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一种简易高效的大鼠胰岛分离纯化方法 被引量:18
1
作者 张桦 蔡德鸿 +2 位作者 徐春生 陈宏 刘宏 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2001年第2期129-131,F003,共4页
目的探索一种高效、高纯度大鼠胰岛分离纯化方法,并研究纯化后的胰岛细胞在体内外环境中的基本生物学功 能状况。方法采用 Hanks液经胰管内注射法机械性扩张破坏大鼠胰腺的腺泡组织点后将其剪碎置于含 1g/L胶原酶 的 Hank... 目的探索一种高效、高纯度大鼠胰岛分离纯化方法,并研究纯化后的胰岛细胞在体内外环境中的基本生物学功 能状况。方法采用 Hanks液经胰管内注射法机械性扩张破坏大鼠胰腺的腺泡组织点后将其剪碎置于含 1g/L胶原酶 的 Hanks 液中,于 37℃中静止消化 25~30min后移入含 10%胎牛血清的 RMPI-1640完全培养液中,24℃短期培养, Ficoll-400非连续密度梯度液离心纯化胰岛,纯化后的胰岛进行异种移植。结果经Ficoll-400纯化后,平均每只成年 Wistar大鼠胰腺能获得 920~l 230个胰岛,纯度可达 98%以上;在葡萄糖刺激下胰岛素释放量约为基础分泌水平的 2.2 倍(P<0.001)纯化后的胰岛异种移植可逆转实验性糖尿病BALB/C小鼠的高血糖平均达(8.7±1.6)d。结论胰腺消化 物经短期培养后再进行胰岛纯化的方法具有耗酶量少、技术难度小、胰岛纯度和产率及活率高的特点,是一种简便易行 的高效分离纯化方法. 展开更多
关键词 胰岛 纯化 培养 胰岛移植 分离 大鼠
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Pancreatic islet transplantation 被引量:7
2
作者 Hirofumi Noguchi 《World Journal of Gastrointestinal Surgery》 SCIE CAS 2009年第1期16-20,共5页
Type 1 diabetes mellitus is an autoimmune disease,which results in the permanent destruction of β-cells of the pancreatic islets of Langerhans.While exogenous insulin therapy has dramatically improved the quality of ... Type 1 diabetes mellitus is an autoimmune disease,which results in the permanent destruction of β-cells of the pancreatic islets of Langerhans.While exogenous insulin therapy has dramatically improved the quality of life,chronic diabetic complications develop in a substantial proportion of subjects and these complications generally progress and worsen over time.Although intensive insulin therapy has proven effective to delay and sometimes prevent the progression of complications such as nephropathy,neuropathy or retinopathy,it is difficult to achieve and maintain long term in most subjects.Reasons for this diff iculty include compliance issues and the increased risk of severe hypoglycemic episodes,which are generally associated with intensification of exogenous insulin therapy.Clinical studies have shown that transplantation of