LncRNA-TMEM220-AS1在肝细胞癌中的表达及对细胞增殖和侵袭能力的影响

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作者 任超 叶明亮 +6 位作者 洪莹晖 刘佳良 王纯 康辉 丁洋 蓝偲瑜 常莹 《武汉大学学报（医学版）》 CAS 2024年第2期190-195,共6页

目的:分析lncRNA-TMEM220-AS1在肝细胞癌(HCC)中的表达和对HCC生物学表型的影响。方法:基于TCGA下载的数据,使用秩和检验分析TMEM220-AS1在配对及非配对癌和癌旁组织中的表达差异,Cox回归等分析方法分析TMEM220-AS1与预后的关系,使用KEG... 目的:分析lncRNA-TMEM220-AS1在肝细胞癌(HCC)中的表达和对HCC生物学表型的影响。方法:基于TCGA下载的数据,使用秩和检验分析TMEM220-AS1在配对及非配对癌和癌旁组织中的表达差异,Cox回归等分析方法分析TMEM220-AS1与预后的关系,使用KEGG和GO进行富集分析并通过String数据库构建与TMEM220-AS1相关的蛋白质互作网络;构建稳定敲低TMEM220-AS1的肝癌细胞株,检测TMEM220-AS1的表达量及其对HCC细胞增殖、侵袭、转移的影响。结果:HCC中TMEM220-AS1在高表达组的总体生存率显著高于低表达组,并可能通过参与凋亡相关通路发挥抑癌作用。细胞实验表明TMEM220-AS1不仅可以抑制HCC细胞的增殖,还可以显著抑制其侵袭迁移能力。结论:TMEM220-AS1在HCC中低表达,可以抑制HCC的增殖、迁移和侵袭能力,并可作为HCC的独立预后因素。 展开更多

关键词 TMEM220-AS1 肝细胞癌 生物信息学 腺病毒转染

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RNAi沉默PELPI/MNAR基因对子宫内膜癌细胞增殖和细胞周期的作用 被引量：2

2

作者 万璟 李小毛 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期811-818,共8页

【目的】构建脯氨酸-谷氨酸-亮氨酸富集蛋白1(PELP1)基因慢病毒表达载体,研究沉默PELP1/雌激素受体非基因组活性辅助调节因子(PELP1/MNAR)基因表达对子宫内膜癌细胞增殖和周期的作用及机制。【方法】构建合成靶向PELP1/MNAR RNAi慢病毒... 【目的】构建脯氨酸-谷氨酸-亮氨酸富集蛋白1(PELP1)基因慢病毒表达载体,研究沉默PELP1/雌激素受体非基因组活性辅助调节因子(PELP1/MNAR)基因表达对子宫内膜癌细胞增殖和周期的作用及机制。【方法】构建合成靶向PELP1/MNAR RNAi慢病毒表达载体,并转染子宫内膜癌Ishikawa细胞,Real-time PCR和western blot检测PELP1/MNAR mRNA和蛋白水平的表达。使用普通培养基和加入E2的培养基培养各组细胞,MTT检测各组细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞生长周期情况;Western blot检测ER下游靶基因c-fos,cyclin D1的蛋白表达水平。【结果】成功构建合成靶向PELP1/MNAR RNAi慢病毒表达载体,转染子宫内膜癌Ishikawa细胞,转染后PELP1/MNAR mRNA的表达和蛋白的表达分别下降86%和65%(P<0.05)。转染后Ishikawa细胞与对照组相比增殖抑制(P<0.05),细胞周期G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少(P<0.05)。加入雌激素后,三组细胞的生长速度加快,细胞S期的比例增加,转染组增殖抑制明显(P<0.05),S期比例降低(P<0.05)。转染组ER下游基因c-fos、cyclin-D1蛋白水平均显著降低(P<0.05)。【结论】在子宫内膜癌细胞中沉默PELP1/MNAR的表达能能抑制细胞生长、使细胞阻滞在G1期,下调ER靶基因蛋白表达,PELP1/MNAR有望成为子宫内膜癌治疗的潜在靶点。 展开更多

关键词 子宫内膜癌 RNA干扰 脯氨酸-谷氨酸-亮氨酸富集蛋白1 雌激素受体非基因组活性辅助调节因子 慢病毒

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慢病毒介导荧光素酶表达的人鼻咽癌细胞小鼠模型的建立 被引量：2

