眼镜王蛇毒L-氨基酸氧化酶诱导NACC细胞凋亡作用的研究 被引量：6

1

作者 黄红坤 黎肇炎 +1 位作者 李佳荃 黄爱民 《广西医科大学学报》 CAS 北大核心 2006年第1期22-25,共4页

目的:研究眼镜王蛇毒L-氨基酸氧化酶(LAAO)诱导人类腭部小涎腺腺样囊性癌细胞系(NACC)细胞凋亡的作用。方法:采用倒置相差显微镜、H·E染色及透射电镜定性的方法,观察LAAO引起NACC细胞凋亡形态学改变,采用TUNEL半定量计算凋亡指数(... 目的:研究眼镜王蛇毒L-氨基酸氧化酶(LAAO)诱导人类腭部小涎腺腺样囊性癌细胞系(NACC)细胞凋亡的作用。方法:采用倒置相差显微镜、H·E染色及透射电镜定性的方法,观察LAAO引起NACC细胞凋亡形态学改变,采用TUNEL半定量计算凋亡指数(AI)方法观察NACC细胞经不同浓度LAAO处理后引起细胞凋亡的情况。结果:倒置相差显微镜及H·E染色光镜观察、透射电镜观察可见典型细胞凋亡形态学改变,并可见凋亡小体形成。TUNEL半定量计算AI值,LAAO处理组与对照组比较差异有统计学意义(P<0·01),且AI值高低与LAAO浓度高低有关。结论:眼镜王蛇毒LAAO能诱导NACC细胞发生凋亡。 展开更多

关键词 小涎腺腺样囊性癌 蛇毒 l-氨基酸氧化酶 细胞凋亡

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竹叶青蛇毒L-氨基酸氧化酶的纯化、诱导细胞凋亡和抗菌作用 被引量：6

2

作者 张玉洁 陈克平 +1 位作者 李文辉 张云 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 2006年第1期33-37,共5页

经过分子筛层析和离子交换层析,我们从竹叶青(Trimeresurus stejnegeri)蛇毒中纯化得到了竹叶青蛇毒L-氨基酸氧化酶(TSV-LAO)。实验表明,TSV-LAO是一种糖蛋白,其分子由非共价连接的两个相同的亚基组成,SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳一个亚基... 经过分子筛层析和离子交换层析,我们从竹叶青(Trimeresurus stejnegeri)蛇毒中纯化得到了竹叶青蛇毒L-氨基酸氧化酶(TSV-LAO)。实验表明,TSV-LAO是一种糖蛋白,其分子由非共价连接的两个相同的亚基组成,SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳一个亚基的表观分子量为58 kDa。TSV-LAO酶比活力为1100 U/mg,其分子脱掉糖基化成分后不影响酶活力。TSV-LAO在浓度为1.0μg/mL以上时可以诱导C8166细胞凋亡。TSV-LAO对实验病原微生物具有选择性抗生作用并具有明显的量效关系,对白色念珠菌(ATCC2002)、金黄色葡萄球菌(ATCC2592)和短小芽孢杆菌(CMCCB11207)的最小抑菌浓度分别是0.3,0.4和1.0μg/mL,即使在最高实验浓度10μg/mL,TSV-LAO对其它实验菌株也未显示抑菌作用。 展开更多

关键词 蛇毒 l-氨基酸氧化酶 纯化 生化性质 细胞凋亡 抗生作用

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白眉蝮蛇蛇毒中L-氨基酸氧化酶的分离及其诱导急性肺损伤的作用 被引量：5

