ipt基因种子特异表达载体的构建及转基因大豆的获得

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作者 廉玉利 皮照兴 刘守华 《辽宁农业科学》 2016年第6期26-31,共6页

细胞分裂素是重要的植物激素,它对植物的生长发育具有重要的调控作用。通过基因工程技术提高内源细胞分裂素在大豆种子中的含量,诱导营养物质向种子定向运输,可提高大豆的灌浆效率,为增加作物产量提供了新的研究方向。ipt基因编码的异... 细胞分裂素是重要的植物激素,它对植物的生长发育具有重要的调控作用。通过基因工程技术提高内源细胞分裂素在大豆种子中的含量,诱导营养物质向种子定向运输,可提高大豆的灌浆效率,为增加作物产量提供了新的研究方向。ipt基因编码的异戊烯转移酶是催化AMP转化为细胞分裂素的关键酶,将ipt基因与大豆种子发育中后期特异性表达的β-伴球蛋白α-亚基专一启动子(7ap)融合,构建了植物表达载体pCAMBIA33017αp-ipt-CaMV35 3'ULR,并通过农杆菌介导转化大豆。经草铵膦抗性筛选、PCR、GUS组织化学染色及Southern Blot检测,证实外源基因以单拷贝的形式整合进大豆基因组,共获得8株转基因大豆。 展开更多

关键词 细胞分裂素 异戊烯基转移酶基因 大豆 遗传转化

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根癌农杆菌对感染植原体的泡桐组培苗症状的影响 被引量：6

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作者 田国忠 朱水芳 +2 位作者 罗飞 李怀方 裘维蕃 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2001年第3期258-264,共7页

采用含有激素合成相关基因的根癌农杆菌 ,伤口接种已感染植原体的泡桐丛枝组培苗和健康组培苗 ,结果发现对丛枝苗的致瘤能力明显低于健康对照苗 ,且被接种病苗的丛枝症状缓解。从健苗获得的 T- DNA转化泡桐瘤组织细胞能在无激素培养基... 采用含有激素合成相关基因的根癌农杆菌 ,伤口接种已感染植原体的泡桐丛枝组培苗和健康组培苗 ,结果发现对丛枝苗的致瘤能力明显低于健康对照苗 ,且被接种病苗的丛枝症状缓解。从健苗获得的 T- DNA转化泡桐瘤组织细胞能在无激素培养基上稳定生长和连续继代培养 2年以上 ,说明瘤组织细胞自身已获得了细胞分裂素和生长素合成能力。根据已报道的根癌农杆菌株系p Til5955T- DNA的异戊烯基转移酶基因 ( ipt)的保守序列 ,设计了一对引物 ( CYT和 CYT′) ,用多聚酶链式反应 ( PCR)扩增了我国杨树致瘤农杆菌 ipt基因部分序列 ( 4 2 7bp片段 ) ,也从遗传转化的两个泡桐无性系瘤组织 At- ZH和 At- T35扩增出此特异片段 ,从而进一步肯定了 T- DNA已被整合到泡桐的染色体上 ,表明泡桐易于通过 Ti质粒载体途径进行基因转移操作 ,但用此引物未能从泡桐、甘薯健株和感染植原体的组培病苗扩增出相应的 4 2 7bp特异片段。当用此遗传转化瘤组织嫁接病苗时 ,可减轻丛枝症状的严重度 ,延长病苗的存活时间和诱导病株生根 。 展开更多

关键词 根癌农杆菌 泡桐丛枝病植原体 病害症状 异戊烯基转移酶基因 组培苗 PCR

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ipt基因在植物基因工程中的应用 被引量：2

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作者 陈梦莹 陈祥福 +5 位作者 崔萌 魏娟娟 潘阳露 潘宇 李金华 张兴国 《长江蔬菜》 2014年第16期9-13,共5页

异戊烯基转移酶IPT是细胞分裂素生物合成过程中的限速酶,其编码基因ipt已被克隆并得到广泛应用。简要介绍了在植物遗传转化中控制ipt表达的启动子,综述了ipt在植物基因工程中的应用,并分析了目前ipt基因在植物基因工程应用中存在的一些... 异戊烯基转移酶IPT是细胞分裂素生物合成过程中的限速酶,其编码基因ipt已被克隆并得到广泛应用。简要介绍了在植物遗传转化中控制ipt表达的启动子,综述了ipt在植物基因工程中的应用,并分析了目前ipt基因在植物基因工程应用中存在的一些问题。 展开更多

