大黄蒽醌衍生物对大鼠结肠及LoVo细胞水通道蛋白4表达的调节效应 被引量：19

1

作者 张文生 李锋 +4 位作者 鲍军强 王胜春 尚刚伟 李军昌 王长海 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期818-823,共6页

目的探讨大黄总蒽醌对SD大鼠的泻下效应及对结肠水通道蛋白4(aquaporin4,AQP4)表达的影响及大黄酸、大黄素对体外培养LoVo细胞AQP4的调节效应。方法雄性SD大鼠24只随机分为正常对照组、大黄总蒽醌泻下剂量组及高剂量组,分别予大黄总蒽... 目的探讨大黄总蒽醌对SD大鼠的泻下效应及对结肠水通道蛋白4(aquaporin4,AQP4)表达的影响及大黄酸、大黄素对体外培养LoVo细胞AQP4的调节效应。方法雄性SD大鼠24只随机分为正常对照组、大黄总蒽醌泻下剂量组及高剂量组,分别予大黄总蒽醌悬液或蒸馏水灌胃5天,观察大鼠结肠粪便含水量;应用Western blot、RT-PCR方法观察其近端结肠AQP4表达的变化。体外培养LoVo细胞并予不同浓度大黄酸/大黄素含药培养液作用24 h及大黄酸/大黄素含药培养液(20 mg/L)不同时间作用,采用Western blot及RT-PCR检测AQP4蛋白及mRNA的表达。结果大黄总蒽醌泻下剂量组及高剂量组作用后,大鼠结肠内粪便含水量明显增加,同时其近端结肠AQP4表达降低且表现为量效关系。大黄酸/大黄素能够显著下调体外培养LoVo细胞的AQP4蛋白及mRNA表达,且表现为剂量-效应及时间-效应关系。结论大黄总蒽醌在发挥泻下作用的同时,能够有效下调大鼠近端结肠AQP4的表达;大黄酸、大黄素可抑制体外培养Lo- Vo细胞AQP4的表达,可能是大黄泻下作用机制之一。 展开更多

关键词 大黄蒽醌衍生物 大黄总蒽醌 大黄酸 大黄素 近端结肠 泻下作用 lovo细胞系 水通道蛋白4

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大黄素对LoVo细胞水通道蛋白2表达的调节效应 被引量：18

2

作者 张文生 李锋 +4 位作者 鲍军强 王胜春 尚刚伟 李军昌 王长海 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期718-723,共6页

目的探讨大黄素对体外培养LoVo细胞水通道蛋白2(aquaporin 2,AQP2)表达的调节效应。方法体外培养LoVo细胞并予不同质量浓度大黄素含药培养液24 h处理及大黄素含药培养液(20 mg/L)不同时间处理,采用免疫细胞化学方法观察LoVo细胞AQP2蛋... 目的探讨大黄素对体外培养LoVo细胞水通道蛋白2(aquaporin 2,AQP2)表达的调节效应。方法体外培养LoVo细胞并予不同质量浓度大黄素含药培养液24 h处理及大黄素含药培养液(20 mg/L)不同时间处理,采用免疫细胞化学方法观察LoVo细胞AQP2蛋白表达位置并初步观察AQP2蛋白表达的变化趋势,采用Western blotting及半定量RT-PCR检测AQP2蛋白及mRNA的表达。结果AQP2表达于LoVo细胞的细胞膜,且与大黄素用药浓度及用药时间存在着相关性。进一步的Western blotting证实,不同质量浓度大黄素含药培养液均可抑制AQP2蛋白的表达,药物质量浓度愈大,AQP2蛋白的表达愈低,其中大黄素20 mg/L组及40 mg/L组AQP2蛋白表达显著性降低;大黄素作用3、6 h组,AQP2蛋白表达上升,但与对照组比较,无显著差异;作用12、24、48 h组,AQP2蛋白表达呈进行性下降趋势。半定量RT-PCR结果显示,随着大黄素质量浓度的增加,AQP2 mRNA表达呈进行性下降趋势;在时间-效应方面,随着用药时间的延长,AQP2 mRNA表达呈进行性下降趋势。结论大黄素可抑制LoVo细胞AQP2基因转录与翻译,这提示大黄素对AQP2表达的调节效应可能与大黄的泻下作用有关。 展开更多

关键词 大黄素 lovo细胞系 水通道蛋白2

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大黄酸对LoVo细胞水通道蛋白4表达的调节效应 被引量：16

3

作者 张文生 李锋 +4 位作者 鲍军强 王胜春 尚刚伟 李军昌 王长海 《中药材》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期702-706,共5页

