Tax基因表达细胞系的建立及其生物学活性的初步研究 被引量：12

1

作者 夏云 石瑛 +3 位作者 高琰 郭继强 宋向凤 王辉 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2008年第6期1425-1429,共5页

本研究旨在建立成人T细胞白血病病毒-1(HTLV-1)的tax基因表达细胞系,并对其生物学特性进行初步研究。利用脂质体将真核表达载体pCMV-tax和空载体pCMV-neo-Bam转入T淋巴细胞系(JurkatE 6-1)细胞,用G418筛选出稳定表达tax基因的T细胞系Tax... 本研究旨在建立成人T细胞白血病病毒-1(HTLV-1)的tax基因表达细胞系,并对其生物学特性进行初步研究。利用脂质体将真核表达载体pCMV-tax和空载体pCMV-neo-Bam转入T淋巴细胞系(JurkatE 6-1)细胞,用G418筛选出稳定表达tax基因的T细胞系TaxP和表达tax阴性细胞系TaxN。用RT-PCR检测LAT、SLP-76、ZAP-70和NF-κB(p65)mRNA的表达。将pNF-κB-Luc报告基因质粒分别转染入TAX蛋白阳性和空载细胞后,检测细胞内NF-κB的活性。用流式细胞仪检测CD25,CD69分子的表达。结果表明:用G418筛选出稳定转染tax基因的Jurkat细胞株,经检测RNA转录水平获得了tax稳定表达的转染细胞;RT-PCR显示,与TaxN细胞LAT相比TaxP细胞的ZAP-70,SLP-76和NF-κB表达增高(p<0.05);pNF-κB-Luc报告基因检测显示,TaxP细胞中NF-κB的活化程度明显提高(p<0.01);流式细胞仪检测显示,TAX能够促进T细胞表面CD69,CD25分子的表达。结论:建立了tax基因表达细胞系,TAX蛋白能够促进T细胞的活化和激活NF-κB通路。 展开更多

关键词 T细胞白血病 成人T细胞白血病病毒-1 TAX蛋白 NF—κB通路 jurkat细胞系

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电离辐射对Jurkat T细胞周期进程的影响 被引量：8

2

作者 张萱 刘宁 +5 位作者 刘扬 王珍琦 张丽 刘淼 龚守良 刘志强 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期414-417,共4页

目的：探讨电离辐射诱导Jurkat T细胞损伤过程中细胞周期进程的变化规律。方法：采用流式细胞术（FCM）检测低剂量（0.075 Gy）和较大剂量（0.5、1.0、2.0、4.0及6.0 Gy）X射线照射后Jurkat T细胞周期进程变化的时间-效应关系和剂量-效... 目的：探讨电离辐射诱导Jurkat T细胞损伤过程中细胞周期进程的变化规律。方法：采用流式细胞术（FCM）检测低剂量（0.075 Gy）和较大剂量（0.5、1.0、2.0、4.0及6.0 Gy）X射线照射后Jurkat T细胞周期进程变化的时间-效应关系和剂量-效应关系。结果：时间-效应关系研究发现，2.0 Gy X射线照射后JurkatT细胞相继发生S期延迟和G2期阻滞，S期细胞百分率于照射后立即增加（P〈0.001），而G2＋M期细胞百分率照射后8 h开始显著增加（P〈0.001）。剂量-效应关系研究发现，75 mGy低剂量X射线照射即可诱导JurkatT细胞发生S期延迟（P〈0.001）和G2期阻滞（P〈0.05）；0.5-6.0 Gy较大剂量X射线照射后，Jurkat T细胞发生S期延迟和G2期阻滞。与假照组相比较，G0/G1期细胞百分率显著降低（P〈0.001），在0.5-6.0 Gy内具有剂量依赖性，而S期和G2＋M期细胞百分率显著升高（P〈0.05或P〈0.001）。结论：X射线照射可以改变Jurkat T细胞周期进程，诱导其相继发生S期延迟和G2期阻滞，在0.5-6.0 Gy内具有剂量依赖性。 展开更多

关键词 辐射 电离 jurkat T细胞 细胞周期 G2期阻滞

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人急性淋巴细胞白血病细胞株T细胞电转染条件的优化 被引量：7

3

作者 江雪 杨平 +2 位作者 李玥 赵少志 马用信 《重庆医学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第15期1463-1465,共3页

目的优化人急性淋巴细胞白血病细胞株细胞(Jurkat T细胞)的电转染条件。方法采用电穿孔的方法,将pEG-FP-C1导入Jurkat T细胞中,通过改变电转时的电压来检测细胞存活率,调节电压、细胞密度、电转质粒数、电转缓冲液,通过流式细胞仪检测... 目的优化人急性淋巴细胞白血病细胞株细胞(Jurkat T细胞)的电转染条件。方法采用电穿孔的方法,将pEG-FP-C1导入Jurkat T细胞中,通过改变电转时的电压来检测细胞存活率,调节电压、细胞密度、电转质粒数、电转缓冲液,通过流式细胞仪检测质转染效率。结果电转条件在电压140 V、细胞密度107个/毫升、质粒数30μg、电转缓冲液为优化培养基时,电转染效率可达(79.2±3.21)%。本研究为外源基因电转染Jurkat T细胞提供了可靠的试验参数依据。结论本实验通过优化Jur-kat T细胞电转染条件能够有效地提高Jurkat T细胞的电转染效率。 展开更多