3

作者 魏晓龙 魏继福 +3 位作者 黄阗 陈秋玉 刘岳宁 何韶衡 《第四军医大学学报》 北大核心 2006年第22期2096-2099,共4页

目的:从白眉蝮蛇蛇毒分离纯化L-氨基酸氧化酶,并研究其对肺组织的影响.方法:通过Heparin-Sepharose FF及Q-Sepharose HP从白眉蝮蛇蛇毒中分离纯化得到一个L-氨基酸氧化酶,命名为ABU-LAO.给Balb/c小鼠静脉注射50,5,0.5μg药物或生理盐水... 目的:从白眉蝮蛇蛇毒分离纯化L-氨基酸氧化酶,并研究其对肺组织的影响.方法:通过Heparin-Sepharose FF及Q-Sepharose HP从白眉蝮蛇蛇毒中分离纯化得到一个L-氨基酸氧化酶,命名为ABU-LAO.给Balb/c小鼠静脉注射50,5,0.5μg药物或生理盐水100μL,每组6只,6 h或24 h后取材,肺组织常规切片,HE染色.高倍镜视野下计算平均红细胞数(RBCs)、平均肺泡内多形核白细胞数(IAPLs)、平均肺泡隔多形核白细胞数(ASPLs);用图像分析仪测平均肺泡面积(MACA).结果:纯化ABU-LAO并在SDS-PAGE上测定其表观M r约为60000.与生理盐水组相比RBCs,IAPLs,ASPLs,MACA在注射ABU-LAO后有显著改变(P<0.0125).结论:通过两步层析法分离纯化得到ABU-LAO,它能诱导小鼠发生严重的急性肺损伤. 展开更多

关键词 l-氨基酸氧化酶 白眉蝮蛇 急性病 肺/损伤 小鼠 近交BAlBC

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眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶分离纯化及对血管内皮细胞的抑制作用 被引量：7

4

作者 陈洲 黄剑钧 +2 位作者 薛玲 许云禄 林丽珊 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1024-1028,共5页

目的从眼镜蛇毒中分离纯化L-氨基酸氧化酶(L-a-mino acid oxidase of Naja atra venom,NAV-LAAO),观察其对血管内皮细胞是否有抑制作用。方法应用阳离子交换层析和亲和层析方法分离纯化NAV-LAAO;采用MTT法、Western blot测定caspase及... 目的从眼镜蛇毒中分离纯化L-氨基酸氧化酶(L-a-mino acid oxidase of Naja atra venom,NAV-LAAO),观察其对血管内皮细胞是否有抑制作用。方法应用阳离子交换层析和亲和层析方法分离纯化NAV-LAAO;采用MTT法、Western blot测定caspase及细胞小管形成实验观察NAV-LAAO对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)生长和血管生成的影响。结果眼镜蛇毒粗毒经两步层析法得到的LAAO,分子量约为58 ku。NAV-LAAO抑制HUVEC细胞的生长和细胞小管形成,其抑制细胞生长的IC50为21.42 mg.L-1。与对照组相比,LAAO组caspase-3、caspase-8升高。结论应用两步层析法从眼镜蛇毒中分离出的NAV-LAAO具有剂量依赖性的抑制HUVEC细胞的生长和影响细胞小管形成的作用。 展开更多

关键词 眼镜蛇毒 l氨-基酸氧化酶 分离纯化 血管内皮细胞 内皮/细胞小管形成 亲和层析

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马氏珠母贝L-氨基酸氧化酶基因克隆及表达分析

5

作者 罗贝 林海生 +4 位作者 王庆恒 秦小明 曹文红 高加龙 郑惠娜 《上海海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期1074-1083,共10页

L-氨基酸氧化酶(LAAO)是一种广泛存在于自然界中的免疫蛋白酶,为探究马氏珠母贝LAAO(Pinctada fucata martensii LAAO,PmLAAO)基因序列的特征及其在副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,Vp)刺激后的表达变化,克隆得到了PmLAAO的cDNA全... L-氨基酸氧化酶(LAAO)是一种广泛存在于自然界中的免疫蛋白酶,为探究马氏珠母贝LAAO(Pinctada fucata martensii LAAO,PmLAAO)基因序列的特征及其在副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,Vp)刺激后的表达变化,克隆得到了PmLAAO的cDNA全长,其开放阅读框(ORF)长度为1767 bp,共编码588个氨基酸,具有FAD结合域和氨基酸氧化酶的结构域,是氨基酸氧化酶家族的一员。多序列比对结果和系统发育树显示,PmLAAO与双壳类动物的亲缘关系较近,其中,与加州贻贝的相似度最高。qRT-PCR结果显示PmLAAO在鳃、外套膜、闭壳肌、性腺、消化腺中均有表达,在鳃组织中表达水平最高;在Vp刺激后,PmLAAO在鳃组织中的表达水平显著升高,受刺激后48 h表达量最高。研究结果为新型免疫蛋白酶LAAO在双壳贝类中的功能活性提供了参考。 展开更多

关键词 马氏珠母贝 l-氨基酸氧化酶 基因克隆 实时荧光定量PCR

原文传递

眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶诱导人胃癌细胞MGC-803细胞凋亡的实验研究 被引量：4

