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人肝细胞系L-02细胞单纯肝脂肪变性细胞模型的建立与应用 被引量：17
1
作者 殷锦锦 唐外姣 +1 位作者 曾璐 周本杰 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期837-842,共6页
目的：探讨建立人肝细胞L-02单纯肝脂肪变性细胞模型的方法与模型的应用。方法体外用1640培养基培养L-02细胞，分为模型组和正常组。当细胞融合达到70%~80%，正常组换用新鲜1640培养液，而模型组改为含有游离脂肪酸（油酸和棕榈酸）混... 目的：探讨建立人肝细胞L-02单纯肝脂肪变性细胞模型的方法与模型的应用。方法体外用1640培养基培养L-02细胞，分为模型组和正常组。当细胞融合达到70%~80%，正常组换用新鲜1640培养液，而模型组改为含有游离脂肪酸（油酸和棕榈酸）混合物的1640培养基诱导培养24 h。以油红O染色定性观察细胞内脂滴并通过显色比较各组间总脂质差别，模型鉴定采用观察细胞内脂滴形态，检测细胞内甘油三酯和细胞培养上清丙二醛含量，并检测细胞凋亡情况；同时利用此模型观察护肝清脂片对脂肪变性肝细胞内脂滴的影响。结果模型组L-02细胞内脂滴大量形成，且甘油三酯明显升高，而培养液中肝酶释放量及丙二醛较正常组没有明显升高，且凋亡率没有明显增加；护肝清脂片含药血清两次给药，可以使细胞内脂滴和甘油三酯明显减少。结论采用油酸和棕榈酸混合物（油酸∶棕榈酸=2∶1）可以成功诱导L-02细胞脂肪变性，该模型适用于治疗脂肪肝药物的研究。 展开更多
关键词 脂肪肝 脂肪变性 l-02细胞 细胞模型
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喹烯酮和喹乙醇对人源肝细胞的毒性作用 被引量：16
2
作者 班曼曼 张可煜 +1 位作者 江善祥 薛飞群 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1517-1521,共5页
采用Chang Liver和L-02 2株人源肝细胞为生物材料,通过细胞生长抑制试验、DNA损伤分析、兴奋性试验,观测喹烯酮和喹乙醇不同作用剂量和作用时间下对细胞生长的影响,对细胞DNA尾长、尾部DNA百分含量和Oliver尾距的影响以及低剂量药物对... 采用Chang Liver和L-02 2株人源肝细胞为生物材料,通过细胞生长抑制试验、DNA损伤分析、兴奋性试验,观测喹烯酮和喹乙醇不同作用剂量和作用时间下对细胞生长的影响,对细胞DNA尾长、尾部DNA百分含量和Oliver尾距的影响以及低剂量药物对细胞兴奋效应的诱导作用,并进行统计分析。结果显示,高剂量喹烯酮和喹乙醇对Chang Liver细胞作用24 h的最高抑制率分别达73.29%和31.88%,对L-02细胞作用24 h的最高抑制率分别达76.51%和39.7%,且抑制作用呈剂量和时间相关性,但低剂量喹烯酮也能诱导L-02细胞产生兴奋效应(P<0.01);同时,细胞DNA尾长、尾部DNA百分含量和Oliver尾距随药物剂量的增加而不断上升,证明2种药还可显著诱导这2株细胞的DNA损伤(P<0.01),且喹乙醇导致的损伤比喹烯酮严重。结果表明,喹烯酮和喹乙醇对人肝细胞均具有一定的毒性,但喹烯酮的毒性作用比喹乙醇小。 展开更多
关键词 喹烯酮 喹乙醇 CHANG liver细胞 l-02细胞 细胞毒性
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异鼠李素通过减轻氧化应激改善游离脂肪酸诱导肝细胞脂质沉积 被引量：14
3
作者 周健 杜凤 +7 位作者 康秉文 殷草草 蒋杉 石莹 王玥 周耿瑶 秦绪军 王枫 《中南药学》 CAS 2021年第3期376-381,共6页
目的探讨异鼠李素(Iso)对游离脂肪酸(FFA)诱导的肝细胞脂质沉积程度以及氧化应激的影响。方法将L-02细胞分为3组:对照组,FFA组和FFA+Iso组,其中FFA浓度为0.6 mmol·L^(-1),异鼠李素浓度为10μmol·L^(-1)。干预7 d后,采用CCK-8... 目的探讨异鼠李素(Iso)对游离脂肪酸(FFA)诱导的肝细胞脂质沉积程度以及氧化应激的影响。方法将L-02细胞分为3组:对照组,FFA组和FFA+Iso组,其中FFA浓度为0.6 mmol·L^(-1),异鼠李素浓度为10μmol·L^(-1)。干预7 d后,采用CCK-8试剂盒、油红O染色和三酰甘油(TG)试剂盒检测细胞活力、TG沉积程度;用DCFH-DA荧光探针、丙二醛(MDA)试剂盒检测细胞内总活性氧(ROS)、MDA水平;用抗氧化酶活性检测试剂盒检测总超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性;Western blot检测SOD1、SOD2、CAT、谷胱甘肽过氧化物酶1(GPx1)、核因子NF-E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)、谷氨酸半胱氨酸连接酶(GCL)等蛋白的表达水平。结果FFA可诱导L-02细胞中脂质沉积显著增加,并显著提高细胞中总ROS与MDA水平;抑制SOD酶活性,降低SOD1、SOD2、GPx1的表达水平;抑制Nrf2通路,降低其下游的HO-1、GCLC、GCLM的表达水平。异鼠李素则能够缓解FFA引起的脂质沉积,使ROS与MDA水平降低,增强SOD活性,提高GPx1等抗氧化酶蛋白的表达水平,促进Nrf2活化进入细胞核并提高其下游的蛋白表达水平。结论异鼠李素可通过减轻氧化应激,缓解FFA对L-02细胞诱导的脂质沉积。Nrf2通路在此过程中发挥了重要作用。 展开更多