目的:探讨大黄酸对体外培养LoVo细胞水通道蛋白4(AQP4)的调节效应。方法:体外培养LoVo细胞并予不同浓度大黄酸含药培养液处理24 h及大黄酸含药培养液(20 mg/L)处理不同时间,其中不同浓度分为大黄酸高(40 mg/L)、中(20 mg/L)、低(10 mg/L... 目的:探讨大黄酸对体外培养LoVo细胞水通道蛋白4(AQP4)的调节效应。方法:体外培养LoVo细胞并予不同浓度大黄酸含药培养液处理24 h及大黄酸含药培养液(20 mg/L)处理不同时间,其中不同浓度分为大黄酸高(40 mg/L)、中(20 mg/L)、低(10 mg/L)剂量组和正常对照组;不同作用时间分为3、6、12、24、48 h组和正常对照组。采用免疫细胞化学方法观察LoVo细胞AQP4蛋白表达定位,采用Western blotting及半定量RT-PCR检测AQP4蛋白及mRNA的表达。结果:AQP4主要表达于LoVo细胞的细胞膜上,在细胞浆也有少量表达。随着大黄酸用药剂量增加,AQP4表达持续下降;大黄酸低剂量组与正常对照组比较,AQP4表达下降但无显著性差异;大黄酸中、高剂量组,AQP4表达则呈显著性下降。在时间效应方面,大黄酸3、6 h组AQP4表达无显著性下降,但在12、24、48 h组则显著下降;同时研究发现,AQP4表达下降的程度与大黄酸剂量及大黄酸作用时间均存在相关性。结论:大黄酸可抑制LoVo细胞AQP4基因转录与翻译,提示大黄酸对AQP4表达的调节可能与大黄的泻下作用有关。 展开更多

关键词 大黄酸 lovo细胞系 水通道蛋白4 药理作用

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大蒜素对结肠癌LoVo细胞增殖的影响 被引量：17

4

作者 刘扬清 高勇 +4 位作者 万一元 易竹筠 惠红霞 徐丽娟 刘华 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2009年第2期139-143,共5页

目的:观察大蒜素对结肠癌细胞LoVo生长、细胞凋亡及细胞周期的影响。方法:不同浓度的大蒜素作用于体外培养的LoVo细胞,倒置显微镜下观察LoVo细胞的形态学变化,采用MTT法检测大蒜素对LoVo细胞增殖抑制能力,An-nexinV-FITC标记流式细胞术... 目的:观察大蒜素对结肠癌细胞LoVo生长、细胞凋亡及细胞周期的影响。方法:不同浓度的大蒜素作用于体外培养的LoVo细胞,倒置显微镜下观察LoVo细胞的形态学变化,采用MTT法检测大蒜素对LoVo细胞增殖抑制能力,An-nexinV-FITC标记流式细胞术检测大蒜素对LoVo细胞的凋亡抑制率,流式细胞术检测大蒜素对LoVo细胞周期影响。结果:大蒜素可抑制人结肠癌LoVo细胞增殖,具有明显量效和时间依赖性,24、48和72h大蒜素抑制LoVo细胞的IC50分别为32.23、10.74和6.58μg/ml;大蒜素能够诱导LoVo细胞凋亡,作用24h其诱导凋亡率随着药物浓度的递增具有增高趋势,作用48h其诱导凋亡作用峰值浓度为8μg/ml,后再继续增加浓度凋亡率反而下降;大蒜素作用LoVo细胞24h后,大蒜素浓度低于4μg/ml时,LoVo细胞周期被阻滞于G2/M;而高于4μg/ml时,细胞周期被阻滞于G2/M和G1期。结论:大蒜素能够诱导LoVo细胞凋亡,阻滞细胞周期,抑制细胞增殖。 展开更多

关键词 大蒜素 结肠癌 lovo细胞株 细胞增殖 凋亡

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蝎毒组分对人大肠癌细胞的体外抑杀作用研究 被引量：9

5

作者 沈东海 高春芳 +4 位作者 王元和 王强 李冬晖 王秀丽 王平 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期45-46,共2页

目的观察蝎毒不同组分对人大肠癌细胞的体外抑杀作用。方法 用噻唑蓝(MTT法)、集落形成抑制实验,以丝裂霉素C(MMC)为阳性对照药品,以蝎毒提取物SVC Ⅰ、SVC Ⅱ、SVC Ⅲ,SVC Ⅳ各组分、浓度分别为45μg/ml、60μg/ml、75μg/ml、90μg/m... 目的观察蝎毒不同组分对人大肠癌细胞的体外抑杀作用。方法 用噻唑蓝(MTT法)、集落形成抑制实验,以丝裂霉素C(MMC)为阳性对照药品,以蝎毒提取物SVC Ⅰ、SVC Ⅱ、SVC Ⅲ,SVC Ⅳ各组分、浓度分别为45μg/ml、60μg/ml、75μg/ml、90μg/ml处理人大肠癌细胞Lovo,观察Lovo的生长情况。结果 SVCⅢ对Lovo细胞的细胞毒性和集落形成的抑制作用略强于MMC组,SVC Ⅰ、SVC Ⅱ、SVC Ⅳ对细胞Lovo的影响在所用药物浓度内与对照组相比未见统计学差异,细胞毒性作用不显著。结论SVC Ⅲ对人大肠癌细胞具有明显的细胞毒性和生长抑制作用。 展开更多

