菊花多糖的结构特征及其对NF-κB和肿瘤细胞的活性研究 被引量：18

1

作者 范灵婧 倪鑫炎 +1 位作者 吴纯洁 丁侃 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2013年第17期2364-2371,共8页

目的阐明菊花多糖的结构特征,研究其对NF-κB和肿瘤细胞的活性。方法以杭菊花、怀菊花和亳菊花为原料药材,经水提醇沉、离子交换树脂和凝胶过滤柱色谱分离纯化,获得6种中性均一多糖。应用高效凝胶渗透色谱(HPGPC)、红外光谱(IR)、气相色... 目的阐明菊花多糖的结构特征,研究其对NF-κB和肿瘤细胞的活性。方法以杭菊花、怀菊花和亳菊花为原料药材,经水提醇沉、离子交换树脂和凝胶过滤柱色谱分离纯化,获得6种中性均一多糖。应用高效凝胶渗透色谱(HPGPC)、红外光谱(IR)、气相色谱(GC)及气相色谱-质谱联用(GC-MS)等方法对其一级结构特征进行初步分析,同时运用6种菊花多糖对胰腺癌(PANC-1)和肝细胞(LO2)的MTT实验及NF-κB信号激活实验进行了活性测定。结果 6种多糖CMTA0S1、CMTA0S3、CMJA0S1、CMJA0S2、CMBA0S1和CMBA0S3的重均相对分子质量依次为7.52×104、7.80×103、7.80×104、1.04×104、5.79×104和1.35×104,其中CMTA0S1、CMJA0S1和CMBA0S1主要由半乳糖、阿拉伯糖和葡萄糖组成,物质的量比分别为1.23∶1.00∶0.20、2.18∶1.00∶0.53和3.30∶1.00∶0.75;CMTA0S3、CMJA0S2和CMBA0S3主要由半乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖和甘露糖组成,物质的量比分别为0.73∶1.00∶0.40∶0.21、1.39∶1.00∶0.84∶0.55和1.19∶1.00∶0.48∶0.19。6种菊花多糖以末端-呋喃阿拉伯糖、1,5-呋喃阿拉伯糖、1,4-吡喃半乳糖、1,3,6-吡喃半乳糖和1,4-吡喃葡萄糖5种连接方式为主。生物活性研究表明菊花多糖均对胰腺癌PANC-1细胞具有明显抑制作用,以杭菊花多糖CMTA0S3和怀菊花多糖CMJA0S2抑制率最强,接近70%且呈现出良好的浓度依赖性。针对核因子NF-κB活性实验结果显示,菊花多糖中只有粗多糖CMBA表现出较强的免疫抑制活性,而均一多糖CMTA0S1和CMJA0S1则显示出潜在的免疫激活活性。结论 3种菊花中的6种中性多糖结构具有一定程度的相似性,对胰腺癌PANC-1细胞具有良好的抑制作用,且对NF-κB活性有明显调节作用。 展开更多

关键词 菊花 中性多糖 胰腺癌细胞 肝细胞 NF—κB

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醋制降低京大戟对人正常肝细胞LO2的毒性及机制研究 被引量：15

2

作者 陈海鹰 曹雨诞 +3 位作者 颜晓静 张丽 耿欣欣 丁安伟 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期866-870,共5页

目的:比较京大戟醋制前后对人正常肝细胞LO2的毒性作用,并探讨其可能的作用机制。方法:体外培养LO2细胞,用不同浓度的京大戟生品和醋品对其进行处理,MTT法测定各样品对LO2细胞增殖的抑制作用;Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡的形... 目的:比较京大戟醋制前后对人正常肝细胞LO2的毒性作用,并探讨其可能的作用机制。方法:体外培养LO2细胞,用不同浓度的京大戟生品和醋品对其进行处理,MTT法测定各样品对LO2细胞增殖的抑制作用;Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡的形态学改变;AnnexinV/PI染色流式细胞术检测LO2细胞凋亡;PI染色流式细胞术分析其对细胞周期的影响;检测细胞培养液上清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)活力,细胞裂解上清超氧化歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)含量。结果:与阴性对照组比较,京大戟生品各浓度组均可抑制LO2细胞增殖,诱导细胞凋亡,引起细胞S期阻滞(P<0.05);能显著升高细胞培养液上清ALT,AST,LDH活力(P<0.05),显著降低细胞裂解上清SOD活性和GSH含量、增加MDA含量。醋制后,与京大戟生品组比较,可显著降低细胞凋亡率、降低细胞周期阻滞,显著降低细胞培养液上清ALT,AST,LDH活力(P<0.05),显著升高细胞裂解上清SOD活性和GSH含量、显著降低MDA含量。结论:醋制可降低京大戟对LO2细胞的毒性,其机制可能是减轻氧化损伤,从而降低细胞周期阻滞,减少细胞凋亡。 展开更多

关键词 京大戟 醋制 lo2细胞 凋亡 氧化损伤

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补骨脂素和异补骨脂素下调NF-κB活性改善LO2细胞脂代谢紊乱的机制研究 被引量：12

3

作者 周俪姗 鄢素琪 +5 位作者 熊小丽 黄娟 秦欢 张领领 张林利 汤建桥 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期2118-2123,共6页

