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益气养阴方对白血病干细胞MDR1 mRNA和P-gp表达的影响 被引量：10
1
作者 闫理想 史哲新 +6 位作者 杨向东 李德冠 刘富春 王秀婷 高宏 姚芳 王兴丽 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1491-1495,共5页
目的探讨益气养阴方对白血病干细胞多药耐药基因1(multidrug resistance gene 1,MDR1)mRNA和P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达的影响。方法从KG1a细胞株中分选出CD34+CD38-KG1a细胞,采用CCK-8法检测益气养阴方联合柔红霉素(daunorubic... 目的探讨益气养阴方对白血病干细胞多药耐药基因1(multidrug resistance gene 1,MDR1)mRNA和P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达的影响。方法从KG1a细胞株中分选出CD34+CD38-KG1a细胞,采用CCK-8法检测益气养阴方联合柔红霉素(daunorubicin,DNR)对KG1a干细胞的抑制率及IC50值;RT-PCR法检测益气养阴方干预KG1a干细胞后MDR1mRNA的表达量;流式细胞术检测益气养阴方干预KG1a干细胞后各组P-gp表达。结果经过免疫磁珠法分选CD34+CD38-KG1a细胞比例为(97.2±2.5)%,IC50(48h)值为(0.50±0.07)μg/mL。与DNR组和对照兔血清+DNR组比较,20、40μL含药兔血清+DNR组24、48、72h的抑制率均增高(P<0.05)。与空白组比较,DNR组MDR1mRNA表达增高(P<0.05);与对照兔血清组比较,对照兔血清+DNR组MDR1 mRNA表达增高(P<0.05);与含药兔血清组比较,含药兔血清+DNR组MDR1mRNA表达降低(P<0.05)。与空白组比较,DNR组P-gp表达量增高,但差异无统计学意义(P>0.05);分别与DNR组、含药兔血清组比较,含药兔血清+DNR组P-gp表达量均明显降低(P<0.05)。结论益气养阴方可逆转KG1a干细胞对DNR的耐药性,其机制可能与其协同DNR降低多药耐药基因编码的P-gp蛋白表达,从而提高对DNR的敏感性。 展开更多
关键词 益气养阴方 白血病干细胞 KG1a细胞 多药耐药基因1 P-糖蛋白
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白藜芦醇对髓系白血病干细胞增殖和凋亡的影响及其与allo-NK细胞的联合杀伤作用 被引量：2
2
作者 张霞 曾泗宇 朱新昌 《中南药学》 CAS 2014年第7期626-630,共5页
目的探讨白藜芦醇(RES)对髓系白血病干细胞(CD34+CD38-KG1a细胞,以下简写为KG1a细胞)增殖和凋亡的影响,并初步探讨RES增强allo-NK细胞对KG1a细胞杀伤作用的机制。方法免疫磁珠分选法分选人外周血单个核细胞(PBMCs)中的CD16+CD56+CD3-NK... 目的探讨白藜芦醇(RES)对髓系白血病干细胞(CD34+CD38-KG1a细胞,以下简写为KG1a细胞)增殖和凋亡的影响,并初步探讨RES增强allo-NK细胞对KG1a细胞杀伤作用的机制。方法免疫磁珠分选法分选人外周血单个核细胞(PBMCs)中的CD16+CD56+CD3-NK细胞(以下简写为NK细胞)。流式细胞术检测细胞表面分子CD34、CD38、CD3、CD15和CD56。MTT法、甲基纤维素克隆形成实验检测RES对KG1a细胞增殖抑制作用。DAPI染色法和流式细胞术检测RES对KG1a细胞凋亡的影响。使用IC50的RES作用KG1a细胞24 h后清洗离心获得RES/KG1a细胞。LDH释放法检测NK细胞对KG1a细胞和RES/KG1a 2种细胞的杀伤能力。流式细胞术检测KG1a细胞和RES/KG1a细胞的表面配体ULBP1、ULBP2、ULBP3、MICA和MICB。结果免疫磁珠分选后,外周血单个核细胞中的NK细胞比例为(90.5±3.2)%;KG1a细胞纯度为(91.2±3.9)%。