6

作者 齐元麟 张明芳 +1 位作者 赵蓉 林建银 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2012年第2期121-125,共5页

目的:研究眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶(NA-LAAO)对人胃癌细胞MGC-803的细胞毒性、诱导凋亡作用及可能机制。方法:采用CCK-8法测定细胞毒性;采用DNA倍体分析和An-nexin V/碘化丙啶染色测定细胞凋亡;采用发色底物法测定Caspase-3酶活性;采用We... 目的:研究眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶(NA-LAAO)对人胃癌细胞MGC-803的细胞毒性、诱导凋亡作用及可能机制。方法:采用CCK-8法测定细胞毒性;采用DNA倍体分析和An-nexin V/碘化丙啶染色测定细胞凋亡;采用发色底物法测定Caspase-3酶活性;采用Western-blot方法测定聚二磷酸腺苷核糖多聚酸-1(PARP-1)切割。结果:NA-LAAO可抑制MGC-803细胞增殖,6、12、24h的IC50分别为(2.48±0.41)、(1.74±0.27)和(0.83±0.19)mg/L;NA-LAAO可使细胞DNA分布出现亚二倍体凋亡峰,并可促使细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻;NA-LAAO可激活Caspase-3并可促使其底物PARP-1降解。结论:NA-LAAO可能通过激活Caspase-3这一分子机制而诱导细胞凋亡,从而抑制肿瘤细胞增殖。 展开更多

关键词 蛇毒 中华眼镜蛇 l-氨基酸氧化酶 细胞增殖 细胞凋亡

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蛇毒L-氨基酸氧化酶的生物学作用 被引量：4

7

作者 郭春梅 刘淑清 孙明忠 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2012年第B12期205-212,共8页

蛇毒(snake venom,SV)是天然的最丰富的蛋白(酶)源之一,而L-氨基酸氧化酶(L-amino acid oxidase,LAAO)是SV的主要蛋白(酶)组成成份,也是SV重要的活性和毒性蛋白成份,其生物学活性多样。近年来的研究表明,SV-LAAOs具有明显的影响血小板... 蛇毒(snake venom,SV)是天然的最丰富的蛋白(酶)源之一,而L-氨基酸氧化酶(L-amino acid oxidase,LAAO)是SV的主要蛋白(酶)组成成份,也是SV重要的活性和毒性蛋白成份,其生物学活性多样。近年来的研究表明,SV-LAAOs具有明显的影响血小板聚集、诱导细胞凋亡、细胞毒性、抑菌活性及抗病毒/HIV活性等生物功能。本文简述了SV-LAAO的酶学和结构特性,综述了SV-LAAO以上生物学作用及其相关作用机制,以期为今后深入研究SV-LAAO提供参考。 展开更多

关键词 蛇毒 l-氨基酸氧化酶 生物学活性

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眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶对人膀胱癌ECV304细胞增殖和细胞周期的影响及机制 被引量：4

8

作者 齐元麟 张明芳 +3 位作者 赵蓉 张旭 吴玲珊 林建银 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1660-1665,共6页

目的研究眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶(Naja atra L-a-mino acid oxidase,NA-LAAO)对人膀胱癌细胞株ECV304的生长抑制作用,探讨其作用机制。方法 CCK-8法测定NA-LAAO的细胞毒性及对细胞增殖抑制能力;流式细胞术分析NA-LAAO对ECV304细胞周期... 目的研究眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶(Naja atra L-a-mino acid oxidase,NA-LAAO)对人膀胱癌细胞株ECV304的生长抑制作用,探讨其作用机制。方法 CCK-8法测定NA-LAAO的细胞毒性及对细胞增殖抑制能力;流式细胞术分析NA-LAAO对ECV304细胞周期的影响;实时定量PCR和Western blot分析细胞周期相关基因mRNA和蛋白质表达。结果 NA-LAAO对ECV304细胞有强烈抑制作用,且呈剂量-效应和时间-效应关系。NA-LAAO处理6、12、24 h对ECV304的IC50分别为(1.54±0.23)、(1.09±0.15)和(0.48±0.14)mg.L-1;细胞生长曲线显示,0.156 mg.L-1的NA-LAAO作用4 d可明显抑制ECV304细胞增殖;0.313 mg.L-1从d 2起就有明显效果;0.625 mg.L-1处理后细胞多数死亡;流式细胞术分析提示NA-LAAO可使ECV304细胞阻滞在G1期,并呈量效关系;实时定量PCR结果显示,NA-LAAO可下调Cyclin A2、B1、D1、E1、CDK2、CDK6、Survivin、Skp2,上调p21、p16、p27的表达,Western blot结果显示NA-LAAO可下调Cyclin A、CDK2、CDK6,上调p21,与实时PCR结果一致。结论 NA-LAAO可通过调节细胞周期相关分子,使ECV304细胞阻滞在G1期,抑制细胞增殖。 展开更多