关键词 大肠癌细胞 蝎毒 lovo 大肠肿瘤 抑杀作用 SVCⅢ 抗癌作用

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扶正抑癌方含药血清对结肠癌lovo细胞E-cad、N-cad和Snail蛋白表达的影响 被引量：9

6

作者 李素云 周春仙 +2 位作者 顾燕频 袁宝萍 卫洪昌 《中国肿瘤》 CAS 2011年第9期690-693,共4页

[目的]通过观察扶正抑癌方含药血清对结肠癌lovo细胞E-cad、N-cad和Snail蛋白表达的影响,探讨扶正抑癌方对结肠癌细胞EMT的影响,从而进一步明确扶正抑癌方抑制结肠癌转移的机制。[方法]lovo细胞体外培养,制备大鼠不同浓度含药血清后,MT... [目的]通过观察扶正抑癌方含药血清对结肠癌lovo细胞E-cad、N-cad和Snail蛋白表达的影响,探讨扶正抑癌方对结肠癌细胞EMT的影响,从而进一步明确扶正抑癌方抑制结肠癌转移的机制。[方法]lovo细胞体外培养,制备大鼠不同浓度含药血清后,MTT法测定不同浓度含药血清对细胞增殖的影响;免疫荧光法检测E-cad、N-cad的表达,Western Blot检测Snail蛋白的表达。[结果]高剂量含药血清组24h对lovo细胞抑制率较中剂量、低剂量组更加明显,差异具有统计学意义(P<0.01),免疫荧光结果显示扶正抑癌方含药血清可以下调lovo细胞N-cad的表达和上调E-cad表达,与正常组和空白组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);Western Blot检测结果显示扶正抑癌方含药血清能降低lovo细胞转录因子Snail蛋白的表达,与正常组和空白组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。[结论]扶正抑癌方含药血清通过上调E-cad表达和下调N-cad的表达,抑制lovo细胞的EMT转变,从而降低lovo细胞的侵袭力和运动能力。 展开更多

关键词 扶正抑癌方 含药血清 结肠癌 lovo细胞 E-CAD N-cad SNAIL

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反义DLC-1基因对结直肠癌LoVo细胞增殖和细胞周期的影响 被引量：8

7

作者 金月玲 商延芳 +2 位作者 田小强 方媛 黄培林 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期493-496,共4页

目的应用核糖核酸干扰(RNAi)技术,通过对大肠癌细胞株LoVo中DLC-1基因mRNA表达的抑制,初步探讨DLC-1基因对大肠癌细胞株的生物学行为影响。方法构建DCL-1的RNAi重组体pGCsiDLC,转染大肠癌LoVo细胞株。采用RT-PCR观察转染前后细胞株中DLC... 目的应用核糖核酸干扰(RNAi)技术,通过对大肠癌细胞株LoVo中DLC-1基因mRNA表达的抑制,初步探讨DLC-1基因对大肠癌细胞株的生物学行为影响。方法构建DCL-1的RNAi重组体pGCsiDLC,转染大肠癌LoVo细胞株。采用RT-PCR观察转染前后细胞株中DLC-1 mRNA以及Bax、Bcl-2基因表达的改变,MTT比色法检测转染前后细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期。结果成功构建发卡siRNA真核表达载体pGCsiDLC;pGCsiDLC转染LoVo细胞后,电泳显示DLC-1 mRNA表达水平明显下降;LoVo细胞生长曲线增长幅度亦随时间的增加而逐渐增高,在48h最为明显,RNAi组细胞比脂质体组及空白对照组细胞增殖明显增高(P<0.05);干扰后的LoVo细胞株G0/G1期发生阻滞,而G2/M期细胞数量分布减少。而Bax和bcl-2基因表达在干扰前后未见明显改变。结论成功构建载体介导的DLC-1靶向RNAi重组体可有效抑制LoVo细胞DLC-1 mRNA表达;DLC-1基因可抑制结直肠癌细胞增殖并且对细胞周期重新分布,其可能与结直肠癌的发生发展有一定关系,可能是一个新的抑癌基因。 展开更多

关键词 核糖核酸干扰 DLC-1基因 lovo细胞株 结直肠癌

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伊立替康、奥沙利铂及氟尿嘧啶对人大肠癌LoVo细胞株作用的实验研究 被引量：7

8

作者 高勇 刘扬清 +4 位作者 易竹筠 李元媛 宣恒报 万一元 徐丽娟 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2008年第3期217-221,共5页