关键词 电转染 急性淋巴细胞白血病细胞株T细胞 转染效率 PEGFP-C1

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电离辐射对Jurkat T细胞凋亡与坏死的影响 被引量：4

4

作者 张萱 刘扬 +3 位作者 王珍琦 孙延红 龚守良 刘志强 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期782-785,共4页

目的：研究电离辐射诱导Jurkat T细胞凋亡与细胞坏死的变化规律,探讨电离辐射作用后细胞的死亡模式与机理。方法：采用Annexin V-EGFP和PI双染、流式细胞术（FCM）检测不同剂量（0.075、0.500、1.000、2.000、4.000和6.000Gy）X射线照射... 目的：研究电离辐射诱导Jurkat T细胞凋亡与细胞坏死的变化规律,探讨电离辐射作用后细胞的死亡模式与机理。方法：采用Annexin V-EGFP和PI双染、流式细胞术（FCM）检测不同剂量（0.075、0.500、1.000、2.000、4.000和6.000Gy）X射线照射后Jurkat T细胞凋亡与细胞坏死的时间-效应关系和剂量-效应关系。结果：时间-效应关系,2.000Gy X射线照射后,与假照组比较,Jurkat细胞凋亡百分率在照射后18h显著增加,至24h始终维持在较高水平（P〈0.001）;细胞坏死百分率于照射后4h显著增加,12h达峰值,至48h始终维持在较高水平（P〈0.001）。剂量-效应关系,0.075Gy X射线照射后18h,Jurkat T细胞凋亡百分率和细胞坏死百分率与假照组相比较未见明显变化（P〉0.05）。2.000-6.000Gy较大剂量X射线照射后18h,细胞凋亡百分率和细胞坏死百分率与假照组比较均呈剂量依赖性增加（P〈0.001）。结论：2.000Gy以上剂量X射线可以诱导Jurkat T细胞发生凋亡和坏死,细胞坏死比细胞凋亡出现时间更早,持续时间更长。 展开更多

关键词 辐射 电离 凋亡 坏死 jurkat T细胞

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三羟基苯甲酸纯化物及其化合物对Jurkat细胞周期进程及凋亡的影响 被引量：4

5

作者 吕喆 牛凤兰 +1 位作者 郗艳丽 龚守良 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期904-907,共4页

目的:研究不同浓度菱角三羟基苯甲酸(TBA)纯化物及其化合物对人T淋巴细胞白血病Jurkat细胞周期进程及凋亡的影响,并探讨2种不同来源TBA对肿瘤生长抑制的可能机制。方法:2种不同来源TBA分别作用于对数生长期的Jurkat细胞,每种TBA分为5组(... 目的:研究不同浓度菱角三羟基苯甲酸(TBA)纯化物及其化合物对人T淋巴细胞白血病Jurkat细胞周期进程及凋亡的影响,并探讨2种不同来源TBA对肿瘤生长抑制的可能机制。方法:2种不同来源TBA分别作用于对数生长期的Jurkat细胞,每种TBA分为5组(0、3.125、6.250、12.500和25.000mg·L-1),作用于Jurkat细胞30h后,经流式细胞仪分别检测不同浓度菱角TBA纯化物及其化合物处理的Jurkat细胞周期各时相及其凋亡率变化。结果:Jurkat细胞分别经过不同浓度菱角TBA纯化物处理后,细胞凋亡率明显高于0mg·L-1组(P<0.05或P<0.01);与对照组比较,3.125mg·L-1组变化无差异;6.250、12.500和25.000mg·L-1组变化有差异(P<0.05或P<0.01)。Jurkat细胞分别经过不同浓度TBA化合物处理后,与对照组比较,细胞凋亡率在3.125mg·L-1组时即存在差异(P<0.05),随其剂量增加而增加(P<0.05或P<0.01),各用药组间变化无差异。经TBA纯化物作用后,G1期细胞百分数明显高于对照组(P<0.01),并随TBA剂量增加而增加,在6.250～25.000mg·L-1浓度下S期细胞百分数明显低于对照组(P<0.05或P<0.01),G2期无显著变化。经TBA化合物作用后在6.250～25.000mg·L-1浓度下G1期百分数明显高于对照组(P<0.05或P<0.01),S期细胞百分数明显低于对照组(P<0.05),G2期无显著变化。各用药组间变化无差异。结论:2种不同来源TBA均能够诱导细胞凋亡;均能够阻止人T淋巴细胞白血病细胞的G1期细胞向S期进程,其抑制作用可能通过G0/G1期阻滞引起。 展开更多

关键词 三羟基苯甲酸 jurkat T细胞 细胞周期 细胞凋亡

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稳定过表达/下调表达miR-125b-5p Jurkat T 细胞株的建立及验证 被引量：3