关键词 蛇毒 中华眼镜蛇 l-氨基酸氧化酶 细胞增殖 细胞周期 膀胱癌

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几种蛇毒抑菌作用的比较 被引量：3

9

作者 张景海 王起振 姜雯 《蛇志》 1994年第1期23-28,共6页

本文通过平板扩散实验观察了蛇岛蝮蛇毒、长白山白眉蝮蛇毒、江浙蝮蛇毒及中华眼镜蛇毒对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的抑菌作用。结果表明四种蛇毒对试验菌株均有不同程度的抑菌作用；其中白眉蝮蛇毒对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为... 本文通过平板扩散实验观察了蛇岛蝮蛇毒、长白山白眉蝮蛇毒、江浙蝮蛇毒及中华眼镜蛇毒对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的抑菌作用。结果表明四种蛇毒对试验菌株均有不同程度的抑菌作用；其中白眉蝮蛇毒对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为０．６３ｍｇ／ｍｌ，对大肠杆菌为５．０ｍｇ／ｍｌ。抑菌作用与蛇毒中Ｌ—氨基酸氧化酶的活力有相关性。利用ＣＭ—ＳｅｐｈａｄｅｘＣ－２５ＳｅｐｈｄｅｘＧ—７５一对江浙蝮蛇毒的抑菌成份进行初步的柱层析分离，从纯化的各组份看，Ｌ—氨基酸氧化酶活力高的其抑菌活性也高。 展开更多

关键词 江浙蝮蛇毒 抑菌作用 药理 蛇毒类

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麦洼牦牛初乳期乳腺中2个特异表达EST片段的克隆与分析 被引量：3

10

作者 江明锋 刘勇涛 +3 位作者 李生伟 陈艳 叶煜辉 陈敏 《畜牧与兽医》 北大核心 2009年第5期37-42,共6页

为研究牦牛初乳期乳腺特异表达的基因,采用抑制消减杂交和斑点杂交法对麦洼牦牛初乳期(产犊后2 d)和常乳期(产犊后18 d)特异表达的基因进行了分离鉴定。结果发现2个在初乳期间特异表达的EST片段,并命名为LAO和COL1α1。测序结果LAO片段... 为研究牦牛初乳期乳腺特异表达的基因,采用抑制消减杂交和斑点杂交法对麦洼牦牛初乳期(产犊后2 d)和常乳期(产犊后18 d)特异表达的基因进行了分离鉴定。结果发现2个在初乳期间特异表达的EST片段,并命名为LAO和COL1α1。测序结果LAO片段长698 bp,GenBank比对,其核苷酸序列与西藏黄牛(Bos taurus)、小家鼠(Mus musculus)、家犬(Canis familiaris)等的L-氨基酸氧化酶基因有较高的序列相似性,其序列一致性分别达到96%、73%、72%;COL1α1片段长337 bp,比对结果,其序列与Bos taurus、马鹿(Cervus elaphus)、家犬(Canis lupus fa-miliaris)等的Ⅰ型胶原蛋白α1有较高的序列相似性,其序列一致性分别为100%、100%、99%。2个序列与牛基因组的Blast分析表明,LAO片段定位于3号染色体LOC782545区,该区域编码1个L-氨基酸氧化酶基因;另一片段定位于19号染色体LOC615867区,该区域编码1个Ⅰ型胶原α1基因。研究表明,L-氨基酸氧化酶基因和Ⅰ型胶原蛋白α1基因是牦牛初乳期乳腺特异表达蛋白,这2个基因在牦牛初乳期乳腺组织中较高的表达水平可能与初乳期乳腺特殊的生理状态有关。 展开更多

关键词 麦洼牦牛 乳腺组织 l-氨基酸氧化酶 Ⅰ型胶原蛋白α1 抑制性削减杂交

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眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶的纯化、性质鉴定及细胞毒性测定 被引量：3