pancreas or purified pancreatic islets can support glucose homeostasis in type 1 diabetic patients.Islet transplantation carries the special advantages of being less invasive and resulting in fewer complications compared with the traditional pancreas or pancreas-kidney transplantation.However,islet transplantation efforts have limitations including the short supply of donor pancreata,the paucity of experienced islet isolation teams,side effects of immunosuppressants and poor long-term results.The purpose of this article is to review recent progress in clinical islet transplantation for the treatment of diabetes. 展开更多
关键词 PANCREATIC islet TRANSPLANTATION islet isolation PANCREATIC β-cells islet REGENERATION
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大鼠胰岛分离纯化和功能分析的研究 被引量:9
3
作者 刘翠萍 徐宽枫 +2 位作者 武晓泓 茅晓东 刘超 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期242-245,F0004,共5页
目的:探讨大鼠胰岛分离纯化的方案。方法:采用胰管内灌注胶原酶Ⅴ消化、Histopaque-1077密度梯度离心分离纯化20只雄性SD大鼠胰岛。椎虫蓝染色判断胰岛存活率,双硫腙染色后计数胰岛,葡萄糖刺激胰岛素释放实验评估胰岛功能,同种异体胰岛... 目的:探讨大鼠胰岛分离纯化的方案。方法:采用胰管内灌注胶原酶Ⅴ消化、Histopaque-1077密度梯度离心分离纯化20只雄性SD大鼠胰岛。椎虫蓝染色判断胰岛存活率,双硫腙染色后计数胰岛,葡萄糖刺激胰岛素释放实验评估胰岛功能,同种异体胰岛门静脉移植治疗5只链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠,监测血糖变化。结果:分离纯化后平均胰岛得率为(646±67)个/大鼠,存活率达到90%以上。新鲜分离的胰岛呈椭圆或圆形,悬浮于培养液面,胞膜光滑完整,直径大于150μm的细胞团占95%以上。葡萄糖刺激的胰岛素释放试验结果表明:第1、3、5天胰岛的刺激指数分别为2.6倍、1.7倍和1.4倍,两组间低糖和高糖的胰岛分泌量差异均有显著性(P<0.05)。胰岛门静脉移植术后,第2天大鼠血糖降至11.1mmol/L,8天内血糖可控制在15mmol/L以下,随后血糖逐步升高。结论:采用胰管内灌注胶原酶Ⅴ消化联合Histopaque-1077分离纯化是一种较好的大鼠胰岛分离方法,胰岛得率较高且功能良好。 展开更多
关键词 胰岛 分离 纯化 移植
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成年猪胰岛的分离与纯化 被引量:8
4
作者 张伟杰 SchrezenmeirJ. 《中华器官移植杂志》 CAS CSCD 2000年第6期341-343,共3页
目的 研究成年猪胰岛的分离与纯化方法。方法 胰岛的分离采用导管内连续灌注胶原酶消化法 ,纯化采用Nycodenz连续密度梯度离心。 结果 消化后每个胰腺平均可获得 (3970 0 0±185 96 3)个胰岛或 (986 0± 3 0 43)个胰岛 /克... 目的 研究成年猪胰岛的分离与纯化方法。方法 胰岛的分离采用导管内连续灌注胶原酶消化法 ,纯化采用Nycodenz连续密度梯度离心。 结果 消化后每个胰腺平均可获得 (3970 0 0±185 96 3)个胰岛或 (986 0± 3 0 43)个胰岛 /克胰腺组织 ,纯化后为 (1480 0 0± 890 0 0 )个胰岛 /胰腺或(3 75 0± 493)个胰岛 /克胰腺组织 ,纯度 >95 %。体外培养示胰岛对糖刺激反应良好 ;免疫组织化学检查证实胰岛细胞存活。结论 经本法获得的胰岛具有较高的纯度及良好的功能 ,可为临床提供可靠的移植物来源。 展开更多