6

作者 曹文婷 罗雯 +4 位作者 刘鑫 阿霄 谭晓智 袁李梅 邓丹琪 《中华全科医学》 2019年第10期1631-1633,1672,共4页

目的构建稳定过表达/下调表达miR-125b-5p的Jurkat T细胞株,为miR-125b-5p在免疫性疾病中的发病机制研究奠定基础。方法扩增质粒,经293T细胞包装产生慢病毒颗粒,感染Jurkat T细胞,RT-qPCR检测miR-125b-5p表达情况,Western blotting检测... 目的构建稳定过表达/下调表达miR-125b-5p的Jurkat T细胞株,为miR-125b-5p在免疫性疾病中的发病机制研究奠定基础。方法扩增质粒,经293T细胞包装产生慢病毒颗粒,感染Jurkat T细胞,RT-qPCR检测miR-125b-5p表达情况,Western blotting检测下游靶基因UVRAG表达情况。采用单因素方差分析,2组之间比较应用LSD检验,P<0.05为差异具有统计学意义。结果 hsa-miR-125b-5p慢病毒过表达载体及对照转染Jurkat T细胞后均有绿色荧光表达,hsa-miR-125b-5p慢病毒干扰载体及对照转染Jurkat T细胞后均有红色荧光表达;RT-qPCR显示和对照组比较慢病毒过表达载体组miR-125b-5p表达水平明显增高(P<0.01),慢病毒干扰载体组miR-125b-5p表达水平明显降低(P<0.01),差异均有统计学意义。Western blotting显示和对照组比较,慢病毒过表达载体组下游靶基因UVRAG表达明显降低(P<0.001),慢病毒干扰载体组下游靶基因UVRAG表达明显升高(P<0.001),差异均有统计学意义。结论成功建立了稳定过表达/下调表达hsa-miR-125b-5p的Jurkat T细胞株。 展开更多

关键词 慢病毒 jurkat T细胞 miR-125b-5p

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去甲斑蟊素诱导T淋巴细胞白血病Jurkat细胞凋亡作用及其机制 被引量：3

7

作者 李晓辉 王亚君 +2 位作者 陈丽丽 宋飞飞 张剑白 《中国小儿血液与肿瘤杂志》 CAS 2016年第2期81-86,共6页

目的研究去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)在体外对急性T淋巴细胞白血病细胞株Jurkat细胞凋亡的作用及其机制。方法取对数生长期的Jurkat细胞分别加入不同浓度的NCTD和(或)10 mg/L的长春新碱(VCR),倒置显微镜下观察不同时间Jurkat细胞... 目的研究去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)在体外对急性T淋巴细胞白血病细胞株Jurkat细胞凋亡的作用及其机制。方法取对数生长期的Jurkat细胞分别加入不同浓度的NCTD和(或)10 mg/L的长春新碱(VCR),倒置显微镜下观察不同时间Jurkat细胞形态、密度及结构的变化;采用MTT比色法测定NCTD及VCR两种药物作用于细胞72 h后对细胞增殖抑制作用的影响;实时荧光定量RT-PCR法对p53及survivin基因表达量进行检测。结果 NCTD及VCR作用组细胞形态出现不规则,胀大、变形现象明显,分布稀疏,大量细胞死亡,两者在相同时间点上对细胞的影响无明显差别。MTT法检测结果表明:NCTD增殖抑制作用呈现时间-浓度依赖关系,最佳浓度及时间在20 mg/L,作用72 h时。NCTD与VCR两者对Jurkat细胞均有抑制作用(P<0.05),两者的抑制率相比无显著性差异(P>0.05),且两者联合可增加细胞增殖抑制率(P<0.05)。应用实时荧光定量RT-PCR技术定量表达p53及survivin基因,结果显示NCTD组p53基因表达较对照组细胞株明显上升(P<0.001),相反survivin基因较对照组明显下降(P<0.01)。结论(1)NCTD抑制Jurkat细胞株的增殖抑制作用具有时间-浓度依赖关系;(2)NCTD与VCR对细胞增殖均有抑制作用,两者的影响无显著性差异,且两者联合可增强对细胞的增殖抑制作用;(3)NCTD促进Jurkat细胞株细胞凋亡、抑制增殖的机制可能与上调p53基因表达量及下调survivin基因表达量有关。 展开更多

关键词 T淋巴细胞白血病 jurkat细胞株 去甲斑蝥素 p53基因 SURVIVIN基因

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转染B7-1基因的Raji和Jurkat细胞诱导细胞因子mRNA表达的研究 被引量：3

8

作者 贾丽萍 克晓燕 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2002年第4期322-326,共5页

