用MDBK传代细胞繁殖BVDV毒株的研究 被引量：13

1

作者 王树成 林建辉 +1 位作者 刘宏 董志珍 《中国动物检疫》 CAS 1995年第4期6-8,共3页

关键词 牛病 病毒性腹泻 病毒 mdbk 传代细胞繁殖

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口蹄疫病毒前导蛋白(L^(pro))致牛肾细胞(MDBK)作用的形态学观察 被引量：7

2

作者 郝峰强 丛国正 +4 位作者 高闪电 林彤 独军政 邵军军 常惠芸 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期1614-1620,共7页

为探讨口蹄疫病毒Lpro致MDBK细胞病变效应中的形态学变化,本实验在成功构建可稳定表达口蹄疫病毒Lpro目的基因的MDBK细胞系的基础上,人工诱导Lpro表达后,采用光学显微镜观察、Hoechst33258染色、AO-EB染色、DNALadder等进行检测,研究口... 为探讨口蹄疫病毒Lpro致MDBK细胞病变效应中的形态学变化,本实验在成功构建可稳定表达口蹄疫病毒Lpro目的基因的MDBK细胞系的基础上,人工诱导Lpro表达后,采用光学显微镜观察、Hoechst33258染色、AO-EB染色、DNALadder等进行检测,研究口蹄疫病毒Lpro致MDBK细胞的病变效应。结果显示,MDBK细胞系在诱导表达口蹄疫病毒Lpro24h后,光学显微镜下细胞形态表现为细胞体积缩小、核浓缩、细胞周围出现透明圈等现象;Hoechst33258染色检测呈现典型的细胞核浓缩和梅花状核碎裂;诱导表达Lpro36h后,AO-EB染色显示早期病变细胞核染亮绿色呈致密斑块或碎片状,晚期病变细胞核染橘黄色呈致密斑块;DNA凝胶电泳显示可见的DNALadder"梯状"条带。证明口蹄疫病毒Lpro在体外可诱导MDBK细胞发生凋亡。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 Lpro mdbk 细胞凋亡

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牛病毒性腹泻病毒感染MDBK细胞和家兔前后炎症因子的表达变化 被引量：2

3

作者 任志军 康茜 +5 位作者 常丽云 陈颖彬 王紫燕 夏颖 秦建华 赵月兰 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期290-297,共8页

为了解牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)感染宿主后炎症因子的变化,以Madin-Darby牛肾细胞(Madin-Darby bovine kidney cells,MDBK)和家兔为宿主,选用炎症反应关键酶COX-2和炎症因子如IL-8、MIP-3α、GRO-α作为研... 为了解牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)感染宿主后炎症因子的变化,以Madin-Darby牛肾细胞(Madin-Darby bovine kidney cells,MDBK)和家兔为宿主,选用炎症反应关键酶COX-2和炎症因子如IL-8、MIP-3α、GRO-α作为研究指标。通过设计上述炎症因子的特异性引物,分别从MDBK、家兔脾脏组织和小肠上皮组织中分别扩增目的片段,建立实时荧光相对定量PCR方法检测感染前后COX-2和IL-8、MIP-3α、GRO-αmRNA的相对表达水平。结果表明,在BVDV感染MDBK细胞后,COX-2和IL-8、GRO-αmRNA表达量均显著高于未感染前(P<0.01);当BVDV感染家兔后小肠和脾细胞中COX-2和IL-8、GRO-α表达量均显著高于未感染前(P<0.05);但只有在脾细胞中,MIP-3αmRNA表达量显著高于未感染前(P<0.01)。说明BVDV感染宿主的过程中可引起COX-2和IL-8、GRO-α基因表达量的升高,推测MIP-3α在脾脏抗BVDV感染过程中发挥着重要的作用。 展开更多

