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肺炎支原体膜脂蛋白诱导A549细胞mICAM-1表达上调 被引量：3
1
作者 董碧麟 刘先洲 +2 位作者 汤纪路 白瑞珍 宗润芝 《武汉大学学报（医学版）》 CAS 2004年第6期642-644,651,共4页
目的 :观察肺炎支原体膜脂蛋白 (Mp -LAMP)对肺腺上皮癌细胞 (A5 4 9细胞 )mICAM - 1表达的影响并探讨膜脂蛋白中的活性成分 ,为阐明肺炎支原体感染所致炎性反应奠定基础。方法 :用流式细胞术检测Mp -LAMP不同浓度刺激组、不同时间刺激... 目的 :观察肺炎支原体膜脂蛋白 (Mp -LAMP)对肺腺上皮癌细胞 (A5 4 9细胞 )mICAM - 1表达的影响并探讨膜脂蛋白中的活性成分 ,为阐明肺炎支原体感染所致炎性反应奠定基础。方法 :用流式细胞术检测Mp -LAMP不同浓度刺激组、不同时间刺激组及消化酶处理组的A5 4 9细胞mICAM - 1的表达水平。结果 :与正常细胞相比 ,A5 4 9细胞受到Mp -LAMP作用后 ,mICAM - 1的表达水平明显上调 (P <0 .0 1) ,且对Mp -LAMP具有浓度依耐性。随着Mp -LAMP作用时间的延长 ,A5 4 9细胞mICAM - 1表达水平逐渐上升 ,作用 16h时达到高峰 ,然后开始下降。酶消化试验证实Mp -LAMP的活性成分是其脂质部分。 结论 :肺炎支原体膜脂蛋白中的脂质成分可以诱导A5 4 9细胞mICAM - 1表达水平的上调 ,在很大程度上影响着肺炎支原体所致炎性反应的强弱。 展开更多
关键词 肺炎支原体 膜脂蛋白 膜结合型细胞间粘附分子-1
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维生素C对肺炎支原体膜脂蛋白诱导细胞mICAM-1表达的调控 被引量：1
2
作者 朱泽荣 刘先洲 +4 位作者 饶帮忠 汤纪路 白瑞珍 宗润芝 柳卫凰 《公共卫生与预防医学》 2005年第1期19-21,共3页
目的　观察维生素C对肺炎支原体膜脂蛋白(Mp- L AMP)诱导A5 4 9细胞、ECV30 4细胞表达m l CAM- 1的影响;探讨维生素C对肺炎支原体膜脂蛋白诱导的炎症反应的抑制作用。方法　用流式细胞术检测不同浓度维生素C作用于2 5 ug/ m1膜脂蛋白刺... 目的　观察维生素C对肺炎支原体膜脂蛋白(Mp- L AMP)诱导A5 4 9细胞、ECV30 4细胞表达m l CAM- 1的影响;探讨维生素C对肺炎支原体膜脂蛋白诱导的炎症反应的抑制作用。方法　用流式细胞术检测不同浓度维生素C作用于2 5 ug/ m1膜脂蛋白刺激的A5 4 9细胞、ECV30 4细胞后ml CAM- 1的表达水平。结果　与对照组相比,不同刺激浓度的维生素C对膜脂蛋白刺激的A5 4 9细胞ml CAM- 1的表达水平无显著性差异(P>0 .0 5 ) ,但对膜脂蛋白刺激ECV30 4细胞的ml CAM- 1的表达具有抑制作用(P<0 .0 5 ) ,维生素浓度越高,抑制作用越明显。结论　维生素C能抑制肺炎支原体膜脂蛋白诱导的ECV30 4细胞m l CAM- 1表达的上调,对A5 4 9细胞m ICAM- 1的表达水平无影响。维生素C抑制血管内皮细胞m l CAM- 1的表达。 展开更多
关键词 肺炎支原体 膜脂蛋白 维生素C 膜结合型细胞间粘附分子-1 mICAM-1 MP 原核生物
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肺炎支原体膜脂蛋白通过TLR2介导mICAM-1表达的上调 被引量：4
3
作者 董碧麟 汤纪路 +2 位作者 白瑞珍 宗润芝 刘先洲 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期103-106,共4页