探讨补骨脂素和异补骨脂素对正常人肝细胞(LO2)内脂质沉积的改善及作用机制。建立棕榈酸(PA)诱导的人LO2细胞非酒精性脂肪肝模型,给予补骨脂素和异补骨脂素干预,酶法检测细胞内甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)含量,细胞上清液谷丙转氨酶(ALT... 探讨补骨脂素和异补骨脂素对正常人肝细胞(LO2)内脂质沉积的改善及作用机制。建立棕榈酸(PA)诱导的人LO2细胞非酒精性脂肪肝模型,给予补骨脂素和异补骨脂素干预,酶法检测细胞内甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)含量,细胞上清液谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)含量;ELISA法检测细胞上清液促炎因子(IL-6,TNF-α)及趋化因子(IL-8,MCP-1)的表达;Western blot法检测细胞内核因子κB(NF-κB) p65磷酸化(p-p65)及非磷酸化蛋白(p65)、转化因子(TGF)β1蛋白表达。结果显示,与模型组比较,补骨脂素组细胞内TG,TC含量降低(P<0. 01,P<0. 05),细胞上清液中ALT和AST含量、促炎因子及趋化因子分泌水平均有降低(P<0. 01,P<0. 05),细胞内p-p65/p65比值及TGF-β1蛋白表达明显下降(P<0. 01);异补骨脂素组细胞内TG含量无明显变化,其余检测指标均有降低(P<0. 01,P<0. 05)。补骨脂素疗效优于异补骨脂素(P<0. 01,P<0. 05)。结果表明,补骨脂素对PA诱导LO2细胞脂肪变性具有改善作用;补骨脂素和异补骨脂素均对PA诱导LO2细胞损伤具有缓解作用,可抑制NF-κB的活性减轻炎症反应并下调TGF-β1表达。 展开更多

关键词 补骨脂素 异补骨脂素 lo2细胞 非酒精性脂肪性肝病 核因子ΚB

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不同方法炮制甘遂对LO2细胞周期与凋亡的影响 被引量：11

4

作者 张丽 高兰 +2 位作者 颜晓静 曹雨诞 丁安伟 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期825-830,共6页

目的:探讨不同方法炮制所得甘遂各样品对人正常肝细胞LO2细胞周期与凋亡的影响。方法:以人正常肝细胞LO2为研究对象,采用MTT法检测甘遂醋制前后各炮制品(生品、清炒品、醋润品、醋制品)对LO2细胞活性的影响,采用倒置显微镜观察细胞形态... 目的:探讨不同方法炮制所得甘遂各样品对人正常肝细胞LO2细胞周期与凋亡的影响。方法:以人正常肝细胞LO2为研究对象,采用MTT法检测甘遂醋制前后各炮制品(生品、清炒品、醋润品、醋制品)对LO2细胞活性的影响,采用倒置显微镜观察细胞形态,采用流式细胞术研究甘遂醋制前后各炮制品对LO2细胞周期和凋亡的影响。结果:与阴性对照组比较,甘遂生品可明显降低LO2细胞的活性(P<0.01)和形态,显著升高S期细胞百分率(P<0.05),显著降低G2/M期细胞百分率(P<0.01),显著增加人正常肝细胞LO2细胞的早期凋亡率、晚期凋亡坏死率、总凋亡率(P<0.01);与甘遂生品组比较,甘遂各炮制品均能降低对人正常肝细胞LO2的增殖抑制作用(P<0.01)和形态变差的趋势,其降低增殖抑制作用的顺序为醋制品>醋润品>清炒品,且呈一定的量-效关系(r醋制=0.999,r醋润=0.913,r清炒=0.914,r生品=0.984);且均能显著增加G2/M期细胞百分率(P<0.05,P<0.05,P<0.01),显著减少人正常肝细胞LO2的早期凋亡率、晚期凋亡坏死率、总凋亡率(P<0.01),其增加G2/M期细胞百分率的顺序和降低凋亡率的顺序均为醋制品>醋润品>清炒品。结论:甘遂炮制后可通过影响LO2细胞周期与凋亡降低其毒性,且甘遂醋制工艺中的炒与醋润2种操作在醋制降低甘遂的肝毒性中能够起到协同作用,从而为揭示上述2种操作在甘遂醋制减毒工艺中的合理性和醋制工艺优化提供了一定的依据。 展开更多

关键词 甘遂 醋甘遂 炒 醋润 醋制 lo2细胞 减毒 细胞周期 细胞凋亡

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猫爪草粗多糖及其部位和组分的理化性质及对药物诱导肝细胞损伤的保护作用 被引量：10

5

作者 姚蕙 骆芙瑶 +3 位作者 麻浩 顾嘉楠 高月求 单俊杰 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期544-554,共11页