关键词 BVDV mdbk 家兔 炎症因子 相对定量PCR

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牛病毒性腹泻病毒的分离与鉴定 被引量：1

4

作者 毕莹 倪宏波 《现代畜牧兽医》 2016年第7期14-16,共3页

为了对牛病毒性腹泻病毒进行分离鉴定,本试验通过对黑龙江省完达山牛场疑似感染牛病毒性腹泻病毒患牛的直肠粪便以及鼻拭子进行无菌采集,样品经常规处理后接种于MDBK细胞,盲传3次以及PCR扩增鉴定,最后对收集到的病毒进行蚀斑纯化试验。... 为了对牛病毒性腹泻病毒进行分离鉴定,本试验通过对黑龙江省完达山牛场疑似感染牛病毒性腹泻病毒患牛的直肠粪便以及鼻拭子进行无菌采集,样品经常规处理后接种于MDBK细胞,盲传3次以及PCR扩增鉴定,最后对收集到的病毒进行蚀斑纯化试验。结果表明,病毒MDBK细胞出现明显病变,PCR鉴定与预期结果相符,3次蚀斑纯化后分离到该病毒。结论可成功分离到牛病毒性腹泻病毒。 展开更多

关键词 牛病毒性腹泻病毒 mdbk 鉴定 蚀斑纯化

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建立表达犬NECTIN4的牛源细胞株用于培养犬瘟热病毒

5

作者 杨思鸣 蔡东焱 +3 位作者 孙曼曼 陈霄 戴晓峰 白仲虎 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期7-10,共4页

NECTIN4是犬瘟热病毒的受体之一。通过在牛肾MDBK细胞株中表达NECTIN4,建立MDBK-N4细胞株用于培养犬瘟热病毒。接种犬瘟热病毒后,MDBK-N4细胞能够扩增病毒并产生细胞病变,这说明病毒受体的表达增强了病毒与细胞膜表面的结合能力,进而改... NECTIN4是犬瘟热病毒的受体之一。通过在牛肾MDBK细胞株中表达NECTIN4,建立MDBK-N4细胞株用于培养犬瘟热病毒。接种犬瘟热病毒后,MDBK-N4细胞能够扩增病毒并产生细胞病变,这说明病毒受体的表达增强了病毒与细胞膜表面的结合能力,进而改变细胞对病毒的敏感性。这一发现为工业疫苗生产细胞株的开发提供了新的思路。 展开更多

关键词 犬瘟热病毒 NECTIN4 mdbk 受体

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牛病毒性腹泻病毒复制相关宿主细胞环状RNA的筛选 被引量：2

6

作者 侯晓旭 李村院 +10 位作者 蔡晓桃 李晓悦 刘芝瑾 张翔宇 姚洋 贾婷婷 杨会丹 龚美璠 贾志豪 倪伟 胡圣伟 《动物医学进展》 北大核心 2020年第9期30-35,共6页

为了明确环状RNA(circRNA)在牛病毒性腹泻病毒(BVDV)复制中的作用,用BVDV NADL感染牛肾细胞(MDBK)并进行高通量测序分析,结果获得大量差异表达circRNA,对高通量测序数据进行筛选,共获得了12个上调的circRNA,通过RNase R消化、荧光定量PC... 为了明确环状RNA(circRNA)在牛病毒性腹泻病毒(BVDV)复制中的作用,用BVDV NADL感染牛肾细胞(MDBK)并进行高通量测序分析,结果获得大量差异表达circRNA,对高通量测序数据进行筛选,共获得了12个上调的circRNA,通过RNase R消化、荧光定量PCR验证及通路分析,初步认为circ-0027407具有抑制病毒复制的可能性。在RNA干扰试验中,设计的干扰片段显著降低了circ-0027407的表达量,降低幅度约为66.1%,使用干扰载体转染MDBK细胞后感染病毒,发现干扰circ-0027407会显著增加病毒复制,提高了约113.2%。说明circ-0027407对BVDV感染有抑制作用。 展开更多