11

作者 张明芳 齐元麟 《海峡药学》 2009年第12期217-220,共4页

目的从眼镜蛇蛇毒中分离L-氨基酸氧化酶(LAAO),测定其理化性质及细胞毒性。方法采用Superdex75凝胶层析、Phenyl-SepharoseFF疏水层析、ResourceS离子交换层析分离纯化LAAO;SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及C18反相色谱鉴定纯度并测定相对分子... 目的从眼镜蛇蛇毒中分离L-氨基酸氧化酶(LAAO),测定其理化性质及细胞毒性。方法采用Superdex75凝胶层析、Phenyl-SepharoseFF疏水层析、ResourceS离子交换层析分离纯化LAAO;SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及C18反相色谱鉴定纯度并测定相对分子量;CCK8法测定细胞毒性。结果舟山眼镜蛇蛇毒经凝胶层析、疏水层析、离子交换层析及C18反相色谱后获得LAAO(暂定名NA-LAAO),在非还原和还原条件下相对分子质量均为58kD左右;具有明显的抑制人胃癌MGC-803细胞增殖作用。结论从眼镜蛇毒中纯化得到LAAO,其具有明显的细胞毒性。 展开更多

关键词 眼镜蛇毒 l-氨基酸氧化酶 纯化 细胞毒性

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出血性蛇毒诱导血管内皮细胞凋亡的成分及作用机制研究进展 被引量：3

12

作者 赵启韬 解琨 +1 位作者 张捷 苗俊英 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2004年第5期708-712,共5页

出血性蛇毒能专一性诱导血管内皮细胞 (vascularendothelialcells ,VEC)凋亡 ,研究人员已从中分离出 5种VEC凋亡诱导成份 ,其中 2种为L aa氧化酶类 ,3种属于金属蛋白酶 解整联蛋白家族。研究证实前者可通过氧化VEC细胞膜上的L leu产生H... 出血性蛇毒能专一性诱导血管内皮细胞 (vascularendothelialcells ,VEC)凋亡 ,研究人员已从中分离出 5种VEC凋亡诱导成份 ,其中 2种为L aa氧化酶类 ,3种属于金属蛋白酶 解整联蛋白家族。研究证实前者可通过氧化VEC细胞膜上的L leu产生H2 O2 而诱导其凋亡 ,后者则通过干扰膜整联蛋白与其配体的结合而使VEC凋亡。在由蛇毒诱导的VEC凋亡过程中 ,p5 3和bcl 2基因表达增加 ,且bcl 2的mRNA被剪辑成 2条。已证实锚定依赖性信号分子αvβ3和磷脂信号分子PC PLC参与该过程的信号转导。对该领域进一步研究 ,有望从蛇毒中纯化出或人工构建出专一地诱导肿瘤血管细胞凋亡的成分。本文总结了出血性蛇毒方面的研究进展。 展开更多

关键词 蛇毒 血管内皮细胞 细胞凋亡 解整联蛋白 l—aa氧化酶

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蛇毒L-氨基酸氧化酶的研究进展 被引量：2

13

作者 黄剑钧（综述） 许云禄（审校） 《世界肿瘤杂志》 2009年第2期91-95,共5页

L-氨基酸氧化酶（LAAO）作为蛇毒中的一个重要成分，有着多样的生物学活性，近年来许多文献报道LAAO的生化作用和药理作用，提供了许多关于其对血小板活性、诱导细胞凋亡、细胞毒性、抗菌等方面的资料，本文就蛇毒L-氨基酸氧化酶（SV-L... L-氨基酸氧化酶（LAAO）作为蛇毒中的一个重要成分，有着多样的生物学活性，近年来许多文献报道LAAO的生化作用和药理作用，提供了许多关于其对血小板活性、诱导细胞凋亡、细胞毒性、抗菌等方面的资料，本文就蛇毒L-氨基酸氧化酶（SV-LAAO）的理化性质、生物学特性及其可能的抗肿瘤作用及作用机制作一综述。 展开更多

关键词 蛇毒 l-氨基酸氧化酶 理化性质 生物学活性 抗肿瘤 抗菌作用

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L-氨基酸氧化酶的诱导表达及生物催化合成5-氨基戊酸的研究 被引量：1