RES对KG1a细胞的增殖抑制作用具有时间和剂量依赖性,24 h的IC50=24.0μmol·L-1;48 h的IC50=13.7μmol·L-1。RES抑制KG1a细胞的克隆形成能力并诱导细胞凋亡,具有剂量依赖性(P<0.05)。NK细胞对RES/KG1a细胞的杀伤能力比其对KG1a细胞的杀伤能力强(P<0.05)。与KG1a细胞比较,RES/KG1a细胞表面配体ULBP1、ULBP2、ULBP3表达明显上调(P<0.05),MICA和MICB变化不明显。结论 RES能够抑制KG1a细胞增值抑制并诱导细胞凋亡,联合NK细胞对KG1a细胞具有协同杀伤作用,这可能与KG1a细胞表面的ULBP1、ULBP2、ULBP3表达上调相关。 展开更多
关键词 白藜芦醇 白血病干细胞 KG1a细胞 NK细胞 协同效应 NKG2D
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去甲基化KG1a细胞DNA对人外周血单个核细胞杀伤活性和T细胞受体VαβT细胞增殖的影响
3
作者 贾振薇 郭坤元 +2 位作者 黄迎 曲佳 佘秒容 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2009年第18期2996-2999,共4页
目的:研究去甲基化的急性髓性白血病细胞KG1a的DNA体外诱导人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)的杀伤活性和T细胞受体Vαβ(αβ chain variable gene of T cell receptor,TCRVαβ)谱系的表达和克隆情况。方... 目的:研究去甲基化的急性髓性白血病细胞KG1a的DNA体外诱导人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)的杀伤活性和T细胞受体Vαβ(αβ chain variable gene of T cell receptor,TCRVαβ)谱系的表达和克隆情况。方法:去甲基化试剂盒对KG1a细胞去甲基化处理,并提取其DNA。应用乳酸脱氢酶释放法检测DNA诱导前后PBMC杀伤KG1a细胞的活性,应用RT-PCR方法扩增各组外周血T细胞的32个TCRVα亚家族和24个TCRVβ亚家族的CDR3,并用基因扫描分析扩增产物以确定T细胞的克隆性。结果:基因扫描显示去甲基化的KG1a细胞DNA可以诱导出呈单克隆、寡克隆或寡克隆趋势生长的亚家族T细胞,且在效靶比为20∶1时去甲基化的KG1a细胞DNA诱导前后PBMC杀伤KG1a细胞的活性差异有统计学意义(P<0.05)。结论:去甲基化的KG1a细胞DNA可提高PBMC杀伤活性,且诱导T细胞呈克隆性增殖。 展开更多
关键词 受体 抗原 T细胞 α-β KG1a细胞 去甲基化 基因扫描 T细胞克隆
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体外观察中华眼镜蛇毒组分对KG1a细胞增殖抑制作用及对其细胞周期的影响
4
作者 贺艳杰 李苗霞 +3 位作者 李玉华 邓兰 吴秉毅 郭坤元 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期554-556,共3页
目的:探讨中华眼镜蛇毒组分(NaiaNaiaActravenomcomponent,NNAVC)对KG1a细胞的增殖抑制作用及对其细胞周期的影响。方法:以人急性髓系白血病细胞株KG1a细胞为研究对象进行实验。应用不同剂量的中华眼镜蛇毒组分作用于KG1a细胞后,采用MT... 目的:探讨中华眼镜蛇毒组分(NaiaNaiaActravenomcomponent,NNAVC)对KG1a细胞的增殖抑制作用及对其细胞周期的影响。方法:以人急性髓系白血病细胞株KG1a细胞为研究对象进行实验。应用不同剂量的中华眼镜蛇毒组分作用于KG1a细胞后,采用MTT法测定其对KG1a细胞的生长抑制作用,倒置显微镜镜下观察药物作用前后细胞形态学变化,流式细胞仪检测中华眼镜蛇毒组分对KG1a细胞周期的影响。结果:中华眼镜蛇毒组分可以明显的抑制KG1a细胞的增殖。在0.7μg/mL至1.2μg/mL的浓度范围内,中华眼镜蛇毒组分作用具有时间依赖性及剂量依赖性。显微镜镜下观察KG1a细胞经中华眼镜蛇毒组分作用6h后状态开始发生变化,随着药物作用时间的延长,细胞逐渐出现体积变小、变形、胞内空泡、细胞固缩等形态学变化。流式细胞仪检测证实中华眼镜蛇毒组分作用后,能够将KG1a细胞阻滞于细胞周期的G_0/G_1期,而处于G_2/M期的细胞含量减少。结论:中华眼镜蛇毒组分对KG1a细胞的增殖具有明显抑制作用,调节细胞周期停滞于G_0/G_1期,减少G_2/M期的细胞含量,提示影响细胞周期进程可能是中华眼镜蛇毒组分对KG1a细胞的发挥增殖抑制作用的机制之一。 展开更多