目的:研究国产盐酸伊立替康(CPT-11)、奥沙利铂(L-OHP)及氟尿嘧啶(5-FU)对人大肠癌细胞株LoVo的生长抑制作用。方法:采用MTT法观察上述药物单药应用、两药及三药同时或序贯联合应用对大肠癌LoVo细胞生长的影响,评价药物联合应用的效果... 目的:研究国产盐酸伊立替康(CPT-11)、奥沙利铂(L-OHP)及氟尿嘧啶(5-FU)对人大肠癌细胞株LoVo的生长抑制作用。方法:采用MTT法观察上述药物单药应用、两药及三药同时或序贯联合应用对大肠癌LoVo细胞生长的影响,评价药物联合应用的效果。结果:单药应用、两药联合及三药联合应用均对大肠癌LoVo细胞有显著的抑制作用(P<0.05);两药联合应用均优于各自单药的抑制效果,CPT-11联合L-OHP弱于CPT-11或L-OHP与5-FU联合的抑制效果(P<0.05),由L-OHP到CPT-11小剂量序贯联合具有明显的协同作用;三药联合应用的抑制效果显著优于两药联合(P<0.05),由5-FU+L-OHP到5-FU+CPT-11的序贯联合应用与三药同步联合应用无显著性差异(P>0.05),但由5-FU+CPT-11到5-FU+L-OHP序贯应用时明显低于三药同步应用的效果(P<0.05),且三药全量及半量联合应用效果差异无显著性(P>0.05)。结论:由5-FU+L-OHP到5-FU+CPT-11的小剂量序贯联合应用具有高效协同抑制大肠癌细胞株LoVo的作用,可为临床难治性和复发性大肠癌患者的化疗及小剂量序贯化疗提供参考。 展开更多

关键词 伊立替康 奥沙利铂 氟尿嘧啶 大肠肿瘤 细胞株lovo MTT比色法

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多烯紫杉醇免疫脂质体对结肠癌细胞的靶向放射增敏作用 被引量：7

9

作者 王庆伟 刘宏 +2 位作者 吕惠兰 张学锋 程孝国 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期795-797,共3页

目的探讨免疫脂质化的多烯紫杉醇对LoVo细胞的放射增敏作用。方法制备偶联CEA抗体的多烯紫杉醇脂质体,测定抗体活性及细胞结合率,分析其对LoVo细胞体外放射增敏作用。结果多烯紫杉醇免疫脂质体平均粒径为：(213．0±17．4)nm、包封... 目的探讨免疫脂质化的多烯紫杉醇对LoVo细胞的放射增敏作用。方法制备偶联CEA抗体的多烯紫杉醇脂质体,测定抗体活性及细胞结合率,分析其对LoVo细胞体外放射增敏作用。结果多烯紫杉醇免疫脂质体平均粒径为：(213．0±17．4)nm、包封率为97．6%、较多烯紫杉醇脂质体处理的LoVo细胞荧光强度差异有统计学意义(P＜0．01)；偶联抗CEA单抗的免疫活性无明显改变；2nmol/L和100nmol/L多烯紫杉醇免疫脂质体均可提高LoVo细胞放射敏感性。SER_(D0)分别为1．70、1．78,而2nmol/L多烯紫杉醇脂质体对其放射敏感性的的影响不明显。SER_(D0)为1．02。结论多烯紫杉醇免疫脂质体可特异的与LoVo细胞结合并具有放射增敏作用。 展开更多

关键词 结直肠肿瘤 多烯紫杉醇 脂质体

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Serrin B和Nodosin对HL60、SGC7901、LOVO、U87、AGZY细胞株的毒性作用 被引量：3

10

作者 海广范 张慧 +1 位作者 郭兰青 白素平 《新乡医学院学报》 CAS 2013年第5期345-346,352,共3页

目的探讨天然药物Serrin B和Nodosin对人早幼粒白血病细胞株HL60、人胃腺癌细胞株SGC7901、人结肠癌细胞株LOVO、人胶质瘤细胞株U87、人肺腺癌细胞株AGZY的毒性作用。方法将对数期生长的HL60、SGC7901、LOVO、U87、AGZY细胞株接种于96... 目的探讨天然药物Serrin B和Nodosin对人早幼粒白血病细胞株HL60、人胃腺癌细胞株SGC7901、人结肠癌细胞株LOVO、人胶质瘤细胞株U87、人肺腺癌细胞株AGZY的毒性作用。方法将对数期生长的HL60、SGC7901、LOVO、U87、AGZY细胞株接种于96孔板中,细胞贴壁后,分别加入Serrin B或Nodosin,使药物的终浓度分别为0.00、1.25、2.50、5.00、10.00、20.00μmol.L-1,24 h后用四甲基偶氮唑盐法检测细胞株的死亡率。结果 Serrin B对HL60、SGC7901、LOVO、U87和AGZY细胞株均有较强的毒性作用(P<0.01),且其毒性作用呈现剂量-效应关系。Nodosin对HL60、SGC7901、LOVO、U87细胞株具有较强的毒性作用(P<0.05,P<0.01),而对AGZY细胞株无明显毒性作用。结论 Serrin B和Nodosin是中药溪黄草抗癌作用的有效成分,为人类多种肿瘤治疗的新药研究开发提供新的思路。 展开更多