为探讨B7共刺激分子在T细胞活化和分化中的作用,利用脂质体介导的转基因技术将B7基因导入恶性血液病细胞系Raji和Jurkat细胞,用流式细胞术检测转基因前、后B7-1基因的表达,用RT-PCR检测T细胞表面细胞因子IL-2,IL-4和IFN-γ mRNA的表达及... 为探讨B7共刺激分子在T细胞活化和分化中的作用,利用脂质体介导的转基因技术将B7基因导入恶性血液病细胞系Raji和Jurkat细胞,用流式细胞术检测转基因前、后B7-1基因的表达,用RT-PCR检测T细胞表面细胞因子IL-2,IL-4和IFN-γ mRNA的表达及这3种细胞因子在转基因后4,12,20及48小时的时间动态变化。结果发现,B7^+ Raji细胞可诱导T细胞分泌细胞因子IL-2,IL-4和IFN-γ,B7^+ Jurkat细胞可诱导IL-2和IFN-γ的分泌,而B7^- Raji细胞及B7^- Jurkat细胞均未诱导细胞因子的分泌。IL-2和IL-4在T细胞活化4小时即可检测到,IFN-γ在T细胞活化12小时可检测到,在20小时出现峰值。结论:B7-1基因的导入可有效地增强肿瘤细胞的免疫原性,激活T细胞,B7-1在T细胞活化和分化中起着更主要的作用。 展开更多

关键词 B7-1基因 基因转染 T细胞 细胞因子 Raji细胞系 jurkat细胞系 恶性血液病

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雷帕霉素靶蛋白抑制剂PP242对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株增殖的影响 被引量：3

9

作者 白波 马梁明 +3 位作者 鹿育晋 赵汀梓 吴海燕 赵小娟 《中国医药》 2015年第4期520-522,共3页

目的 探讨雷帕霉素靶蛋白抑制剂PP242对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株增殖的影响及可能机制.方法 用含有10％胎牛血清的RPMI 1640培养液培养Jurkat细胞,调整细胞浓度为1×105/ml,接种于96孔培养板,每孔 180μ1细胞悬液.观察组加... 目的 探讨雷帕霉素靶蛋白抑制剂PP242对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株增殖的影响及可能机制.方法 用含有10％胎牛血清的RPMI 1640培养液培养Jurkat细胞,调整细胞浓度为1×105/ml,接种于96孔培养板,每孔 180μ1细胞悬液.观察组加入不同浓度PP242,每孔20μ1,使其终浓度为0.1、0.5、1.0、5.0、10.0μmol/L.对照组每孔加入含有0.01％二甲基亚砜的RPMI 1640培养基20μl.采用四甲基偶氮唑盐法检测经不同浓度PP242处理的Jurkat细胞的增殖情况,用流式细胞仪检测不同浓度PP242作用48 h后Jurkat细胞的细胞周期改变和细胞凋亡情况.结果 培养24、48、72 h后,对照组吸光度值分别为0.569±0.023、0.901±0.022、1.199±0.041;1μmol/L观察组细胞吸光度值分别为0.513±0.014、0.764±0.019、0.955 ±0.016;5 μmol/L观察组细胞吸光度值分别为0.438±0.019、0.661 ±0.025、0.840±0.034;10 μmol/L观察组细胞吸光度值分别为0.407 ±0.011、0.613±0.026、0.791±0.012;浓度为1.0、5.0、10.0μmol/L的PP242能明显抑制Jurkat细胞的增殖.与对照组比较,1.0、5.0、10.0 μmol/L的PP242作用48 h后G0/G1期的Jurkat细胞百分比增高[（63.2±0.7）％、（65.8±0.4）％、（68.2±0.7）％比（56.9±0.6）％],差异均有统计学意义（均P＜0.05）.浓度为1.0、5.0、10.0 μmol/L的PP242作用48 h后,Jurkat细胞凋亡率分别为（1.7±0.6）％、（1.8±0.7）％、（2.4±0.8）％,对照组Jurkat细胞凋亡率为（1.6±0.6）％,差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 PP242能明显抑制体外培养的急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株的增殖,其机制可能是使Jurkat细胞的细胞周期阻滞于G0/G1期. 展开更多

关键词 白血病 T细胞 jurkat细胞 细胞周期

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酪氨酸磷酸化抑制剂AG490抑制Jurkat T细胞增殖 被引量：2

10

作者 毛成全 邢飞跃 +1 位作者 郭中峰 方志远 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期214-217,共4页

目的:通过AG490对Jurkat T细胞活化、增殖、周期、凋亡及ICBP90蛋白表达的影响,探讨阻断JAK/STAT信号通路以抑制Jurkat T细胞生长的可能性及其初步机制。方法:以Jurkat T细胞为模型,应用双荧光抗体标记结合流式细胞仪检测AG490对Jurkat ... 目的:通过AG490对Jurkat T细胞活化、增殖、周期、凋亡及ICBP90蛋白表达的影响,探讨阻断JAK/STAT信号通路以抑制Jurkat T细胞生长的可能性及其初步机制。方法:以Jurkat T细胞为模型,应用双荧光抗体标记结合流式细胞仪检测AG490对Jurkat T细胞表面分子CD69和CD25表达的影响;利用噻唑蓝(MTT)比色法观察AG490对Jurkat T细胞增殖的影响;采用碘化丙锭(PI)染色检测AG490对Jur-kat T细胞周期的影响;应用Annexin V-FITC和PI双染色检测AG490对Jurkat T细胞凋亡的影响;Western blot检测AG490对Jurkat T细胞中ICBP90蛋白表达的影响以确定其与AG490抑制Jurkat T细胞增殖的关系。结果:随着AG490浓度从1 mmol/L增至30 mmol/L,细胞停滞于G0/G1期,阻止其进入S期和G2/M期,导致Jurkat T细胞ICBP90蛋白的表达显著降低;AG490对细胞的抑制作用于24 h最为明显,抑制率可达27.37%,呈剂量依赖关系;AG490不能明显抑制Jurkat T细胞的活化或促进其凋亡。结论:AG490能明显抑制Jurkat T细胞的生长,其抑制作用可能通过下调Jurkat T细胞ICBP90蛋白的表达与细胞周期阻滞有关,而不是通过促进细胞凋亡而实现。 展开更多