目的:研究猫爪草多糖及组分的理化性质,以及对药物诱导肝细胞损伤的影响。方法:猫爪草药材60℃和100℃连续水提,水提液分别经乙醇沉淀、透析和冷冻干燥,制备粗多糖RTP-60和RTP-60-100。RTP-60和RTP-60-100分别采用乙醇分级法分离得到不... 目的:研究猫爪草多糖及组分的理化性质,以及对药物诱导肝细胞损伤的影响。方法:猫爪草药材60℃和100℃连续水提,水提液分别经乙醇沉淀、透析和冷冻干燥,制备粗多糖RTP-60和RTP-60-100。RTP-60和RTP-60-100分别采用乙醇分级法分离得到不同多糖部位,多糖部位经DEAE-纤维素和凝胶柱层析,得到不同的多糖组分和成分。苯酚-硫酸法测定糖含量,凝胶过滤法测定分子量分布,PMP-衍生和毛细管电泳法测定单糖组成。采用MTT法评价粗多糖及其部位和组分对对乙酰氨基酚、顺铂、恩替卡韦和过氧化氢诱导人LO2肝细胞损伤的影响。结果:猫爪草的粗多糖RTP-60和RTP-60-100及其多糖部位和组分对对乙酰氨基酚和恩替卡韦造成的肝细胞毒性均具有显著的抑制作用,对过氧化氢诱导肝细胞死亡也有明显的抗损伤活性,但对顺铂造成的肝毒性仅RTP-60-1V部位显示有抑制活性。结论:猫爪草多糖具有明显肝保护作用,抗氧化作用可能是其作用机制之一,希望未来可用于治疗药物肝损伤。 展开更多

关键词 猫爪草 多糖 药物肝损伤 lo2细胞

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细胞学方法评价6种中药的寒热药性 被引量：6

6

作者 王亚男 窦德强 《辽宁中医杂志》 CAS 北大核心 2017年第3期558-560,共3页

目的:评价6种中药的寒热属性。方法:用噻唑蓝(MTT)比色法考察黄芩、黄连、黄柏、干姜、附子、花椒对人正常肝细胞LO2以及人肺癌细胞A549细胞体外增殖的影响,并用倒置显微镜观察黄芩、黄连、黄柏、干姜、附子、花椒对细胞形态特征的影响... 目的:评价6种中药的寒热属性。方法:用噻唑蓝(MTT)比色法考察黄芩、黄连、黄柏、干姜、附子、花椒对人正常肝细胞LO2以及人肺癌细胞A549细胞体外增殖的影响,并用倒置显微镜观察黄芩、黄连、黄柏、干姜、附子、花椒对细胞形态特征的影响,台盼蓝染色法观察黄芩、黄连、黄柏、干姜、附子、花椒对LO2以及A549细胞的毒性作用。结果:黄芩、黄连、黄柏在所选浓度范围内抑制两种细胞生长,使细胞固缩,变圆;干姜、附子、花椒在低浓度时促进两种细胞生长,使细胞密度增加、结构致密。台盼蓝染色表明6种中药对两种细胞均无细胞毒性。结论:黄芩、黄连、黄柏药性为寒凉,干姜、附子、花椒药性为温热;黄芩、黄连、黄柏、干姜、附子、花椒对LO2及A549细胞均无细胞毒活性。 展开更多

关键词 寒热药性 MTT法 lo2细胞 A549细胞

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北柴胡水提液中13种化学成分分析及其肝损伤保护作用研究 被引量：4

7

作者 杨奇涛 汪玉馨 +5 位作者 吴殷囡 刘洋 孟长虹 谭力 陆益红 史清水 《中南药学》 CAS 2022年第1期74-79,共6页

目的分析北柴胡水提液的主要化学成分并考察其对对乙酰氨基酚(APAP)所致肝损伤的影响。方法采用高效液相色谱-高分辨飞行时间串联质谱(HPLC-Q-TOF-MS/MS)对北柴胡化学成分主要成分群进行分析鉴定;根据HPLC-Q-TOF-MS/MS测定及PeakView 2.... 目的分析北柴胡水提液的主要化学成分并考察其对对乙酰氨基酚(APAP)所致肝损伤的影响。方法采用高效液相色谱-高分辨飞行时间串联质谱(HPLC-Q-TOF-MS/MS)对北柴胡化学成分主要成分群进行分析鉴定;根据HPLC-Q-TOF-MS/MS测定及PeakView 2.1分析中得到的各化合物的质谱信息,并结合参考文献进行初步推测及对照品验证,对北柴胡水提液主要成分群进行表征;利用APAP诱导的人源化非肿瘤肝细胞(LO2)损伤模型对主要成分活性进行筛选与比较。结果北柴胡水提液中以柴胡皂苷为主,且其多为同分异构体,特征碎片离子相似,通过对照品对13种成分进行了确证。这些化学成分对LO2肝细胞损伤预保护作用活性差异较大,其中柴胡皂苷F及黄芩苷具有潜在肝损伤预保护作用。结论该研究对北柴胡活性成分的药效及毒性考察具有借鉴意义。 展开更多

关键词 北柴胡水提液 化学成分 肝损伤 对乙酰氨基酚 lo2细胞

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Pdx1与Ngn3协同诱导LO2细胞分化为胰腺β样细胞 被引量：3

8

作者 郭敏 唐小龙 张洹 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期351-356,共6页

目的:胰腺十二指肠同源框蛋白1(Pdx1)与神经源素3(Ngn3)联合诱导肝实质细胞向胰腺β样细胞分化。方法:以人胚胎胰腺组织基因组的mRNA为模板经RT-PCR扩增获得Pdx1与Ngn3基因。应用分子生物学技术,分别克隆到真核表达载体pEGFP-C1的多克... 目的:胰腺十二指肠同源框蛋白1(Pdx1)与神经源素3(Ngn3)联合诱导肝实质细胞向胰腺β样细胞分化。方法:以人胚胎胰腺组织基因组的mRNA为模板经RT-PCR扩增获得Pdx1与Ngn3基因。应用分子生物学技术,分别克隆到真核表达载体pEGFP-C1的多克隆位点中,构建pEGFP-C1/Pdx1与pEGFP-C1/Ngn3真核表达质粒,并共转染L02细胞,用RT-PCR、免疫组化、间接荧光法检测目的基因及胰岛素相关基因葡萄糖转运体2(GLUT2)与胰岛素的表达情况。结果:目的基因克隆正确,RT-PCR、免疫组化、间接荧光证实转染后LO2细胞中有Pdx1、Ngn3和胰岛素及胰岛素相关基因GLUT2的表达。结论:Pdx1与Ngn3协同作用可诱导肝实质细胞向胰腺β样细胞分化。 展开更多