关键词 异戊烯基转移酶基因(ipt) 植物基因工程

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黄瓜细胞分裂素合成关键酶IPT基因家族序列特征及其表达分析 被引量：7

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作者 张停林 李季 +3 位作者 崔利 苏芃 徐建 陈劲枫 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期58-68,共11页

为了分析黄瓜 IPT 家族基因,以及黄瓜 IPT 基因 CsIPT 与果实发育的关系,以黄瓜单性结实自交系‘EC1’和非单性结实自交系‘8419s-1’为试材,应用荧光定量 PCR 技术,在分析不同器官中CsIPT 表达特征的基础上,寻找果实发育中的作用基因,... 为了分析黄瓜 IPT 家族基因,以及黄瓜 IPT 基因 CsIPT 与果实发育的关系,以黄瓜单性结实自交系‘EC1’和非单性结实自交系‘8419s-1’为试材,应用荧光定量 PCR 技术,在分析不同器官中CsIPT 表达特征的基础上,寻找果实发育中的作用基因,进一步分析这些基因在果实发育过程中的表达特征。结果表明:8 个黄瓜 IPT 基因(CsIPT1 ～ CsIPT8)核苷酸相似性在 17.3% ～ 33.2%范围内,氨基酸长度在 280 ～ 504 AA 之间,具有共同的 ATP/GTP 结合功能域[(A,G)-X4-G-K-(S,T)],CsIPT4 氨基酸序列中包含有一个锌指基序(C-X2-C-X12,18-H-X5-H)类似序列;黄瓜幼果中 CsIPT3、CsIPT5、CsIPT7 和 CsIPT8表达水平较高;CsIPT1、CsIPT3、CsIPT4 和 CsIPT5 的表达量在未发育的果实中有增加的趋势,CsIPT2和 CsIPT8 在未发育的果实中表达基本无变化,而在授粉后发育的果实中表达量很高,说明这两个基因可能与授粉后黄瓜果实发育调控有关。此外,CsIPT2 在天然单性结实材料‘EC1’果实发育早期表达较高,推测其在黄瓜单性结实果实发育中发挥着重要作用。 展开更多

关键词 黄瓜 单性结实 IPT 基因表达 荧光定量PCR

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异戊烯基转移酶基因在转基因烟草中的特异性表达 被引量：1

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作者 马庆虎 张韧 HigginsThomasJV 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 1994年第5期339-344,共6页

来自农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍ ｅｆａｃｉｅｎｓ）的细胞分裂素生物合成基因——异戊烯基转移酶基因（ｉｐｔ）与矮牵牛（Ｐｅｔｕｎｉａ ｈｙｂｒｉｄａ Ｖｉｌｍ ．）中的磷酸核酮糖羧化酶小亚基启动子（ＳＳＵ）... 来自农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍ ｅｆａｃｉｅｎｓ）的细胞分裂素生物合成基因——异戊烯基转移酶基因（ｉｐｔ）与矮牵牛（Ｐｅｔｕｎｉａ ｈｙｂｒｉｄａ Ｖｉｌｍ ．）中的磷酸核酮糖羧化酶小亚基启动子（ＳＳＵ）融合后转入烟草（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔａｂａｃｕｍ Ｌ．）。在转基因烟草中研究了这种嵌合基因的特异性表达，并且测定了内源细胞分裂素水平的变化。结果表明，矮牵牛的ＳＳＵ 展开更多

关键词 异戊烯基 转移酶基因 转基因烟草

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烟草内源细胞分裂素变化与植株形态发育的初步研究 被引量：4

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作者 李朝霞 吴国智 +1 位作者 姜洋 肖尊安 《北京师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期263-267,共5页

