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激光扫描共聚焦显微镜观察胰蛋白酶对肺上皮细胞游离钙离子的影响 被引量:8
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作者 王海燕 何韶衡 林珏龙 《激光生物学报》 CAS CSCD 2005年第5期377-379,共3页
目的:研究PAR-2激动剂SLIGKV和tc-LIGRLO、胰蛋白酶及其抑制剂对H292肺上皮细胞[Ca2+]i的影响。方法:应用Fluo-3/AM荧光标记技术和激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测不同因素处理的H292肺上皮细胞[Ca2+]i。结果:胰蛋白酶、SLIGKVt、c-LIG... 目的:研究PAR-2激动剂SLIGKV和tc-LIGRLO、胰蛋白酶及其抑制剂对H292肺上皮细胞[Ca2+]i的影响。方法:应用Fluo-3/AM荧光标记技术和激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测不同因素处理的H292肺上皮细胞[Ca2+]i。结果:胰蛋白酶、SLIGKVt、c-LIGRLO均能引发H292细胞[Ca2+]i的增加,平均荧光强度分别比加入药物前增加267%,60%和37%。胰蛋白酶抑制剂大豆胰蛋白酶抑制剂(SBTI)和α1-抗胰蛋白酶(α1-AT)可以抑制胰蛋白酶诱导的细胞[Ca2+]i的增加。结论:PAR-2可以介导H292肺上皮细胞[Ca2+]i的释放增加,胰蛋白酶抑制剂可以抑制胰蛋白酶诱导的细胞[Ca2+]i的增加。 展开更多
关键词 激光扫描共聚焦显微镜 Fluo-3荧光探针 蛋白酶激活受体 肺上皮细胞 胞浆内钙离子浓度
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钙三醇干预甲状旁腺素诱导的心肌细胞内钙超载和细胞肥大 被引量:6
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作者 赵卫红 张晓文 王笑云 《中国血液净化》 2009年第5期256-259,共4页
目的探讨甲状旁腺素(PTH)对鼠心肌细胞内游离钙([Ca2+]i)和心肌肥大的影响及其机制,以及钙三醇的干预作用。方法培养的新生大鼠心肌细胞以Fluo-3/AM负载,通过激光共聚焦显微术(LSCM)测定细胞内[Ca2+]i;以细胞面积和细胞蛋白含量作为心... 目的探讨甲状旁腺素(PTH)对鼠心肌细胞内游离钙([Ca2+]i)和心肌肥大的影响及其机制,以及钙三醇的干预作用。方法培养的新生大鼠心肌细胞以Fluo-3/AM负载,通过激光共聚焦显微术(LSCM)测定细胞内[Ca2+]i;以细胞面积和细胞蛋白含量作为心肌细胞肥大指标,体外实验观察PTH瞬时和持续刺激对鼠心肌细胞[Ca2+]i和肥大的影响,以及钙三醇的干预作用。结果①在细胞外Ca2+为2.5mmol/L时,PTH1-34在0.1和1μmol浓度下的刺激可促使心肌细胞静息[Ca2+]i荧光强度(FI)快速上升;1μmol浓度PTH1-34刺激,在细胞外液无钙,或应用10μmol硝苯地平预处理时,心肌细胞静息钙则无明显上升。②培养的心肌细胞应用PTH1-340.01和0.1μmol刺激7天后,心肌细胞内钙荧光强度、心肌细胞面积和蛋白含量均较对照组显著增加。若以PTH1-340.1μmol刺激,并同时加入0.001μmol的钙三醇干预,上述指标明显降低(P<0.01);但应用0.1μmol高浓度钙三醇干预,上述指标则未见显著改善。结论PTH1-34刺激可显著增加培养心肌细胞[Ca2+]i,诱导细胞肥大;适宜浓度钙三醇具有保护作用,电压依赖型钙通道的开放引起的细胞外钙内流增加是PTH1-34诱导上述变化的重要机制之一。 展开更多
关键词 钙三醇 甲状旁腺素(PTH) 心肌细胞 细胞内游离钙([ca2+]i) 心肌肥大
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蛙皮素对PC-3细胞骨架及细胞内游离Ca^(2+)的影响