关键词 牛病毒性腹泻病毒 牛肾细胞 环状RNA 高通量测序 RNA干扰

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猪α干扰素表达蛋白ab的抗病毒效果研究

7

作者 陆辉 朱善元 +2 位作者 左伟勇 洪伟鸣 吴双 《安徽农业科学》 CAS 2012年第3期1509-1510,1522,共3页

[目的]探索猪α干扰素表达蛋白ab的抗病毒效果。[方法]通过测定猪α干扰素(PoIFN-α)表达的融合蛋白ab对接种水泡性口炎病毒(VSV)的牛肾细胞(MDBK)保护作用的效价,来研究其抗病毒效果。通过中和试验,测定保护50%细胞不产生病变所需PoIFN... [目的]探索猪α干扰素表达蛋白ab的抗病毒效果。[方法]通过测定猪α干扰素(PoIFN-α)表达的融合蛋白ab对接种水泡性口炎病毒(VSV)的牛肾细胞(MDBK)保护作用的效价,来研究其抗病毒效果。通过中和试验,测定保护50%细胞不产生病变所需PoIFN-α表达的融合蛋白ab的稀释度。[结果]PoIFN-α表达的融合蛋白ab具有显著的抗病毒作用,稀释度1∶4.9的2.0μg/ml ab蛋白溶液即可保护50%细胞不产生细胞病变。[结论]猪重组α干扰素具有高活性、纯度高、无毒副作用、无药物残留等特点,其研制与开发对猪生产实践和疾病防治具有重要意义。 展开更多

关键词 PoIFN-α 水泡性口炎病毒 牛肾细胞 融合蛋白ab 中和试验 效价

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牛干扰素(IF)的起动作用

8

作者 白吉荣 《动物医学进展》 1985年第9期34-36,共3页

起动作用是IF非抗病毒特性之一(Lockart1963,Stewart等1971,Tyring等1983)。在诱生之前,预先用少量IF处理细胞能引起IF产量增加。曾有人应用人和鼠IF对起动作用进行过研究。但是对其它动物IF的了解还很不够。

关键词 纤维细胞 产量 效价 滴度 诱生剂 mdbk 培养液 IF

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猪瘟病毒NS3蛋白对牛肾细胞生长的影响

9

作者 孙裴 张彦明 +2 位作者 魏建忠 李郁 王桂军 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期10-15,共6页

猪瘟病毒蛋白NS3被认为与培养细胞发生病变存在紧密联系,为了进一步探讨NS3蛋白单独作用及其表达水平对培养细胞CPE发生的影响,本研究构建了2种携带NS3基因的真核表达载体,分别在牛源细胞MDBK中表达NS3蛋白,利用荧光显微镜观察宿主细胞... 猪瘟病毒蛋白NS3被认为与培养细胞发生病变存在紧密联系,为了进一步探讨NS3蛋白单独作用及其表达水平对培养细胞CPE发生的影响,本研究构建了2种携带NS3基因的真核表达载体,分别在牛源细胞MDBK中表达NS3蛋白,利用荧光显微镜观察宿主细胞形态学变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western-blot检测目的蛋白表达情况。研究结果表明,2种载体均在MDBK中成功表达NS3蛋白;其中pCD-NA3.1-NS3质粒所表达的目的蛋白量较大,并使宿主细胞表现出明显的形态学变化;细胞凋亡检测结果表明NS3蛋白大量表达的宿主细胞凋亡率显著高于对照组。猪瘟NS3蛋白可以不需要猪瘟病毒其他蛋白的参与,具有直接造成宿主细胞发生病变的能力,但较低的蛋白存在水平并不能对宿主细胞造成可检测的损伤,推测活体内若能有效干扰瘟病毒NS3蛋白的产生或其功能可能会降低猪瘟或牛病毒性腹泻-黏膜病的发病率或使临床表现减轻。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 NS3蛋白 牛肾细胞 生长影响

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重组牛干扰素γ对病毒性MDBK细胞病变的抑制作用 被引量：9