14

作者 马金莲 应晗笑 +3 位作者 王璟 曹伟佳 吴昊 陈可泉 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期153-158,共6页

L-氨基酸氧化酶可以催化L-氨基酸生成酮酸等化学品,具有重要的应用前景。本研究成功将来源于红球菌(Rhodococcus opacus)的氨基酸氧化酶在大肠杆菌中表达,并首次用于生物催化合成5-氨基戊酸。结果表明:L-氨基酸氧化酶诱导表达最适温度... L-氨基酸氧化酶可以催化L-氨基酸生成酮酸等化学品,具有重要的应用前景。本研究成功将来源于红球菌(Rhodococcus opacus)的氨基酸氧化酶在大肠杆菌中表达,并首次用于生物催化合成5-氨基戊酸。结果表明:L-氨基酸氧化酶诱导表达最适温度为25℃,最适诱导剂浓度0.5 mmol/L,最适诱导时间为7 h,诱导时最佳细胞量为0.246 g/L。催化合成5-氨基戊酸时,最适底物L-赖氨酸(Lys)浓度17 mmol/L,最适p H为7.0,最适温度为37℃,最适时间为24 h,最适补加0.5%H_2O_2,添加酶与黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)的最适摩尔比为1∶1,最终5-氨基戊酸产量达到16.71 mmol/L。本研究成功的实现了单酶(LAAO)合成5-氨基戊酸,为简便生物合成5-氨基戊酸奠定基础。 展开更多

关键词 l-氨基酸氧化酶 诱导表达 酶催化 5-氨基戊酸

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广西眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶的分离纯化及体外抗血小板聚集作用 被引量：1

15

作者 王辉 张文宇 +1 位作者 李玉媚 欧和生 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期1294-1297,共4页

目的从广西眼镜蛇粗毒中分离纯化L-氨基酸氧化酶(L-amino acid oxidase,LAAO),并对其物理、生化性质及体外抗血小板聚集作用进行研究。方法用Sephacryls-200凝胶过滤,DEAE-Sepharose CL-6B离子交换,CM-SepharoseCL-6B离子交换层析法分... 目的从广西眼镜蛇粗毒中分离纯化L-氨基酸氧化酶(L-amino acid oxidase,LAAO),并对其物理、生化性质及体外抗血小板聚集作用进行研究。方法用Sephacryls-200凝胶过滤,DEAE-Sepharose CL-6B离子交换,CM-SepharoseCL-6B离子交换层析法分离纯化广西眼镜蛇毒中的LAAO,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳在还原与非还原条件下测定其蛋白分子量,等电聚焦法测定等电点,比浊法测定广西眼镜蛇LAAO对二磷酸腺苷、胶原、凝血酶、花生四烯酸引起的血小板聚集率的影响。结果从广西眼镜蛇毒中分离出的LAAO分子量约为55.2 KD,等电点为7.6;生物活性检测发现,该蛋白不具有磷脂酶A2和精氨酸酯酶活性,无纤溶及出血活性,能明显抑制二磷酸腺苷、胶原、凝血酶、花生四烯酸引起的血小板聚集,并呈明显的正相关。结论分离纯化的广西眼镜蛇毒LAAO为电泳纯,并具有较强的抑制体外血小板聚集作用。 展开更多

关键词 蛇毒 l-氨基酸氧化酶 分离纯化 血小板聚集

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中介蝮蛇毒L-氨基酸氧化酶基因的生物信息学分析 被引量：1

16

作者 张翠 郭积芳 +2 位作者 孙悦 王芳霞 杨章民 《陕西师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期71-75,共5页

