胞系对有肾毒性的AAⅠ和AAⅡ和未见肾毒性报道的苦参碱、氧化苦参碱和肉豆蔻醚的反应不同，可用于中药成分体外肾毒性评价。
关键词
肾
毒性
mdck
ⅱ
细胞
中草药
Keywords
kidney
toxicity
mdck
ⅱ
cells
drugs,
Chinese
herbal
分类号
R285.5 [医药卫生—中药学]
R965.2 [医药卫生—中医学]
下载PDF
职称材料
题名
构建MDCK Ⅱ-hMDR1-hCYP3A4共表达体系
2
作者
黄洁琼
徐云婷
李佳俊
汪维鹏
张洪建
机构
苏州农业职业技术学院
苏州大学药学院
出处
《药物生物技术》
CAS
2017年第4期289-293,共5页
基金
国家自然科学基金(No.81473278)
文摘
构建MDCK-hMDR1-CYP3A4双转表达体系,研究CYP3A4和P-gp之间的相互作用。根据基因文库合成CYP3A4基因编码片段,连接到pc DNA3.1/Hypgro表达载体,进行测序。验证正确的重组质粒pc DNA3.1/Hypgro/h CYP3A4转染MDCK-MOCK细胞以及MDCK-hMDR1细胞,经潮霉素B(Hygromycin B)加压筛选阳性克隆,获得稳定高表达人CYP3A4的MDCK-h CYP3A4单转以及MDCK-hMDR1-h CYP3A4双转稳转细胞株。结果显示相比于空白细胞(MDCK-MOCK)以及阴性细胞(MDCK-MDR1),CYP3A4在MDCK-h CYP3A4、MDCK-hMDR1-h CYP3A4细胞中的表达更稳定并且活性显著增强。MTT结果表明,在MOCK、MDCK-MDR1、MDCK-CYP3A4以及MDCK-MDR1-CYP3A4 4种细胞系中,苏尼替尼的IC_(50)值分别为2.832,5.717,3.628,6.561μmol/L,而伯舒替尼的IC_(50)值分别为0.712 6,4.413,2.184,7.010μmol/L。由于苏尼替尼和博苏替尼是CYP3A4以及P-gp的共同底物,CYP3A4的代谢活性以及P-gp的外排功能共同作用使得苏尼替尼和博苏替尼毒性降低,因而MDCK-hMDR1-h CYP3A4双转细胞株IC_(50)值比MDCK-hMDR1、MDCK-h CYP3A4明显增大。以上结果说明了构建的稳定单转MDCK-h CYP3A4以及MDCK-hMDR1-h CYP3A4双转细胞株是具有功能的,并且CYP3A4与P-gp之间的作用是相互影响的,同时该模型的建立也为药物的转运与代谢研究提供更全面的研究技术与思路。
关键词
P-糖蛋白
代谢酶CYP3A4
共表达
mdck
ⅱ
细胞
细胞毒性
相互作用
Keywords
P-glycoprotein
Cytochrome
P450
3A4
mdck
ⅱ
cells
Double-transfection
cell
variability
Interplay
分类号
Q7 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基于MDCKⅡ细胞的中药成分体外肾毒性评价
刘庆
王旗
杨秀伟
张宝旭
《中国药理学与毒理学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007
10
下载PDF
职称材料
2
构建MDCK Ⅱ-hMDR1-hCYP3A4共表达体系
黄洁琼
徐云婷
李佳俊
汪维鹏
张洪建
《药物生物技术》
CAS
2017
0
原文传递
已选择
0
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