10

作者 沙涌波 杨晓芳 《中国动物检疫》 CAS 1998年第2期10-11,共2页

本实验研究了重组牛干扰素对５种病毒诱导ＭａｒｄｉｎＤａｒｂｙ牛肾细胞产生细胞病变（ＣＰＥ）的抑制作用。通过比较重组牛干扰素ｒ处理和未处理情况下５种病毒的ｌｏｇＴＣＩＤ５０，发现水泡性口炎病毒（ＶＳＶ），牛呼吸道合胞... 本实验研究了重组牛干扰素对５种病毒诱导ＭａｒｄｉｎＤａｒｂｙ牛肾细胞产生细胞病变（ＣＰＥ）的抑制作用。通过比较重组牛干扰素ｒ处理和未处理情况下５种病毒的ｌｏｇＴＣＩＤ５０，发现水泡性口炎病毒（ＶＳＶ），牛呼吸道合胞病毒（ＢＲＳ）和副流感病毒３型对于重组牛干扰素有显著的敏感性，与对照相比，其ＴＣＩＤ５０分别增加１０００倍，７９４倍和３９８倍。牛腺病毒７型（Ａｄ－７）和传染性牛鼻气管炎病毒（ＩＢＲ）对重组牛干扰素的敏感性很弱，ＴＣＩＤ５０分别增长１．２５倍和１．５８倍。实验结果表明重组牛干扰素在治疗对其敏感性强的病毒性传染病方面具有潜在的应用价值。 展开更多

关键词 重组牛干扰素γ 细胞病变 mdbk细胞 干扰素

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柔嫩艾美耳球虫裂殖子对侵入细胞凋亡抑制通路的研究 被引量：7

11

作者 宋丽聪 王黎霞 +3 位作者 刘新月 赵晨璐 张建军 安健 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2016年第1期14-16,共3页

为了研究柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenlla)裂殖子入侵宿主细胞后对凋亡诱导的抑制通路,将纯化的裂殖子与牛肾传代细胞(MDBK细胞)共培养1.5 h。用含6%乙醇的完全培养基诱导细胞凋亡2.5 h,通过流式细胞术检测细胞凋亡率。采用标准试剂盒测... 为了研究柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenlla)裂殖子入侵宿主细胞后对凋亡诱导的抑制通路,将纯化的裂殖子与牛肾传代细胞(MDBK细胞)共培养1.5 h。用含6%乙醇的完全培养基诱导细胞凋亡2.5 h,通过流式细胞术检测细胞凋亡率。采用标准试剂盒测定Cyto C,Caspase8,Caspase9,Caspase3的活性。流式细胞术结果显示,入侵裂殖子的细胞在诱导凋亡后其凋亡率为4.57%,而未感染的细胞其凋亡率达到23.69%,二者差异显著(P<0.05),诱导凋亡的MDBK细胞早期凋亡率为19.50%,晚期凋亡率为4.19%,而感染裂殖子后诱导凋亡的MDBK细胞其早期凋亡率为3.53%,晚期凋亡率为1.04%,差异显著(P<0.05)。结果表明,裂殖子的入侵不但可以抑制细胞凋亡,还可以延缓细胞进入早期凋亡的时间。试剂盒结果表明,裂殖子使Cyto C,Caspase8,Caspase9的活性下降,而Caspase3没有变化。根据上述结果初步判断,E tenlla裂殖子抑制MDBK细胞的凋亡是通过线粒体通路。 展开更多

关键词 柔嫩艾美耳球虫 裂殖子 mdbk细胞 细胞凋亡 通路

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江苏省羊口疮病毒的分离鉴定及B2L基因的遗传进化分析 被引量：7

12

作者 王秋霞 朱相儒 +4 位作者 易成功 秦涛 陈素娟 彭大新 夏同海 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第4期950-958,共9页