采用生物信息学方法,对中介蝮蛇毒L-氨基酸氧化酶（GI-LAO）基因进行了分析。结果表明：GI-LAO基因所包含的开放阅读框为1 515bp,编码504个氨基酸残基;GI-LAO一级结构与白眉蝮GH-LAO的相似性最高,达99%;N-端的18个氨基酸残基为信号肽,... 采用生物信息学方法,对中介蝮蛇毒L-氨基酸氧化酶（GI-LAO）基因进行了分析。结果表明：GI-LAO基因所包含的开放阅读框为1 515bp,编码504个氨基酸残基;GI-LAO一级结构与白眉蝮GH-LAO的相似性最高,达99%;N-端的18个氨基酸残基为信号肽,成熟肽含486个氨基酸残基,相对分子质量为55.1kDa,理论等电点为6.55;该蛋白含有两个结构域：FAD结合域（56-123位氨基酸残基）和催化结构域（61~499位氨基酸残基）;与白眉蝮GH-LAO序列比对发现,有4个氨基酸位点存在差异（分别是20、56、99和467位氨基酸残基）,用SIFT软件分析表明,这四个位点对其功能无影响;该基因编码的氨基酸序列有2个活性位点（H242和R343）,2个N-糖基化位点（N190和N379）,5个位点（R108、H241、Y390、G482和W483）与底物结合有关,4个保守半胱氨酸残基形成两对二硫键（C28—C191和C349—C430）;三维结构建模结果表明,GI-LAO形成同源二聚体,每个单体由22个α-螺旋,22个β-折叠股和一些无规则卷曲、转角等形成三个结构域：FAD结合域,底物结合域以及α-螺旋域;在GI-LAO蛋白的进化分析中,中介蝮GI-LAO与白眉蝮GHLAO的亲缘关系最近。 展开更多

关键词 中介蝮 l-氨基酸氧化酶 基因 生物信息学

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斜带石斑鱼L-氨基酸氧化酶基因克隆及表达分析 被引量：1

17

作者 杜贾贾 江飚 +1 位作者 唐嘉嘉 李安兴 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期303-309,共7页

鱼类的L-氨基酸氧化酶(L-amino acid oxidase,LAAO)具有广泛的抑菌杀虫效果,为了解斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)LAAO基因序列特征及其在刺激隐核虫(Cryptocaryon irritans)感染后的表达变化,该试验克隆得到2个石斑鱼LAAO基因:EcLAA... 鱼类的L-氨基酸氧化酶(L-amino acid oxidase,LAAO)具有广泛的抑菌杀虫效果,为了解斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)LAAO基因序列特征及其在刺激隐核虫(Cryptocaryon irritans)感染后的表达变化,该试验克隆得到2个石斑鱼LAAO基因:EcLAAO-1和EcLAAO-2,它们的ORF长度分别为1536和1569 bp,编码511和522个氨基酸,均含有氨基酸氧化酶(Amino_oxidase)结构域以及LAAO保守序列:DBM和GG motif。多重序列比对显示石斑鱼LAAO与其他鱼类LAAO具有较高的相似性。系统进化树分析表明,斜带石斑鱼的LAAO与硬骨鱼类亲缘关系较近。实时荧光定量PCR检测结果显示EcLAAO-1和EcLAAO-2在石斑鱼各组织均有表达,其中皮肤、鳃、胸腺、肝脏和肌肉中含量较丰富;在感染刺激隐核虫后,鳃和脾脏EcLAAO-1,EcLAAO-2表达量显著升高(P<0.05),这些结果暗示了石斑鱼LAAO参与先天性免疫,并在抗御刺激隐核虫感染中发挥重要作用。 展开更多

关键词 斜带石斑鱼 l氨基酸氧化酶 刺激隐核虫 基因克隆 表达模式

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蛇毒抗菌的比较性研究 被引量：1

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作者 李妲 孙明忠 +2 位作者 郭春梅 彭博雅 刘淑清 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2013年第6期639-642,共4页

目的研究蛇毒粗毒的抗菌作用,并比较不同蛇毒对不同细菌的抑制效果。方法采用抑菌环法测定蛇岛蝮、江浙蝮和短尾蝮蛇毒粗毒对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌以及白色念珠菌的抗菌作用,比较不同蛇毒粗毒的抗菌... 目的研究蛇毒粗毒的抗菌作用,并比较不同蛇毒对不同细菌的抑制效果。方法采用抑菌环法测定蛇岛蝮、江浙蝮和短尾蝮蛇毒粗毒对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌以及白色念珠菌的抗菌作用,比较不同蛇毒粗毒的抗菌效果;加入过氧化氢酶(catalase),考察蛇毒抗菌作用的变化。结果 (1)3种蛇毒粗毒对5种细菌均呈现不同程度的抑制作用。(2)3种蛇毒粗毒对5种细菌的抑制作用大小依次为:金黄色葡萄球菌>白色念珠菌>大肠埃希菌或铜绿假单胞菌>枯草芽孢杆菌。(3)加入catalase后,蛇毒的抗菌作用明显减弱。结论 (1)3种蛇毒粗毒均具有一定的抗菌作用,并具有明显抑菌选择性。(2)3种蛇毒的抗菌效果不同,蛇岛蝮蛇抗菌作用最强。(3)catalase能显著降低蛇毒的抗菌活性,表明L-氨基酸氧化酶是蛇毒起抗菌作用的主要成分。 展开更多