关键词 胰岛 分离 纯化 胰岛移植
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纳米技术在封装胰岛移植物中的研究
5
作者 余梓桐 张微尘 程颖 《中华器官移植杂志》 CAS 2024年第3期194-198,共5页
胰岛移植是治疗1型糖尿病的最佳手段,但移植的胰岛细胞容易因免疫反应等原因而大量丢失,导致胰岛移植远期疗效不佳。胰岛封装是将胰岛细胞包裹在半透性的材料中,以达到保护胰岛细胞分泌胰岛素功能、减少胰岛细胞凋亡、减轻免疫反应的作... 胰岛移植是治疗1型糖尿病的最佳手段,但移植的胰岛细胞容易因免疫反应等原因而大量丢失,导致胰岛移植远期疗效不佳。胰岛封装是将胰岛细胞包裹在半透性的材料中,以达到保护胰岛细胞分泌胰岛素功能、减少胰岛细胞凋亡、减轻免疫反应的作用。而纳米技术能对封装材料进行纳米级控制,更好的"隔离"胰岛细胞和外界环境,是延长胰岛细胞存活时间的关键技术。本文简要介绍了胰岛封装技术及纳米技术,探讨不同纳米技术在封装胰岛移植物的优缺点,并对纳米技术将来在胰岛移植诊断与治疗方面进行展望,旨在延长胰岛细胞存活时间,提高胰岛素的分泌,改善胰岛移植疗效。 展开更多
关键词 纳米技术 胰岛移植 胰岛封装 免疫隔离
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成年猪胰岛的分离和纯化 被引量:7
6
作者 章乐虹 杨学伟 +1 位作者 刘应生 胡以则 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 2001年第11期10-11,共2页
目的 :观察胶原酶消化法对成年猪胰岛的分离效果。方法 :采用胶原酶胰导管注射负荷技术 ,静止消化与物理消化相结合消化分离成年猪胰腺脾叶 ;不连续密度梯度比重离心纯化 ,胰岛素释放试验检测胰岛细胞功能。结果 :胰岛收获量为 8339... 目的 :观察胶原酶消化法对成年猪胰岛的分离效果。方法 :采用胶原酶胰导管注射负荷技术 ,静止消化与物理消化相结合消化分离成年猪胰腺脾叶 ;不连续密度梯度比重离心纯化 ,胰岛素释放试验检测胰岛细胞功能。结果 :胰岛收获量为 8339± 2 30 5胰岛数 /g胰腺 ,纯化后胰岛数 / g胰腺为 436 7± 1876 ,纯度为 85 %,胰岛素释放反应良好。结论 :采用本方法消化分离成年猪胰岛 ,胰岛细胞产量、纯度较高 ,功能良好。 展开更多
关键词 成年猪 胰岛细胞 分离 胰岛移植 糖尿病
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大量人胰岛分离技术的改进及相应胰岛功能的检测 被引量:7
7
作者 宋振顺 顾克菊 张建国 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第8期920-922,共3页
目的 通过对人胰岛分离技术的改进以获得大量高活力胰岛并检测其功能。方法采用经典及改良技术分离、纯化28例人胰岛。胰岛收获量以胰岛当量(IEQ)表示。胰岛功能测定分别为体外测定胰岛素/DNA比率、静止葡萄糖刺激试验(SGS)及将胰岛移... 目的 通过对人胰岛分离技术的改进以获得大量高活力胰岛并检测其功能。方法采用经典及改良技术分离、纯化28例人胰岛。胰岛收获量以胰岛当量(IEQ)表示。胰岛功能测定分别为体外测定胰岛素/DNA比率、静止葡萄糖刺激试验(SGS)及将胰岛移植至糖尿病裸小鼠的体内功能鉴定并行糖耐量试验,连续测血糖水平及其体内C肽浓度。结果 前13例采用经典方法,平均每个胰腺收获49123 IEQs,平均846 IEQs/g胰腺组织,平均纯度为87%。改进技术后15例的分离结果则分别为:501813 IEQs/胰腺,7003 IEQ/g胰腺组织及纯度89%。体外胰岛素刺激试验结果表明分离纯化后的人胰岛有正常功能,将12次分离得到的胰岛分别移植至34只糖尿病裸鼠肾包膜下,其中29只糖尿病裸鼠于12h内血糖恢复正常且糖耐量试验接近正常鼠,血中C肽水平亦接近正常。结论 采用改进的人胰岛分离方法,可以获得大量高活力的具有正常功能的胰岛,为同种异体胰岛移植用于临床奠定了必要的基础。 展开更多
关键词 胰岛分离 正常 胰岛功能 糖尿病 糖耐量试验 体内 胰岛移植 功能鉴定 DNA 分离纯化
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一种简便分离纯化大鼠胰岛方法的探索 被引量:5