为了解江苏省近年来羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)的流行情况,更好地控制江苏地区的羊口疮病,2013~2015年采集江苏部分地区羊口疮疑似病料121份,进行病毒分离鉴定及其B2L基因的遗传进化分析。结果显示,样品中ORFV PCR检测阳性4份,用胎羊... 为了解江苏省近年来羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)的流行情况,更好地控制江苏地区的羊口疮病,2013~2015年采集江苏部分地区羊口疮疑似病料121份,进行病毒分离鉴定及其B2L基因的遗传进化分析。结果显示,样品中ORFV PCR检测阳性4份,用胎羊鼻甲骨细胞(OFTu)和MDBK细胞进行病毒分离,分离到4株病毒。这4株病毒分别命名为ORFV/Ovis/XZ/Jiangsu/2015/China、ORFV1/Ovis/DT/Jiangsu/2015/China、ORFV2/Ovis/DT/Jiangsu/2015/China和ORFV/Ovis/SL/Jiangsu/2015/China。扩增ORFV的B2L基因全长并绘制遗传进化树。B2L基因序列分析显示,4株分离株之间的核酸同源性为98.5%~100.0%。遗传进化树显示,ORFV/Ovis/XZ/Jiangsu/2015/China株、ORFV1/Ovis/DT/Jiangsu/2015/China株和ORFV2/Ovis/DT/Jiangsu/2015/China株与SC-JY、GX-YB、JS-FX株聚成一簇,核苷酸同源性为97.8%~100.0%。ORFV/Ovis/SL/Jiangsu/2015/China与LiaoNing、HuB、Gansu株亲缘关系接近,核苷酸同源性为98.8%~98.9%。4株分离株与中国疫苗株的核苷酸同源性为96.8%~98.1%。结果表明,江苏地区的ORFV来源可能不同,有必要开展更为深入的流行病学调查,为防控江苏地区的羊口疮奠定基础。 展开更多

关键词 羊口疮病毒 胎羊鼻甲骨细胞 mdbk细胞 B2L基因 遗传进化分析

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冷热应激对牛PBMC和MDBK细胞活力及HSP70表达的影响 被引量：6

13

作者 康玲 胡丽蓉 +4 位作者 李玮 鄢新义 亓建刚 徐青 王雅春 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期1359-1365,共7页

以奶牛原代培养细胞PBMC（peripheral blood mononuclear cells）和商业化细胞系MDBK（madin-darby bovine kidney）为细胞模型，采用MTS、实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR）及Western blot等方法检测不同程度的冷热应激对... 以奶牛原代培养细胞PBMC（peripheral blood mononuclear cells）和商业化细胞系MDBK（madin-darby bovine kidney）为细胞模型，采用MTS、实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR）及Western blot等方法检测不同程度的冷热应激对牛PBMC和MDBK细胞活力及HSP70表达水平的影响，分析不同温度的冷热应激条件下细胞活力和HSP70表达变化的规律，以及不同类型细胞应答冷热应激的差异。结果显示，冷应激和热应激均会使细胞活力降低，应激强度越大，细胞活力越低；冷热应激会调控细胞中HSP70的表达水平，重度冷应激（10℃）下调HSP70的表达，而热应激则上调HSP70的表达，但若超过细胞耐受极限度HSP70表达开始下降；HSP70表达水平应对冷热应激的变化与细胞的类型和冷热应激强度有关。结果表明，冷热应激会降低细胞活力，调控细胞HSP70的表达水平，HSP70的表达变化能够反映细胞冷热应激的强度，可作为评价奶牛冷热应激反应的潜在分子标记在奶牛个体中进行深入研究。 展开更多

关键词 冷热应激 HSP70 细胞活力 PBMC细胞 mdbk细胞 基因表达

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脂筏在牛呼吸道合胞体病毒感染MDBK细胞中的作用 被引量：4

14

作者 李丽阳 刘洋 +2 位作者 王磊 李艳婷 侯喜林 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期643-647,共5页

为探讨脂筏在牛呼吸道合胞体病毒(bovine respiratory syncytial virus,BRSV)感染MDBK细胞中的作用,采用胆固醇去除药物MβCD处理MDBK细胞。结果显示,细胞膜胆固醇含量明显降低,同时也降低BRSV感染水平,补充外源胆固醇后,病毒感染力可... 为探讨脂筏在牛呼吸道合胞体病毒(bovine respiratory syncytial virus,BRSV)感染MDBK细胞中的作用,采用胆固醇去除药物MβCD处理MDBK细胞。结果显示,细胞膜胆固醇含量明显降低,同时也降低BRSV感染水平,补充外源胆固醇后,病毒感染力可部分恢复;表明细胞膜胆固醇的去除可以抑制BRSV的感染,BRSV的感染与细胞膜脂筏相关。进一步研究发现,胆固醇去除不会影响BRSV结合在靶细胞表面,但会抑制病毒进入靶细胞。在病毒感染后采用胆固醇去除药物MβCD处理MDBK细胞,对于病毒感染力的影响是轻微的。这些发现可有助于理解BRSV的感染机制,为研制安全、高效的疫苗和有效的治疗药物提供理论依据。 展开更多