关键词 异鼠李素 l-02细胞 氧化应激 脂质沉积
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砷代谢相关的全长新cDNA的克隆和功能初步研究 被引量：11
4
作者 顾永清 杨磊 +6 位作者 袁红玲 吴超群 潘泽民 夏放 李瑶 应康 谢毅 《复旦学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期603-608,共6页
从人胎脑中获得mRNA建立cDNA文库 ,通过大规模测序克隆出一人类新基因cDNA .全长 2 2 5 5bp ,开放阅读框 (ORF) 15 32bp .用 4μmol/L砷刺激L 0 2细胞 2周 ,与未用砷刺激的L 0 2细胞作表达谱基因芯片杂交 ,发现该基因在砷刺激L 0 2细胞... 从人胎脑中获得mRNA建立cDNA文库 ,通过大规模测序克隆出一人类新基因cDNA .全长 2 2 5 5bp ,开放阅读框 (ORF) 15 32bp .用 4μmol/L砷刺激L 0 2细胞 2周 ,与未用砷刺激的L 0 2细胞作表达谱基因芯片杂交 ,发现该基因在砷刺激L 0 2细胞中表达量上调 3倍 .用不同浓度砷染毒L 0 2细胞 2周 ,与未用砷染毒的L 0 2细胞抽RNA转膜作Northern杂交 ,结果显示该基因在未染毒L 0 2细胞中几乎不表达 ;而在砷染毒细胞中该基因的表达量明显增加 ,且有随剂量增加表达量亦增加的趋势 ;同时Northern结果显示在 2 3kb处有单一条带 .用不同浓度砷染毒L 0 2细胞 2周 ,作细胞原位杂交 ,结果显示该基因在未染毒细胞中几乎不表达 ,在各染毒组细胞中均有表达 .据此 ,认为这可能是一条新的全长砷代谢相关基因 ,经HUGO/GDB人类基因命名委员会的同意 ,命名为ARG1(arseniterelatedgene 1) . 展开更多
关键词 砷代谢相关基因 l-02细胞 基因芯片杂交 人 抗砷基因 砷中毒
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人肝细胞系L02胰岛素抵抗细胞模型的建立及鉴定 被引量：11
5
作者 李倩 王继红 +1 位作者 王欣 曾建涛 《现代预防医学》 CAS 北大核心 2007年第22期4233-4234,4236,共3页
[目的]采用高浓度胰岛素体外诱导培养法建立人肝细胞IR模型,为研究IR的发生发展机制及筛选改善IR的药物提供一种简便可靠的IR细胞模型。[方法]以人肝细胞系L02为研究对象,在含5×10-7 mol/L人胰岛素的培养液培养16 h,未用高浓度胰... [目的]采用高浓度胰岛素体外诱导培养法建立人肝细胞IR模型,为研究IR的发生发展机制及筛选改善IR的药物提供一种简便可靠的IR细胞模型。[方法]以人肝细胞系L02为研究对象,在含5×10-7 mol/L人胰岛素的培养液培养16 h,未用高浓度胰岛素培养者为对照组。之后两组分别加入0、1、10、50、100、200 ng/ml人胰岛素。采用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法(GOD-POD)法检测培养液中残存葡萄糖含量。[结果]在各浓度的胰岛素刺激下,高胰岛素诱导组培养液中残存葡萄糖含量均显著高于对照细胞(P﹤0.01)。[结论]用含5×10-7 mol/L胰岛素的培养液培养16 h的L02细胞产生胰岛素抵抗,作为IR肝细胞模型可广泛用于胰岛素抵抗的研究。 展开更多
关键词 l02 胰岛素抵抗 细胞模型
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ROS介导的氧化应激在INH诱导的细胞毒性中的作用及槲皮素的干预 被引量：11
6
作者 卢春凤 杨玉 +5 位作者 商宇 王培军 陈廷玉 王丽敏 朱秋双 张井凡 《生态毒理学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期209-215,共7页
为探讨ROS介导的氧化应激在异烟肼(INH)诱导L-02细胞毒性中的作用及槲皮素的干预作用,建立体外培养INH诱导L-02细胞氧化损伤模型,实验分为对照组(A)、INH组(B)、槲皮素低剂量组(C)及槲皮素高剂量组(D)。采用生化分析法检测L-02细胞培养... 为探讨ROS介导的氧化应激在异烟肼(INH)诱导L-02细胞毒性中的作用及槲皮素的干预作用,建立体外培养INH诱导L-02细胞氧化损伤模型,实验分为对照组(A)、INH组(B)、槲皮素低剂量组(C)及槲皮素高剂量组(D)。采用生化分析法检测L-02细胞培养液中天冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)的活性;利用荧光探针检测L-02细胞线粒体内活性氧(ROS)水平;应用比色法检测L-02细胞内丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)的含量以及主要抗氧化物酶的活性。结果表明,与对照组相比,INH能显著增加L-02细胞培养液中AST和ALT的活性、细胞线粒体内ROS水平及细胞内MDA的含量(P<0.01),并显著减少L-02细胞内GSH的含量及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性(P<0.01)。与INH组比较,槲皮素低剂量组L-02细胞培养液中AST的活性、线粒体内ROS水平及细胞内MDA的含量明显降低(P<0.05),而细胞内SOD的活性明显增加(P<0.05);高剂量槲皮素能显著降低L-02细胞培养液中AST和ALT的活性、细胞线粒体内ROS水平及细胞内MDA的含量(P<0.01),并能显著增高L-02细胞内GSH的含量和主要抗氧化物酶的活性(P<0.01)。与槲皮素低剂量组相比,槲皮素高剂量组的保护效应更明显(P<0.05)。可见,ROS介导的氧化应激在INH诱导的L-02细胞毒性中发挥了重要作用,且槲皮素对INH诱导的L-02细胞氧化损伤具有保护作用。 展开更多