农杆菌介导将异戊烯基转移酶基因(isopentenyl transferase,ipt)导入烟草SD株系的叶肉细胞,经过抗性筛选和鉴定,获得转基因植株.酶联免疫吸附(ELISA)测定叶片内源玉米素核苷(ZR)、异戊烯基腺苷(iPA)和吲哚乙酸(IAA)的质量分数.结果表明... 农杆菌介导将异戊烯基转移酶基因(isopentenyl transferase,ipt)导入烟草SD株系的叶肉细胞,经过抗性筛选和鉴定,获得转基因植株.酶联免疫吸附(ELISA)测定叶片内源玉米素核苷(ZR)、异戊烯基腺苷(iPA)和吲哚乙酸(IAA)的质量分数.结果表明:转基因株系的ZR和iPA的质量分数w不同程度地升高,IAA水平随之升高.高水平细胞分裂素导致叶片的气孔密度增加、气孔长度和花型大小减小,以及花粉萌发率降低.当w(iPA+ZR)与w(IAA)的比值大于2时,成年植株上部侧枝茎端生长发育异常,出现丛生状小叶.本文讨论了细胞分裂素水平和细胞分裂素与生长素的比值对转基因烟草生长发育的影响. 展开更多

关键词 烟草 异戊烯基转移酶基因 细胞分裂素 生长素

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转基因烟草中过量生长素对叶片生长发育的影响 被引量：3

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作者 李朝霞 殷娴 +2 位作者 江一希 姜洋 肖尊安 《北京师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期369-373,共5页

分别构建了iaaM、iaaM和ipt共表达植物转化载体,农杆菌介导转化烟草,RT-PCR鉴定转基因株系,ELISA方法分析叶片IAA、IPA和ZR含量.结果表明:叶片IAA含量高低依次为株系iaaM10、iaaM_ipt3和野生型;而细胞分裂素含量高低依次为iaaM_ipt3、... 分别构建了iaaM、iaaM和ipt共表达植物转化载体,农杆菌介导转化烟草,RT-PCR鉴定转基因株系,ELISA方法分析叶片IAA、IPA和ZR含量.结果表明:叶片IAA含量高低依次为株系iaaM10、iaaM_ipt3和野生型;而细胞分裂素含量高低依次为iaaM_ipt3、野生型和iaaM10.随着内源IAA水平升高,气孔密度减小、保卫细胞长度增加、栅栏组织细胞增大和叶片厚度增加.讨论了生长素和细胞分裂素含量对叶片细胞生长发育的影响. 展开更多

关键词 烟草 色氨酸单氧化酶基因 异戊烯基转移酶基因 生长素 细胞分裂素

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异戊烯基转移酶基因克隆及植物表达载体构建 被引量：1

8

作者 钱秋芳 王贵学 +2 位作者 蔡平钟 张志雄 王闵霞 《重庆大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期209-211,215,共4页

根据已知的异戊烯基转移酶基因保守序列设计引物,以根癌农杆菌C58的Ti质粒为模板,采用PCR方法扩增获得了异戊烯基转移酶基因723bp的片段。将该片段回收,连接到pMD18-T载体测序,测序片段经酶切回收后克隆到植物表达载体pB I121中,转化至... 根据已知的异戊烯基转移酶基因保守序列设计引物,以根癌农杆菌C58的Ti质粒为模板,采用PCR方法扩增获得了异戊烯基转移酶基因723bp的片段。将该片段回收,连接到pMD18-T载体测序,测序片段经酶切回收后克隆到植物表达载体pB I121中,转化至大肠杆菌感受态细胞DH5α。将阳性质粒转化农杆菌感受态细胞EHA105,经菌液和质粒PCR分析,获得了真核表达载体pB I121-ipt,这为异戊烯基转移酶基因功能的进一步研究提供了基础。 展开更多

关键词 异戊烯基转移酶基因 克隆 真核植物表达载体

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不同启动子调控下的异戊烯基转移酶(ipt)基因在烟草中的表达 被引量：2

9

作者 麻密 周达锋 +1 位作者 潜忠兴 林忠平 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1993年第9期27-30,共4页

关键词 基因 转基因 烟草 植物

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特异性启动子在异戊烯基转移酶基因转化中的应用 被引量：4

10

作者 理莎莎 朱道圩 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第14期5798-5800,共3页