关键词 牛呼吸道合胞体病毒 脂筏 MβCD mdbk细胞

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MiR-222对山羊副流感病毒3型复制的影响 被引量：4

15

作者 钟纯燕 李基棕 +9 位作者 毛立 李文良 郝飞 孙敏 刘茂军 主性 嵇辛勤 肖芳 杨蕾蕾 张纹纹 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期2664-2671,共8页

为探讨miR-222对山羊副流感病毒3型(CPIV3)复制的影响及其机制。本研究将miR-222模拟体转染MDBK细胞,接种CPIV3病毒液,收集上清和细胞,测定病毒效价和干扰素(IFN)含量;通过Target Scan和miRanda等生物信息学软件预测miR-222调控的靶基因... 为探讨miR-222对山羊副流感病毒3型(CPIV3)复制的影响及其机制。本研究将miR-222模拟体转染MDBK细胞,接种CPIV3病毒液,收集上清和细胞,测定病毒效价和干扰素(IFN)含量;通过Target Scan和miRanda等生物信息学软件预测miR-222调控的靶基因,用双荧光素酶报告系统验证其靶基因,RNA干扰技术研究靶基因对CPIV3复制的影响。结果显示,miR-222模拟体能抑制CPIV3复制,转染miR-222组IFN的表达水平较高,且病毒复制效价(10^(2. 5)TCID_(50)·0. 1 mL^(-1))显著低于miRNA阴性对照组(10^(3. 3)TCID_(50)·0. 1 mL^(-1));双荧光素酶报告系统验证和qPCR检测得出,miR-222可靶向结合IRF2的3'-UTR,并降解IRF2的mRNA和抑制IRF2蛋白表达;敲除IRF2的MDBK细胞感染CPIV3后,病毒复制效价(10^(2. 0)TCID_(50)·0. 1 mL^(-1))低于正常MDBK细胞组(10^(3. 2)TCID_(50)·0. 1 mL^(-1))。本研究表明,miR-222通过靶向降解IRF2 mRNA提高IFN表达水平来抑制CPIV3复制,为基于miR-222研制潜在抗病毒药物提供基础资料。 展开更多

关键词 山羊副流感病毒3型 MIR-222 mdbk细胞 IRF2

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牦牛热休克蛋白B11通过抗凋亡缓解热应激对肾细胞的体外损伤

16

作者 孟德飞 张康友 +8 位作者 颜勇 魏玲 泽仁翁姆 丁则德米 黄建钧 梅群弟 张楠驰 魏勇 王利 《兽类学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期489-496,共8页

热休克蛋白B11(Heat shock protein beta‑11,HSPB11)是小热休克蛋白家族的成员之一,具有抗凋亡、促进细胞存活和维持细胞形态等功能。在热应激条件下,自噬失调是急性肾损伤、肾损伤修复不全及慢性肾脏疾病的发病机制之一,而肾细胞的基... 热休克蛋白B11(Heat shock protein beta‑11,HSPB11)是小热休克蛋白家族的成员之一,具有抗凋亡、促进细胞存活和维持细胞形态等功能。在热应激条件下,自噬失调是急性肾损伤、肾损伤修复不全及慢性肾脏疾病的发病机制之一,而肾细胞的基础自噬是维持肾脏稳态、结构和功能的关键。为探讨牦牛HSPB11对热应激牛肾细胞(Madin Darby Bovine Kidney,MDBK)活性和凋亡的作用,本研究将MDBK细胞分为对照组、热应激组和处理组,采用PCR扩增、生物信息学分析、原核表达载体构建、CCK‑8法、吖啶橙染色法、荧光酶标仪检测、荧光定量PCR等方法。扩增得到牦牛HSPB11目的片段757 bp;构建的系统进化树显示,牦牛与黄牛HSPB11的相似性高达99%;成功构建pET‑32a‑HSPB11重组质粒,表达获得约35 kDa的牦牛HSPB11;筛选得到牦牛HSPB11最佳浓度为10.0μg/mL,作为处理组HSPB11浓度。研究结果显示,对照组细胞相对活性极显著高于热应激组(P=0.004),处理组细胞相对活性极显著高于热应激组(P<0.001)。热应激组细胞出现收缩、细胞核裂解呈现碎片状,处理组少见细胞裂解。此外,热应激组MDBK细胞核酸荧光强度均极显著高于对照组和处理组(P<0.001)。热应激组caspase‑3、caspase‑9、Bcl‑2的mRNA表达量极显著高于对照组和处理组(P<0.001)。综上,推测牦牛HSPB11通过凋亡途径缓解热应激对MDBK细胞损伤,为探究牦牛HSPB11的功能提供基础资料。 展开更多