目的　观察肺炎支原体膜脂蛋白 (Mp LAMP)对THP 1 (前单核白血病细胞系 )细胞TLR2 (Toll样受体 )与mICAM 1 (膜结合型细胞间黏附分子 1 )表达的影响 ,探讨膜脂蛋白中的活性成分及二者表达的相互关系。方法　用流式细胞术检测Mp LAM... 目的　观察肺炎支原体膜脂蛋白 (Mp LAMP)对THP 1 (前单核白血病细胞系 )细胞TLR2 (Toll样受体 )与mICAM 1 (膜结合型细胞间黏附分子 1 )表达的影响 ,探讨膜脂蛋白中的活性成分及二者表达的相互关系。方法　用流式细胞术检测Mp LAMP刺激组、抗人TLR2功能纯化抗体(TL2 .1 )阻断组及消化酶处理组的THP 1细胞mICAM 1和TLR2的表达水平。结果　与对照组相比 ,不同刺激浓度的Mp LAMP对THP 1细胞膜上TLR2及mICAM 1的表达均有明显的上调作用 (P <0 .0 5 ) ,且表达水平的增加对Mp LAMP的刺激具有浓度依耐性 ;用TL2 .1将THP 1细胞膜上的TLR2阻断后 ,Mp LAMP对mICAM 1表达的诱导作用明显受到抑制 (P <0 .0 1 ) ,其阻断效果随TL2 .1量的增加而加强 ;酶消化试验证实Mp LAMP的活性成分是其脂质部分。相关分析表明 ,mICAM 1在THP 1细胞上的表达水平与TLR2密切相关 (r=0 .989,P <0 .0 1 )。结论　肺炎支原体膜脂蛋白通过TLR2介导上调THP 1细胞mICAM 1的表达 ,在一定程度上影响着肺炎支原体感染所导致的炎性反应的强弱。 展开更多
关键词 ICAM-1表达 TLR2 THP-1细胞 介导 白通 体膜 细胞问黏附分子 Toll样受体 流式细胞术检测 肺炎支原体感染 白血病细胞系 膜脂蛋白 活性成分 膜结合型 相互关系 上调作用 诱导作用 阻断效果 相关分析 炎性反应 水平 酶处理
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滑液囊支原体GA组件蛋白的原核表达及间接ELISA方法的建立
4
作者 高乐 司朵朵 +5 位作者 郭磊 陈灿 王玮 王健霖 王玲玲 李继东 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期2621-2632,共12页
【目的】体外表达滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)的GA组件蛋白(GA module-containing protein),建立一种MS抗体检测方法,用于血清学检测及MS抗体水平监测。【方法】分析、筛选MS的GA组件蛋白长链保守结构域,合成重组质粒pET30a-... 【目的】体外表达滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)的GA组件蛋白(GA module-containing protein),建立一种MS抗体检测方法,用于血清学检测及MS抗体水平监测。【方法】分析、筛选MS的GA组件蛋白长链保守结构域,合成重组质粒pET30a-ΔGA-L,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达,并优化表达条件;通过SDS-PAGE检测重组蛋白的表达,纯化重组蛋白ΔGA-L并进行Western blotting鉴定;以纯化后的重组蛋白ΔGA-L作为包被抗原,建立MS抗体的间接ELISA检测方法,优化反应条件,确定临界值,对其特异性、敏感性、重复性进行检验,并进行临床样品检测。【结果】重组蛋白ΔGA-L的分子质量大小为45.7 ku,最佳表达条件为25℃、0.2 mmol/L IPTG诱导表达5 h,以包涵体形式表达。Western blotting结果表明,重组蛋白ΔGA-L能与MS抗体发生特异性反应。以ΔGA-L抗原包被浓度为0.5μg/mL,一抗稀释度为1∶400,二抗稀释度为1∶12 000为最佳条件,建立了MS抗体间接ELISA检测方法,其阴阳性临界值为0.283;所建立方法特异性强、灵敏度高,有较高稳定性;与商品化MS抗体检测试剂盒总符合率为96%。【结论】本研究成功表达了MS重组蛋白ΔGA-L,所建立的MS抗体间接ELISA检测方法具有良好的特异性、敏感性、重复性,为MS抗体检测提供了有效快捷的方法。 展开更多
关键词 滑液囊支原体 GA组件蛋白 脂质相关膜蛋白 原核表达 间接ELISA
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肺炎支原体膜脂质诱导人支气管上皮细胞分泌MUC5AC的机制研究
5
作者 彭力 钟礼立 +3 位作者 黄寒 丁小芳 陈敏 林小娟 《热带医学杂志》 CAS 2024年第7期922-925,938,共5页