3

作者 吕景礼 李二毛 +2 位作者 李晓艳 周问渠 刘启才 《现代生物医学进展》 CAS 2013年第36期7005-7009,共5页

目的:建立荧光素酶标记的人鼻咽癌细胞裸鼠模型,活体成像系统监测肿瘤的生长并与肿瘤的体积进行对比。方法:构建表达荧光素酶基因2(luc2)的慢病毒载体,与辅助质粒共转染293T细胞以制备慢病毒,感染人鼻咽癌SUNE1细胞后经嘌呤霉素筛选获... 目的:建立荧光素酶标记的人鼻咽癌细胞裸鼠模型,活体成像系统监测肿瘤的生长并与肿瘤的体积进行对比。方法:构建表达荧光素酶基因2(luc2)的慢病毒载体,与辅助质粒共转染293T细胞以制备慢病毒,感染人鼻咽癌SUNE1细胞后经嘌呤霉素筛选获得表达luc2的细胞株。活体成像设备体外检测不同数量细胞的发光强度,最后以5×106个细胞皮下接种BALB/c nu/nu裸鼠,活体成像系统动态记录接种后肿瘤的信号并与肿瘤的体积对比。结果:成功构建慢病毒表达质粒pLenti-luc2并包装出慢病毒颗粒,病毒感染后嘌呤霉素筛选6天得到鼻咽癌细胞株SUNE1-luc2。细胞株传代后有稳定的发光强度,且经活体检测的每秒光子数与细胞数成正相关(R2=0.96);活体成像观察发现裸鼠接种第2天接种部位的发光强度就达到3.2×108,而且成瘤过程中发光强度的变化与肿瘤大小一致。结论:成功构建适用于活体成像的人鼻咽癌SUNE1细胞的裸鼠成瘤模型,该模型从细胞接种开始即可有效动态监测鼻咽癌皮下瘤的生长及转移,从而为鼻咽癌的成瘤机制及药物干预研究提供一个新的手段。 展开更多

关键词 荧光素酶 SUNE1细胞 慢病毒 活体成像

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Tet-On3G系统调控人巨细胞病毒蛋白pUL23稳定表达的人胚肺成纤维细胞(HELF)系的建立 被引量：1

4

作者 杨少敏 傅政民 +4 位作者 孙绮遥 冯琳远 杨晓苹 冉艳红 李弘剑 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期550-557,共8页

人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)为疱疹病毒家族一员,易导致免疫力低下或缺陷的人群严重疾病,目前对HCMV编码的皮层蛋白pUL23功能的相关报道很少。本研究应用Tet-On3G诱导表达系统,在人胚肺成纤维细胞(Human embryonic lung f... 人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)为疱疹病毒家族一员,易导致免疫力低下或缺陷的人群严重疾病,目前对HCMV编码的皮层蛋白pUL23功能的相关报道很少。本研究应用Tet-On3G诱导表达系统,在人胚肺成纤维细胞(Human embryonic lung fibroblast,HELF)建立诱导表达HCMV病毒蛋白pUL23细胞模型。将病毒基因UL23和阳性对照基因EGFP分别定向插入应答慢病毒载体pLVX-TRE3G中,获得pLVX-TRE3GUL23-3×Flag、pLVX-TRE3G-EGFP重组慢病毒载体。运用二代慢病毒包装系统与Lenti-X293T包装细胞系,制备收获慢病毒后感染人胚肺成纤维细胞HELF。遗传霉素(Geneticin,G418)和嘌呤霉素(Puromycin,Puro)抗性筛选后多西环素(Doxycycline,Dox)诱导外源基因表达。感染后的细胞在96孔板有限稀释法成单克隆,分别采用RT-PCR与Western blot技术检测病毒UL23基因在mRNA水平与蛋白水平的表达量,筛选出当诱导时高效表达且未诱导时低表达的单克隆细胞;并评估Dox诱导剂量与诱导时间对外源蛋白pUL23表达的影响。限制性内切酶与测序显示重组质粒pLVX-TRE3G-UL23-3×Flag、pLVX-TRE3G-EGFP序列和方向正确。病毒蛋白pUL23在感染细胞中能够被诱导表达;当Dox浓度高于400ng/mL时pUL23蛋白表达量不再随Dox剂量增高而增高。在Dox诱导2h后,RT-PCR结果表明在921bp处有特定条带(UL23-3×Flag基因)与此同时,Western blot实验也检测到pUL23蛋白。这些结果表明,成功构建重组慢病毒载体,包装成慢病毒感染后,病毒基因UL23能够在人胚肺成纤维细胞中诱导表达。Dox的最佳工作浓度为400ng/mL,最佳诱导时间为12h至24h之间。这将为进一步研究病毒蛋白pU23的功能奠定基础。 展开更多