关键词 AG490 jurkat T细胞 增殖 周期 ICBP90

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新型全人源LAG3单克隆抗体的体外抗肿瘤作用及其机制初探 被引量：1

11

作者 张陈 刘平 +4 位作者 于晓杰 刘剑飞 钦可为 吴成林 周丽君 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期419-425,共7页

目的:构建LAG3+Jurkat细胞与肿瘤细胞的共培养模型,探讨新型全人源LAG3单克隆抗体(LAG3 mAb)的体外抗肿瘤作用及其可能的机制。方法:使用PHA刺激Jurkat细胞模拟TIL,通过ELISA法检测Jurkat细胞的IL-2分泌水平来评估细胞活化程度,通过FCM... 目的:构建LAG3+Jurkat细胞与肿瘤细胞的共培养模型,探讨新型全人源LAG3单克隆抗体(LAG3 mAb)的体外抗肿瘤作用及其可能的机制。方法:使用PHA刺激Jurkat细胞模拟TIL,通过ELISA法检测Jurkat细胞的IL-2分泌水平来评估细胞活化程度,通过FCM、免疫荧光法和WB法检测活化后Jurkat细胞的LAG3表达水平及肿瘤细胞(胃癌HGC-27、MGC-803细胞和NSCLC A549细胞)中LAG3配体MHCⅡ类分子(MHC-Ⅱ)的表达水平。构建活化的LAG3+Jurkat细胞与肿瘤细胞的共培养模型,CCK-8法评估在不同效靶比时LAG3+Jurkat细胞杀伤肿瘤细胞的效率及抗LAG3 mAb对杀伤效率的影响,ELISA法检测共培养体系上清液中细胞因子IL-2、IL-10和TNF-α的分泌水平。结果:2μg/mL PHA刺激48 h对Jurkat细胞无明显毒性(P>0.05),且能够活化Jurkat细胞使其分泌IL-2(P<0.01)并诱导LAG3表达(P<0.01),获得活化的LAG3+Jurkat细胞。MGC-803和A549细胞显著表达MHC-Ⅱ(P<0.01),但HGC-27细胞不表达(P>0.05)。选用效靶比10∶1构建LAG3+Jurkat细胞与肿瘤细胞的共培养模型,抗LAG3 mAb能够有效增强Jurkat细胞对两种MHC-Ⅱ+肿瘤细胞的杀伤作用(均P<0.05),并且MHC-Ⅱ+靶细胞组共培养上清液中细胞因子IL-2、IL-10和TNF-α水平均显著升高(均P<0.01)。结论:成功构建LAG3+Jurkat细胞与肿瘤细胞体外共培养模型,抗LAG3 mAb可能通过阻断LAG3/MHC-Ⅱ相互作用提高LAG3+Jurkat细胞对肿瘤细胞MGC-803和A549的杀伤作用,并且该作用可能与共培养体系中细胞因子IL-2、IL-10和TNF-α分泌水平升高有关。 展开更多

关键词 肿瘤 T细胞 jurkat细胞 淋巴细胞活化基因3 全人源单克隆抗体 MHCⅡ类分子 细胞因子

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T细胞激活剂对Jurkat细胞重组激活基因表达的影响 被引量：2

