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人前脑啡肽原基因修饰的永生化大鼠星形胶质细胞株的构建 被引量:8
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作者 安珂 田玉科 +2 位作者 杨辉 高峰 王鹏 《中国疼痛医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期167-170,共4页
目的构建人前脑啡肽原(hPPE)基因修饰的永生化大鼠星形胶质细胞株。方法采用DNA重组技术将质粒pCMVhPPE.SEQ中的人前脑啡肽原基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)上,经酶切鉴定和测序分析后,采用脂质体介导法将重组质粒pcDNA3.1(+)hPPE... 目的构建人前脑啡肽原(hPPE)基因修饰的永生化大鼠星形胶质细胞株。方法采用DNA重组技术将质粒pCMVhPPE.SEQ中的人前脑啡肽原基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)上,经酶切鉴定和测序分析后,采用脂质体介导法将重组质粒pcDNA3.1(+)hPPE和空质粒pcDNA3.1(+)分别转染永生化大鼠星形胶质细胞株(IAST)。经G418(600μg/ml)筛选,挑选阳性克隆并扩大培养。采用免疫细胞化学法、RTPCR和放射免疫法检测转染细胞亮氨酸脑啡肽(LEK)的表达及分泌,同时检测Neo基因的存在以证实转染成功。结果重组质粒经酶切后分别出现5.4kb和950bb片段,测序分析与文献报道结果一致,表明重组质粒pcDNA3.1(+)hPPE亚克隆成功。Neo基因检测显示重组质粒和空质粒已成功转染至IAST中,筛选获得IAST/hPPE和IAST/Neo两个细胞株,LEK免疫染色均阳性,但平均光密度结果显示IAST/hPPE的LEK表达明显强于IAST/Neo和IAST(P<0.01)。IAST/hPPE细胞与IAST/Neo和IAST细胞相比,hPPEmRNA表达水平和培养上清液中LEK的分泌量明显增高(P<0.01),而IAST与IAST/Neo细胞相比无显著性差异(P>0.05)。结论成功构建了人前脑啡肽原基因修饰的永生化大鼠星形胶质细胞株(IAST/hPPE),为该细胞移植用于镇痛的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 前脑啡肽原 星形胶质 基因修饰 细胞株 永生化 大鼠 pcDNA3.1(%PlUS%) DNA重组技术 免疫细胞化学法 重组质粒 真核表达载体 脂质体介导法 亮氨酸脑啡肽 RT-PCR l-ek mRNA表达 免疫法检测 Neo基因 平均光密度 培养上清液 显著性差异
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APA-BCC镇痛微囊在癌痛患者脑脊液中的生物学变化 被引量:6
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作者 罗芸 李雁凌 +3 位作者 薛毅珑 郭水龙 高宇红 崔忻 《标记免疫分析与临床》 CAS 2005年第2期97-99,共3页
了解海藻酸钙多聚赖氨酸海藻酸钙微囊化牛肾上腺嗜铬细胞(APABCC微囊)植入癌痛患者脑脊液中的形态、活率及亮氨酸脑啡肽(LEK)分泌的变化。将APABCC微囊按常规腰穿方法植入癌痛患者蛛网膜下腔。7或8天时采取脑脊液,观察APABCC的形态、细... 了解海藻酸钙多聚赖氨酸海藻酸钙微囊化牛肾上腺嗜铬细胞(APABCC微囊)植入癌痛患者脑脊液中的形态、活率及亮氨酸脑啡肽(LEK)分泌的变化。将APABCC微囊按常规腰穿方法植入癌痛患者蛛网膜下腔。7或8天时采取脑脊液,观察APABCC的形态、细胞活率,用放射免疫法测定脑脊液中LEK的含量。移植7天后,患者视觉模拟疼痛评分(VAS)均值由移植前的8.8降为2.4;脑脊液中APABCC微囊形态无明显变化;细胞活率由平均91.2%降为89.1%;LEK含量较移植前增加了1.65倍。将APABCC微囊植入癌痛病人脑脊液中能够保持细胞存活、分泌亮啡肽,并产生镇痛效应。 展开更多
关键词 微囊化细胞 移植手术 细胞活率 亮氨酸脑啡肽 脑脊液 APA-BCC 镇痛微囊 癌痛 脑脊液 生物学
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卵泡发育不良促排卵后血浆中SS,β-EP和L-EK的变化
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作者 戴良图 李光明 +2 位作者 翁婉波 曾敏华 白迎堂 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第12期1174-1174,1180,1183,共3页