关键词 蛇毒粗毒 抗菌 l-氨基酸氧化酶 过氧化氢酶

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酶标抗原火箭免疫电泳法及其在蛇毒抗原成分含量测定中的应用 被引量：1

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作者 廖共山 林柏溪 黄湘萍 《蛇志》 1993年第2期10-14,共5页

为解决目前蛇毒成份检测困难以及寻找一种可用于蛇伤快速鉴别诊断的方法,本研究建立了酶标抗原火箭免疫电泳法。本法结合了酶标法灵敏度高和火箭电泳操作简单的特点,对待测的同种抗原标记辣根过氧化物酶(酶标抗原),检测时把微量的酶标... 为解决目前蛇毒成份检测困难以及寻找一种可用于蛇伤快速鉴别诊断的方法,本研究建立了酶标抗原火箭免疫电泳法。本法结合了酶标法灵敏度高和火箭电泳操作简单的特点,对待测的同种抗原标记辣根过氧化物酶(酶标抗原),检测时把微量的酶标记抗原掺入被测样品中,在含多价抗血清的免疫电泳板进行电泳。最后用辣根过氧化物底物3.3′-二氨基联苯胺在板上直接显色,显色后观察到的免疫沉淀线高度与被测抗原含量呈正相关(r=+0.98)。采用本方法检测眼镜蛇毒细胞毒素和限镜王蛇毒 L-氨基酶氧化酶,细胞毒素的最低检测浓度为110ng/ml,氨基酸氧化酶为60ng/ml。比单向火箭免疫电泳法灵敏度高30倍。用同一原理的酶标记抗原融合电泳法监测L-氨基酸氧化酶的层析分离时,比酶活性法检测灵敏度高20倍。全部检测只需30分钟。初步观察商品眼镜蛇毒抗血清可对蛇毒15种成分产生免疫沉淀线,眼镜蛇的细胞毒与同科异科蛇毒的细胞毒素无交叉免疫反应。因此,采用本法可以确定不同蛇种蛇毒中所含的特异性抗原,获得蛇伤鉴别诊断的依据。 展开更多

关键词 免疫电泳 蛇毒 抗原 测定

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竹叶青蛇毒L-氨基酸氧化酶的表达载体的构建及重组蛋白抗肿瘤的研究 被引量：1

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作者 何光志 田维毅 +4 位作者 王安宇 王平 曹峰 黄高 王文佳 《湖南师范大学自然科学学报》 CAS 北大核心 2012年第4期59-63,85,共6页

将经BamHⅠ和HindⅢ酶切的pMD18-T-LAAO和Pet28a(+)质粒的纯化回收产物进行连接,将产物Pet28a(+)-LAAO表达载体转化BL21(DE3)进行诱导表达,表达产物经Western-blot分析表明,重组蛋白能被兔抗竹叶青蛇毒L-氨基酸氧化酶(LAAO)阳性血清所识... 将经BamHⅠ和HindⅢ酶切的pMD18-T-LAAO和Pet28a(+)质粒的纯化回收产物进行连接,将产物Pet28a(+)-LAAO表达载体转化BL21(DE3)进行诱导表达,表达产物经Western-blot分析表明,重组蛋白能被兔抗竹叶青蛇毒L-氨基酸氧化酶(LAAO)阳性血清所识别.将鼻咽癌CNE-2Z、人宫颈癌LYA01021和卵巢癌A2780MSC细胞悬液接种小鼠建立小鼠实体瘤模型,分别用不同浓度重组蛋白接种荷瘤小鼠,根据瘤重和小鼠存活时间计算抑瘤率和对荷瘤小鼠生命延长率.结果表明:重组蛋白对低、中和高剂量组荷瘤小鼠抑瘤率和生命延长率与阴性对照组均存在极显著差异(P<0.01).本研究为开发利用竹叶青蛇毒L-氨基酸氧化酶提供依据,为进一步研制新型的抗肿瘤药物打基础. 展开更多

关键词 lAAO 表达载体 构建 重组蛋白 抗肿瘤

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