关键词 溪黄草 HL60细胞株 SGC7901细胞株 lovo细胞株 U87细胞株 AGZY细胞株

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大黄酚对LoVo细胞AQP2表达的调节效应 被引量：5

11

作者 刘青 李锋 +4 位作者 任秦有 王新 王文 王长海 杜永平 《第四军医大学学报》 北大核心 2009年第9期849-852,共4页

目的:探讨大黄酚对体外培养LoVo细胞AQP2表达的调节效应.方法:体外培养LoVo细胞,随机分为对照组,大黄酚10,20,40mg/L不同浓度组.间接免疫荧光定性LoVo细胞AQP2表达,WesternBlot、半定量RT-PCR检测药物处理24h后AQP2蛋白及mRNA表达.体外... 目的:探讨大黄酚对体外培养LoVo细胞AQP2表达的调节效应.方法:体外培养LoVo细胞,随机分为对照组,大黄酚10,20,40mg/L不同浓度组.间接免疫荧光定性LoVo细胞AQP2表达,WesternBlot、半定量RT-PCR检测药物处理24h后AQP2蛋白及mRNA表达.体外培养LoVo细胞后,随机又将细胞分为对照组,大黄酚40mg/L组,PKA激动剂8-Bromo-cAMP10mg/L组,大黄酚40mg/L+PKA激动剂8-Bro-mo-cAMP10mg/L组.非放射性法检测药物处理24h后LoVo细胞PKA的活性水平.结果:AQP2表达于LoVo细胞膜,药物处理24h后,大黄酚20,40mg/L组AQP2蛋白分别为(0.64±0.08),(0.46±0.09)显著低于对照组(0.83±0.05),(P<0.01);AQP2mRNA分别为(0.50±0.12),(0.39±0.09),显著低于对照组(0.73±0.08),(P<0.01).40mg/L大黄酚组PKA活性(0.54±0.08)显著低于对照组(0.78±0.10),(P<0.05).结论:大黄酚可抑制LoVo细胞AQP2基因转录与翻译.大黄酚对AQP2表达的调节效应可能与大黄泻下作用有关,其可能是通过PKA信号通路调节AQP2的表达. 展开更多

关键词 大黄酚 lovo细胞系 水通道蛋白2 药理作用

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LHRH-PE40对LOVO细胞的靶向杀伤作用 被引量：5

12

作者 吴广谋 张国利 +2 位作者 岳玉环 何畅 朱平 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2006年第4期349-351,共3页

目的研究LHRH-PE40对LOVO细胞的靶向杀伤作用。方法用XTT检测LHRH-PE40对LOVO细胞的体外细胞毒性。将LOVO细胞移植于裸鼠,测定静脉注射LHRH-PE40对体内肿瘤细胞生长的抑制作用。结果LHRH-PE40对LOVO细胞细胞毒作用的半数抑制浓度为2... 目的研究LHRH-PE40对LOVO细胞的靶向杀伤作用。方法用XTT检测LHRH-PE40对LOVO细胞的体外细胞毒性。将LOVO细胞移植于裸鼠,测定静脉注射LHRH-PE40对体内肿瘤细胞生长的抑制作用。结果LHRH-PE40对LOVO细胞细胞毒作用的半数抑制浓度为2·103μg/ml,在裸鼠肿瘤模型中,LHRH-PE40剂量为150μg/kg时抑瘤率为68·49%,这种细胞毒性作用可以被LHRH(或LHRH类似物)特异性抑制。结论在体内外LHRH-PE40对LOVO细胞具有很强的细胞毒作用,其机制是LHRH-PE40通过与癌细胞膜上的LHRH受体特异结合发挥细胞杀伤作用。 展开更多

关键词 LHRH-PE40 XTT 细胞毒性 lovo细胞系

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草分枝杆菌制剂对人结肠癌细胞周期动力学的调控 被引量：3

13

作者 祁晓平 刘福坤 黎介寿 《医学研究生学报》 CAS 2003年第2期86-87,90,共3页

目的 :探讨草分枝杆菌制剂对人结肠癌细胞周期动力学的影响。　方法 :以不同浓度的草分枝杆菌制剂(商品名乌体林斯 ,UtilinS)体外处理人结肠癌细胞株Lovo,4 8h后以流式细胞仪检测细胞周期动力学指标的变化。结果 :4种不同浓度的药物均... 目的 :探讨草分枝杆菌制剂对人结肠癌细胞周期动力学的影响。　方法 :以不同浓度的草分枝杆菌制剂(商品名乌体林斯 ,UtilinS)体外处理人结肠癌细胞株Lovo,4 8h后以流式细胞仪检测细胞周期动力学指标的变化。结果 :4种不同浓度的药物均能调控Lovo细胞的细胞周期 ,使G0 ～G1期细胞数率非常显著地上升 (P <0 .0 1) ,G2 ～M期细胞数率显著地上升 (P <0 .0 5 ) ,同时使S期细胞数率非常显著地下降 (P <0 .0 1)。　结论 :乌体林斯能直接抑制结肠癌细胞株Lovo增殖 ,并可能通过G2 展开更多

