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Smad4对小鼠眼睑发育的影响 被引量:2
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作者 刘瑛 顾欣祖 +1 位作者 LU Michael DING Chuanqing 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期338-343,共6页
目的:利用眼特异性Smad4基因敲除小鼠,观察其眼睑表型并探讨其眼睑发育异常的可能机制。方法:选择PAX6第一启动子P0驱动的晶体外胚层特异性表达Cre重组酶的转基因小鼠(Le-Cre)作为介导敲除的工具鼠,将其与Smad4条件基因小鼠(Smad4fl/fl... 目的:利用眼特异性Smad4基因敲除小鼠,观察其眼睑表型并探讨其眼睑发育异常的可能机制。方法:选择PAX6第一启动子P0驱动的晶体外胚层特异性表达Cre重组酶的转基因小鼠(Le-Cre)作为介导敲除的工具鼠,将其与Smad4条件基因小鼠(Smad4fl/fl)交配获得Le-Cre特异性Smad4基因敲除小鼠,通过HE染色揭示其眼睑组织形态学的改变,采用免疫染色技术对某些关键蛋白的表达进行检测并与野生型小鼠进行比较,并检测其眼睑上皮细胞凋亡和增殖的改变。结果:Smad4在眼睑的失活导致眼睑在发育过程中不能融合,生后眼睑保持开放;Smad4在眼睑的表达缺失不影响眼睑睑缘上皮细胞的增殖和凋亡,但导致上皮细胞内c-Jun磷酸化过程受损,表皮生长因子受体(EGFR)核转位受影响,引起细胞内肌动蛋白束装配异常而导致上皮细胞移行受损,出现眼睑发育时融合不能。结论:Smad4在眼睑发育中对于眼睑的闭合是必需的。 展开更多
关键词 SMAD4 le-cre 眼睑闭合 C-JUN 表皮生长因子
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条件性Smad4基因敲除鼠模型的建立和鉴定及初步表型
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作者 刘瑛 林丁 《国际眼科杂志》 CAS 2014年第1期17-22,共6页
目的:利用Cre/LoxP系统建立眼组织特异性Smad4基因敲除小鼠并进行初步表型分析。方法:通过PAX6启动子驱动的Cre转基因小鼠(Le-Cre)作为介导敲除的工具鼠,将其与Smad4条件基因小鼠(Smad4fl/fl)结合获得Le-Cre特异性Smad4基因敲除小鼠或... 目的:利用Cre/LoxP系统建立眼组织特异性Smad4基因敲除小鼠并进行初步表型分析。方法:通过PAX6启动子驱动的Cre转基因小鼠(Le-Cre)作为介导敲除的工具鼠,将其与Smad4条件基因小鼠(Smad4fl/fl)结合获得Le-Cre特异性Smad4基因敲除小鼠或变异小鼠(Le-Cre;Smad4fl/fl)。为了证实条件性基因敲除的特异性及有效性,通过PCR技术对小鼠或鼠胚进行了相关基因分析,特定组织绿色荧光蛋白(GFP)的表达及Smad4蛋白的检测,同时利用ROSA26报导基因小鼠藉LacZ染色显示Le-Cre在眼组织的表达;并对Smad4变异小鼠的表型进行了观察。结果:早在E10.0左右,鼠胚晶状体位置及眼周外胚层发现强荧光的GFP表达,表明Le-Cre明确出现在特定的靶组织。通过小鼠基因型分析,确定了小鼠或鼠胚是否携带Cre重组酶基因、Smad4条件性等位基因和/或Rosa报导基因,对小鼠晶体DNA的基因分析也证实Smad4基因在某些特异性眼组织内得到剔除。通过在Cre转基因小鼠导入报导基因,并籍LacZ染色对Cre重组酶的表达进行检测,显示了Cre重组酶的时空表达及其表达的组织特异性。Smad4免疫组化染色显示,在正常发育胚鼠眼可见广泛的Smad4表达,早期主要存在于胞浆,随着胚眼发育向核内转移;而在Smad4变异鼠胚眼,结果表明Smad4在Cre重组酶所表达的组织内缺乏表达。观察发现Smad4变异鼠可以顺利存活,但表现出眼球缩小、眼窝凹陷、眼睑畸形开放、闭合不能及眼周毛发脱失的外观。结论:通过基因和蛋白水平的检测证实了Le-Cre;Smad4基因敲除鼠的建立及Smad4在变异小鼠中表达的缺乏。Smad4在眼组织的敲除导致了眼及附属器的明显异常,为深入了解眼球发育及Smad4对其影响的机制提供了一个可信的动物模型。 展开更多
关键词 SMAD4 条件性基因敲除 lecre 报告基因 眼表型
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