关键词 槲皮素 异烟肼 l-02细胞 氧化应激
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雷公藤甲素通过抑制细胞色素P4503A4酶增强肝损伤研究 被引量：10
7
作者 杨新华 夏宏光 金涌 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2020年第4期496-502,共7页
目的研究雷公藤甲素诱导细胞色素P450 3A4(CYP3A4)表达下调在其引发肝损伤中的作用。方法将L-02细胞和C57BL/6雄性小鼠随机分为4组,分别为正常组(C)、雷公藤甲素(TP)组、雷公藤甲素(TP)+卡马西平(CBZ)组、雷公藤甲素(TP)+氨氯地平(AML)... 目的研究雷公藤甲素诱导细胞色素P450 3A4(CYP3A4)表达下调在其引发肝损伤中的作用。方法将L-02细胞和C57BL/6雄性小鼠随机分为4组,分别为正常组(C)、雷公藤甲素(TP)组、雷公藤甲素(TP)+卡马西平(CBZ)组、雷公藤甲素(TP)+氨氯地平(AML)组, 24 h后收集培养基,C57BL/6雄性小鼠2周后安乐死,取血和肝脏。流式细胞仪观察用药后各组细胞的凋亡率,小鼠肝脏进行组织染色观察肝细胞损伤情况。试剂盒检测细胞上清液和小鼠血清的丙氨酸氨基转移酸(alanine transaminase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate transaminase,AST)。通过Western blot法和RT-PCR法检测细胞和小鼠肝脏CYP3A4的mRNA和蛋白表达水平,应用高效液相色谱法检测细胞培养基中和小鼠血清中雷公藤甲素的含量。结果流式细胞仪检测的细胞凋亡结果和小鼠肝脏病例照片结果显示,TP组明显比C组严重,加入P450 3A4诱导剂的TP+CBZ组则明显减轻,而加入P450 3A4抑制剂的TP+AML组的细胞进一步加剧。体内外ALT和AST检测结果显示,TP组明显高于C组,TP+CBZ组则明显降低,TP+AML组进一步增加。Western blot法和RT-PCR结果显示,TP组CYP3A4表达量明显低于C组,TP+CBZ组的CYP3A4表达量则明显升高,TP+AML组的CYP3A4表达量更低。高效液相检测结果显示,TP+CBZ组中TP的含量低于TP组,而TP+AML组中TP的含量则相反。结论 TP通过抑制其主要代谢酶CYP3A4来减慢自身代谢,可能是其产生肝损伤的机制之一。 展开更多
关键词 l-02细胞 雷公藤甲素 细胞色素P4503A4 卡马西平 氨氯地平 肝脏
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基于谱毒关系和肝毒网络整合模式的柴胡水煎液肝毒物质基础研究 被引量：10
8
作者 侯磊 王亮 +1 位作者 刘闰平 孙蓉 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期2798-2806,共9页
目的研究柴胡水煎液HPLC指纹图谱及体外肝毒性的谱毒关系,构建柴胡水煎液致肝毒性的作用网络,整合谱毒关系和网络毒理学预测柴胡水煎液致肝毒性的物质基础。方法采用HPLC法建立10批次柴胡水煎液的指纹图谱;测定柴胡水煎液对正常人肝细胞... 目的研究柴胡水煎液HPLC指纹图谱及体外肝毒性的谱毒关系,构建柴胡水煎液致肝毒性的作用网络,整合谱毒关系和网络毒理学预测柴胡水煎液致肝毒性的物质基础。方法采用HPLC法建立10批次柴胡水煎液的指纹图谱;测定柴胡水煎液对正常人肝细胞L02中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)的含量;采用灰色关联分析法进行谱毒关联分析,初步确定肝毒性成分。结合网络毒理学,预测肝毒性候选成分。整合分析探究柴胡水煎液致肝毒性的成分。结果建立了柴胡水煎液指纹图谱,共标定29个共有峰;根据灰色关联度大小排序,13、12、8、26、10、14、27、11号共有峰与L02细胞ALT含量有较高关联度;12、13、26、8、10、14、27、11号共有峰与L02细胞AST含量有较高关联度。网络毒理学推测柴胡致肝毒性的成分为豆甾醇、黄芩苷等17个;整合分析确定柴胡致肝毒性的成分为共有峰13、12、8、26、10、14、27、11代表的成分及豆甾醇、黄芩苷、柴胡皂苷D等。结论柴胡水煎液致肝毒性是多种成分共同作用的结果,本研究可对下一步柴胡水煎液致肝毒性的物质基础研究提供数据支持。 展开更多
关键词 柴胡 肝毒性 谱毒关系 作用网络 网络毒理学 物质基础 HPlC 指纹图谱 l02细胞 丙氨酸转氨酶 天冬氨酸转氨酶 灰色关联分析法 整合分析 豆甾醇 黄芩苷 柴胡皂苷D
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大黄素诱导肝细胞L-02凋亡的作用机制 被引量：9
9
作者 刘艺 董晓旭 倪健 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期2028-2034,共7页