关键词 胰腺十二指肠同源框蛋白1 神经源素3 lo2细胞 转分化 胰腺β样细胞

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基于VEGF/p38MAPK研究羟基红花黄色素A对过氧化氢诱导人肝细胞氧化损伤的保护作用

9

作者 白皓天 杨婧 +5 位作者 李娅兰 梁霄 张筠昊 孙淑慧 张倩倩 王锐 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期843-848,共6页

目的探讨羟基红花黄色素A(Hydroxysafflor yellow A,HSYA)对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的人肝细胞LO2氧化损伤的保护作用及其机制。方法利用H_(2)O_(2)诱导并建立了LO2细胞氧化损伤模型。将细胞分为对照组(Control group,CG)、H_(2)O_(2... 目的探讨羟基红花黄色素A(Hydroxysafflor yellow A,HSYA)对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的人肝细胞LO2氧化损伤的保护作用及其机制。方法利用H_(2)O_(2)诱导并建立了LO2细胞氧化损伤模型。将细胞分为对照组(Control group,CG)、H_(2)O_(2)损伤模型组(Model group,MG)、HYSA(0.125,0.25,0.5,1mg·mL^(-1))干预组(MG+0.125,0.25,0.5,1mg·mL^(-1)HYSA)。分别利用MTT法、流式细胞术测定了细胞活力和凋亡程度;利用ELISA测定细胞内ROS、LDH、SOD、GSH-Px、MDA和CAT的活性及含量;Hoechst染色进一步观察细胞核凋亡状态;通过qRT-PCR技术测定细胞内VEGF、p38MAPK和凋亡相关蛋白的mRNA表达量;采用Western blotting法检测凋亡相关因子及VEGF/p38MAPK通路的蛋白表达。结果成功建立由H_(2)O_(2)所诱导的人肝细胞LO2损害模型;与MG比较,在0.125、0.25、0.5、1mg·mL^(-1)HYSA干预组细胞中LDH、MDA和ROS的活性和含量均明显下降,SOD、GSH-Px和CAT活性均明显增强,HYSA可明显抑制细胞凋亡并下调VEGF、p38MAPK/p-p38MAPK蛋白表达。结论HYSA可缓解H_(2)O_(2)对人肝LO2细胞造成的损伤,对细胞内氧化指标产生显著影响,有明显的氧化损伤保护作用,机制与VEGF/p38MAPK通路有关,可为HYSA的临床应用提供支持。 展开更多

关键词 羟基红花黄色素A lo2细胞 氧化应激 P38MAPK VEGF

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千金子制霜前后提取物在体外对人正常肝细胞LO2的毒性作用研究 被引量：3

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作者 王慧楠 王佩华 +4 位作者 杨子烨 姜明瑞 杨泰基 曹艳花 王英姿 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期18-22,共5页

目的比较千金子制霜前后提取物对LO2细胞毒性的影响并探究千金子制霜减毒的作用机制。方法将人肝LO2细胞分为7组:千金子生品低、中、高3个剂量组、千金子霜品低、中、高3个剂量组和阴性对照组。将细胞培养48 h后,分别予以100,200,400μg... 目的比较千金子制霜前后提取物对LO2细胞毒性的影响并探究千金子制霜减毒的作用机制。方法将人肝LO2细胞分为7组:千金子生品低、中、高3个剂量组、千金子霜品低、中、高3个剂量组和阴性对照组。将细胞培养48 h后,分别予以100,200,400μg·mL^(-1)的千金子生品、千金子霜品供试品溶液和等体积的无血清细胞培养液,各组设置3个复孔。分别用PI染色法和Annexin V-FITC/PI双重染法来检测细胞周期和凋亡情况,试剂盒法检测乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)和Na^(+)-K^(+)-ATP酶的活力。结果阴性对照组、千金子生品低、高2个剂量组、千金子霜品低、高2个剂量组的细胞G2/M期比例依次为(22.47±2.29)%,(13.63±0.88)%,(6.12±0.83)%,(18.03±0.73)%和(9.88±0.75)%^;这5组总凋亡率依次为(3.87±0.12)%,(9.93±0.05)%,(12.80±0.28)%,(6.90±0.08)%和(9.73±0.09)%。阴性对照组、千金子生品低、中、高3个剂量组、千金子霜品低、中、高3个剂量组的LDH活力依次为(21.66±1.78),(257.77±13.09),(452.44±10.80),(798.65±8.72),(145.16±5.65),(238.10±4.85)和(495.56±5.16) mU·mL^(-1);这7组的SOD活力依次为(17.03±0.41),(8.28±0.35),(6.01±0.37),(2.89±0.27),(12.87±0.21),(10.58±0.24)和(7.71±0.44) U·mg^(-1);这7组的Na^(+)-K^(+)-ATP酶活力依次为(15.84±0.54),(8.47±0.66),(7.00±0.13),(3.64±0.17),(12.88±0.40),(10.79±0.22)和(8.45±0.13) U·mg^(-1)。上述指标,千金子生品低、中、高3个剂量组与阴性对照组相比,差异均有统计学意义(均P<0.01)^(+)千金子霜品3个剂量组与千金子生品3个剂量组相比,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论千金子制霜后可能通过减轻细胞氧化损伤,降低细胞膜通透性,改善肝细胞功能损伤,减少细胞凋亡来降低体外肝毒性。 展开更多