关键词 草分枝杆菌 结肠癌 lovo细胞株 细胞周期动力

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VEGFR_2siRNA腺病毒载体的构建及其对人结肠癌细胞系的影响 被引量：2

14

作者 黄大伟 吴开春 +4 位作者 潘阳林 林涛 刘长江 郭长存 樊代明 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2005年第2期184-188,共5页

目的:构建血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)siRNA腺病毒载体,并研究其对结肠癌细胞系LOVOVEGFR2表达的影响.方法:首先构建含有VEGFR2siRNA的鼠U6载体(mU6-VEGFR2siRNA);利用HindⅢ与XbaⅠ双酶切将鼠U6载体启动子和VEGFR2siRNA克隆入... 目的:构建血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)siRNA腺病毒载体,并研究其对结肠癌细胞系LOVOVEGFR2表达的影响.方法:首先构建含有VEGFR2siRNA的鼠U6载体(mU6-VEGFR2siRNA);利用HindⅢ与XbaⅠ双酶切将鼠U6载体启动子和VEGFR2siRNA克隆入无启动子穿梭载体promoterlesspShuttlevector,得到pShuttle-mU6pro-VEGFR2siRNA;将pShuttle-mU6pro-VEGFR2siRNA与腺病毒骨架质粒(pAdeasy-1)在BJ5183细菌中进行同源重组,得到PAdeasy-mU6Pro-VEGFR2siRNA;利用得到的重组腺病毒感染人结肠癌LOVO细胞系,观察VEGFR2siRNA对结肠癌细胞VEGFR2表达的影响.采用West-blot检测感染前后VEGFR2蛋白表达水平的变化.结果:成功构建血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)siRNA腺病毒载体,该载体显著抑制LOVO细胞中VEGFR2的蛋白表达水平(P<0.01).结论:构建的Adeasy-mU6pro-VEGFR2siRNA腺病毒能有效地抑制LOVO细胞中VEGFR2表达,从而为肿瘤的基因治疗打下基础,也为肿瘤血管抑制治疗提供了新思路. 展开更多

关键词 VEGFR2siRNA 腺病毒载体 构建 人结肠癌细胞系 血管内皮细胞生长因子受体 结肠癌

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靶向转酮醇酶样基因1 siRNA表达载体的构建及鉴定 被引量：3

15

作者 张德太 杨菊红 +1 位作者 胡丽华 蔡鹏程 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期128-130,共3页

目的构建针对转酮醇酶样基因1(TKTL1)特异性小干扰RNA(siRNA)真核表达载体并检测其沉默效应。方法采用人U6 SnRNA启动子,分别把被9 bp序列间隔的19 bp长短的TKTL1靶序列的反向重复序列,置于pEGFP-C1-U6质粒载体中,构建成TKTL1短发夹环R... 目的构建针对转酮醇酶样基因1(TKTL1)特异性小干扰RNA(siRNA)真核表达载体并检测其沉默效应。方法采用人U6 SnRNA启动子,分别把被9 bp序列间隔的19 bp长短的TKTL1靶序列的反向重复序列,置于pEGFP-C1-U6质粒载体中,构建成TKTL1短发夹环RNA,产生重组质粒pEGFP-C1-U6/TKTL1,分别用PstⅠ和SalⅠ酶切鉴定及测序分析,并将重组质粒转染人结肠癌细胞株LoVo,通过RT-PCR检测TKTL1基因表达水平的变化。结果酶切鉴定与DNA测序分析证明,TKTL1基因的siRNA表达载体构建正确,RT-PCR结果表明转染重组质粒的LoVo细胞TKTL1基因的表达水平明显降低。结论成功构建了针对TKTL1基因的siRNA表达载体,转染LoVo细胞后可显著抑制TKTL1基因表达。 展开更多

关键词 SIRNA 转酮醇酶 转酮醇酶样基因1 人结肠癌细胞株lovo

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转酮醇酶1在人结肠癌细胞株LoVo增殖中的作用 被引量：3

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作者 杨菊红 胡丽华 +1 位作者 张德太 蔡鹏程 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期347-350,共4页