目的:研究大黄素对L-02正常肝细胞增殖、周期及凋亡的影响并初探其机制。方法:以大黄素为研究对象,L-02细胞为体外模型,采用MTT法检测不同浓度(20、40、60μmol/L)的大黄素对细胞增殖的影响;采用Hoechst染色观察L-02细胞形态学变化;采用... 目的:研究大黄素对L-02正常肝细胞增殖、周期及凋亡的影响并初探其机制。方法:以大黄素为研究对象,L-02细胞为体外模型,采用MTT法检测不同浓度(20、40、60μmol/L)的大黄素对细胞增殖的影响;采用Hoechst染色观察L-02细胞形态学变化;采用FITC AnnexinV/PI双染法,检测不同浓度的药物处理后细胞凋亡情况;采用PI/RNase法检测药物对细胞周期的影响;利用流式细胞仪检测大黄素对L-02细胞内活性氧和线粒体膜电位的影响;采用荧光定量PCR技术检测肝细胞中Sirt1的mRNA表达水平,采用Western Blot检测凋亡相关蛋白Sirt1、Bax、Bcl-2、Caspase-3的表达,探讨大黄素细胞毒性的作用机制。结果:大黄素抑制L-02细胞增殖,且呈浓度相关性;Hoechst染色发现随着药物浓度升高,细胞形态发生明显变化,出现核固缩,呈亮蓝色,形成凋亡小体等;实验结果表明大黄素能使L-02细胞内活性氧升高,线粒体膜电位水平下降,细胞中谷胱甘肽含量降低;与对照组比较,3个大黄素组L-02细胞出现明显的凋亡细胞,且细胞凋亡率随大黄素浓度增大而逐渐升高;40、60μmol/L大黄素组L-02细胞处于G0/G1期的细胞数减少,S期的细胞增多,表明大黄素能将L-02细胞的细胞周期阻滞在S期。PCR结果显示3个大黄素组能够使Sirt1的mRNA表达水平不同程度降低;Western Blot结果显示3个大黄素组可以不同程度地降低Sirt1、Bax、Caspase-3蛋白的表达,同时升高Bcl-2蛋白的表达。结论:大黄素在体外对L-02肝细胞的增殖具有明显抑制作用,其机制可能是通过降低Sirt1的表达,使线粒体功能受损,增加活性氧的产生,从而引起细胞凋亡。 展开更多
关键词 大黄素 l-02细胞 凋亡 活性氧 线粒体
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连翘脂素通过调控P2X7R/NF-κB/NLRP3炎性小体信号通路缓解LPS/ATP诱导的L02细胞炎症 被引量：8
10
作者 邓英 赵兴桃 +4 位作者 周梦婷 薛鑫妍 廖利 王晶 李芸霞 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第14期61-69,共9页
目的:为研究连翘脂素(Phillygenin,PHI)对脂多糖(LPS)和腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)联合诱导L02细胞中的抗炎药效和对P2X7受体(P2X7R),NOD样蛋白结构域受体3(NLRP3)和核转录因子-κB(NF-κB)表达的影响。方法:本研究采用先给予100μg·L^... 目的:为研究连翘脂素(Phillygenin,PHI)对脂多糖(LPS)和腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)联合诱导L02细胞中的抗炎药效和对P2X7受体(P2X7R),NOD样蛋白结构域受体3(NLRP3)和核转录因子-κB(NF-κB)表达的影响。方法:本研究采用先给予100μg·L^(-1)LPS处理24 h后,再使用5 mmoL·L^(-1)ATP 5 h建立L02细胞炎症模型。给药组在给予LPS处理的同时给予不同浓度PHI(100、50、25 mg·L^(-1))培养6 h,随后换液,继续用LPS处理18 h,ATP处理5 h后,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测L02细胞中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)、P2X7R、NLRP3、胱天蛋白酶-1前体(pro-Caspase-1)、裂解胱天蛋白酶-1(cleaved Caspase-1)、NF-κB、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)mRNA和蛋白表达。通过分子对接实验预测P2X7R与PHI能否结合,以及DCFH-DA活性氧(ROS)荧光探针检测细胞中ROS的累积。采用小干扰核糖核酸(siRNA)沉默P2X7R,并随后通过Real-time PCR检测IL-1β、IL-18、P2X7R、NLRP3、Caspase-1、NF-κB、IκBα mRNA表达情况。结果:Real-time PCR和Western blot分析显示,与空白组比较,模型组IL-1β、IL-18的表达均有所升高(P<0.05);与模型组比较,给药组明显下调了IL-1β、IL-18 mRNA和蛋白的表达(P<0.05)。分子对接结果显示PHI与P2X7R有较好的结合作用。Real-time PCR和Western blot分析显示,与空白组比较,模型组P2X7R的表达明显上调(P<0.05);与模型组比较,给药组下调了P2X7R mRNA和蛋白表达(P<0.05)。ROS荧光探针分析显示,与空白组比较,ROS的含量明显升高(P<0.05);与模型组比较,给药组明显降低了ROS的积累(P<0.05)。Real-time PCR和Western blot分析显示,与空白组比较,模型组NLRP3炎性小体,NF-κB的表达明显升高(P<0.05);与模型组比较,给药组明显降低NLRP3、cleaved-Caspase-1和上调NF-κB、IκBα mRNA及蛋白表达(P<0.05)。Real-time PCR分析显示,与模型组比较,siRNA沉默P2X7R后,IL-1β、IL-18� 展开更多
关键词 连翘脂素 P2X7R l02细胞 NOD样蛋白结构域受体3(NlRP3)炎性小体 核转录因子-κB(NF-κB)