关键词 热休克蛋白B11 热应激 mdbk细胞 凋亡

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牛结节性皮肤病病毒感染MDBK细胞后转录组差异表达分析 被引量：4

17

作者 曹政 居马别克·夏拉巴依 +1 位作者 李春燕 马力克·艾则孜 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期460-468,共9页

旨在探索牛结节性皮肤病病毒(lumpy skin disease virus,LSDV)与宿主细胞的相互作用,采集了具有典型临床症状的牛皮肤病变组织,接种MDBK细胞进行病毒分离,采用透射电镜观察病变组织及病毒感染后的MDBK细胞,同时对感染后24 h的MDBK细胞... 旨在探索牛结节性皮肤病病毒(lumpy skin disease virus,LSDV)与宿主细胞的相互作用,采集了具有典型临床症状的牛皮肤病变组织,接种MDBK细胞进行病毒分离,采用透射电镜观察病变组织及病毒感染后的MDBK细胞,同时对感染后24 h的MDBK细胞进行转录组学分析,筛选差异表达基因并将其按功能分类,分析它们参与的细胞信号通路。结果显示,LSDV在电镜下呈椭圆形,病毒粒子大小约320 nm×260 nm。转录组分析发现,与未处理组相比,显著差异表达的基因共499个,其中,112个基因上调表达,387个基因下调表达。通过GO和KEGG分析得知,差异表达基因主要富集在从细胞表面传导信号至细胞核内部的MAPK信号通路,其中,参与天然免疫且涉及细胞凋亡的MAP3K1基因表达呈现显著下调,提示病毒感染会影响宿主细胞的迁移与凋亡等过程。显著变化基因包括HIF1A、RORA、LRRK2、AP3B1和ANO6等,分别涉及到调节血管内皮生长因子、炎症反应、细胞增殖分化以及信号转导等功能,除此之外,不饱和脂肪酸及胆汁分泌两个信号通路也发生了显著变化。本研究为进一步深入探究LSDV的致病机制奠定了基础。 展开更多

关键词 牛结节性皮肤病病毒 mdbk细胞 高通量测序 转录组

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堆型艾美耳球虫裂殖子外分泌蛋白对细胞凋亡的抑制作用

18

作者 葛玉杰 王黎霞 +6 位作者 王诗琪 石梦云 陈玲玲 王梦琦 于慧 张建军 安健 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第4期81-85,共5页

为了研究堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)裂殖子的外分泌蛋白对马-达氏牛肾(MDBK)细胞凋亡的抑制作用,本试验建立Transwell小室间接共培养体系,即将E.acervulina裂殖子与MDBK细胞共培养,采用流式细胞术分别检测共培养1.5、3和6 h M... 为了研究堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)裂殖子的外分泌蛋白对马-达氏牛肾(MDBK)细胞凋亡的抑制作用,本试验建立Transwell小室间接共培养体系,即将E.acervulina裂殖子与MDBK细胞共培养,采用流式细胞术分别检测共培养1.5、3和6 h MDBK细胞的凋亡情况,利用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)对共培养6 h后的细胞上清液中的成分进行鉴定。结果显示,1.5、3和6 h共培养组MDBK细胞的总细胞凋亡率分别为(5.92±0.19)%、(8.13±0.32)%和(11.57±0.37)%,与对照组相比,总细胞凋亡率均极显著降低(P<0.01)。LC-MS/MS分析共鉴定到65个E.acervulina的外分泌蛋白,包括热休克蛋白、微线蛋白、能量代谢酶分子、蛋白磷酸酶分子和未知功能蛋白等。结果表明,E.acervulina裂殖子外分泌蛋白可抑制MDBK细胞凋亡,具体哪种蛋白在抑制细胞凋亡中发挥作用有待后续进一步研究。 展开更多