目的探讨转酮醇酶1(TKTL1)在体外培养的人类结肠癌细胞株(LoVo)生长增殖中的作用。方法构建针对TKTL1 mRNA的小干扰RNA(siRNA)质粒,将该质粒转染LoVo细胞;采用实时定量RT-PCR检测转染前后LoVo细胞转酮醇酶基因家族中转酮醇酶(TKT)、TKTL... 目的探讨转酮醇酶1(TKTL1)在体外培养的人类结肠癌细胞株(LoVo)生长增殖中的作用。方法构建针对TKTL1 mRNA的小干扰RNA(siRNA)质粒,将该质粒转染LoVo细胞;采用实时定量RT-PCR检测转染前后LoVo细胞转酮醇酶基因家族中转酮醇酶(TKT)、TKTL1、转酮醇酶2(TKTL2)mRNA表达水平的变化,通过流式细胞术和MTT法检测转染前后LoVo细胞周期和细胞增殖的改变。结果转染组(携带有pEGFP-C1-U6/TKTL1)、质粒对照组(携带有pEGFP-C1-U6/UC)和未转染组(未转染细胞)中TKT和TKTL2 mRNA的表达水平差异无显著性意义(P>0.05)。转染组细胞中TKTL1的表达水平与质粒对照组和未转染组相比,明显下调,且转染组LoVo细胞总转酮醇酶活性明显下降,细胞增殖明显被抑制,LoVo细胞被阻滞在G0/G1期。结论TKTL1在人类结肠癌细胞(LoVo细胞系)的生长增殖中起重要作用,TKTL1可能成为肿瘤治疗的新靶点。 展开更多

关键词 转酮醇酶 转酮醇酶1 小干扰RNA 转酮醇酶活性 lovo细胞

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LoVo细胞系中结肠癌干细胞样细胞的分离、培养及鉴定 被引量：2

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作者 张洪也 程勇 +2 位作者 胡祥 吕原 武乃金 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期149-154,共6页

目的:从结肠癌LoVo细胞系中分离、鉴定具有CD44+/EPCAMhigh特异表型的结肠癌干细胞样细胞,观察其生物学行为,证实该细胞系中结肠癌干细胞样细胞的存在。方法:从普通血清培养的LoVo细胞系中以流式细胞仪分选具有CD44+/EPCAMhigh表型的细... 目的:从结肠癌LoVo细胞系中分离、鉴定具有CD44+/EPCAMhigh特异表型的结肠癌干细胞样细胞,观察其生物学行为,证实该细胞系中结肠癌干细胞样细胞的存在。方法:从普通血清培养的LoVo细胞系中以流式细胞仪分选具有CD44+/EPCAMhigh表型的细胞,接种于添加生长因子的无血清培养基中,观察其增殖过程,继而诱导分化。MTT法、流式细胞术检测CD44+/EPCAMhigh、EPCAMlow和未分选LoVo细胞的增殖能力及细胞周期分布。3种细胞接种裸鼠,比较不同细胞的成瘤率;免疫荧光技术检测小鼠次代CD44+/EPCAMhigh细胞中CD44/EPCAM的表达。结果:LoVo细胞中有17.4%的CD44+/EPCAMhigh细胞,并能在添加生长因子的无血清培养基中呈细胞球样生长,且可连续传代;在血清的诱导下,呈贴壁分化生长,其形态与未分选LoVo细胞无差别。CD44+/EPCAMhigh细胞增殖能力高于EPCAMlow细胞及未分选LoVo细胞,且细胞周期多集中在G0/G1期。以500个CD44+/EPCAMhigh细胞接种裸鼠成瘤率为90%(9/10),而1×104个EPCAMlow细胞成瘤率为0(0/10)。小鼠移植瘤中次代CD44+/EPCAMhigh细胞仍能少量表达CD44和EPCAM。结论:LoVo细胞中存在CD44+/EPCAMhigh结肠癌干细胞样细胞,CD44+/EPCAMhigh可用于结肠癌肿瘤干细胞的深入研究。 展开更多

关键词 结肠癌 lovo细胞株 肿瘤干细胞 干细胞样细胞 CD44/EPCAM

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高表达p55PIK细胞株的建立及其对结肠癌LoVo细胞周期的影响 被引量：1

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作者 曹小年 胡发涌 +3 位作者 杨熹 来森艳 孙威 胡俊波 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期128-131,共4页

目的构建p55PIK高表达的质粒,筛选稳定高表达p55PIK的LoVo细胞系,检测其对LoVo细胞周期的影响。方法以基因组cDNA为模板,聚合酶链反应(PCR)扩增目的片段,通过限制性核酸内切酶进行酶切,T4DNA连接酶将目的片段插入pcDNA3.1质粒中;将携带p... 目的构建p55PIK高表达的质粒,筛选稳定高表达p55PIK的LoVo细胞系,检测其对LoVo细胞周期的影响。方法以基因组cDNA为模板,聚合酶链反应(PCR)扩增目的片段,通过限制性核酸内切酶进行酶切,T4DNA连接酶将目的片段插入pcDNA3.1质粒中;将携带p55PIK基因的pcDNA3.1质粒转染LoVo细胞,加入适量的G418筛选(500μg/mL),并通过实时定量PCR(qPCR)和Western blot方法检测p55PIK mRNA水平和蛋白水平,进一步通过BrdU/PI掺入法检测p55PIK对LoVo细胞周期和DNA合成的影响。结果成功构建了p55PIK高表达的质粒,并筛选出稳定高表达p55PIK的LoVo细胞系;在LoVo细胞中高表达p55PIK能够促进细胞S期的进程和DNA的合成。结论成功构建了pcDNA3.1-p55PIK质粒,并筛选出p55PIK稳定高表达的LoVo细胞系,高表达p55PIK能够促进LoVo细胞S期的进程和DNA的合成。 展开更多