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应用微载体Cytodex3高密度培养L-02人肝细胞系 被引量：5
11
作者 唐南洪 陈燕凌 +3 位作者 王晓茜 李秀金 朱金海 殷凤峙 《福建医科大学学报》 2000年第4期331-333,346,共4页
目的　探讨用微载体进行 L - 0 2人肝细胞系高密度培养的方法 ,以期为生物人工肝提供有应用价值的生物材料。　方法　在限制贴壁的条件下 ,采用 Cytodex3为材料进行 L- 0 2人肝细胞的微载体培养 ,诱导肝细胞聚集体的形成 ,定期进行细胞... 目的　探讨用微载体进行 L - 0 2人肝细胞系高密度培养的方法 ,以期为生物人工肝提供有应用价值的生物材料。　方法　在限制贴壁的条件下 ,采用 Cytodex3为材料进行 L- 0 2人肝细胞的微载体培养 ,诱导肝细胞聚集体的形成 ,定期进行细胞计数及培养上清白蛋白、尿素、谷草转氨酶 (AST)、乳酸脱氢酶 (L DH )等生化指标的检测 ,并在光镜和透射电镜下观察生长情况。　结果　培养至第 6天时 ,所有的微载体均包满细胞 ,并形成微载体诱导的肝细胞聚集体 ,细胞数量达最高峰为 (17.1± 0 .76 )× 10 7/瓶 ,同时白蛋白和尿素的合成亦最高 ,浓度分别为5 3.81± 1.6 4m g/ L 和 5 .35± 0 .13m mol/ L。　结论　 Cytodex3培养的 L- 0 2人肝细胞可形成高密度的肝细胞聚集体 ,具有一定的生物合成和代谢功能。 展开更多
关键词 生物人工肝 微载体 Cytedex3 l-02 肝细胞 培养
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蛇床子素对L02细胞的毒性作用及其机制研究 被引量：7
12
作者 陈婕 李杨蕾 +1 位作者 鲍依琪 陆红 《中国现代应用药学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期859-863,共5页
目的探究蛇床子素(osthole,Ost)对L02细胞的毒性损伤和作用机制,为中药蛇床子及其制剂的安全合理应用提供实验依据。方法以不同浓度Ost作用于L02细胞,MTT法检测细胞活性;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒测定细胞LDH释放率;Hoechst 33342染色法检... 目的探究蛇床子素(osthole,Ost)对L02细胞的毒性损伤和作用机制,为中药蛇床子及其制剂的安全合理应用提供实验依据。方法以不同浓度Ost作用于L02细胞,MTT法检测细胞活性;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒测定细胞LDH释放率;Hoechst 33342染色法检测细胞核形态;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;Western blot检测Bcl-2、Bax、pro-caspase-3、cleaved-caspase-3(p17)、p-Histon H3(Ser10)的表达。结果 L02细胞在Ost作用下活性下降,LDH释放率提高,且呈浓度依赖;Hoechst 33342染色荧光下可见细胞核皱缩碎裂;Annexin V/PI双染法结果表明凋亡率随浓度提高而上升。与对照组比较,50,100,200μmol·L^(-1)Ost作用24 h后,Bcl-2、pro-caspase-3、p-Histon H3(Ser10)表达水平降低,Bax、cleaved-caspase-3表达水平升高。结论 Ost对L02细胞有毒性损伤作用,呈一定的时间和浓度依赖性,可促进细胞凋亡,抑制细胞增殖。 展开更多
关键词 蛇床子素 l02细胞 毒性损伤 细胞凋亡
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仙茅及其有效成分对不同状态L02细胞PXR-CYP3A的影响研究 被引量：6
13
作者 薛春苗 张冰 林志健 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第19期3348-3352,共5页
目的:明确仙茅水提液及其有效成分苔黑酚葡萄糖苷对正常、虚寒状态L02细胞中PXR-CYP3A的影响,为探讨仙茅在不同状态下药效表达差异的机制奠定基础。方法:分别用正常、虚寒大鼠血清培养L02细胞,诱导正常、虚寒2种状态细胞。仙茅水提液及... 目的:明确仙茅水提液及其有效成分苔黑酚葡萄糖苷对正常、虚寒状态L02细胞中PXR-CYP3A的影响,为探讨仙茅在不同状态下药效表达差异的机制奠定基础。方法:分别用正常、虚寒大鼠血清培养L02细胞,诱导正常、虚寒2种状态细胞。仙茅水提液及其有效成分苔黑酚葡萄糖苷作用于不同状态细胞后,检测不同状态L02细胞PXR蛋白表达和CYP3A活性。结果:MTT法结果显示,仙茅水提液和苔黑酚葡萄糖苷能使L02细胞活力明显增强;仙茅水提液能使正常组L02细胞PXR蛋白表达水平显著降低,苔黑酚葡萄糖苷能使正常组L02细胞CYP3A活性和PXR蛋白表达水平均显著降低;而仙茅水提液能使虚寒组L02细胞CYP3A活性和PXR蛋白表达升高,苔黑酚葡萄糖苷能使虚寒组L02细胞CYP3A活性水平显著降低,使虚寒组细胞PXR蛋白表达水平升高。结论:仙茅作用于虚寒状态L02细胞,能激活PXR诱导CYP3A活性,但对正常L02细胞的PXR及其介导的CYP3A活性没影响或作用相反。 展开更多
关键词 仙茅 有效成分 l02细胞 孕烷X受体 药物代谢酶CYP3A
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吴茱萸水提物体外肝毒性的谱-毒关系研究 被引量：6