目的研究肺炎支原体(MP)脂质相关膜蛋白(LAMPs)刺激人支气管上皮细胞(HBEC)表达黏蛋白5AC(MUC5AC)的作用机制。方法大量培养MP,提取LAMPs,采用Westerm blot检测LAMPs作用HBEC下MUC5AC蛋白水平,并用特异性siRNA分别沉默和过表达HBEC细胞... 目的研究肺炎支原体(MP)脂质相关膜蛋白(LAMPs)刺激人支气管上皮细胞(HBEC)表达黏蛋白5AC(MUC5AC)的作用机制。方法大量培养MP,提取LAMPs,采用Westerm blot检测LAMPs作用HBEC下MUC5AC蛋白水平,并用特异性siRNA分别沉默和过表达HBEC细胞白细胞介素17(IL⁃17),设立空白对照组、LAMPs组、LAMPs+si⁃IL17组、IL⁃17组、LAMPs+IL⁃17组。Westernblot分析LAMPs对细胞核转录因子κB(NF⁃κB)相关信号分子(NF⁃κB p65、p⁃NF⁃κB p65、IKK⁃β)和MUC5AC蛋白表达的影响。用NF⁃κB抑制剂预处理HBEC细胞后,Western blot检测LAMPs刺激后MUC5AC的分泌水平。结果与对照组相比,提取的LAMPs能刺激HBEC细胞表达MUC5AC蛋白(1.68±0.31)明显升高,差异有统计学意义(t=6.38,P<0.05)。与LAMPs组相比,LAMPs+si⁃IL17组NF⁃κB p65、p⁃NF⁃κB p65、IKK⁃β和MUC5AC蛋白表达水平(分别为1.12±0.37、1.67±0.27、7.53±0.31、1.26±0.17)均明显降低,差异有统计学意义(P均<0.01)。LAMPs+过表达IL⁃17后,NF⁃κB信号分子NF⁃κB p65、p⁃NF⁃κB p65、IKK⁃β和MUC5AC蛋白表达水平(分别为1.87±0.19、3.07±0.33、3.94±0.22、2.93±0.15)较对照组、IL⁃17组、LAMPs组均显著增加,差异均有统计学意义(F=6.72、12.84、21.19、11.31,P均<0.01)。而NF⁃κB抑制剂处理后,LAMPs诱导细胞MUC5AC表达(1.21±0.10)较前(1.59±0.12)显著下降,差异有统计学意义(t=2.51,P=0.012)。结论MP⁃LAMPs可经IL⁃17诱导NF⁃κB信号通路刺激HBEC细胞MUC5AC表达。 展开更多
关键词 肺炎支原体肺炎 脂质相关膜蛋白 黏蛋白5AC
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人血清对生殖支原体LAMPs诱导THP-1细胞表达TNF-α的影响 被引量：1
6
作者 何军 游晓星 +2 位作者 伍绍坚 田巍 吴移谋 《中南医学科学杂志》 CAS 2014年第3期226-228,245,共4页
目的探讨人血清对生殖支原体(Mg)脂质相关膜蛋白(LAMPs)诱导TNF-α表达的影响。方法提取对数期Mg的LAMPs,分别加入脂蛋白脂肪酶,蛋白酶K及人血清预处理后,刺激THP-1细胞,ELISA法测定其TNF-α水平。结果 Mg LAMPs为一混合蛋白,其活性成... 目的探讨人血清对生殖支原体(Mg)脂质相关膜蛋白(LAMPs)诱导TNF-α表达的影响。方法提取对数期Mg的LAMPs,分别加入脂蛋白脂肪酶,蛋白酶K及人血清预处理后,刺激THP-1细胞,ELISA法测定其TNF-α水平。结果 Mg LAMPs为一混合蛋白,其活性成分为脂质成分,能激活THP-1细胞表达大量TNF-α,且与LAMPs浓度呈明显的剂量依赖性。人血清能上调LAMPs诱导的TNF-α水平,且与LAMPs浓度呈明显的剂量依赖性。结论人血清上调Mg LAMPs诱导THP-1细胞表达TNF-α。 展开更多
关键词 生殖支原体 脂质相关膜蛋白 肿瘤坏死因子 人血清
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CD14对生殖支原体LAMPs激活NF-κB的影响 被引量：1
7
作者 何军 曾焱华 +4 位作者 游晓星 伍绍坚 田巍 刘君 吴移谋 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期797-799,859,共4页
