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两种抗病基因双T-DNA区双元载体的构建
被引量：
1
1
作者
吴磊
史秀岚
+2 位作者
田巍
刘巧泉
王幼平
《分子植物育种》
CAS
CSCD
2010年第5期976-980,共5页
选择标记基因的删除是植物转基因工程中重要的步骤之一,双T-DNA区双元载体转化法以其共整合频率高、删除标记基因效率高的优点在植物遗传转化中应用非常广泛。本文通过构建天麻抗真菌蛋白基因、脂质转移蛋白基因双T-DNA区双元载体,为培...
选择标记基因的删除是植物转基因工程中重要的步骤之一,双T-DNA区双元载体转化法以其共整合频率高、删除标记基因效率高的优点在植物遗传转化中应用非常广泛。本文通过构建天麻抗真菌蛋白基因、脂质转移蛋白基因双T-DNA区双元载体,为培育不含选择标记基因的抗病新材料奠定基础。通过PCR的方法克隆GAFP基因,产物纯化测序确定序列准确后与pSB130-35S载体进行BamHⅠ、SacⅠ双酶切;pCAMBIA2300-LTP、pSB130-35S经EcoRⅠ、HindⅢ双酶切,酶切产物纯化后连接,连接产物转化大肠杆菌。采用基因特异性引物进行菌液PCR鉴定阳性克隆,重组质粒pSB130-GAFP、pSB130-LTP双酶切产物大小分别为540bp、1200bp,与预期产物大小一致,pSB130-GAFP、pSB130-LTP双T-DNA区双元载体构建成功。载体pSB130-GAFP、pSB130-LTP转化根癌农杆菌后可以直接用于植物的遗传转化。
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关键词
双元载体
双T-DNA区
天麻抗真菌蛋白基因
脂质转移蛋白基因
下载PDF
职称材料
牡丹非特异性脂质转移蛋白基因PsLTP的生物信息学分析
2
作者
问荣荣
苏钰
+3 位作者
高泽芳
徐梦宇
何雯雯
王步勇
《安徽农业科学》
CAS
2024年第2期87-92,共6页
[目的]了解牡丹非特异性脂质转移蛋白基因LTP的基因特征及其编码蛋白的生物学特性,探索其生物功能。[方法]运用Blast、ORF-Finder、ProtParam、SignalP 4.1、ProtScale和TMHMM 2.0 Server等生物信息学软件,分析牡丹nsLTP基因序列及其编...
[目的]了解牡丹非特异性脂质转移蛋白基因LTP的基因特征及其编码蛋白的生物学特性,探索其生物功能。[方法]运用Blast、ORF-Finder、ProtParam、SignalP 4.1、ProtScale和TMHMM 2.0 Server等生物信息学软件,分析牡丹nsLTP基因序列及其编码蛋白的基本理化性质、信号肽、磷酸化位点、保守结构域等,并运用DANMAN、MEGA软件进行多序列比对和系统发育树构建。[结果]牡丹nsLTP基因(NCBI登录号为:JZ840269.1)序列全长为685 bp,开放阅读框长为354 bp,编码蛋白包含117个氨基酸,理论等电点为8.93,为不稳定性蛋白。牡丹nsLTP蛋白为疏水性蛋白,含有信号肽但不含跨膜结构域,NetPho Server预测其含有8个丝氨酸和3个酪氨酸磷酸化位点及5个苏氨酸磷酸化位点。PsnsLTP蛋白具有植物LTP蛋白典型结构,即4个α-螺旋,4对二硫键,1个可结合和容纳脂质分子的疏水结构。多序列比对及系统发育树分析显示,PsLTP蛋白与绒毛烟草LTP蛋白(XP_009608993.1)的相识度62.7%,且进化树聚为同一小分支,遗传距离较近。[结论]通过对牡丹nsLTP基因特性及蛋白结构研究,系统性研究了牡丹nsLTP基因的生物信息学特性,为牡丹抗病抗逆功能基因的研究提供了依据,也为其他植物nsLTP基因研究提供了参考。
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关键词
牡丹
非特异性脂质转移蛋白基因
ltp
蛋白结构
生物信息学
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职称材料
题名
两种抗病基因双T-DNA区双元载体的构建
被引量：
1
1
作者
吴磊
史秀岚
田巍
刘巧泉
王幼平
机构
扬州大学生物科学与技术学院
扬州大学农学院
出处
《分子植物育种》
CAS