关键词 千金子生品 制霜 人正常肝细胞lo2 肝毒性 减毒

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不同浓度腐胺对人肝细胞增殖及凋亡的影响 被引量：4

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作者 陈健霞 荣新洲 陈沅然 《中华损伤与修复杂志（电子版）》 CAS 2014年第4期25-28,共4页

目的探讨不同浓度腐胺对体外培养人正常肝细胞增殖、凋亡的影响。方法将体外培养的人正常肝细胞株LO2分为腐胺组与对照组,不同浓度腐胺组以含腐胺浓度分别为0.25、0.50、1.00、10.00、20.00、40.00、80.00、160.00、320.00、640.00μg/m... 目的探讨不同浓度腐胺对体外培养人正常肝细胞增殖、凋亡的影响。方法将体外培养的人正常肝细胞株LO2分为腐胺组与对照组,不同浓度腐胺组以含腐胺浓度分别为0.25、0.50、1.00、10.00、20.00、40.00、80.00、160.00、320.00、640.00μg/mL完全培养基培养细胞,对照组以不添加腐胺完全培养基培养细胞。对照组与不同浓度腐胺组处理的LO2细胞培养12 h后,再以四唑化合物电子耦联显色法（MTS）、流式细胞技术（FCM）分别测定细胞的增殖活性（用吸光度值表示）与凋亡率,并对两组数据进行相关性分析。结果 MTS结果显示,0.25、0.50、1.00、10.00、20.00μg/mL浓度腐胺组LO2细胞吸光度值均较对照组（0.474±0.022）升高,差异有统计学意义（P〈0.05）,并且1.00μg/mL浓度时达到峰值（0.834±0.012）;80.00μg/mL及以上浓度腐胺组LO2细胞吸光度值较对照组降低,差异有统计学意义（P均〈0.01）;40.00μg/mL腐胺组LO2细胞吸光度值（0.477±0.009）与对照组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。流式细胞技术结果显示,0.25、0.50、1.00、10.00、20.00μg/mL浓度腐胺组LO2细胞凋亡率均较对照组（15.23±1.82）%降低,差异有统计学意义（P〈0.05）,并且1.00μg/mL腐胺组细胞凋亡率达到最低值（2.30±1.00）%;80.00μg/mL及以上浓度腐胺组LO2细胞凋亡率较对照组升高,差异有统计学意义（P均〈0.01）;40.00μg/mL腐胺组LO2细胞凋亡率（16.10±1.45）%与对照组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。相关性分析结果显示,各组浓度腐胺处理LO2细胞其细胞增殖与凋亡率呈负线性相关关系（r=-0.989,P=0.000）。结论低浓度（0.25-20.00μg/mL）腐胺对人正常肝LO2细胞增殖有促进作用,而较高浓度（80.00μg/mL及以上）的腐胺则出现明显的诱导凋亡作用,低浓度腐胺促进细胞增殖可能是通过抑制细胞凋亡而实现。 展开更多

关键词 腐胺 增殖 凋亡 lo2肝细胞

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人claudin-10基因启动子转录调控的初步分析 被引量：3

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作者 周雯 王青松 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期205-211,216,共8页

[目的]构建不同长度的人claudin-10基因上游启动子荧光素酶报告基因载体,并在LO2细胞中比较其活性。[方法]以人LO2肝细胞基因组DNA为模板,PCR扩增获得claudin-10基因5'侧翼序列,并将其插入p MD18-T载体;PCR扩增获得不同长度的claudi... [目的]构建不同长度的人claudin-10基因上游启动子荧光素酶报告基因载体,并在LO2细胞中比较其活性。[方法]以人LO2肝细胞基因组DNA为模板,PCR扩增获得claudin-10基因5'侧翼序列,并将其插入p MD18-T载体;PCR扩增获得不同长度的claudin-10基因上游启动子区序列,构建p GL3-Basic系列荧光素酶基因报告载体。瞬时转染LO2细胞,双荧光素酶报告基因分析系统检测转录活性。[结果]成功构建6个不同长度的人claudin-10基因上游启动子区(-1 451/+100bp、-1 022/+100bp、-1 005/+100bp、-677/+100bp、-377/+100bp和-108/+100bp)的报告载体;启动子活性实验结果表明:当claudin-10启动子片段从-1 005 bp截短至-677 bp,从-108 bp截短至+100 bp时活性显著下降(P<0.05);其余截短时活性无改变(P>0.05)。[结论]claudin-10启动子-1 005bp^-677bp和-108bp^+100bp区是claudin-10基因的主要转录调控区。 展开更多

关键词 claudin-10基因 启动子 lo2细胞 转录调控 荧光素酶报告基因

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低剂量镉和汞单独及联合作用对人胚肝细胞生长的Hormesis效应及机制研究 被引量：3