关键词 蛇毒 KG1a细胞 细胞周期
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中华眼镜蛇毒组分联合活化免疫细胞对白血病KG1a细胞的杀伤作用
5
作者 贺艳杰 李玉华 +2 位作者 涂三方 吴海燕 郭坤元 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期1133-1136,共4页
本研究旨在探讨中华眼镜蛇毒组分(Naja Naja Actra Venom Component,NNAVC)与活化免疫细胞联合对人急性髓系白血病系KG1a细胞的杀伤作用。采用CCK-8法检测不同浓度NNAVC对KG1a细胞的杀伤作用,乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒测定活化免疫细胞... 本研究旨在探讨中华眼镜蛇毒组分(Naja Naja Actra Venom Component,NNAVC)与活化免疫细胞联合对人急性髓系白血病系KG1a细胞的杀伤作用。采用CCK-8法检测不同浓度NNAVC对KG1a细胞的杀伤作用,乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒测定活化免疫细胞对KG1a细胞的细胞毒作用、NNAVC与活化免疫细胞联合杀伤KG1a细胞以及NNAVC作用后存活的KG1a细胞对活化免疫细胞的杀伤敏感性变化。结果显示,NNAVC对KG1a细胞的抑制率随药物浓度的增加而增高,而活化免疫细胞对KG1a细胞的杀伤活性随效靶比的升高(6.25∶1、12.5∶1和25∶1)分别达到12.30%、24.85%和52.26%。NNAVC与不同效靶比(10∶1、20∶1)的活化免疫细胞联合,对KG1a细胞的杀伤率达到56.21%和85.59%,高于两因素各自的单独作用效果。以不同浓度NNAVC杀伤后存活的KG1a细胞为靶细胞,活化免疫细胞对其杀伤活性在效靶比为10∶1时分别为25.65%、31.33%、28.63%和16.78%,在效靶比为20∶1时分别为40.62%、44.70%、44.62%、40.72%。结论:NNAVC与活化免疫细胞在体外均可以有效杀伤KG1a细胞,二者联合应用能够增强对KG1a细胞的杀伤作用。 展开更多
关键词 中华眼镜蛇毒 KG1a细胞 免疫细胞 白血病
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中华眼镜蛇毒组分诱导人急性髓系白血病细胞株KG1a细胞凋亡的研究
6
作者 贺艳杰 黄宇贤 +2 位作者 李玉华 宋朝阳 郭坤元 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2010年第13期2277-2280,共4页
目的：探讨中华眼镜蛇毒组分（najanajaactravenomcomponent，NNAVC）诱导KG1a细胞凋亡及相关机制。方法：以NNAVC作用人急性髓系白血病细胞株KG1a细胞，台盼蓝拒染法测定细胞毒性，流式细胞仪测细胞凋亡率，RT—PCR测细胞凋亡相关基因... 目的：探讨中华眼镜蛇毒组分（najanajaactravenomcomponent，NNAVC）诱导KG1a细胞凋亡及相关机制。方法：以NNAVC作用人急性髓系白血病细胞株KG1a细胞，台盼蓝拒染法测定细胞毒性，流式细胞仪测细胞凋亡率，RT—PCR测细胞凋亡相关基因（Bax、Bak、Bcl-2）的表达。结果：NNAVC对KG1a细胞有显著的细胞毒性作用，能诱导KG1a细胞凋亡，促凋亡作用可能与Bcl-2表达下调和Bax表达上调有关。结论：NNAVC通过调节抗／促凋亡分子诱导KG1a细胞凋亡．提示NNAVC具有治疗复发难治性白血病的应用前景。 展开更多