8
作者 郝丽萍 胡学锋 +3 位作者 曲巍 赵要武 杨年红 孙秀发 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期69-71,共3页
 目的 探索可大量获取纯化大鼠胰岛的最佳方法。方法 采用胰管内灌注生理盐溶液 KRBB, 外置胶原酶消化法及用单核细胞分离液Histopaque 1077纯化胰岛。结果 成年Wistar大鼠胰腺消化后能获得 (540±84) 胰岛/胰腺, 纯化后获得 (3...  目的 探索可大量获取纯化大鼠胰岛的最佳方法。方法 采用胰管内灌注生理盐溶液 KRBB, 外置胶原酶消化法及用单核细胞分离液Histopaque 1077纯化胰岛。结果 成年Wistar大鼠胰腺消化后能获得 (540±84) 胰岛/胰腺, 纯化后获得 (335±81) 胰岛/胰腺, 纯度可达90%。纯化后的胰岛培养上清液中未检测到胰淀粉酶。胰岛培养1周后, 胰岛素分泌量仍保持较旺盛状态。结论 本方法能获得大量纯度较高且活性好的胰岛, 是一种简便高效的胰岛分离方法。 展开更多
关键词 胰岛分离 成年WISTAR大鼠 胰腺 分离纯化 胰管 法能 胰岛素分泌量 胶原酶消化法 生理 保持
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胰岛移植的研究进展 被引量:2
9
作者 董丽 段宇 刘超 《医学综述》 2006年第1期43-44,共2页
糖尿病是由多种原因引起的β细胞功能减退,致胰岛素分泌相对或绝对不足引发的糖代谢紊乱,最终导致全身多器官的损害。众所周知,胰岛素的应用虽明显改善了患者的糖代谢紊乱,但无法阻止糖尿病各种并发症的发生及发展,而在体内建立内源性... 糖尿病是由多种原因引起的β细胞功能减退,致胰岛素分泌相对或绝对不足引发的糖代谢紊乱,最终导致全身多器官的损害。众所周知,胰岛素的应用虽明显改善了患者的糖代谢紊乱,但无法阻止糖尿病各种并发症的发生及发展,而在体内建立内源性的胰岛素分泌系统才能治愈糖尿病。全胰移植可有效治疗糖尿病,但因其手术创伤大、病死率高、免疫原性大等缺点不再受到人们的青睐,而胰岛移植具有操作简单、创伤小、并发症少等优点,近年来逐渐受到医学界的重视,成为又一新的研究热点。 展开更多
关键词 胰岛移植 Edmonton方案 胰岛分离 胰岛纯化 糖尿病 释放酶 类胰岛β细胞
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年龄对非糖尿病捐献者胰岛制备过程和功能的影响
10
作者 刘尧娟 丁雪洁 +5 位作者 孙鹏 张博雅 刘腾丽 王乐 王树森 邹家琦 《哈尔滨医科大学学报》 CAS 2023年第6期649-652,共4页
目的分析不同年龄捐献者胰腺胰岛制备产量和功能的特点。方法选取2015年6月~2019年12月天津市第一中心医院105例胰腺,均来自非糖尿病器官捐献者,按照<40岁,≥40岁进行分组,其中<40岁组38例,≥40岁组67例。胰岛制备在优良生产规范... 目的分析不同年龄捐献者胰腺胰岛制备产量和功能的特点。方法选取2015年6月~2019年12月天津市第一中心医院105例胰腺,均来自非糖尿病器官捐献者,按照<40岁,≥40岁进行分组,其中<40岁组38例,≥40岁组67例。胰岛制备在优良生产规范实验室(good manufacturing practice,GMP)中进行,经过修整,灌注胶原酶,Ricordi消化罐消化,利用连续密度梯度法纯化获得胰岛,检测胰岛产率、活性和葡糖糖刺激的胰岛素分泌能力,评估分离胰岛的数量和质量。结果胰岛纯化前,<40岁组胰岛当量(islet equivalent,IEQ)、IEQ/g较≥40岁组高,差异具有统计学意义(P<0.05),胰岛纯化后<40岁组胰岛个数(islet particle number,IPN)、IPN/g较≥40岁组高,差异具有统计学意义(P<0.01),两组胰岛素分泌差异无统计学意义。结论年轻捐献者可以提高胰岛制备的成功率,非糖尿病年长供者可以获得优质的胰岛。 展开更多
关键词 胰岛分离 Β细胞 年龄 胰岛当量 葡萄糖刺激胰岛素分泌实验
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供体因素和胰腺特点对胰岛制备成功率的影响
11
作者 邹家琦 蔡湘衡 +2 位作者 孙鹏 丁雪洁 王树森 《中华内分泌代谢杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期421-425,共5页