关键词 p55PIK 稳定细胞系 lovo细胞 细胞周期 DNA合成

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CXCR3B在结肠癌组织中的表达及对结肠癌LOVO细胞株迁移能力的影响 被引量：2

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作者 李海 荣诗阔 +3 位作者 许佳义 陈冬梅 刘晓明 杨银学 《宁夏医科大学学报》 2017年第6期651-654,I0002,共5页

目的探讨趋化因子受体CXCR3B(CXC型趋化因子受体3变体B)在结肠癌组织中的表达及对结肠癌LOVO细胞株迁移能力的影响。方法常规收取结直肠癌及癌旁组织标本,用免疫组织化学(IHC)染色方法检测CXCR3B的表达;实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测... 目的探讨趋化因子受体CXCR3B(CXC型趋化因子受体3变体B)在结肠癌组织中的表达及对结肠癌LOVO细胞株迁移能力的影响。方法常规收取结直肠癌及癌旁组织标本,用免疫组织化学(IHC)染色方法检测CXCR3B的表达;实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测正常肠上皮细胞株NCM460及结肠癌细胞株LOVO中的CXCR3B m RNA表达,过表达CXCR3B-RFP慢病毒感染LOVO细胞株,划痕实验及transwell实验检测LOVO细胞株的迁移变化。结果免疫组织化学结果显示在结直肠癌旁组织中CXCR3B的表达显著高于癌组织(P<0.001);NCM460细胞中CXCR3B m RNA表达高于LOVO细胞表达(P<0.01)。划痕实验及transwell迁移实验显示过表达CXCR3B组(LOVO-CXCR3B)细胞迁移较阴性对照组(LOVO-NC)低(P<0.01)。结论人结直肠癌组织中CXCR3B低表达,过表达CXCR3B可抑制结肠癌细胞株LOVO的迁移。 展开更多

关键词 CXC型趋化因子受体3变体B 结直肠癌 迁移 lovo细胞株

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结直肠癌转移生物标记物的蛋白质组学研究 被引量：1

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作者 张鹏 黄龙 +7 位作者 马延磊 彭佳远 沈通一 陈红旗 周玉坤 储昭新 张明 秦环龙 《中华胃肠外科杂志》 CAS 北大核心 2009年第6期618-622,共5页

目的应用蛋白质组学技术寻找结直肠癌转移潜在标志物，研究氟尿嘧啶（5-Fu）对差异蛋白表达的影响，并初步探讨结直肠癌的转移机制。方法常规培养Lovo及SW480细胞至指数生长期后提取蛋白。采用MTF法检测5-Fu对此两种细胞的半数抑制浓度... 目的应用蛋白质组学技术寻找结直肠癌转移潜在标志物，研究氟尿嘧啶（5-Fu）对差异蛋白表达的影响，并初步探讨结直肠癌的转移机制。方法常规培养Lovo及SW480细胞至指数生长期后提取蛋白。采用MTF法检测5-Fu对此两种细胞的半数抑制浓度（IC50），分别用IC50的5-FU干预Lovo和SW480细胞后提取蛋白。对所提取的蛋白进一步行二维凝胶电泳，选取表达有显著差异的点进行质谱检验和生物信息学分析。采用Western blot及免疫荧光验证5-FU作用前后两种细胞显著差异蛋白的表达。结果二维凝胶电泳和质谱分析成功鉴定出11种差异蛋白．根据预设条件筛选出：核内不均匀核糖核蛋白K（hnRNP K）、蛋白质二硫键异构酶（PDI）。Western blot及免疫荧光实验显示;Lovo细胞株中hnRNPK蛋白表达较SW480高，PDI蛋白表达较SW480低：5-Fu干预后．Lovo细胞株中hnRNP K蛋白表达下调程度较SW480显著．免疫荧光强度减弱，SW480细胞株中PDI蛋白表达上调幅度较Lovo细胞显著，免疫荧光强度增强。结论hnRNP K和PDI表达在不同转移潜能结直肠癌细胞系Lovo和SW480存在显著差异，5-Fu干预后其表达有着规律性改变。 展开更多

关键词 结直肠肿瘤 lovo细胞 SW480细胞 氟尿嘧啶 肿瘤转移 蛋白质组学

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