综述了特异性启动子在异戊烯基转移酶基因转化中应用的研究进展,分析了存在的问题,并对今后的研究提出了建议。

关键词 异戊烯基转移酶基因 特异性启动子 细胞分裂素

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黄瓜异戊烯基转移酶基因(CsIPT2)的克隆及特征分析 被引量：3

11

作者 张停林 崔利 +4 位作者 李季 郭勤卫 娄群峰 徐建 陈劲枫 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期21-26,共6页

为了分析黄瓜异戊烯基转移酶基因(CsIPT2)在果实发育不同模式中的转录变化以及对不同激素的转录应答情况,对CsIPT2基因进行了克隆和序列分析,再利用荧光定量PCR技术分析该基因在黄瓜单性结实自交系EC1和非单性结实自交系8419s-1果实发... 为了分析黄瓜异戊烯基转移酶基因(CsIPT2)在果实发育不同模式中的转录变化以及对不同激素的转录应答情况,对CsIPT2基因进行了克隆和序列分析,再利用荧光定量PCR技术分析该基因在黄瓜单性结实自交系EC1和非单性结实自交系8419s-1果实发育过程中的表达情况,并分析了CsIPT2对不同激素的应答反应。结果表明:CsIPT2基因全长843 bp,共编码280个氨基酸,蛋白空间结构模型与蛇麻IPT蛋白极其相似。该基因不仅在授粉后的黄瓜果实发育中表达量上调,而且在黄瓜天然单性结实前期和人工诱导的单性结实后期表达量均有增加,推测该基因在促进黄瓜果实发育过程中发挥着重要作用,同时也可能参与了黄瓜单性结实的调控过程。GA、ET、6-BA、ABA和NAA 5种激素都能够诱导该基因的上调表达。其中GA处理后3 h基因表达量最高,ET、6-BA、ABA和NAA诱导的表达峰值出现在处理后6 h。随着NAA处理浓度的增加基因的表达量上调幅度增大。 展开更多

关键词 黄瓜 黄瓜异戊烯基转移酶基因(CsIPT2) 克隆 表达分析

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茎瘤芥异戊烯基转移酶家族基因全基因组鉴定及表达分析 被引量：6

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作者 蔡兆明 程春红 +1 位作者 廖静静 王殿东 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期38-47,共10页

该研究以茎瘤芥栽培品种‘永安小叶’为实验材料,在全基因组水平对茎瘤芥基因组中异戊烯基转移酶(IPT)家族基因成员进行鉴定;通过荧光定量PCR检测各基因在不同组织、盐胁迫和根肿菌胁迫条件下的表达模式。结果显示:(1)在茎瘤芥基因组中... 该研究以茎瘤芥栽培品种‘永安小叶’为实验材料,在全基因组水平对茎瘤芥基因组中异戊烯基转移酶(IPT)家族基因成员进行鉴定;通过荧光定量PCR检测各基因在不同组织、盐胁迫和根肿菌胁迫条件下的表达模式。结果显示:(1)在茎瘤芥基因组中共鉴定到27个IPT家族基因,分布在14条染色体上,它们在系统进化树中可聚类为7个分支。(2)大部分IPT家族基因主要在茎瘤芥的根和茎中表达,在叶片、花和种荚中表达量相对较低。BjuB006281在茎中的表达水平最高,BjuA027211、BjuB010173、BjuB010174和BjuA001839在根中的表达水平较高。(3)大部分的IPT基因表达受盐胁迫抑制,BjuB006281、BjuA036403、BjuB010173、BjuB026254在盐胁迫12~48 h显著下调表达;BjuB022918和BjuB007352则在盐胁迫24~48 h显著下调表达。(4)大部分茎瘤芥IPT基因在12 h受到根肿菌侵染的显著诱导,其中BjuB006281、BjuA014415、BjuB022918在侵染后12 h的表达水平为0 h对照的15倍以上。该研究鉴定出多个响应盐胁迫和根肿菌胁迫的IPT基因,为进一步研究他们的基因功能奠定了基础。 展开更多

关键词 茎瘤芥 异戊烯基转移酶 盐胁迫 根肿菌 基因家族

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