关键词 慢病毒诱导表达 Tet-On3G pUL23 人巨细胞病毒(HCMV) 慢病毒

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敲低GNL3抑制脑胶质瘤干细胞增殖和自我更新 被引量：1

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作者 黄浩浩 王心正 +2 位作者 郭赛赛 张学敏 满江红 《科学技术与工程》 北大核心 2017年第28期36-40,共5页

肿瘤干细胞是一小群特异的肿瘤细胞,被认为是肿瘤发生,耐药和复发的主要原因。GNL3(guanine nucleotide-binding protein-like 3)是MMR1/HSR1 GTP结合蛋白家族成员,在干细胞增殖中发挥重要作用。实验室通过质谱筛选,发现GNL3蛋白在脑胶... 肿瘤干细胞是一小群特异的肿瘤细胞,被认为是肿瘤发生,耐药和复发的主要原因。GNL3(guanine nucleotide-binding protein-like 3)是MMR1/HSR1 GTP结合蛋白家族成员,在干细胞增殖中发挥重要作用。实验室通过质谱筛选,发现GNL3蛋白在脑胶质瘤干细胞(glioma stem cell,GSC)中特异性高表达。目前关于GNL3在脑胶质瘤干细胞中的功能及其作用机制未见文献报道。为了研究GNL3在GSC中的功能,利用慢病毒感染细胞体系,在GSC中应用3个不同的靶序列对GNL3基因的表达进行稳定干涉;利用Western Blot对GNL3的干涉效果进行检测。实验结果表明,在稳定敲低GNL3表达的GSC中,胶质瘤干细胞的细胞活力和肿瘤细胞球(tumor sphere)的形成能力明显受到抑制,表明GNL3蛋白对GSC的增殖能力及自我更新能力具有重要调控,提示GNL3在胶质母细胞瘤的肿瘤发生过程中发挥一定作用。 展开更多

关键词 GNL3 脑胶质瘤干细胞 细胞增殖 慢病毒

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慢病毒为载体的siRNA抑制肝星状细胞TIMP-1的表达

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作者 白艳锋 丛敏 +7 位作者 王萍 刘天会 吴晓宁 杨爱婷 唐淑珍 马红 贾继东 尤红 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2009年第3期309-312,共4页

目的观察以慢病毒为载体,用含有针对大鼠金属蛋白酶组织抑制因子(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)、具有较强抑制作用的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)感染大鼠肝星状细胞系HSC-T6后对TIMP-1表达的抑制作用... 目的观察以慢病毒为载体,用含有针对大鼠金属蛋白酶组织抑制因子(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)、具有较强抑制作用的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)感染大鼠肝星状细胞系HSC-T6后对TIMP-1表达的抑制作用。方法针对大鼠TIMP-1 mRNA基因序列挑选2个不同短片段(nt161～181和nt445～463),在体外构建为短发夹siRNA1、siRNA2表达载体后,将其包装为重组Lenti/siRNA1-TIMP-1/GFP和Lenti/siRNA2-TIMP-1/GFP,同时包装阴性对照Lenti/GFP(空载体组),并以滴度MOI=10感染大鼠肝星状细胞系HSC-T6,感染后3d,用流式细胞仪及荧光显微镜检测病毒的感染效率。分别在感染后7、9d用Western blotting方法检测TIMP-1蛋白表达情况。结果感染HSC-T6后细胞形态和增生速度未发生明显变化。流式细胞仪及荧光显微镜检查证实感染效率分别为:空载体组68.23%,siRNA1感染组57.93%,siRNA2感染组51.2%,与正常细胞相比,感染后7d和9d,siRNA1、siRNA2感染组TIMP-1蛋白表达均有所下降,但只有siRNA1感染组在感染后9d能显著抑制TIMP-1表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论构建的重组Lenti/siRNA-TIMP-1/GFP可短期有效抑制大鼠肝星状细胞系HSC-T6TIMP-1蛋白表达。 展开更多

关键词 小干扰RNA 金属蛋白酶组织抑制因子-1 慢病毒 肝星状细胞

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人肝细胞生长因子基因重组慢病毒载体的构建及其在成肌干细胞中的表达