12

作者 邹红云 马骊 +2 位作者 姚新生 温茜 王小宁 《第四军医大学学报》 CAS 北大核心 2006年第14期1253-1255,共3页

目的:研究T细胞激活剂PHA,抗CD3mAb,PMA+A23187对人T细胞白血病细胞株Jurkat重组激活基因(RAGs)mRNA表达水平的影响.方法:采用RTPCR法检测不同T细胞激活剂作用不同时间后Jurkat细胞中RAG1,RAG2mRNA,以β肌动蛋白(βactin)的表达作为内... 目的:研究T细胞激活剂PHA,抗CD3mAb,PMA+A23187对人T细胞白血病细胞株Jurkat重组激活基因(RAGs)mRNA表达水平的影响.方法:采用RTPCR法检测不同T细胞激活剂作用不同时间后Jurkat细胞中RAG1,RAG2mRNA,以β肌动蛋白(βactin)的表达作为内参照进行灰度分析,比较不同组Jurkat细胞RAGsmRNA的表达水平.结果:三种T细胞激活剂刺激诱导的Jurkat细胞RAG1mRNA表达量明显低于对照组(P<0.05),且RAG1mRNA表达量的下降与刺激诱导作用时间有关;PHA刺激诱导后RAG2表达量显著低于对照组(P<0.05);PMA+A23187刺激诱导6,12h均未检测出RAG2mRNA的表达;而抗CD3mAb作用12h组RAG2mRNA表达量显著高于对照组(P<0.05).结论:Jurkat细胞同时表达RAG1,RAG2mRNA,并在一定诱导下RAGs表达量发生改变,因此有可能成为研究外周T细胞RAGs表达调节的一个潜在的细胞模型. 展开更多

关键词 T细胞激活剂 jurkat细胞 重组激活基因 逆转录聚合酶链反应

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流体剪切力下趋化因子CXCL12诱导Jurkat T细胞的钙响应机制 被引量：2

13

作者 胡兵 吴建华 +1 位作者 凌颖琛 方颖 《医用生物力学》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第3期331-337,共7页

目的探究流体剪切力(fluid shear stress,FSS)条件下趋化因子诱导Jurkat T细胞钙响应的力-化学耦合调控机制。方法通过流动腔系统与荧光显微镜结合,在静止或流场条件下,观察分析有或无胞外Ca2+时固定化趋化因子CXCL12诱导的Jurkat T细... 目的探究流体剪切力(fluid shear stress,FSS)条件下趋化因子诱导Jurkat T细胞钙响应的力-化学耦合调控机制。方法通过流动腔系统与荧光显微镜结合,在静止或流场条件下,观察分析有或无胞外Ca2+时固定化趋化因子CXCL12诱导的Jurkat T细胞钙响应过程,提取相应特征参数。结果 CXCL12可以介导Jurkat T细胞的稳定黏附且呈现浓度依赖性;力是细胞钙响应的开关,当FSS从0提高到20 mPa时,钙响应激活比率从约4%提高到约75%;在20 mPa FSS下,胞外Ca2+可以通过缩短延迟时间(缩短约23 s)加快钙响应,增加爬坡时间(约7 s)和半衰期(约20 s)提高钙响应强度。结论 FSS和胞外Ca2+协同作用,加快、加强CXCL12介导的Jurkat T细胞钙响应,提示一条依赖机械敏感钙离子通道的"外钙内流-内质网钙库释放"的快速通路。研究结果有助于深入理解T细胞的活化过程,为相应病理和药物研究提供参考。 展开更多

关键词 流体剪切力 jurkat T细胞 钙响应

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Jurkat细胞模型在感染性疾病研究中的应用进展 被引量：1

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作者 陈经纶 农光民 《中国当代儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期236-242,共7页

感染性疾病可由多种病原体感染人体引起,人体感染病原体后可产生特异性免疫反应。T细胞产生的免疫应答是细胞免疫,在人体抗感染中发挥重要作用,可参与免疫防护及导致免疫病理。各种感染性疾病的转归与细胞免疫功能有密切关系,尤其与T细... 感染性疾病可由多种病原体感染人体引起,人体感染病原体后可产生特异性免疫反应。T细胞产生的免疫应答是细胞免疫,在人体抗感染中发挥重要作用,可参与免疫防护及导致免疫病理。各种感染性疾病的转归与细胞免疫功能有密切关系,尤其与T细胞的功能密切相关。Jurkat细胞属于人急性T淋巴细胞白血病细胞系,Jurkat细胞模型可模拟T淋巴细胞功能,在T细胞信号转导、细胞因子和受体表达的体外研究中应用广泛,对各类感染性疾病的治疗和机制研究也具有重要的参考和指导作用。Jurkat细胞模型已广泛应用于病毒性疾病及非典型病原体的体外研究,而使用Jurkat细胞模型的寄生虫感染研究目前仍少见。本文就Jurkat细胞模型在感染性疾病研究中的应用进展进行综述。 展开更多

关键词 jurkat细胞 T细胞 细胞模型 感染性疾病

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抗人PD-1高亲和力抗血清的制备及其在PD-1免疫印迹分析中的应用

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作者 施焕敬 徐丽慧 +2 位作者 韩捷 卢宏松 何贤辉 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期315-319,共5页

利用纯化的可溶性人PD-1胞外域(sPD-1)蛋白为免疫原免疫小鼠,获得抗血清.免疫印迹显示该抗血清与原核表达的sPD-1有特异性反应,但与某些菌体蛋白存在交叉反应.经菌体蛋白吸附法处理后,交叉反应明显减弱.以商业化抗人PD-1抗体和小鼠sPD-... 利用纯化的可溶性人PD-1胞外域(sPD-1)蛋白为免疫原免疫小鼠,获得抗血清.免疫印迹显示该抗血清与原核表达的sPD-1有特异性反应,但与某些菌体蛋白存在交叉反应.经菌体蛋白吸附法处理后,交叉反应明显减弱.以商业化抗人PD-1抗体和小鼠sPD-1抗血清分析经亲和层析富集的活化的Jurkat T细胞表达的PD-1,只有自制的抗血清鉴定到特异反应条带,其表观分子质量为49 ku. 展开更多