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作者 纪存委 武丽 +3 位作者 张裕曾 蓝晖翔 周宜开 郑丹 《环境与健康杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期16-19,共4页

目的探讨低剂量重金属镉、汞单独及等浓度联合作用对人胚肝细胞（L02）生长的兴奋效应及可能的机制。方法以体外培养的L0：细胞为实验对象，不同浓度的镉、汞单独及等浓度（0．01—100μmol／L）联合处理L0：24h后，用Vi—CELLTMXR活力... 目的探讨低剂量重金属镉、汞单独及等浓度联合作用对人胚肝细胞（L02）生长的兴奋效应及可能的机制。方法以体外培养的L0：细胞为实验对象，不同浓度的镉、汞单独及等浓度（0．01—100μmol／L）联合处理L0：24h后，用Vi—CELLTMXR活力分析仪分析细胞生长状况；根据Finney数学模型和Logistic回归方法判断联合作用类型；按照二硫代二硝基苯甲酸比色法和黄嘌呤氧化酶法测定谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—Px）与超氧化物歧化酶（SOD）的活力；依据ParvinderKaur的检测方法检测细胞内ROS水平；火焰原子吸收光谱法及原子荧光法分别检测细胞内镉、汞吸收量。结果低剂量的镉、汞（0．01、0．05、0．25μmol／L）单独染毒及镉＋汞（0．01，0．05μmol／L）联合染毒处理24h能明显刺激LO2细胞生长；Finney数学模型显示镉、汞等浓度联合作用于LO2细胞24h后Q=1．9，说明其联合作用属于相加作用；低剂量的镉、汞单独及联合染毒LO2细胞24h均能明显诱导SOD与GSH—Px活力升高，当剂量增大到一定水平（25．6μmol／L）后又抑制两种酶活力。细胞内ROS水平与重金属吸收量随染毒剂量增加而增加。结论低浓度重金属镉、汞单独及等浓度联合作用对LO2生长存在Honnesis效应，其机制可能是低浓度镉、汞诱导细胞GSH—Px、SOD活力增强，清除过量的自由基，保护细胞免受氧化损伤，提高细胞存活率。 展开更多

关键词 毒物兴奋效应 金属 重 人胚肝细胞 氧化应激 联合毒性

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二氯乙腈对LO2细胞周期的影响及其相关调控机制的研究 被引量：1

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作者 翟璐 梁海荣 +1 位作者 刘雨果 罗皓 《环境与健康杂志》 CAS 北大核心 2018年第1期17-20,共4页

目的探讨二氯乙腈(dichloroacetonitrile,DCAN)对细胞周期的影响及其相关的调控机制。方法用二甲基亚砜(DMSO)溶解DCAN,以DMSO处理人胚肝细胞(LO2细胞)为对照组,采用Cell Counting Kit-8试剂盒检测0~5 000μmol/L DCAN对细胞存活率的影... 目的探讨二氯乙腈(dichloroacetonitrile,DCAN)对细胞周期的影响及其相关的调控机制。方法用二甲基亚砜(DMSO)溶解DCAN,以DMSO处理人胚肝细胞(LO2细胞)为对照组,采用Cell Counting Kit-8试剂盒检测0~5 000μmol/L DCAN对细胞存活率的影响,分别用10、50、100、500μmol/L DCAN处理LO2细胞为染毒组,以碘化丙啶(PI)标记的流式细胞技术检测细胞周期分布情况,以实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测chkl基因、chk2基因、p53基因和bcl-2基因m RNA表达的改变。结果 CCK-8结果显示:随DCAN浓度增加LO2细胞存活率降低,DCAN引起LO2细胞的IC_(50)为583.25μmol/L;与对照组比较,500μmo I/L DCAN处理组G1期细胞比例明显减少,G2期细胞比例明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05);500μmo I/L DCAN作用于LO2细胞后上调了p53的表达,下调了bcl-2和chk2的表达,差异有统计学意义(P<0.05),而对chkl的表达没有影响。结论 DCAN可能通过上调p53和下调bcl-2的表达使细胞阻滞于G_2期。 展开更多

关键词 二氯乙腈 细胞周期 P53 BCL-2 lo2细胞

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利用CRISPR/Cas9建立RBBP4低表达的HepG2,LO2稳定细胞系

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作者 杨丽丽 黄常新 +4 位作者 李永强 王聪洁 沈靖 陈艺丹 张嗣玉 《浙江临床医学》 2022年第12期1742-1744,共3页

目的利用CRISPR/Cas9在肝癌细胞HepG2及正常肝组织细胞(LO2)中敲低RBBP4 eGFP报告基因,构建RBBP4低表达的HepG2及LO2稳定细胞系.方法基于CRISPR/Cas9系统原理,设计靶向细胞RBBP4基因第1个外显子的小向导RNA(sgRNA),构建具有左右同源臂和... 目的利用CRISPR/Cas9在肝癌细胞HepG2及正常肝组织细胞(LO2)中敲低RBBP4 eGFP报告基因,构建RBBP4低表达的HepG2及LO2稳定细胞系.方法基于CRISPR/Cas9系统原理,设计靶向细胞RBBP4基因第1个外显子的小向导RNA(sgRNA),构建具有左右同源臂和P2A-eGFP供体质粒的干扰质粒;将测序鉴定正确的重组质粒分别转染至HepG2及LO2细胞中,通过嘌呤霉素筛选细胞系,提取RNA和蛋白,分别通过QPCR和蛋白质印迹分析检测RBBP4敲低对细胞系的影响.结果QPCR及和蛋白质印迹分析结果提示筛选的HepG2及LO2细胞系中RBBP4基因及蛋白表达减低(P<0.05).结论通过CRISPR/Cas9系统成功构建了RBBP4稳定敲低的HepG2及LO2细胞系. 展开更多