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作者 汤维芳 刘菲 +4 位作者 陈世彩 陈东辉 李孟 朱敏辉 郑宏良 《听力学及言语疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期45-49,共5页

目的构建人肝细胞生长因子(human hepatocyte growth factor,hHGF)基因重组pCMV-G﹠NR-U6-hHGF慢病毒载体,并检测其在成肌干细胞系C2C12细胞中的hHGF表达,为治疗失神经喉肌纤维化的研究提供依据。方法采用RT-PCR法扩增并纯化得到hHGF基... 目的构建人肝细胞生长因子(human hepatocyte growth factor,hHGF)基因重组pCMV-G﹠NR-U6-hHGF慢病毒载体,并检测其在成肌干细胞系C2C12细胞中的hHGF表达,为治疗失神经喉肌纤维化的研究提供依据。方法采用RT-PCR法扩增并纯化得到hHGF基因片段,并将其克隆到pCMV-G﹠NR-U6上,再将重组慢病毒载体转化入感受态大肠杆菌DH5α,筛选阳性菌落并行BamHI和HindⅢ双酶切鉴定。对筛选后的重组质粒阳性克隆行PCR鉴定和测序,将表达质粒与包装质粒共转染293T细胞包装hHGF慢病毒,荧光显微镜检测病毒滴度,再进一步转染C2C12细胞(分为空白对照组、空载体组、HGF重组慢病毒过表达组),最后行PCR和WB检测HGF的表达情况。结果 PCR鉴定和测序结果显示所构建的慢病毒载体正确无误,包装后的病毒滴度>1×109 IU/mL;慢病毒过表达组的HGF表达量均较空白对照组、空载体组明显增高,而且72h仍有稳定的表达。结论本实验成功构建了慢病毒载体pCMV-G﹠NR-U6-hHGF,并能够在离体培养的成肌干细胞系C2C12细胞中稳定高效表达HGF,为治疗失神经喉肌等骨骼肌纤维化、提高神经修复效果的实验研究提供了依据。 展开更多

关键词 人肝细胞生长因子 慢病毒 喉肌 成肌干细胞

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小鼠Smad6慢病毒干扰载体的构建及筛选 被引量：4

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作者 于静 戚孟春 +2 位作者 邓久鹏 刘刚 陈槐卿 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第5期1100-1104,共5页

体外构建及筛选小鼠Smad6重组慢病毒干扰载体,并在骨髓间充质干细胞(BMSCs)中检测其干扰效果。通过分子克隆技术应用携带绿色荧光蛋白(GFP)的慢病毒构建三个重组Smad6 RNA干扰载体,并通过DNA测序确定基因重组的正确性。培养小鼠BMSCs,... 体外构建及筛选小鼠Smad6重组慢病毒干扰载体,并在骨髓间充质干细胞(BMSCs)中检测其干扰效果。通过分子克隆技术应用携带绿色荧光蛋白(GFP)的慢病毒构建三个重组Smad6 RNA干扰载体,并通过DNA测序确定基因重组的正确性。培养小鼠BMSCs,并用骨形态发生蛋白2(BMP2)进行骨向诱导。应用激光共聚焦技术确定重组病毒的转染效率,并通过Real-time PCR和Western blot对Smad6基因的干扰效果进行检测。实验成功构建了三个Smad6重组慢病毒干扰载体,DNA测序证实了基因重组的正确性。重组病毒转染间充质干细胞(MSCs)后,GFP均得到了有效表达,达到了较高的转染效率(>95%)。经Real-time PCR和Western bloot检测,#2重组载体对Smad6基因表达的干扰效果最佳,蛋白水平干扰效率接近91%。本实验成功构建了小鼠Smad6基因有效重组干扰载体,为BMP信号通路的进一步研究提供了有效的实验工具。 展开更多

关键词 慢病毒载体 SMAD6 骨髓间充质干细胞 RNA干扰

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去泛素化酶USP10 RNAi慢病毒载体的构建及其对PC12细胞增殖的影响 被引量：3

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作者 叶樱泽 张旭 +1 位作者 曾智 古丽娟 《武汉大学学报（医学版）》 CAS 2019年第1期6-10,16,共6页