目的通过分析供体胰腺特点与胰岛制备成功率的相关性,探讨适合中国人胰岛移植的供体筛选标准,为优化胰岛制备方案和胰岛移植效果提供有力依据。方法根据胰岛制备成功否,将纳入研究的113例胰岛制备样本分为成功组(胰岛产量IEQ≥250000,... 目的通过分析供体胰腺特点与胰岛制备成功率的相关性,探讨适合中国人胰岛移植的供体筛选标准,为优化胰岛制备方案和胰岛移植效果提供有力依据。方法根据胰岛制备成功否,将纳入研究的113例胰岛制备样本分为成功组(胰岛产量IEQ≥250000,且纯度≥30%,且活性≥80%)和失败组(胰岛产量IEQ<250000或纯度<30%或活性<80%)。利用Ricordi方法消化胰腺,连续密度梯度法纯化胰岛,检测胰岛制备效率、胰岛活性、胰岛纯度。结果胰岛制备成功组的供体年龄显著低于失败组(t=2.479,P=0.015),且Pearson相关性分析显示,在本研究纳入标准所覆盖的年龄范围内,供体年龄与胰岛制备产量(IEQ)存在显著相关性(r=-0.214,P=0.048);胰岛制备成功组供体胰腺胰周脂肪较多(z=-2.007,P=0.045),且胰腺消化率(t=2.133,P=0.035)和胰岛回收率(t=5.912,P=0.001)显著高于失败组。结论在本研究纳入标准所覆盖的年龄、胰腺重量和胰周脂肪的范围内,供体年龄与胰岛制备产量(IEQ)呈负相关,胰腺重量越大、胰周脂肪越多,胰岛制备成功率越高。 展开更多
关键词 胰岛移植 供体年龄 纳入标准 筛选标准 胰腺 供体因素 制备效率
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大鼠胰岛分离和纯化 被引量:4
12
作者 汤志刚 王春友 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 2004年第11期109-111,共3页
目的观察胶原酶消化法对大鼠胰岛的分离结果.方法用胶原酶法分离、Ficoll400 密度梯度离心法纯化胰岛.用DTZ法判定胰岛的纯度;用AO/PI法判定胰岛存活率;用胰岛素释放试验和移植糖尿病大鼠法判定胰岛功能.结果纯化后的胰岛收获量为(500-7... 目的观察胶原酶消化法对大鼠胰岛的分离结果.方法用胶原酶法分离、Ficoll400 密度梯度离心法纯化胰岛.用DTZ法判定胰岛的纯度;用AO/PI法判定胰岛存活率;用胰岛素释放试验和移植糖尿病大鼠法判定胰岛功能.结果纯化后的胰岛收获量为(500-700)个/每只胰腺,胰岛纯度大于85%,活度大于95%,胰岛细胞体外培养液中胰岛素含量在基础相和刺激相为(18.32±3.57)mu/L、(32.25±3.74)mu/L,差异有显著性(P<0.05),胰岛移植后,实验组2天后血糖浓度降至正常,对照组无改变,实验组正常血糖维持时间(5.1±2.4)d.结论胶原酶消化、Ficoll400密度梯度离心法可获得高纯度和活力的大鼠胰岛. 展开更多
关键词 胰岛细胞 分离 纯化
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Recent progress in pancreatic islet transplantation 被引量:2
13
作者 Takashi Kuise Hirofumi Noguchi 《World Journal of Transplantation》 2011年第1期13-18,共6页
Diabetes mellitus remains a major burden.More than 200 million people are affected worldwide,which represents 6%of the world’s population.Type 1 diabetes mellitus is an autoimmune disease,which induces the permanent ... Diabetes mellitus remains a major burden.More than 200 million people are affected worldwide,which represents 6%of the world’s population.Type 1 diabetes mellitus is an autoimmune disease,which induces the permanent destruction of theβ-cells of the pancreatic islets of Langerhans.Although intensive insulin therapy has proven effective to