关键词 白血病 髓样 急性 蛇毒 KG1a细胞 凋亡
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苦参碱提高白血病KG1a细胞对NK细胞杀伤敏感性及其机制 被引量：4
7
作者 王国征 孙明 +4 位作者 贾振薇 周健 胡亮杉 郭坤元 宋朝阳 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期298-301,共4页
目的研究苦参碱(Matrine)作用前后白血病KG1a细胞对NK细胞杀伤细胞敏感性的变化,并初步探讨其机制。方法应用CCK-8法检测苦参碱对KG1a细胞50%抑制量IC50值,以此量的苦参碱作用于KG1a细胞,LDH释放法检测作用前后对NK细胞的杀伤敏感性。RT... 目的研究苦参碱(Matrine)作用前后白血病KG1a细胞对NK细胞杀伤细胞敏感性的变化,并初步探讨其机制。方法应用CCK-8法检测苦参碱对KG1a细胞50%抑制量IC50值,以此量的苦参碱作用于KG1a细胞,LDH释放法检测作用前后对NK细胞的杀伤敏感性。RT-PCR检测KG1a细胞NKG2D配体(MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3)五种基因的表达,流式细胞仪检测作用前后KG1a细胞表面NKG2D配体和HLA-Ⅰ类分子表达变化。结果苦参碱作用前后在效靶比为5:1、10:1、20:1时对NK细胞杀伤敏感性差异均有统计学意义(P<0.05)。KG1a细胞在mRNA水平五种基因均表达,苦参碱作用前KG1a细胞表面NKG2D各配体几乎不表达,作用后各配体显著升高,与作用前相比差异有统计学意义(P<0.05),HLA-Ⅰ类分子无明显变化(P>0.05)。结论苦参碱能提高KG1a细胞对NK细胞的杀伤敏感性,其机制可能与苦参碱提高KG1a细胞表面NKG2D配体的表达有关。 展开更多
关键词 苦参碱 白血病KG1a细胞 NK细胞 NKG2D配体 细胞毒性实验
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来自噬菌体抗体库识别KG1a细胞的scFv5C1的高效表达、纯化及其生物学特性 被引量：2
8
作者 隋建华 李文辉 +2 位作者 姜学英 何一心 宋增璇 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期437-441,共5页
目的　为深入研究源于噬菌体抗体库特定单链抗体 (scFv)的功能和其识别抗原的分子特征 ,将识别KG1a细胞的单链抗体 5C1scFv高效表达、纯化 ;用scFv测定未知抗原的相对分子质量 (Mr) ;并研究 5C1scFv对KG1a部分细胞生物学特性的影响。方... 目的　为深入研究源于噬菌体抗体库特定单链抗体 (scFv)的功能和其识别抗原的分子特征 ,将识别KG1a细胞的单链抗体 5C1scFv高效表达、纯化 ;用scFv测定未知抗原的相对分子质量 (Mr) ;并研究 5C1scFv对KG1a部分细胞生物学特性的影响。方法　基因重组构建表达 5C1scFv的载体pSTE 5C1,在大肠杆菌中诱导表达 ,金属离子螯和亲和层析法纯化 ,获得高纯度的活性 5C1scFv ;借助生物素 链亲和素的高亲和力和高灵敏度的显色系统 ,用Westernblot分析其识别的KG1a细胞膜蛋白的Mr;用聚集实验分析 5C1scFv对KG1a细胞同型聚集的影响。结果　 5C1scFv在大肠杆菌中获高效表达 ,纯化后活性蛋白产量可达每升培养物 5 0～ 6 0mg ,纯度大于 95 % ;成功地测定了其识别抗原的Mr 为 (85 .0 /12 4.5 )× 10 3;并确认 5C1scFv以浓度依赖方式抑制KG1a细胞的同型聚集。结论　高效表达纯化的 5C1scFv特异性识别Mr 为 (85 .0 /12 4.5 )× 10 3 的KG1a细胞膜表面分子 ,此分子可能是一种在KG1a细胞表面表达的参与细胞同型聚集的分子或受体。 展开更多
关键词 单链抗体 kgla细胞 同型聚集 免疫印迹 包涵体 噬菌体
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