关键词 视网膜母细胞瘤结合蛋白4 CRISPR/Cas9 系统HepG2细胞 lo2细胞

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索拉非尼在HepG2与LO2细胞的摄取动力学

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作者 温金华 《中南药学》 CAS 2022年第1期35-38,共4页

目的探讨索拉非尼在肝癌细胞(HepG2)与正常肝细胞(LO2)的摄取动力学特性。方法取正常培养的处于对数期的HepG2与LO2细胞株,加入含索拉非尼系列浓度的培养液,孵育后处理细胞,检测索拉非尼及细胞蛋白浓度,分析摄取动力学参数。结果HepG2与... 目的探讨索拉非尼在肝癌细胞(HepG2)与正常肝细胞(LO2)的摄取动力学特性。方法取正常培养的处于对数期的HepG2与LO2细胞株,加入含索拉非尼系列浓度的培养液,孵育后处理细胞,检测索拉非尼及细胞蛋白浓度,分析摄取动力学参数。结果HepG2与LO2细胞对索拉非尼的摄取随着浓度的增加而趋于饱和,但与LO2细胞相比较,HepG2细胞对索拉非尼的摄取量明显增加。当加入10 mol·L^(-1)的索拉非尼,HepG2与LO2细胞对索拉非尼的摄取随着时间的增加而增加,均在20 min时趋于饱和。HepG2细胞的摄取动力参数V_(max)为(684.14±78.19)pmol·mg protein^(-1)·min^(-1),K_(m)为(93.3±17.56)μmol·L^(-1);LO2细胞的摄取动力参数V_(max)为(335.61±69.73)pmol·mg protein^(-1)·min^(-1),K_(m)为(135.68±29.34)μmol·L^(-1);结果显示HepG2细胞对索拉非尼的摄取速率明显高于LO2细胞。结论索拉非尼在肝癌细胞中摄取量及摄取速率明显高于正常肝细胞,对肝癌细胞具有一定的靶向性。 展开更多

关键词 索拉非尼 HEPG2细胞 lo2细胞 摄取动力学

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河蚬酶解物对乙醇诱导肝细胞LO2损伤的保护作用 被引量：2

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作者 任娇艳 尚帅明 +4 位作者 梁明 张婷 周勇 李海龙 袁尔东 《华南理工大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第12期20-26,共7页

通过测定清除DPPH自由基的活性和氧自由基吸收能力实验评价不同蛋白酶酶解河蚬(Corbicula fluminea)所得酶解物的抗氧化性;运用MTT检测法和检测谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性研究不同乙醇浓度对LO2细胞的影响,并评价河蚬酶解物对乙醇致LO... 通过测定清除DPPH自由基的活性和氧自由基吸收能力实验评价不同蛋白酶酶解河蚬(Corbicula fluminea)所得酶解物的抗氧化性;运用MTT检测法和检测谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性研究不同乙醇浓度对LO2细胞的影响,并评价河蚬酶解物对乙醇致LO2细胞损伤的保护作用;最后对活性高的样品进行了氨基酸分析.结果显示:河蚬酶解物具备一定的抗氧化能力,河蚬酶解物(300~400 mg/L)对LO2细胞的增殖无毒性,且可以抑制乙醇诱导降低LO2细胞存活率的趋势,其中胰酶和复合风味蛋白酶酶解物的保护作用显著优于其他酶解物,同时二者可减缓乙醇导致的LO2细胞ALT和AST的释放,各自含对抗氧化有贡献的氨基酸占其总氨基酸的比例分别是75.69%、75.06%. 展开更多

关键词 河蚬 酶解物 抗氧化活性 乙醇 L02细胞

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铁过载对肝LO2细胞糖代谢关键酶活性的影响

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作者 陶秀娟 刘贺荣 +3 位作者 蔡慧珍 范彦娜 高清菡 杨建军 《重庆医学》 CAS 2022年第18期3079-3082,共4页

目的探讨铁过载对人正常肝LO2细胞的葡萄糖代谢关键酶:葡萄糖激酶(GK)、丙酮酸激酶(PK)活性水平的影响,阐明铁过载对肝细胞氧化应激水平的影响,分析铁过载引起肝细胞糖代谢紊乱的可能机制。方法体外培养人肝LO2细胞株,以不添加枸橼酸铁... 目的探讨铁过载对人正常肝LO2细胞的葡萄糖代谢关键酶:葡萄糖激酶(GK)、丙酮酸激酶(PK)活性水平的影响,阐明铁过载对肝细胞氧化应激水平的影响,分析铁过载引起肝细胞糖代谢紊乱的可能机制。方法体外培养人肝LO2细胞株,以不添加枸橼酸铁铵(FAC)为对照组,以加入不同浓度(7.5、75.0、750.0μmol/L)的FAC作为低、中、高剂量干预组,以FAC(75μmol/L)+去铁胺(DFO,250μmol/L)作为DFO处理组,CCK-8法测定各组LO2细胞活性,ELISA检测GK、PK活性,活性氧(ROS)荧光探针(DCFH-DA)染色检测细胞内ROS水平。结果所有组LO2细胞活性比较,差异无统计学意义(P>0.05)。中、高剂量干预组细胞GK活性低于对照组,高剂量干预组细胞PK活性低于对照组(P<0.05);DFO处理组细胞GK、PK活性高于中剂量干预组,但差异无统计学意义(P>0.05)。高剂量干预组细胞内ROS水平高于对照组(P<0.05)。结论随着FAC干预浓度的增加,LO2细胞内GK、PK活性降低,ROS水平增加。 展开更多