关键词 堆型艾美耳球虫 裂殖子 mdbk细胞 凋亡抑制 外分泌蛋白

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共表达口蹄疫病毒衣壳前体蛋白P1-2A基因和蛋白酶3C基因牛肾细胞株的筛选及稳定性 被引量：4

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作者 李炯 刘艳红 +4 位作者 刘湘涛 尚佑军 刘俊林 安芳兰 殷宏 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1520-1525,共6页

【目的】筛选稳定表达口蹄疫病毒衣壳蛋白的牛肾细胞(Madin-Darby bovine kidney,MDBK)株。【方法】采用聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)方法从重组质粒pMD-P1-2A和pMD-3C中分别扩增口蹄疫病毒衣壳前体蛋白P1-2A基因和... 【目的】筛选稳定表达口蹄疫病毒衣壳蛋白的牛肾细胞(Madin-Darby bovine kidney,MDBK)株。【方法】采用聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)方法从重组质粒pMD-P1-2A和pMD-3C中分别扩增口蹄疫病毒衣壳前体蛋白P1-2A基因和蛋白酶3C基因,将两基因依次插入逆转录病毒载体pBABE-puro。重组逆转录病毒载体pBABE-puro/P1-2A-3C和pVSV-G质粒载体用脂质体介导共转染GP2-293包装细胞。产生的重组逆转录病毒感染MDBK细胞后使用嘌呤霉素筛选抗性细胞。利用克隆环套取法得到单克隆细胞。经间接免疫荧光和酶联免疫吸附测定(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)方法检测MDBK细胞中衣壳蛋白的表达,并在电镜下观察口蹄疫病毒空衣壳。【结果】成功筛选到稳定表达口蹄疫病毒衣壳蛋白的MDBK细胞株,衣壳前体蛋白P1-2A在蛋白酶3C裂解作用下正确组装成空衣壳。【结论】该研究为口蹄疫亚单位疫苗的研制提供了实验材料。 展开更多

关键词 逆转录病毒载体 口蹄疫病毒 衣壳蛋白 mdbk细胞

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牛支原体黏附宿主细胞间接免疫荧光检测方法的建立 被引量：4

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作者 李明霞 陈胜利 +6 位作者 郝华芳 赵萍 季文恒 王展慧 刘永生 殷宏 储岳峰 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期1310-1314,1345,共6页

牛支原体可引起牛肺炎、乳腺炎和关节炎等多系统炎症，关于其黏附宿主细胞的机理有待深入研究。本试验以牛支原体08M株和牛肾细胞MDBK为研究对象，抗牛支原体多克隆抗体为一抗，FITC标记的兔抗牛IgG为二抗，通过优化牛支原体黏附滴度、... 牛支原体可引起牛肺炎、乳腺炎和关节炎等多系统炎症，关于其黏附宿主细胞的机理有待深入研究。本试验以牛支原体08M株和牛肾细胞MDBK为研究对象，抗牛支原体多克隆抗体为一抗，FITC标记的兔抗牛IgG为二抗，通过优化牛支原体黏附滴度、黏附时间及一抗、二抗工作浓度，建立牛支原体黏附宿主细胞的间接免疫荧光检测方法。最终确定牛支原体的最适黏附滴度为1×10^9CFU／mL，黏附时间为4h，一抗最适工作浓度为1：250，二抗最适工作浓度为1：250。本试验建立的间接免疫荧光方法可用于牛支原体黏附宿主细胞的检测，为牛支原体体外感染的检测及黏附机理的研究提供有效的技术手段。 展开更多

关键词 牛支原体 黏附 mdbk细胞 间接免疫荧光

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