delay and sometimes prevent the progression of complications such as nephropathy,neuropathy or retinopathy,it is difficult to achieve and maintain long term in most subjects.The successes achieved over the last few decades by the transplantation of whole pancreas and isolated islets suggest that diabetes can be cured by the replenishment of deficientβcells.However,islet transplantation efforts have various limitations,including the limited supply of donor pancreata,the paucity of experienced islet isolation teams,side effects of immunosuppressants and poor long term results.The purpose of this article is to review the recent progress in clinical islet transplantation for the treatment of diabetes and to describe the recent progress on pancreatic stem/progenitor cell research,which has opened up several possibilities for the development of new treatments for diabetes. 展开更多
关键词 Type 1 DIABETES PANCREATIC islet TRANSPLANTATION islet isolation Pancreaticβ-cells islet REGENERATION
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人胰岛的分离纯化和功能评价 被引量:3
14
作者 蔡寒青 许世清 +5 位作者 门秀丽 眭维国 张文健 李启东 杨文英 娄晋宁 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期836-840,共5页
目的应用Ricordi人胰岛分离技术分离和纯化人的胰岛,并进行功能和安全性的评价。方法获得6例成人尸体胰腺组织供体,采用胶原酶消化法及密度梯度离心法分离和纯化胰岛,并分析胰岛的数量、纯度和活力。采用免疫荧光法分析胰岛内分泌细... 目的应用Ricordi人胰岛分离技术分离和纯化人的胰岛,并进行功能和安全性的评价。方法获得6例成人尸体胰腺组织供体,采用胶原酶消化法及密度梯度离心法分离和纯化胰岛,并分析胰岛的数量、纯度和活力。采用免疫荧光法分析胰岛内分泌细胞的组成和分布;检测葡萄糖刺激的胰岛素分泌和胰岛移植后的动物血糖水平。并对分离胰岛的安全性指标进行评价。结果分离纯化后的胰岛数量为(22.9±3.1)万IEQ,纯度为(59.0±8.9)%,活力为(89.0±3.0)%。免疫荧光显示,胰岛由4种内分泌细胞组成并呈正常分布。葡萄糖刺激胰岛素释放的刺激指数为8.1±4.0。胰岛移植于糖尿病裸鼠后,血糖在3d后降至正常水平并维持超过30d。分离胰岛样本的各项安全性指标在规定范围之内。结论采用Ricordi人胰岛分离技术分离和纯化的胰岛在形态、结构、数量、纯度、活力、体内外功能以及安全性方面都达到临床胰岛移植的标准,为开展临床胰岛移植奠定了基础。 展开更多
关键词 胰岛移植 糖尿病 胰岛素 分离纯化
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实验动物胰岛细胞的分离纯化 被引量:3
15
作者 李芬 夏雪培 +1 位作者 刘光伟 赵勇 《动物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期63-66,共4页