关键词 lo2细胞 铁过载 葡萄糖激酶 丙酮酸激酶 活性氧

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石胆酸诱导的LO2细胞胰岛素抵抗模型及其应用

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作者 吕秋月 项佳媚 +4 位作者 乐亮 姜保平 陈四保 许利嘉 肖培根 《中南药学》 CAS 2019年第3期371-376,共6页

目的利用石胆酸刺激人正常肝细胞(LO2)建立胰岛素抵抗模型,并用于筛选具有改善胰岛素抵抗降血糖活性的化合物。方法用不同浓度石胆酸(LCA)处理LO2细胞不同时间。通过MTT法检测细胞活性,并用不同浓度胰岛素刺激细胞,采用荧光标记2-脱氧... 目的利用石胆酸刺激人正常肝细胞(LO2)建立胰岛素抵抗模型,并用于筛选具有改善胰岛素抵抗降血糖活性的化合物。方法用不同浓度石胆酸(LCA)处理LO2细胞不同时间。通过MTT法检测细胞活性,并用不同浓度胰岛素刺激细胞,采用荧光标记2-脱氧葡萄糖(2-NBDG)作为光学探针检测细胞的葡萄糖摄取能力,明确建立稳定的LO2细胞胰岛素抵抗模型所需LCA的最适浓度及时间。Western blot检测LCA对胰岛素信号通路关键蛋白:磷酸化胰岛素受体底物1(p-IRS1)、胰岛素受体底物1(IRS1)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)和蛋白激酶B(AKT)表达的影响。模型建立后,以二甲双胍为阳性药,对5种黄酮类化合物奥卡宁、异奥卡宁、马里苷、黄诺马苷、紫铆因及1种环烯醚萜类化合物梓醇,进行改善胰岛素抵抗降血糖活性筛选,以2-NBDG荧光标记葡萄糖法评估细胞糖摄取情况,以MTT法评估细胞存活率。结果 LCA作用于LO2细胞可显著降低细胞糖吸收,并产生明显的胰岛素耐受,而25μmol·L^(-1) LCA作用于LO2细胞24 h,模型稳定性最好。与对照组相比,12.5和25μmol·L^(-1) LCA组IRS1的蛋白磷酸化水平显著降低(P <0.05),且12.5和50μmol·L^(-1) LCA能明显减少AKT蛋白的磷酸化水平(P <0.01)。活性筛选发现,奥卡宁、异奥卡宁及紫铆因均能显著提高细胞糖摄取能力,并且其改善细胞胰岛素抵抗降血糖活性显著优于阳性药二甲双胍。结论 LCA可诱导LO2细胞建立稳定、可靠的胰岛素抵抗模型并用于药物筛选。 展开更多

关键词 石胆酸 胰岛素抵抗 2-脫氧葡萄糖 lo2细胞

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LncRNA SRA在游离脂肪酸诱导的LO2细胞脂肪蓄积中的作用

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作者 张爱萍 佘开儒 +1 位作者 袁倩 柯亨记 《热带医学杂志》 CAS 2018年第5期609-612,F0004,共5页

目的通过游离脂肪酸(FFA)刺激LO2细胞来观察肝细胞脂肪蓄积的情况和长非编码RNA类固醇受体RNA激活剂(Lnc RNA SRA)在其中的调控机制。方法体外培养人肝癌细胞系LO2细胞,采用不同浓度的棕榈酸(PA)(0、0.2、0.4、0.8 mmol/L PA)处理细胞... 目的通过游离脂肪酸(FFA)刺激LO2细胞来观察肝细胞脂肪蓄积的情况和长非编码RNA类固醇受体RNA激活剂(Lnc RNA SRA)在其中的调控机制。方法体外培养人肝癌细胞系LO2细胞,采用不同浓度的棕榈酸(PA)(0、0.2、0.4、0.8 mmol/L PA)处理细胞。采用油红O染色检测LO2细胞内脂肪蓄积情况;q PCR和Western blot分别测定细胞内基因和蛋白表达情况。结果 0.2 mmol/L的PA刺激能使LO2细胞发生脂肪蓄积。与对照组比较,PA组LO2细胞Lnc RNA SRA的表达异常升高(P<0.05),脂肪甘油三酯脂酶(ATGL)和叉头框蛋白O1(Fox O1)的表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论游离脂肪酸可以导致LO2细胞脂肪蓄积性损伤,可能是通过Lnc RNA SRA抑制ATGL的表达,进而降低脂质氧化的途径完成的。 展开更多

关键词 游离脂肪酸 lo2细胞 LncRNA SRA ATGL

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