目的:构建大鼠去泛素化酶USP10siRNA重组慢病毒载体,为探讨USP10对神经元的调控作用提供体外模型。方法:设计并合成3对特异性大鼠USP10基因的RNAi靶序列,聚合酶链反应(PCR)扩增后,用AgeⅠ及EcoRⅠ双酶切及连接酶构建线性化的GV208慢病... 目的:构建大鼠去泛素化酶USP10siRNA重组慢病毒载体,为探讨USP10对神经元的调控作用提供体外模型。方法:设计并合成3对特异性大鼠USP10基因的RNAi靶序列,聚合酶链反应(PCR)扩增后,用AgeⅠ及EcoRⅠ双酶切及连接酶构建线性化的GV208慢病毒载体;转化感受态细胞,经Amp抗性筛选阳性克隆,PCR鉴定阳性克隆载体并测序;病毒包装并转染至293T细胞,观察绿色荧光蛋白(GFP)表达,荧光法检测滴度。用重组慢病毒感染PC12细胞,WesternBlot检测USP10蛋白的表达,CCK-8法检测PC12细胞增殖。结果:经测序鉴定成功构建了3对USP10RNAi慢病毒载体,感染PC12细胞后,USP10蛋白的表达显著被抑制,PC12细胞的增殖能力明显减弱。结论:成功构建能高效、稳定抑制USP10表达的PC12细胞株,并明显抑制PC12细胞增殖能力,为探讨USP10对神经元的调控作用提供基础。 展开更多

关键词 去泛素化酶(USP10) 慢病毒载体 核糖核酸干扰(RNAi) PC12细胞

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miRNAs慢病毒文库筛选靶向EZH23'非翻译区的新型miRNAs及其在乳腺癌中的表达 被引量：2

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作者 刘萃萃 王璐璐 +4 位作者 赵卫卫 彭攸 王玉平 孙振亮 冯景 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期368-372,共5页

目的重组过表达EZH2基因3'非翻译区的MCF-7细胞株中筛选靶向miRNAs,并进行细胞和组织定量分析。方法重组细胞株感染慢病毒文库,利用细胞毒性药物筛选后抽提细胞基因组,以此为模板PCR扩增出miRNA前体,测序确定miRNAs名称,并对其进行... 目的重组过表达EZH2基因3'非翻译区的MCF-7细胞株中筛选靶向miRNAs,并进行细胞和组织定量分析。方法重组细胞株感染慢病毒文库,利用细胞毒性药物筛选后抽提细胞基因组,以此为模板PCR扩增出miRNA前体,测序确定miRNAs名称,并对其进行PCR定量分析。结果在重组细胞株中共筛选出7种miRNAs,依次为miR-15b、miR-16-2、miR-181b2、miR-217、miR-224、miR-329-1、miR-487b,这些新型miRNAs用生物信息学软件PicTar和TargetScan无法预测。Real-time PCR发现,与乳腺癌细胞MCF-7相比,正常乳腺细胞株HBL-100中miR-217、miR-329-1、miR-487b高表达;乳腺癌组织中仅miR-15b及miR-16-2表达增加,与癌旁组织相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论在重组过表达EZH2 3'-UTR的乳腺癌MCF-7细胞株中结合慢病毒文库可筛选出用生物信息学软件未预测的新型靶向miRNAs,这些新型miRNA在正常乳腺细胞与肿瘤细胞及组织中存在差异表达。 展开更多

关键词 乳腺癌 EZH2 慢病毒文库 EZH2

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鸡斑联蛋白基因的慢病毒干扰载体的构建及筛选 被引量：2

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作者 戴国俊 孙大辉 +7 位作者 林雨鑫 孙明明 王翔 王金玉 张跟喜 谢恺舟 施会强 侍苗苗 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期1330-1336,共7页