胰岛移植作为治疗1型糖尿病的有效方法,临床应用前景较好。但是,由于在胰岛移植手术中,有功能的胰岛细胞数量较少,而严重影响其治疗效果。因此,如何提高胰岛分离纯化效果,获取尽可能多的高质量的胰岛,成为胰岛移植手术成败的关键。本文... 胰岛移植作为治疗1型糖尿病的有效方法,临床应用前景较好。但是,由于在胰岛移植手术中,有功能的胰岛细胞数量较少,而严重影响其治疗效果。因此,如何提高胰岛分离纯化效果,获取尽可能多的高质量的胰岛,成为胰岛移植手术成败的关键。本文仅就在采用实验动物分离和纯化胰岛方面的实验经验作以简要介绍。 展开更多
关键词 大鼠 小鼠 胰岛 分离纯化
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小鼠胰岛的分离与纯化 被引量:4
16
作者 李明 陈栋 +1 位作者 李永海 张伟杰 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期206-208,I0002,共4页
目的 探讨稳定、高效的小鼠胰岛细胞的分离纯化方法.方法 采用胆总管内灌注不同浓度胶原酶(分别为0.5、1.0、1.5 g/L)消化胰腺的方法分离BALB/C小鼠胰岛,Ficoll-400不连续密度梯度离心法纯化胰岛.双硫腙(DTZ)对胰岛进行特异性染色... 目的 探讨稳定、高效的小鼠胰岛细胞的分离纯化方法.方法 采用胆总管内灌注不同浓度胶原酶(分别为0.5、1.0、1.5 g/L)消化胰腺的方法分离BALB/C小鼠胰岛,Ficoll-400不连续密度梯度离心法纯化胰岛.双硫腙(DTZ)对胰岛进行特异性染色计算胰岛产量及纯度,葡萄糖刺激释放试验体外测胰岛功能.结果 不同浓度的胶原酶在不同时间内消化胰腺后收获的胰岛数量有较大的差异,其中采用0.5 g/L胶原酶V、38 ℃水浴消化20 min组收获量最大为(230±20)个胰岛细胞团,纯度约为90%.DTZ染色后胰岛呈腥红色,形态完整.葡萄糖刺激释放实验示高糖刺激后胰岛素释放量为低糖刺激后的2.3倍.结论 胶原酶浓度、消化时间和温度是影响小鼠胰岛分离结果的重要因素,当胶原酶浓度为0.5 g/L,消化时间20 min时可获得数量较多,纯度较好的胰岛细胞. 展开更多
关键词 胰岛 分离 纯化
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成人胰岛细胞手工消化与自动消化法的比较研究 被引量:2
17
作者 章乐虹 刘伟峰 +1 位作者 李勇 胡以则 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期695-698,共4页
目的通过改进成人胰岛细胞消化分离技术,探索成人胰岛细胞分离纯化的有效方法。方法分别采用改进的手工消化法(n=12);及采用自制的胰岛自动分离装置(n=10)进行成人胰岛分离。比较两组间胰岛分离产量,胰岛素刺激释放试验检测胰岛细胞功... 目的通过改进成人胰岛细胞消化分离技术,探索成人胰岛细胞分离纯化的有效方法。方法分别采用改进的手工消化法(n=12);及采用自制的胰岛自动分离装置(n=10)进行成人胰岛分离。比较两组间胰岛分离产量,胰岛素刺激释放试验检测胰岛细胞功能。结果自动消化组每克胰腺胰岛产量(6410.55±1871.6)IEQ/g胰腺,明显高于手工消化法(4428.4±1201.7)IEQ/g胰腺(纯化后)(,P<0.01)。自动消化组高糖刺激后胰岛素释放量为(4.31±0.24)μU/insulin/IE/h,刺激指数为(2.52±0.39)μU/IE/h,均高于手工消化组(4.04±0.23)μU/insulin/IE/h(,1.99±0.53)μU/IE/h(,P<0.05)。结论采用自动消化法分离成人胰岛产量较高,功能良好。胰腺自动分离装置可望进一步推广应用。 展开更多
关键词 成人胰岛 胰岛分离 自动消化法
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小鼠胰岛分离与纯化的研究 被引量:3
18
作者 高戈 冯喆 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期553-555,共3页