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作者 刘舒凌 王剑 +5 位作者 刘雯 黄凤玉 蒋东明 林晓彤 蒙已钦 李耀华 《中国药房》 CAS 北大核心 2022年第1期32-37,共6页
目的研究吴茱萸水提物体外肝毒性的谱-毒关系。方法制备16批不同产地吴茱萸水提物。采用超高效液相色谱(UPLC)法以及《中药指纹图谱相似度评价系统(2012A版)》建立吴茱萸水提物的指纹图谱,并进行共有峰指认及相似度评价;以正常人肝细胞... 目的研究吴茱萸水提物体外肝毒性的谱-毒关系。方法制备16批不同产地吴茱萸水提物。采用超高效液相色谱(UPLC)法以及《中药指纹图谱相似度评价系统(2012A版)》建立吴茱萸水提物的指纹图谱,并进行共有峰指认及相似度评价;以正常人肝细胞L02为对象,考察16批吴茱萸水提物对该细胞的抑制作用;采用灰色关联度法和偏最小二乘回归分析法分析吴茱萸水提物UPLC指纹图谱的共有峰与L02细胞肝毒性的谱-毒关系,并对与吴茱萸体外肝毒性相关性最大的色谱峰的对应成分进行分离、制备及鉴定。结果16批吴茱萸水提物共有27个共有峰,相似度为0.375~0.995;共指认出9个成分,分别为新绿原酸(峰5)、绿原酸(峰9)、隐绿原酸(峰10)、咖啡酸(峰12)、芦丁(峰16)、金丝桃苷(峰17)、去氢吴茱萸碱(峰19)、吴茱萸碱(峰24)、吴茱萸次碱(峰25)。16批吴茱萸水提物对L02细胞的生长均具有显著的抑制作用(P<0.05或P<0.01),抑制率在6.68%~67.95%之间。经灰色关联度分析发现,关联度大于0.8的共有峰有18个,由大到小依次为峰8>峰3>峰23>峰7>峰4>峰9>峰12>峰2>峰19>峰6>峰15>峰5>峰1>峰17>峰21>峰26>峰20>峰14;经偏最小二乘回归分析发现,回归系数为正且变量重要性投影值大于1的共有峰有14个,按回归系数大小排序依次为峰8>峰3>峰23>峰2>峰7>峰4>峰12>峰9>峰19>峰5>峰17>峰26>峰10>峰15。峰8与吴茱萸体外肝毒性相关性最大,进一步鉴定该峰对应的化学成分为6-O-反式咖啡酰葡萄糖酸。结论吴茱萸水提物的体外肝毒性作用是其多组分共同作用的结果,其中6-O-反式咖啡酰葡萄糖酸与其体外肝毒性相关性最大。 展开更多
关键词 吴茱萸 指纹图谱 肝毒性 l02细胞 谱-毒关系 灰色关联度分析法 偏最小二乘回归分析法
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西番莲果皮花色苷对H_(2)O_(2)诱导L02细胞氧化损伤的抑制作用 被引量：5
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作者 张佳辰 丁蕾 +2 位作者 何传波 魏好程 熊何健 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2023年第2期198-207,共10页
目的探究西番莲果皮花色苷(peel of passion fruits anthocyanins,PPFA)对H_(2)O_(2)诱导人正常肝细胞L02氧化损伤的抑制作用。方法采用噻唑蓝[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT]法建立H_(2)O_(2)诱导... 目的探究西番莲果皮花色苷(peel of passion fruits anthocyanins,PPFA)对H_(2)O_(2)诱导人正常肝细胞L02氧化损伤的抑制作用。方法采用噻唑蓝[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT]法建立H_(2)O_(2)诱导L02细胞氧化损伤的模型,通过测定细胞丙二醛(malondialdehyde,MDA)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)指标,观察PPFA对细胞氧化损伤的抑制作用,结合非靶向代谢组学显著差异代谢物分析,探讨其抗氧化机制。结果PPFA体外清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基的半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))值为34.62μg/m L,有一定的羟自由基、超氧阴离子自由基清除能力。细胞实验表明,PPFA能够显著提高H_(2)O_(2)损伤的L02细胞总抗氧化力(P<0.05),并显著降低损伤细胞中MDA生成量和LDH的释放量(P<0.05);与损伤组相比,PPFA各剂量组SOD活性均显著升高(P<0.05),中剂量组CAT与低剂量组GSH-Px的活性显著升高且达空白组水平(P<0.05)。代谢组学分析表明,与损伤组相比,PPFA处理后细胞存在23种显著差异代谢物,涉及到谷胱甘肽代谢、胆汁分泌、铁死亡和脂肪酸生物合成途径。结论PPFA对H_(2)O_(2)诱导L02细胞的氧化损伤有抑制作用,表现出显著的细胞抗氧化活性。 展开更多
关键词 西番莲果皮 花色苷 l02细胞 抗氧化活性 非靶向代谢组学
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亚砷酸钠对人正常肝细胞L-02细胞周期蛋白D1和细胞周期依赖激酶4的影响 被引量：5
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作者 胡婷 张开菊 +1 位作者 张爱华 罗鹏 《中华地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期191-195,共5页