本试验旨在构建4条鸡斑联蛋白(zyxin)基因的RNAi慢病毒载体,对其进行滴度测定,并进行有效干扰靶点的筛选,为以后开展鸡zyxin基因抗球虫机理的研究奠定基础。提取鸡胸腺组织的RNA,反转录,扩增zyxin基因的编码区,并将其克隆到真核表达载体... 本试验旨在构建4条鸡斑联蛋白(zyxin)基因的RNAi慢病毒载体,对其进行滴度测定,并进行有效干扰靶点的筛选,为以后开展鸡zyxin基因抗球虫机理的研究奠定基础。提取鸡胸腺组织的RNA,反转录,扩增zyxin基因的编码区,并将其克隆到真核表达载体Pex-6上。设计针对zyxin的shRNA序列,应用基因重组技术插入到Lv3慢病毒表达载体中,将lv3-shRNA载体与包装质粒pGag/Pol、pRev、Pvsv-G共转染293T细胞,进行病毒包装。将得到的病毒原液10倍稀释6个梯度,分别转染293T细胞,进行滴度的测定。将构建好的4条慢病毒载体与Pex-6-zyxin真核表达载体共转染293T细胞,运用RT-PCR和Western-blot方法进行有效干扰靶点的筛选。构建4条针对目的基因zyxin的RNAi慢病毒穿梭质粒表达载体CO1、CO2、CO3、CO4和1个阴性对照质粒,经测序鉴定正确;共转染293T细胞包装病毒并浓缩后滴度达1×108 TU·mL-1,适合感染目的细胞,经过筛选,CO3对zyxin在293T细胞中的表达干扰效果最佳。成功构建了zyxin基因RNA干扰慢病毒表达载体,并进行了有效干扰靶点的筛选,为进一步研究zyxin基因的功能奠定了基础。 展开更多

关键词 zyxin基因 RNAI 慢病毒干扰载体 真核表达载体 鸡

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梅花鹿鹿茸软骨细胞和间充质干细胞永生化细胞株的构建及鉴定 被引量：2

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作者 王佳雯 高云鹏 +3 位作者 王敏 王思明 赵雨 白雪媛 《科学技术与工程》 北大核心 2017年第27期138-143,共6页

分离梅花鹿鹿茸软骨细胞和间充质干细胞,使用SV40 LT抗原慢病毒载体建立永生化软骨细胞和间充质干细胞系并鉴定。将含有SV40 LT基因片段的慢病毒载体,转染人胚肾细胞293T获得包装后的病毒粒子,感染鹿茸软骨细胞及间充质干细胞,连续传代... 分离梅花鹿鹿茸软骨细胞和间充质干细胞,使用SV40 LT抗原慢病毒载体建立永生化软骨细胞和间充质干细胞系并鉴定。将含有SV40 LT基因片段的慢病毒载体,转染人胚肾细胞293T获得包装后的病毒粒子,感染鹿茸软骨细胞及间充质干细胞,连续传代培养,通过形态观察、细胞增殖、real-time PCR、甲苯胺蓝染色法和流式细胞术等方法检测SV40 LT抗原表达以及细胞性质。实验所建立的永生化鹿茸软骨细胞系与间充质干细胞系能够稳定传代并具有较强的体外增值活性。RT-PCR检测到SV40T抗原的表达,通过甲苯胺蓝染色法和流式细胞术鉴定所得细胞系具有原代细胞的基本性质。成功获得永生化的软骨细胞与间充质干细胞系,为后续鹿茸生长及发育研究奠定了基础。 展开更多

关键词 软骨细胞 间充质干细胞 永生化 SV40LT 慢病毒载体

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TIMP-1高表达系膜细胞模型的建立及其对CXCL10的调控作用

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作者 陈曦曌 吕杨 +1 位作者 谢院生 陈香美 《中国中西医结合肾病杂志》 2015年第5期388-391,I0001,I0002,共6页

目的:利用慢病毒转染方法建立组织金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)的高表达系膜细胞模型,研究TIMP-1对趋化因子CXCL10的调控作用。方法:利用第三代慢病毒系统,制备TIMP-1慢病毒,将制备好的TIMP-1慢病毒转染到原代大鼠系膜细胞,建立TIMP-1高... 目的:利用慢病毒转染方法建立组织金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)的高表达系膜细胞模型,研究TIMP-1对趋化因子CXCL10的调控作用。方法:利用第三代慢病毒系统,制备TIMP-1慢病毒,将制备好的TIMP-1慢病毒转染到原代大鼠系膜细胞,建立TIMP-1高表达模型,利用Taqman探针技术检测TIMP-1和CXCL10的表达量。结果:(1)利用TIMP-1慢病毒感染系膜细胞,可以显著促进TIMP-1表达量升高(P<0.05);(2)TIMP-1能显著促进CXCL10的表达量升高(P<0.05)。结论:成功建立大鼠系膜细胞的TIMP-1过表达细胞模型,为研究TIMP-1功能提供了实验工具。TIMP-1能正向调控CXCL10,提示TIMP-1在肾脏疾病炎症反应的发生发展中可能起到一定的作用。 展开更多

关键词 组织金属蛋白酶抑制剂-1 慢病毒 系膜细胞 CXCL10

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