目的 探讨高效率的小鼠胰岛细胞分离纯化技术.方法 应用胆总管内灌注胶原酶、消化胰腺分离胰岛(灌注法),并与切碎消化胰腺分离胰岛(碎片法)比较;应用碘克沙醇(Iodixanol)不连续密度梯度(Iodixanol组)纯化胰岛,并与Ficoll不连续... 目的 探讨高效率的小鼠胰岛细胞分离纯化技术.方法 应用胆总管内灌注胶原酶、消化胰腺分离胰岛(灌注法),并与切碎消化胰腺分离胰岛(碎片法)比较;应用碘克沙醇(Iodixanol)不连续密度梯度(Iodixanol组)纯化胰岛,并与Ficoll不连续密度梯度(Ficoll组)比较.双硫腙(DTZ)染色观测胰岛的数量和纯度,胰岛素释放试验检测胰岛的分泌功能.结果 灌注法消化后每条胰腺可获得(298.00±15.58)个胰岛,较碎片法(36.00±3.89)个胰岛明显增高,两组间差异有统计学意义(P<0.01).Iodixanol组和Ficoll组纯化后胰岛平均纯度均超过90%,两组间差异无统计学意义(P>0.05).胰岛糖刺激试验于低糖(2.75 mmol/L)刺激时胰岛素分泌量Iodixanol组为(3.120±0.046) μg/L,Ficoll组为(3.060±0.426) μg/L,两组间差异无统计学意义(P>0.05);而高糖(16.50 mmol/L)刺激时,Iodixanol组胰岛素释放量为(11.36±0.82) μg/L,明显高于Ficoll组的(7.98±0.56) μg/L,两组间差异有统计学意义(P<0.05).结论 应用胆总管内灌注消化分离胰岛(灌注法)得到的胰岛更多,应用Iodixanol不连续密度梯度纯化的胰岛生物活性更高,胶原酶灌注消化Iodixanol纯化是小鼠胰岛分离提纯的较好方法. 展开更多
关键词 胰岛 分离 纯化
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成年大鼠胰岛分离纯化的实验研究 被引量:3
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作者 张鑫 高居忠 +1 位作者 王学明 许建军 《首都医科大学学报》 CAS 2003年第3期314-316,共3页
为探讨成年大鼠胰岛分离、纯化的方法 ,为成人胰岛细胞的分离纯化奠定基础 ,采用胰管内注射胶原酶水浴孵化以及不连续密度梯度法进行成年Lewis大鼠胰岛分离纯化 ,并对获得的胰岛细胞通过体外葡萄糖刺激胰岛素分泌实验进行功能活性检测... 为探讨成年大鼠胰岛分离、纯化的方法 ,为成人胰岛细胞的分离纯化奠定基础 ,采用胰管内注射胶原酶水浴孵化以及不连续密度梯度法进行成年Lewis大鼠胰岛分离纯化 ,并对获得的胰岛细胞通过体外葡萄糖刺激胰岛素分泌实验进行功能活性检测。分离后获得 (93 8± 2 1 8)个胰岛细胞 ,染色观察胰岛细胞形态完好。纯化后获得 (80 2±1 81 )个胰岛细胞 ,平均纯度为 (68± 1 1 ) % ,纯化后细胞回收率为 (85 .9± 5 .9) % ,纯化后细胞形态完好。体外葡萄糖刺激胰岛素分泌实验 ,低糖情况下胰岛素分泌量为 (2 .5 3± 0 .1 8)mIU/L ,高糖情况下为 (5 .41± 0 .3 1 )mIU/L ,两者相比有极显著性差异 (P =0 .0 0 1 )。低糖刺激下C肽分泌量为 (7.5 1± 1 .0 9)ng/L ,高糖情况下为 (8.5 6± 1 .0 6)ng/L ,具有极显著性差异 (P =0 .0 0 6)。提示 :采用胰管内胶原酶灌注水浴孵化进行成年大鼠胰岛分离及不连续密度梯度法纯化可获得较多的〔(80 2± 1 81 )个〕形态及功能完好的胰岛细胞 。 展开更多
关键词 成年大鼠 胰岛分离 胰岛纯化 实验 胰岛素 胰岛移植
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一种改良的大鼠胰岛分离方法 被引量:3
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作者 王贵玉 崔云甫 +3 位作者 曹博 韩德恩 胡占良 王志东 《哈尔滨医科大学学报》 CAS 2003年第6期477-479,共3页
目的 寻找并建立一种改良的、实用可靠的大鼠胰岛制备和培养方法。方法 采用胰管内顺行灌注胶原酶溶液 ,静态消化 ,Ficoll不连续密度梯度离心纯化胰岛 ,手挑法捡出全部胰岛。分离后胰岛在 37℃、体积浓度 95 %O2 和 5 %CO2 下培养 1... 目的 寻找并建立一种改良的、实用可靠的大鼠胰岛制备和培养方法。方法 采用胰管内顺行灌注胶原酶溶液 ,静态消化 ,Ficoll不连续密度梯度离心纯化胰岛 ,手挑法捡出全部胰岛。分离后胰岛在 37℃、体积浓度 95 %O2 和 5 %CO2 下培养 1周 ,通过测量培养液的胰岛素含量观察胰岛功能变化。结果  35 5~ 875个胰岛 胰腺 ,捡出后胰岛纯度可达 1 0 0 % ,活率≥ 95 %。本方法制备胰岛体外培养后可以测出功能良好。结论 本法胰岛制备技术已趋于完善 ,效果满意 ,获得的胰岛体外培养后实验证明其功能良好。 展开更多
关键词 大鼠 胰岛 分离方法 制备 培养 胰岛移植 1型糖尿病
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