目的探讨CD14在生殖支原体(Mg)脂质相关膜蛋白(LAMPs)激活NF-κB中作用。方法 THP-1细胞分别加入人血清和CD14抗体孵育,提取对数期Mg的LAMPs刺激,ELISA法检测其NF-κBp65水平;采用共转染技术和sCD14预孵育LAMPs,刺激Hela细胞,双荧光素... 目的探讨CD14在生殖支原体(Mg)脂质相关膜蛋白(LAMPs)激活NF-κB中作用。方法 THP-1细胞分别加入人血清和CD14抗体孵育,提取对数期Mg的LAMPs刺激,ELISA法检测其NF-κBp65水平;采用共转染技术和sCD14预孵育LAMPs,刺激Hela细胞,双荧光素酶报告基因分析CD14在LAMPs激活NF-κB中的作用。结果人血清上调LAMPs诱导THP-1细胞激活NF-κBp65;CD14中和抗体抑制LAMPs诱导THP-1细胞激活NF-κBp65;mCD14和sCD14上调LAMPs诱导Hela细胞激活NF-κB。结论 CD14上调生殖支原体LAMPs激活NF-κB。 展开更多
关键词 CD14 生殖支原体 脂质相关膜蛋白 人血清
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TLR2介导鸡毒支原体脂质相关膜蛋白诱导DF-1细胞表达IL-1β的研究 被引量：1
8
作者 陈莹 汪洋 +7 位作者 于颖 李媛 王琪 邵家日 王显兵 周长平 李继昌 辛九庆 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期111-114,共4页
Toll样受体2(TLR2)在鸡毒支原体(MG)诱导天然免疫反应机制中的作用尚未明确。为鉴定TLR2在MG脂质相关膜蛋白(LAMPs)诱导细胞表达IL-1β中的作用,本研究通过RT-PCR和ELISA方法检测LAMPs刺激后DF-1细胞中IL-1β的m RNA和蛋白水平,结果显示... Toll样受体2(TLR2)在鸡毒支原体(MG)诱导天然免疫反应机制中的作用尚未明确。为鉴定TLR2在MG脂质相关膜蛋白(LAMPs)诱导细胞表达IL-1β中的作用,本研究通过RT-PCR和ELISA方法检测LAMPs刺激后DF-1细胞中IL-1β的m RNA和蛋白水平,结果显示LAMPs可以诱导DF-1细胞分泌IL-1β,并确定最佳刺激时间为6 h,最佳刺激剂量为1μg/m L。此外,通过构建TLR2重组表达质粒p CMV-HA-TLR2,并将该质粒转染DF-1细胞进行过表达及通过抗体封闭TLR2的两种处理方式,处理后采用LAMPs刺激细胞。经检测显示:TLR2过表达处理组的IL-1βm RNA和蛋白水平显著升高,而抗体处理组的IL-1βm RNA和蛋白水平下调。结果表明,LAMPs能够与DF-1细胞膜上的TLR2受体结合,有效的诱导DF-1细胞表达并分泌IL-1β,而且IL-1β的释放可能与天然免疫系统的经典通路即NF-κB信号通路调控有关。本研究为阐述MG的致病机制提供相关实验依据。 展开更多
关键词 鸡毒支原体 脂质相关膜蛋白（LAMPs） TLR2
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肺炎支原体LAMPs经PI3K/Nrf2诱导人单核细胞表达HO-1
9
作者 刘艳 刘丹 朱翠明 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期348-352,共5页
目的探讨肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae，Mp）脂质相关膜蛋白（lipid-associated membrane protein，LAMPs）对人单核细胞表达血红素氧合酶-1（heme oxygenase-1，HO-1）的影响，并探讨可能的调控机制。方法体外培养THP-1细胞，用... 目的探讨肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae，Mp）脂质相关膜蛋白（lipid-associated membrane protein，LAMPs）对人单核细胞表达血红素氧合酶-1（heme oxygenase-1，HO-1）的影响，并探讨可能的调控机制。方法体外培养THP-1细胞，用不同浓度的LAMPs作用后，分别采用realtime-PCR和Western blot检测H0—1mRNA和蛋白的表达。