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海刺参i型溶菌酶基因的重组表达及抑菌谱分析 被引量：23
1
作者 王秀霞 丛丽娜 +2 位作者 王丹 杨西建 朱蓓薇 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期189-194,共6页
将本实验室已分离到的海刺参（Stichopus japonicus）i型溶菌酶的基因（GenBank Accession No.EF036468）亚克隆进原核表达载体pET32a（＋）中,构建重组质粒pET32a（＋）-SjLys,转化至大肠杆菌BL21（DE3）pLysS。阳性克隆子经诱导表达... 将本实验室已分离到的海刺参（Stichopus japonicus）i型溶菌酶的基因（GenBank Accession No.EF036468）亚克隆进原核表达载体pET32a（＋）中,构建重组质粒pET32a（＋）-SjLys,转化至大肠杆菌BL21（DE3）pLysS。阳性克隆子经诱导表达、亲和纯化和透析复性,得到了酶活力为19.2 U/mg的重组SjLys（rSjLys）,并对rSjLys进行了抑菌谱测定。结果表明,rSjLys对革兰氏阳性菌和阴性菌均有抑制作用,尤其对常见的海洋致病菌副溶血弧菌和铜绿假单胞菌具有很强的抑菌活性。更为显著的结果是,rSjLys经100oC、40 min加热处理后,失活的rSjLys对革兰氏阳性菌和阴性菌的抑菌能力高于rSjLys的9%~25%。上述结果表明,海刺参溶菌酶是一种具有糖苷酶活性和非酶抑菌活性的特殊的i型溶菌酶,且具有很广的抑菌活性,在海刺参机体先天免疫系统中是一个重要的效应分子。 展开更多
关键词 海刺参 溶菌酶 重组表达 抗菌活性
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大肠杆菌K88噬菌体的分离鉴定及其生物学特性 被引量：17
2
作者 王冉 韩晗 +2 位作者 张辉 包红朵 王恬 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2012年第4期163-167,共5页
分离鉴定裂解性产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)K88噬菌体,并研究其生物学特性及裂菌效力。用双层平板法从猪场污水中分离噬菌体,通过透射电镜和酶切基因组对获得的噬菌体进行鉴定;同时测定了噬菌体最佳感染复数、一步生长曲线、酸碱稳定性、... 分离鉴定裂解性产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)K88噬菌体,并研究其生物学特性及裂菌效力。用双层平板法从猪场污水中分离噬菌体,通过透射电镜和酶切基因组对获得的噬菌体进行鉴定;同时测定了噬菌体最佳感染复数、一步生长曲线、酸碱稳定性、热稳定性等噬菌体的生物学特性及其体外裂菌效力。结果表明分离获得了一株产肠毒素性大肠杆菌K88强裂解性噬菌体,命名为PK88-4;其噬菌斑清晰透亮,周围无晕环;电镜显示:其头部呈正多面体对称,有可伸缩性尾部;核酸类型为双链DNA(基因组大小约60 kb);该噬菌体能耐受60℃左右高温、在pH值为5～10内效价稳定;最佳感染复数为0.01;潜伏期为10 min,暴发期为40 min,裂解量为40;在5 h内对培养液中的大肠杆菌杀灭率将近100%。PK88-4是一株强裂解性肌尾科大肠杆菌K88噬菌体,具有裂解周期短、杀菌能力强等特点,为畜牧业防治产肠毒素性大肠杆菌K88感染提供了新的思路。 展开更多
关键词 产肠毒素性大肠杆菌K88 裂解性噬菌体 生物学特性 裂菌效力
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凡纳滨对虾溶菌酶基因在大肠杆菌中的表达和活性检测 被引量：13
3
作者 张海波 谭洪新 +4 位作者 王兴强 吴嘉敏 秦松 陈华新 阎斌伦 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期48-53,共6页
将凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)血淋巴细胞中提取的总RNA,经RT-PCR扩增溶菌酶基因(LvLys基因)的开放阅读框,将其克隆至pMD18-T并测序。用限制性内切酶BamHⅠ和HindⅢ双酶切取目的基因并与表达载体pET-28a(+)连接,构建重组质粒pET-2... 将凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)血淋巴细胞中提取的总RNA,经RT-PCR扩增溶菌酶基因(LvLys基因)的开放阅读框,将其克隆至pMD18-T并测序。用限制性内切酶BamHⅠ和HindⅢ双酶切取目的基因并与表达载体pET-28a(+)连接,构建重组质粒pET-28(a+)/LvLys,转移到BL21(DE3)中诱导表达。经亲和纯化得到凡纳滨对虾重组溶菌酶。抑菌活性检测表明重组溶菌酶对大肠杆菌TOP10有一定抑制作用。 展开更多
关键词 凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei) 溶菌酶基因 原核表达 溶菌活性
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斑节对虾溶菌酶基因的原核表达与产物活性检测 被引量：11
4
作者 郑清梅 叶星 +3 位作者 白俊杰 吴锐全 劳海华 罗建仁 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期20-24,共5页
采用PCR方法对所克隆的斑节对虾溶菌酶基因的cDNA进行改造,并克隆至含温控启动子PRPL的大肠杆菌表达质粒pBV220,构建斑节对虾溶菌酶表达载体pBV220 lyz。该质粒转化大肠杆菌后经42℃诱导表达。SDS PAGE电泳表明,表达产物中有16kD左右的... 采用PCR方法对所克隆的斑节对虾溶菌酶基因的cDNA进行改造,并克隆至含温控启动子PRPL的大肠杆菌表达质粒pBV220,构建斑节对虾溶菌酶表达载体pBV220 lyz。该质粒转化大肠杆菌后经42℃诱导表达。SDS PAGE电泳表明,表达产物中有16kD左右的特异性条带,与预期斑节对虾溶菌酶分子量相符。薄层扫描显示,重组斑节对虾溶菌酶约占全菌总蛋白的32%,纯化后的重组斑节对虾溶菌酶占全菌可溶性蛋白的90%左右。比浊法检测复性后产物的生物活性,结果表明重组斑节对虾溶菌酶的最适pH为6.0,最适温度为40℃。测定了重组斑节对虾溶菌酶对溶壁微球菌和几种鱼病原菌菌株的溶菌活力,结果表明,重组斑节对虾溶菌酶对溶壁微球菌、溶藻弧菌和鳗弧菌有较强的溶菌活力,对爱德华氏菌有一定的溶菌活力,对嗜水气单胞菌、副溶血弧菌和大肠杆菌DH5α溶菌活力较弱。 展开更多
关键词 斑节对虾 溶菌酶基因 原核表达 溶菌活性
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