关键词 卵泡发育不良 血浆 生长抑素 Β-内啡肽 l-ek
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一种测定亮氨酸脑啡肽(L-EK)药物的新型荧光衍生化方法
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作者 夏宇沁 陆烨 +1 位作者 刘家池 梁建英 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期301-304,共4页
目的建立一种新型的氧化还原柱前衍生化荧光检测高效液相色谱法测定亮氨酸脑啡肽(leu-enkephalin,L-EK)药物。方法将肽类药物L-EK与0.012mol/L高碘酸钠、0.01mol/L儿茶酚、0.3mol/L硼酸按体积比2∶2∶1∶1混合,于120℃反应10min后,用反... 目的建立一种新型的氧化还原柱前衍生化荧光检测高效液相色谱法测定亮氨酸脑啡肽(leu-enkephalin,L-EK)药物。方法将肽类药物L-EK与0.012mol/L高碘酸钠、0.01mol/L儿茶酚、0.3mol/L硼酸按体积比2∶2∶1∶1混合,于120℃反应10min后,用反相柱分离,以0.25mol/L硼酸盐缓冲液(pH 7.6)和甲醇为流动相,采用梯度洗脱,荧光检测器检测。同时与高效液相色谱紫外法、邻苯二甲醛(O-phthalaldehyde,OPA)柱前衍生荧光检测高效液相色谱法比较,测定体外及血样中L-EK的含量。结果氧化还原柱前衍生化荧光检测高效液相色谱法检测含L-EK血样,线性范围0.5~50.0mg/L,线性良好(r=0.999 8),血浆中检测限为0.1mg/L,且较另外两种方法不受内源性物质的干扰。结论新型的氧化还原柱前衍生化荧光检测高效液相色谱法专属性好,灵敏度高,尤其适合生物样品中L-EK药物的测定。 展开更多
关键词 亮氨酸脑啡肽(l-ek) 邻苯二甲醛(OPA)柱前衍生化法 氧化还原柱前衍生化法
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低压缺氧和亚低温复合因素对小鼠免疫功能的影响
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作者 徐斌 梅丹 +1 位作者 王典瑞 孙新奇 《第四军医大学学报》 北大核心 2003年第1期40-42,共3页
目的 :研究模拟高空低压缺氧和亚低温复合环境 ,对小鼠血浆神经肽含量和免疫功能的影响 .方法 :采用放免法检测高空缺氧和亚低温复合因素作用下 ,小鼠血浆 β 内啡肽 (β EP)和亮氨酸脑啡肽 (L EK)的含量 ;采用MTT法检测ConA或LPS诱导... 目的 :研究模拟高空低压缺氧和亚低温复合环境 ,对小鼠血浆神经肽含量和免疫功能的影响 .方法 :采用放免法检测高空缺氧和亚低温复合因素作用下 ,小鼠血浆 β 内啡肽 (β EP)和亮氨酸脑啡肽 (L EK)的含量 ;采用MTT法检测ConA或LPS诱导的脾细胞增殖反应 ,胸腺细胞IL 1和脾细胞IL 2的活性 .结果 :7km高空缺氧室温组 (2 2± 2 )℃血浆β EP含量 (ng·L-1)显著高于地面室温组 (395± 6 6vs 2 71±37,P <0 .0 1) ,7km 5℃组血浆 β EP含量显著低于 7km室温组 (2 83± 5 9vs 2 71± 37,P <0 .0 1) .地面 5℃组血浆L EK含量显著高于相应的室温组 (5 75± 88vs 4 0 5± 6 5 ,P <0 .0 1) .7km 10℃组ConA或LPS诱导的脾细胞增殖 (MBq)反应显著低于 7km室温组 (6 2 .5± 6 .8vs 2 .1± 0 .2 ,5 8.8± 8.1vs 30 .6± 3.9,P <0 .0 1) ;7km 5℃组ConA或LPS诱导的脾细胞增殖反应显著高于地面 5℃组 (2 3.3± 3.8vs 4 4 .8±4 .4 ,31.9± 0 .5vs 6 6 .0± 2 .7,P <0 .0 1) .7km 10℃组IL 1活性显著高于 7km室温组 (2 .88± 0 .4 9vs1.5 1± 0 .31,P <0 .0 1) ,7km 5℃组IL 1活性显著低于 7km室温组 (1.2 8± 0 .32vs 1.5 1± 0 .31,P <0 .0 1) .7km 10℃和 5℃组小鼠IL 2活性低于 7km室温组 ,但无显著差异 .结论 :缺氧 展开更多
关键词 高空缺氧 亚低温 Β-EP l-ek Il-1 Il-2 免疫功能 动物实验
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