CSCD
2010年第5期976-980,共5页
基金
转基因重大专项(2009ZX08004-002B)
江苏省大学生实践创新训练计划共同资助
文摘
选择标记基因的删除是植物转基因工程中重要的步骤之一,双T-DNA区双元载体转化法以其共整合频率高、删除标记基因效率高的优点在植物遗传转化中应用非常广泛。本文通过构建天麻抗真菌蛋白基因、脂质转移蛋白基因双T-DNA区双元载体,为培育不含选择标记基因的抗病新材料奠定基础。通过PCR的方法克隆GAFP基因,产物纯化测序确定序列准确后与pSB130-35S载体进行BamHⅠ、SacⅠ双酶切;pCAMBIA2300-LTP、pSB130-35S经EcoRⅠ、HindⅢ双酶切,酶切产物纯化后连接,连接产物转化大肠杆菌。采用基因特异性引物进行菌液PCR鉴定阳性克隆,重组质粒pSB130-GAFP、pSB130-LTP双酶切产物大小分别为540bp、1200bp,与预期产物大小一致,pSB130-GAFP、pSB130-LTP双T-DNA区双元载体构建成功。载体pSB130-GAFP、pSB130-LTP转化根癌农杆菌后可以直接用于植物的遗传转化。
关键词
双元载体
双T-DNA区
天麻抗真菌蛋白基因
脂质转移蛋白基因
Keywords
Binary
vector
Twin
T-DNA
Gastrodia
antifungal
protein
gene
（GAFP）
lipid
transfer
protein
gene
（
ltp
）
分类号
S336 [农业科学—作物遗传育种]
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职称材料
题名
牡丹非特异性脂质转移蛋白基因PsLTP的生物信息学分析
2
作者
问荣荣
苏钰
高泽芳
徐梦宇
何雯雯
王步勇
机构
菏泽学院农业与生物工程学院
出处
《安徽农业科学》
CAS
2024年第2期87-92,共6页
文摘
[目的]了解牡丹非特异性脂质转移蛋白基因LTP的基因特征及其编码蛋白的生物学特性,探索其生物功能。[方法]运用Blast、ORF-Finder、ProtParam、SignalP 4.1、ProtScale和TMHMM 2.0 Server等生物信息学软件,分析牡丹nsLTP基因序列及其编码蛋白的基本理化性质、信号肽、磷酸化位点、保守结构域等,并运用DANMAN、MEGA软件进行多序列比对和系统发育树构建。[结果]牡丹nsLTP基因(NCBI登录号为:JZ840269.1)序列全长为685 bp,开放阅读框长为354 bp,编码蛋白包含117个氨基酸,理论等电点为8.93,为不稳定性蛋白。牡丹nsLTP蛋白为疏水性蛋白,含有信号肽但不含跨膜结构域,NetPho Server预测其含有8个丝氨酸和3个酪氨酸磷酸化位点及5个苏氨酸磷酸化位点。PsnsLTP蛋白具有植物LTP蛋白典型结构,即4个α-螺旋,4对二硫键,1个可结合和容纳脂质分子的疏水结构。多序列比对及系统发育树分析显示,PsLTP蛋白与绒毛烟草LTP蛋白(XP_009608993.1)的相识度62.7%,且进化树聚为同一小分支,遗传距离较近。[结论]通过对牡丹nsLTP基因特性及蛋白结构研究,系统性研究了牡丹nsLTP基因的生物信息学特性,为牡丹抗病抗逆功能基因的研究提供了依据,也为其他植物nsLTP基因研究提供了参考。
关键词
牡丹
非特异性脂质转移蛋白基因
ltp
蛋白结构
生物信息学
Keywords
Peony
Non⁃specific
lipid
transfer
protein
gene
ltp
protein
structure
Bioinformatics
分类号
Q781 [生物学—分子生物学]
S685.11 [农业科学—观赏园艺]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
两种抗病基因双T-DNA区双元载体的构建
吴磊
史秀岚
田巍
刘巧泉
王幼平
《分子植物育种》
CAS
CSCD
2010
1
下载PDF
职称材料
2
牡丹非特异性脂质转移蛋白基因PsLTP的生物信息学分析
问荣荣
苏钰
高泽芳
徐梦宇
何雯雯
王步勇
《安徽农业科学》
CAS
2024
0
下载PDF
职称材料
已选择
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