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ATP与P2X_7受体在Müller细胞激活导致视网膜神经节细胞株RGC-5凋亡中的作用研究 被引量：2
1
作者 薛博 季敏 管怀进 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期182-188,共7页
目的 :探讨Müller细胞胶质化激活对RGC-5细胞的影响及ATP与P2X7受体在其中的相关作用。方法:纯化培养Müller细胞、RGC-5细胞株,免疫荧光进行细胞鉴定,并观察加入DHPG后Müller细胞的GFAP表达情况。荧光素酶法检测加入DHPG... 目的 :探讨Müller细胞胶质化激活对RGC-5细胞的影响及ATP与P2X7受体在其中的相关作用。方法:纯化培养Müller细胞、RGC-5细胞株,免疫荧光进行细胞鉴定,并观察加入DHPG后Müller细胞的GFAP表达情况。荧光素酶法检测加入DHPG后Müller细胞外ATP的含量变化;DHPG刺激后的培养液作为条件培养基加入RGC-5细胞株(RGC-5预先使用MPEP及MPMQ处理2 h),TUNEL法检测RGC-5凋亡情况,预先加入P2X7受体阻断剂亮蓝G(brilliant blue G,BBG)后检测RGC-5的凋亡情况。同时使用Western blot检测抗凋亡蛋白及促凋亡蛋白Bcl-2和Bax的变化情况。免疫荧光及Western blot检测RGC-5上P2X7受体的表达变化。结果:DHPG激活Müller细胞后可以导致细胞外ATP的增加;激活的Müller细胞条件培养基(conditioned medium,CM)可以导致RGC-5凋亡的明显增加。而BBG可以抑制RGC-5凋亡的增加,同时Western blot也显示与对照组相比CM显著降低RGC-5细胞上的Bcl-2蛋白水平,但增加了Bax的蛋白表达,而当预先加入BBG后再用CM处理则呈现相反的结果。另外Western blot及免疫荧光显示加入条件培养基后RGC-5细胞的P2X7受体蛋白表达增加。结论:Müller细胞的激活可以导致RGC-5细胞的凋亡,该现象可能与Müller细胞激活引起的ATP释放增加及RGC-5上P2X7受体有关。 展开更多
关键词 Müller细胞激活 P2X7受体 ATP 凋亡 RGC-5
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黄芪甲苷干预碘酸钠诱导的光感受器退行性病变的效应及相关机制
2
作者 李梅 常捷 +5 位作者 吴晗晗 徐静 杜霄烨 崔金刚 张腾 陈瑜 《中华眼底病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期454-462,共9页
目的观察并初步探讨黄芪甲苷(AS-A)干预碘酸钠(NaIO_(3))诱导的光感受器退行性病变的效应及相关机制。方法6~8周龄健康雄性C57BL/6J小鼠60只,随机分为正常对照组(NC组)、NaIO_(3)组、AS-A组,每组20只。建模前30 min,AS-A组按100 mg/kg... 目的观察并初步探讨黄芪甲苷(AS-A)干预碘酸钠(NaIO_(3))诱导的光感受器退行性病变的效应及相关机制。方法6~8周龄健康雄性C57BL/6J小鼠60只,随机分为正常对照组(NC组)、NaIO_(3)组、AS-A组,每组20只。建模前30 min,AS-A组按100 mg/kg的剂量腹腔注射100μl AS-A;30 min后,NaIO_(3)组、AS-A组小鼠按30 mg/kg的剂量腹腔注射100μl NaIO_(3)。其后,AS-A组小鼠每天早晚间隔12 h给药2次,直到实验结束。建模后1 d,紧密连接蛋白(ZO-1)染色观察视网膜色素上皮(RPE)细胞结构;实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测各组小鼠视网膜趋化因子配体2(Ccl2)、白细胞介素1β(Il-1β)、混合谱系激酶结构域样蛋白(Mlkl)、受体相互作用蛋白激酶3(Ripk3)、肿瘤坏死因子(Tnf)等基因的mRNA相对表达量。建模后3 d,免疫组织化学染色观察各组小鼠视网膜中离子钙接头蛋白1(Iba1)、神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性表达;原位末端标记(TUNEL)法检测各组小鼠视网膜光感受器细胞的死亡情况。建模后4 d,采用眼底彩色照相、光相干断层扫描(OCT)检查观察各组小鼠眼底形态;苏木精-伊红染色(HE)观察各组小鼠视网膜形态结构。两组间比较采用独立样本t检验;三组间比较采用单因素方差分析。结果眼底彩色照相、OCT检查发现,NaIO_(3)组小鼠眼底可见大量散在黄白色玻璃膜疣样结构,RPE层出现大量强反射区;AS-A组RPE层中强反射区数量减少。ZO-1染色结果显示,NaIO_(3)组RPE细胞膜上ZO-1大量丢失;AS-A组ZO-1均匀分布于RPE细胞膜上。HE染色结果显示,NaIO_(3)组RPE层可见圆形黑色沉积物,光感受器内外节结构严重受损,外核层(ONL)细胞层核数显著减少;AS-A组RPE层色素整齐,光感受器内外节结构完整,ONL细胞核层数显著增加。TUNEL检测结果显示,NaIO_(3)组ONL可见大量TUNEL阳性细胞核,AS-A组视网膜ONL中TUNEL阳性细胞核数量显著减少,差异有统计学意义(t=2.66,P<0.05)。 展开更多
关键词 黄芪甲苷 视网膜 光感受器退行性病变 细胞死亡 小胶质细胞激活 Müller细胞反应性胶质增生 动物实验
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