目的研究亚砷酸钠（NaAsO2）对人正常肝细胞L-02细胞周期蛋白D1（CyclinD1）和细胞周期依赖激酶4（CDK4）表达的影响。方法以0（对照）、50、100、150μmoL／LNaAsO2处理L-02细胞24h，采用流式细胞仪检测细胞周期变化，采用实时荧光定量... 目的研究亚砷酸钠（NaAsO2）对人正常肝细胞L-02细胞周期蛋白D1（CyclinD1）和细胞周期依赖激酶4（CDK4）表达的影响。方法以0（对照）、50、100、150μmoL／LNaAsO2处理L-02细胞24h，采用流式细胞仪检测细胞周期变化，采用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹检测Cyclin D1、CDK4mRNA和蛋白表达水平。结果细胞周期检测：与对照组G0．G1期[（60．33±0．40）％]比较，除50μmol／LNaAsO2组细胞比例[（54．58±0140）％]减少外，100、150μmol／LNaAsO2组细胞比例[（64．60±0．62）％、（83．13±0．25）％]显著增加，差异均有统计学意义（P均〈0．05）；对照组，50、100、150μmol／LNaAsO2组S期细胞比例逐渐减少[（34．35±0.30）％、（29．89±0.32）％、（29．50±0.44）％、（11．93±0．12）％]，差异均有统计学意义（P均〈0．05）；对照组，50、100、150μmol／LNaAsO2组G2-M期细胞比例[（5．32±0.11）％、（15．54±0．14）％、（5．90±0．20）％、（4．93±0．15）％]比较，差异有统计学意义（F=908．359，P〈0.05）。CyclinD1和CDK4检测：对照组，50、100、150μmoVLNaAsO2组CyclinD1mRNA（0．48±0．17、1．00±0．31、1．00±0．21、2．06±0．53）和蛋白（0．65±0．02、0．64±0．05、0．71±0．10、0．84±0．05）表达水平比较，差异均有统计学意义（F=167．886、46．575，P均〈0．05）；对照组，50、100、150μmoL／LNaAsO2组CDK4mRNA（1．04±0．19、1.00±0．21、1．29±0．22、2．31±0．31）和蛋白（0．67±0.04、0．74±0．03、0．83±0．07、0．94±0．04）表达水平比较，差异均有统计学意义（F=95．171、145．848，P均〈0．05）。结论NaAsO2通过改变细胞周期调控因子Cyelin D1、CDK4mRNA和蛋白表达水平。使L-02肝细胞的生长周期阻滞于G0—G1期，最终导致细胞损害的发生。 展开更多
关键词 亚砷酸盐类 l-02细胞 细胞周期 细胞周期蛋白D1 细胞周期依赖激酶4
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亚砷酸钠对人正常肝细胞L-02活性氧含量和细胞凋亡的影响 被引量：5
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作者 罗鹏 胡婷 张开菊 《中华地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期42-45,共4页
目的研究不同浓度亚砷酸钠（NaAsO2）对人正常肝细胞L-02存活情况、细胞内活性氧（ROS）水平及细胞凋亡的影响。方法用0（对照组）、50、100、150μmol／L NaAsO2作用L-02肝细胞24h后，采用四甲基偶氮唑蓝（MTr）法检测L-02肝细胞存活... 目的研究不同浓度亚砷酸钠（NaAsO2）对人正常肝细胞L-02存活情况、细胞内活性氧（ROS）水平及细胞凋亡的影响。方法用0（对照组）、50、100、150μmol／L NaAsO2作用L-02肝细胞24h后，采用四甲基偶氮唑蓝（MTr）法检测L-02肝细胞存活率，流式细胞仪检测L-02肝细胞内ROS水平和细胞早期（Q4期）、晚期（Q2期）凋亡程度。结果细胞存活率检测：不同浓度NaAsO2组细胞存活率比较，差异有统计学意义（F=350．51，P〈0．05），其中50、100、150μmol／LNaAsO2组细胞存活率[（87．30±3．74）％、（49．03±4．72）％、（13．44±4．01）％]显著低于对照组[（100．00±0．00）％，P均〈0．05]；与50μmol／LNaAsO2组比较，100、150μmol／L NaAsO2组细胞存活率显著下降（P均〈0．05）；与100μmol／L NaAsO2组比较，150μmol／L NaAsO2组细胞存活率显著下降（P〈0．05）。ROS水平检测：不同浓度NaAsO2组细胞内ROS水平比较，差异有统计学意义（F=407．78，P〈0．05），其中100、150μmol／L NaAsO2组细胞内ROS水平（3212．00±221．93、5521．33±179．63）显著高于对照组（1691．67±73．98，P均〈0．05）；与50μmol／L NaAsO2组（1927．67±62．45）比较，100、150μmol／L NaAsO2组细胞内ROS水平显著增加（P均〈0．05）；与100μmol／L NaAsO2组比较，150μmol／L NaAsO2组细胞内ROS水平显著增加（P〈0．05）。细胞凋亡检测：不同浓度NaAsO2组Q2期（晚期凋亡细胞）、Q4期（早期凋亡细胞）、Q2＋Q4期（总凋亡细胞）细胞凋亡率比较，差异均有统计学意义（F=256．84、26．53、63．89，P均〈0．05），除50μmol／L NaAsO2组Q4期[（5．43±0．57）％]外，50μmol／L NaAsO2组[Q2期：（5．67±0．21）％，Q2＋Q4期：（11．10±0．40）％]、100μmol／L NaAsO2组[Q2期：（13．60±0．79）％，Q4期：（7．37±2．01）％，Q2＋Q4期：（20．97±2.38）％]、150μmol／L NaAsO2组[Q2期：（13� 展开更多