关键词 程序死亡蛋白-1 jurkat T细胞 抗血清 免疫印迹

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阿糖胞苷刺激Jurkat细胞B7和细胞因子mRNA表达

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作者 杨铭 赵英新 +3 位作者 范冬梅 周圆 廖晓龙 杨纯正 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期6-9,13,共5页

目的探讨B7共刺激分子在T细胞活化和分化中的作用。方法阿糖胞苷(Ara-C)刺激Jurkat细胞,流式细胞术检测刺激前、后B7-1、B7-2的表达,RT-PCR检测刺激前、后B7-1、B7-2基因的表达,检测T细胞表面因子IL-3和IFN-γ的表达以及这两种细胞因子... 目的探讨B7共刺激分子在T细胞活化和分化中的作用。方法阿糖胞苷(Ara-C)刺激Jurkat细胞,流式细胞术检测刺激前、后B7-1、B7-2的表达,RT-PCR检测刺激前、后B7-1、B7-2基因的表达,检测T细胞表面因子IL-3和IFN-γ的表达以及这两种细胞因子在Ara-C刺激Jurkat细胞后12,24,48,72,96,120,144 h时间动态变化。结果经Ara-C刺激Jurkat细胞后,均能使B7-1、B7-2表达上调,并且可诱导T细胞分泌细胞因子IL-3和IFN-γ,而未经Ara-C刺激的Jurkat细胞,无B7-1、B7-2的表达,均未诱导细胞因子的分泌。IL-3在T细胞活化12 h即可检测到,在48 h表达量最高,IFN-γ在T细胞活化24 h即可检测到,在72 h表达量最高。结论Ara-C可有效地刺激Jurkat细胞B7的表达,有效地增强肿瘤细胞的免疫原性,激活T细胞。B7在T细胞活化中起着重要作用。 展开更多

关键词 B7基因 jurkat细胞系 T细胞 细胞因子

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细胞膜锚定蛋白LY6E对T细胞活化及HIV-1感染的相关研究

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作者 许璇 仇超 +2 位作者 徐建青 乔文涛 李悦 《南开大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期38-43,共6页

淋巴细胞抗原6复合体E(LY6E)是细胞膜表面的糖基磷脂酰肌醇(glycosylphophatidylionositol,GPI)锚定蛋白,对T细胞功能的影响以及在HIV-1感染中起到的作用并不明确.本实验构建了LY6E过表达的Jurkat稳定细胞系Jurkat-LY6E,并用anti-CD3和a... 淋巴细胞抗原6复合体E(LY6E)是细胞膜表面的糖基磷脂酰肌醇(glycosylphophatidylionositol,GPI)锚定蛋白,对T细胞功能的影响以及在HIV-1感染中起到的作用并不明确.本实验构建了LY6E过表达的Jurkat稳定细胞系Jurkat-LY6E,并用anti-CD3和anti-CD28抗体刺激该细胞系活化后检测相应细胞因子表达,实验结果表明,LY6E过表达的Jurkat细胞系产生白介素-2(interleukin-2,IL-2)的水平要明显高于对照细胞系Jurkat-p WPI;而利用HIV-1假病毒感染Jurkat细胞,结果表明LY6E并未对HIV-1复制产生明显影响.综上所述,LY6E分子可以促进T细胞活化,但并不能影响HIV-1假病毒在T细胞中的感染复制过程. 展开更多

关键词 LY6E jurkat T细胞活化 HIV-1

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利用CRISPR/Cas9系统靶向敲除Jurkat T细胞Kcna3及其功能研究

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作者 石书娟 柯才华 +5 位作者 龙思如 张丰 何回香 姜嘉欣 邹宁 尹世金 《中国科学：生命科学》 CSCD 北大核心 2020年第1期44-53,共10页

为探究如何利用CRISPR/Cas9系统靶向敲除Jurkat T细胞Kv1.3通道编码基因Kcna3,以期阐明Jurkat T细胞中Kv1.3通道介导的病理生理功能,本研究设计Kcna3第一个外显子sgRNA,将构建的pX458-sgRNA重组质粒经电穿孔方式转染Jurkat T细胞,联合使... 为探究如何利用CRISPR/Cas9系统靶向敲除Jurkat T细胞Kv1.3通道编码基因Kcna3,以期阐明Jurkat T细胞中Kv1.3通道介导的病理生理功能,本研究设计Kcna3第一个外显子sgRNA,将构建的pX458-sgRNA重组质粒经电穿孔方式转染Jurkat T细胞,联合使用T7EN1酶切、基因组PCR产物和TA克隆测序、Western Blot检测以及电生理、钙成像和ELISA等功能检测技术鉴定Jurkat T细胞中Kcna3敲除效果.测序结果显示,靶向Kcna3基因CRISPR/Cas9重组质粒pX458-sgRNA建立成功,设计的sgRNA2可高效切割基因组DNA.Western Blot未检测出Kv1.3蛋白表达,基因组PCR产物及TA克隆测序显示发生Indel突变.全细胞膜片钳实验结果表明,Kcna3敲除成功的Jurkat T细胞未记录到Kv1.3通道电流,钙成像技术显示Kcna3敲除Jurkat T细胞内自由Ca^2+浓度上升的幅度显著低于野生型Jurkat T细胞.ELISA实验结果显示,与野生型Jurkat T细胞相比,Kcna3敲除Jurkat T细胞IL-2水平显著下降(P<0.001).本研究成功利用CRISPR/Cas9系统靶向敲除Jurkat T细胞Kcna3,有力证明Kv1.3介导了Jurkat T细胞的免疫炎症反应,为深入研究Kv1.3通道的病理生理功能提供了新的细胞模型. 展开更多

