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3种方法对临床菌血症样本细菌DNA提取的比较 被引量：5
1
作者 赵晓丽 李晓霞 +3 位作者 刘德华 任宝军 邵剑春 胡大春 《昆明医科大学学报》 CAS 2014年第4期117-120,共4页
目的寻找一种简单、有效的提取临床菌血症样本细菌DNA的方法.方法分别用碱液加热裂解法、溶菌酶法和商品DNA提取液法提取细菌DNA,用临床常见病原菌特异性引物,进行PCR扩增.结果 (1)商品DNA提取液法提取革兰阴性菌DNA,经PCR扩增后得到特... 目的寻找一种简单、有效的提取临床菌血症样本细菌DNA的方法.方法分别用碱液加热裂解法、溶菌酶法和商品DNA提取液法提取细菌DNA,用临床常见病原菌特异性引物,进行PCR扩增.结果 (1)商品DNA提取液法提取革兰阴性菌DNA,经PCR扩增后得到特异性目的片段,但未扩增出革兰阳性菌的特异性目的片段;(2)碱液加热裂解法、溶菌酶法提取革兰阴、阳性菌DNA,经PCR扩增后均得到特异性目的片段,但碱液加热裂解法比溶菌酶法能扩增到更低浓度的细菌DNA目的片段.结论碱液加热裂解法是3种方法中最简单有效的细菌DNA提取方法,适用于临床病原菌基因组DNA提取. 展开更多
关键词 细菌DNA 碱液加热裂解法 溶菌酶法 商品DNA提取法
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渔用溶菌酶制品的稳定性研究 被引量：4
2
作者 邢思华 华雪铭 +3 位作者 朱站英 黄卫 沈彦萍 沈文婧 《饲料工业》 北大核心 2014年第22期20-23,共4页
设计了溶菌酶制品特性、制粒模拟、体外消化和储存试验研究溶菌酶制品的稳定性。溶菌酶特性试验通过设置不同温度条件和p H值条件测定溶菌酶制品的酶活变化。结果表明,该溶菌酶制品的最适温度为70℃左右,而p H值在3.0~8.0之间对溶菌酶... 设计了溶菌酶制品特性、制粒模拟、体外消化和储存试验研究溶菌酶制品的稳定性。溶菌酶特性试验通过设置不同温度条件和p H值条件测定溶菌酶制品的酶活变化。结果表明,该溶菌酶制品的最适温度为70℃左右,而p H值在3.0~8.0之间对溶菌酶的酶活影响不显著（P〉0.05）。通过挤压和高温处理模拟饲料加工环境,结果表明,挤压和高温处理对溶菌酶饲料的酶活力影响不显著（P〉0.05）。体外消化试验结果表明,鱼类消化道所分泌的消化酶对溶菌酶制品活力的影响因鱼的种类以及消化道部位的不同而不同。溶菌酶饲料的储存试验表明,随着保存时间的延长,饲料中的溶菌酶活力逐渐降低,0~60 d下降较为明显,90 d后相对较为稳定;该溶菌酶制品在饲料中的储存稳定性优于单独存放。研究表明,该溶菌酶制品具有耐高温、耐挤压、对酸碱度不敏感等特性;尽管添加溶菌酶制品的饲料在三个月之后仍能保持较高的溶菌酶活性,但需要充分考虑到因消化酶对溶菌酶制品的消化分解造成的溶菌酶损失问题。 展开更多
关键词 溶菌酶制品 温度 P H值 挤压 消化耐受性 储存时间
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转基因羊奶表达重组人溶菌酶的急性毒性及过敏性研究 被引量：1
3
作者 吕超 包琪 +3 位作者 邹世颖 陈思媛 贺晓云 黄昆仑 《食品安全质量检测学报》 CAS 2014年第9期2831-2836,共6页
目的研究该转基因羊奶表达的重组人溶菌酶的急性毒性和过敏性,确保食品质量安全。方法通过小鼠经口急性毒性、体外模拟胃肠道消化和体外热稳定性试验进行研究。结果小鼠经口急性毒性试验结果显示,重组人溶菌酶对小鼠最大耐受剂量>500... 目的研究该转基因羊奶表达的重组人溶菌酶的急性毒性和过敏性,确保食品质量安全。方法通过小鼠经口急性毒性、体外模拟胃肠道消化和体外热稳定性试验进行研究。结果小鼠经口急性毒性试验结果显示,重组人溶菌酶对小鼠最大耐受剂量>5000 mg/kg.BW.,属实际无毒。体外模拟胃肠道消化试验结果显示,重组人溶菌酶在模拟胃液中2~30min内全部消化;在模拟肠液中15 s^2min内全部消化:体外热稳定性试验结果显示,重组人溶菌酶在100℃加热60 min不会降解。结论该重组人溶菌酶的毒性与过敏性风险较低,可以安全应用于食品行业。 展开更多
关键词 人溶菌酶 急性毒性 致敏性 模拟消化
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非融合海参溶菌酶在大肠杆菌中的表达、纯化及酶活鉴定 被引量：3
4
作者 张齐 牛庆昌 +4 位作者 姜琳 黄君 马俊 丛丽娜 李成 《大连工业大学学报》 CAS 北大核心 2018年第2期84-88,共5页
利用实验室已构建好的表达载体pET32a(+)-SjLys,在基因工程菌RoSetta(DE3)plysS中表达重组融合海参溶菌酶rSjLys。利用融合的组氨酸标签,通过Ni 2+-NTA层析柱分离、纯化,获得高纯度的重组海参溶菌酶。利用重组牛肠激酶在22℃、pH 7.4、... 利用实验室已构建好的表达载体pET32a(+)-SjLys,在基因工程菌RoSetta(DE3)plysS中表达重组融合海参溶菌酶rSjLys。利用融合的组氨酸标签,通过Ni 2+-NTA层析柱分离、纯化,获得高纯度的重组海参溶菌酶。利用重组牛肠激酶在22℃、pH 7.4、16h条件下对目的蛋白rSjLys的融合标签Trx-His-S tag进行完全酶切,通过Ni 2+-NTA层析柱纯化得到纯度大于99%的非融合的海参溶菌酶SjLys。实验结果表明,作为i型溶菌酶,与rSjLys比较,非融合海参溶菌酶对指示菌溶壁微球菌具有明显的抑菌作用。 展开更多
关键词 海参溶菌酶 重组蛋白 肠激酶酶切 抑菌活性
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