关键词 亚砷酸盐类 l-02细胞 活性氧 细胞凋亡
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长期砷诱导L-02细胞的表达谱基因芯片实验 被引量：3
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作者 杨磊 顾永清 +7 位作者 潘泽民 袁红琳 仙玲玲 王国荃 姚华 应康 李遥 谢毅 《第四军医大学学报》 北大核心 2004年第13期1205-1207,共3页
目的 :采用基因芯片技术研究长期砷染毒时人正常肝细胞 (L 0 2细胞 )基因表达谱的变化 .方法 :4 μmol/LNaAsO2染毒人正常肝细胞 (L 0 2细胞 ) 2wk以上与未染毒的L 0 2细胞做表达谱基因芯片杂交 .结果 :长期砷染毒后细胞基因出现多方面... 目的 :采用基因芯片技术研究长期砷染毒时人正常肝细胞 (L 0 2细胞 )基因表达谱的变化 .方法 :4 μmol/LNaAsO2染毒人正常肝细胞 (L 0 2细胞 ) 2wk以上与未染毒的L 0 2细胞做表达谱基因芯片杂交 .结果 :长期砷染毒后细胞基因出现多方面表达差异 ,既包括细胞一些正常生理功能如生长发育、分裂增殖相关的基因 ,同时也包含一些与肿瘤发生、发展有关的基因 .结论 :细胞长期暴露于砷环境后多种与肿瘤发生有关的基因差异表达 。 展开更多
关键词 砷 eDNA基因芯片 l-02细胞
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急慢性砷染毒的肝细胞L-02的基因芯片分析 被引量：4
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作者 杨磊 顾永清 +6 位作者 潘泽民 袁红琳 仙玲玲 王国荃 应康 李遥 谢毅 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期33-34,共2页
目的用基因芯片分析急慢性砷染毒时人正常肝细胞(L02细胞)基因表达谱的变化。方法6μmol/L的亚砷酸钠染毒L02细胞2,15,24h,4μmol/L的亚酸钠染毒L02细胞2周,分别与未染毒的L02细胞抽提RNA作表达谱基因芯片杂交。结果急性和慢性砷诱导细... 目的用基因芯片分析急慢性砷染毒时人正常肝细胞(L02细胞)基因表达谱的变化。方法6μmol/L的亚砷酸钠染毒L02细胞2,15,24h,4μmol/L的亚酸钠染毒L02细胞2周,分别与未染毒的L02细胞抽提RNA作表达谱基因芯片杂交。结果急性和慢性砷诱导细胞基因表达谱截然不同。染砷后首先激活的是解毒功能相关的基因和一些蛋白质合成相关的基因。长期染砷后与肿瘤发生及氧化还原有关的基因表达量升高。结论细胞短期染砷毒后,应激和解毒功能有关的蛋白表达上调,长期染砷后与肿瘤有关的基因表达上调,急慢性砷刺激下细胞以不同的方式抵抗砷毒。 展开更多
关键词 l-02细胞 表达谱基因芯片杂交 亚砷酸钠
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载脂蛋白E基因多态性对氟伐他汀抑制L-02细胞中3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶活性的影响 被引量：5
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作者 孙旭 罗余萍 熊玉卿 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第17期1742-1744,共3页
目的考察不同载脂蛋白E基因型存在时,氟伐他汀对L-02细胞3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A（HMG-Co A）还原酶活性的影响。方法建立通过检测还原辅酶（NADPH）反应酶活性的高效液相色谱检测方法及样品处理方法。摸索细胞总蛋白与酶的反应体系,... 目的考察不同载脂蛋白E基因型存在时,氟伐他汀对L-02细胞3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A（HMG-Co A）还原酶活性的影响。方法建立通过检测还原辅酶（NADPH）反应酶活性的高效液相色谱检测方法及样品处理方法。摸索细胞总蛋白与酶的反应体系,研究氟伐他汀对HMG-Co A还原酶活性的抑制作用。结果建立的高效液相色谱检测方法精密度、准确度及重现性均符合要求。NADPH在2.5~1000.0μmol·L-1线性关系良好。0~5μg·m L-1氟伐他汀对L-02细胞中HMG-Co A还原酶活性的抑制作用成浓度依赖性,最大抑制率为49.73%。载脂蛋白E2、E3、E4分别存在时,氟伐他汀对HMG-Co A还原酶活性的抑制率分别为38.02%,25.12%,21.92%,与野生型E3相比,Apo E2差异有统计学意义（P〉0.05）。结论载脂蛋白E不同基因型存在时,氟伐他汀对L-02细胞HMG-Co A还原酶活性抑制作用有差异。 展开更多
关键词 载脂蛋白E 基因多态性 氟伐他汀 l-02细胞 3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A
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