根据羊口疮病毒(OrfV)的B2L基因设计4条环介导等温扩增(LAMP)特异性引物和1条异硫氰酸荧光素标记的DNA探针,再利用横向流动试纸条(LFD)检测扩增产物。通过对各反应条件包括反应温度、反应时间、内外引物浓度比、Bst DNA 2.0聚合酶浓度、...根据羊口疮病毒(OrfV)的B2L基因设计4条环介导等温扩增(LAMP)特异性引物和1条异硫氰酸荧光素标记的DNA探针,再利用横向流动试纸条(LFD)检测扩增产物。通过对各反应条件包括反应温度、反应时间、内外引物浓度比、Bst DNA 2.0聚合酶浓度、dNTP Mix浓度、Mg^(2+)浓度以及探针结合温度等优化后,建立了检测OrfV的LAMP-LFD方法。结果显示,LAMP-LFD可特异性检测OrfV,而山羊痘病毒、口蹄疫病毒、小反刍兽疫病毒及丝状支原体山羊亚种等均未检出;LAMP-LFD对OrfV-B2L质粒DNA最低检测浓度为4.95×10^(-2)拷贝/μL,其灵敏度是以外引物建立PCR方法的1000倍。利用PCR和LAMP-LFD检测29份临床样品,两者检出符合率为100%。研究建立的LAMP-LFD检测方法可快速、特异地检测OrfV,可作为早期诊断和检测OrfV的有效手段。展开更多
文摘根据羊口疮病毒(OrfV)的B2L基因设计4条环介导等温扩增(LAMP)特异性引物和1条异硫氰酸荧光素标记的DNA探针,再利用横向流动试纸条(LFD)检测扩增产物。通过对各反应条件包括反应温度、反应时间、内外引物浓度比、Bst DNA 2.0聚合酶浓度、dNTP Mix浓度、Mg^(2+)浓度以及探针结合温度等优化后,建立了检测OrfV的LAMP-LFD方法。结果显示,LAMP-LFD可特异性检测OrfV,而山羊痘病毒、口蹄疫病毒、小反刍兽疫病毒及丝状支原体山羊亚种等均未检出;LAMP-LFD对OrfV-B2L质粒DNA最低检测浓度为4.95×10^(-2)拷贝/μL,其灵敏度是以外引物建立PCR方法的1000倍。利用PCR和LAMP-LFD检测29份临床样品,两者检出符合率为100%。研究建立的LAMP-LFD检测方法可快速、特异地检测OrfV,可作为早期诊断和检测OrfV的有效手段。