同时采用不同浓度的放线菌素D（ActD）和放线菌酮（CHX）预处理细胞，观察其对H0-1表达的影响，以证实HO-1的表达是否通过转录和翻译水平；提取LAMPs作用前后的核蛋白，凝胶迁移率实验检测Nrf2的核转位、Westernblot检测Akt的磷酸化情况；同时采用P13K抑制剂LY294002处理细胞，观察其对LAMPs诱导Nrig核转位及HO-1表达的影响；最后采用siRNA干扰Nrf2表达，以证实Nrf2是否参与调控H0-1表达。结果（1）0～5μg／mLLAMPs能以剂量依赖性方式诱导THP-1表达HO-1 mRNA和蛋白；（2）5μg／mLLAMPs能诱导THP-1细胞Akt磷酸化，并能增强其DNA结合活性；P13K抑制剂LY294002处理后，可明显抑制LAMPs诱导的HO-1表达和Nrf2核转位；（3）干扰Nrf2表达后，可明显下调LAMPs诱导THP-1细胞表达HO-1。结论LAMPs可诱导THP-1细胞表达HO-1，其机制可能与P13K／Nrf2通路有关。 展开更多
关键词 脂质相关膜蛋白 血红素氧合酶-1 核因子相关因子-2
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长链非编码RNA H19在肺炎支原体肺炎病儿血清中的表达及其意义 被引量：3
10
作者 秦小菀 高伟霞 陈朴 《安徽医药》 CAS 2022年第4期805-808,共4页
目的探讨长链非编码RNA H19(LncRNA H19)在肺炎支原体肺炎(MPP)病儿血清中的表达及其对肺炎支原体脂质相关膜蛋白(LAMPS)诱导的肺泡巨噬细胞凋亡和炎性因子表达的影响。方法收集2017年10月至2018年12月南阳市中心医院收治的MPP病儿60例... 目的探讨长链非编码RNA H19(LncRNA H19)在肺炎支原体肺炎(MPP)病儿血清中的表达及其对肺炎支原体脂质相关膜蛋白(LAMPS)诱导的肺泡巨噬细胞凋亡和炎性因子表达的影响。方法收集2017年10月至2018年12月南阳市中心医院收治的MPP病儿60例为观察组,根据病儿病情程度分为恢复期(30例)与急性期(30例);选取同期到我院体检的健康儿童60例作为对照组。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测LncRNA H19的表达水平;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析LncRNA H19对MPP的诊断价值。体外培养小鼠肺泡巨噬细胞MH-S,LAMPS处理细胞建立细胞损伤模型。分别将si-NC、si-H19转染至MH-S细胞,使用LAMPS处理24 h。流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)水平。结果与对照组相比,观察组血清LncRNA H19的表达水平显著升高[(1.01±0.13)比(2.58±0.25),P<0.05];与MPP恢复期相比,MPP急性期血清LncRNA H19的表达水平显著升高[(1.63±0.20)比(3.24±0.39),P<0.05];ROC分析显示LncRNA H19在MPP诊断中敏感度为86.67%,特异度为86.67%,AUC面积为0.869;与对照组相比,LAMPS组细胞凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6均显著升高[(8.24±1.35)%比(26.57±3.24)%、(7.23±2.12)pg/mL比(26.32±6.47)pg/mL、(11.62±3.21)pg/mL比(30.24±6.23)pg/mL、(11.20±3.21)pg/mL比(45.32±12.16)pg/mL,均P<0.05];与si-NC组相比,si-H19组细胞凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平显著降低(P<0.05)。结论LncRNA H19在MPP病儿血清中高表达,并可抑制LAMPS诱导的肺泡巨噬细胞凋亡及炎症反应。 展开更多
关键词 肺炎 支原体 长链非编码RNA H19 肺炎支原体脂质相关膜蛋白(LAMPS) 肺泡巨噬细胞 凋亡 炎症
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