关键词 CRISPR/Cas9 基因敲除 jurkat T细胞 Kcna3

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CD45RON-糖基化位点对galectin-3结合CD45RO突变体转染细胞的影响 被引量：1

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作者 薛婧 高锡强 +1 位作者 傅春燕 魏强 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2013年第9期1165-1170,共6页

目的构建CD45RO不同N-糖基化位点突变的T细胞株,并检测其与galectin-3的结合情况。方法采用N→Q定点突变技术分别去除CD45RO的11个N-糖基化位点,制备单个N-糖基化位点缺失的CD45RO,然后将其导入慢病毒表达载体pWPXL中,11个携带单个N-糖... 目的构建CD45RO不同N-糖基化位点突变的T细胞株,并检测其与galectin-3的结合情况。方法采用N→Q定点突变技术分别去除CD45RO的11个N-糖基化位点,制备单个N-糖基化位点缺失的CD45RO,然后将其导入慢病毒表达载体pWPXL中,11个携带单个N-糖基化位点缺失的CD45RO重组慢病毒质粒与慢病毒包装质粒psPAX2和MD2.G共转染293T细胞,将包装重组慢病毒感染CD45-的J45.01细胞,流式分选后获得11株分别表达CD45RO单个N-糖基化位点缺失的J45.01 T细胞株。通过RT-PCR和流式细胞术分别从RNA水平和蛋白水平验证CD45RO突变体的转录和表达,应用流式细胞术检测CD45RO突变细胞株与galectin-3的结合情况。结果成功构建了11个CD45RO单个N-糖基化位点缺失的T细胞株,各突变细胞株能稳定表达突变基因,经测序再次证实突变位点正确,CD45RO突变体能稳定表达于细胞表面。galectin-3与N327Q突变细胞的结合明显增强,与N36Q突变细胞和N217Q突变细胞的结合明显减弱。结论 CD45RO N-糖基化位点对galectin-3与CD45RO-J45.01细胞的结合有调节作用。 展开更多

关键词 半乳糖凝集素-3 结合 N-糖基化位点 CD45RO jurkatT细胞

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hPMSCs对白血病细胞Jurkat T表面CD分子表达的影响及机制研究 被引量：1

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作者 丁瑞松 胡雯 +1 位作者 黄盼盼 胡涛 《滨州医学院学报》 2021年第5期327-332,共6页

目的探究人胎盘源间充质干细胞(human placenta derived mesenchymal stromal cells,hPMSCs)对人急性淋巴白血病细胞(Jurkat T)表面CD4、CD28及CD175表达的影响及机制。方法将hPMSCs与Jurkat T细胞共培养,采用FCM检测共培养前后Jurkat ... 目的探究人胎盘源间充质干细胞(human placenta derived mesenchymal stromal cells,hPMSCs)对人急性淋巴白血病细胞(Jurkat T)表面CD4、CD28及CD175表达的影响及机制。方法将hPMSCs与Jurkat T细胞共培养,采用FCM检测共培养前后Jurkat T细胞表面CD4、CD28、CD175的表达水平;Western blot检测Cosmc蛋白表达水平,荧光法检测T-合酶(T-synthase)活性,细胞O-糖组扩增技术(Cellular O-glycome Reporter/Amplifition,CORA)检测O-糖组变化。结果hPMSCs O-糖组结构较复杂,表达核心1来源的O-糖链结构(m/z955.4、1129.5、1316.6)及核心2来源的O-糖链结构(m/z1217.6、1648.7、1782.8、1939.9、2058.0、2563.2);Jurkat T细胞不表达核心1及核心2来源的O-糖链。与hPMSCs共培养后,Jurkat T细胞表面CD4表达增高,CD28、CD175表达降低;Cosmc蛋白表达增多,T-合酶活性增高,表达核心1来源的O-聚糖结构(m/z955.4,1316.6)。结论hPMSCs可通过上调Cosmc蛋白、T-合酶活性,改变Jurkat T细胞O-糖基化状态影响其表面CD4、CD28及CD175表达。 展开更多

关键词 人胎盘源间充质干细胞 人急性淋巴白血病细胞 分子伴侣 免疫调节 O-糖基化

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