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作者 武斌 王禾 秦卫军 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2007年第4期332-334,共3页
目的:观察蛙皮素(BBS)对前列腺癌PC-3细胞骨架形态及细胞内游离Ca2+([Ca2+]i)浓度的影响。方法:①利用免疫荧光法(IH),结合激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测10-5mol/L浓度BBS处理的PC-3细胞角蛋白(CK)的表达,以反映其对细胞骨架形态的影... 目的:观察蛙皮素(BBS)对前列腺癌PC-3细胞骨架形态及细胞内游离Ca2+([Ca2+]i)浓度的影响。方法:①利用免疫荧光法(IH),结合激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测10-5mol/L浓度BBS处理的PC-3细胞角蛋白(CK)的表达,以反映其对细胞骨架形态的影响;②应用Fluo-3/AM荧光标记技术和LSCM检测不同浓度BBS(10-9、10-7、10-5mol/L)处理的PC-3细胞[Ca2+]i浓度。结果:①10-5mol/L浓度的BBS可促进PC-3细胞CK表达及伪足形成;②BBS可提高PC-3细胞[Ca2+]i浓度,并具有浓度依赖性。结论:实验证明一定浓度的BBS可明显提高PC-3细胞[Ca2+]i浓度及CK表达,进而影响PC-3细胞骨架形态。本研究为探索BBS应用于肿瘤研究以及BBS作用后细胞内信息传递途径提供了基础。 展开更多
关键词 前列腺癌 蛙皮素 激光共聚焦显微镜 荧光免疫测定 角蛋白 ^细胞内游离ca^2+
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七氟菊酯和溴氰菊酯对棉铃虫神经细胞内钙离子浓度的影响 被引量:4
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作者 韩丽鑫 吴广彦 +1 位作者 藏媛媛 贺秉军 《天津师范大学学报(自然科学版)》 CAS 2015年第3期96-101,共6页
以急性分离的棉铃虫神经细胞为实验材料,利用激光扫描共聚焦显微镜技术,探究2种拟除虫菊酯类杀虫剂——七氟菊酯(Ⅰ型)和溴氰菊酯(Ⅱ型)对神经细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的影响,并进行机理初探.研究结果表明:七氟菊酯和溴氰菊酯都... 以急性分离的棉铃虫神经细胞为实验材料,利用激光扫描共聚焦显微镜技术,探究2种拟除虫菊酯类杀虫剂——七氟菊酯(Ⅰ型)和溴氰菊酯(Ⅱ型)对神经细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的影响,并进行机理初探.研究结果表明:七氟菊酯和溴氰菊酯都可刺激神经细胞内钙离子浓度升高,但这种反应只有在细胞外存在钙离子时才会发生,且该反应可以被河豚毒素(tetrodotoxin,TTX,电压门控钠通道阻断剂)阻断.这表明七氟菊酯和溴氰菊酯触发的胞内钙离子浓度升高与电压门控钠通道有关,很可能是拟除虫菊酯作用于电压门控钠通道后所引发的反应. 展开更多
关键词 棉铃虫 七氟菊酯 溴氰菊酯 细胞内钙离子浓度
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陡脉冲电场对体外人肝癌细胞内钙离子浓度的影响 被引量:3
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作者 米彦 孙才新 +4 位作者 姚陈果 李成祥 莫登斌 唐丽灵 刘欢 《中国生物医学工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期551-556,共6页
为研究陡脉冲电场的凋亡效应,以人肝癌细胞系为实验对象,采用激光扫描共聚焦显微镜观察陡脉冲电场作用下细胞内钙离子浓度的变化,采用流式细胞术Annexin V检测陡脉冲电场诱导细胞凋亡。结果发现,陡脉冲电场能使肝癌细胞内钙离子浓度发... 为研究陡脉冲电场的凋亡效应,以人肝癌细胞系为实验对象,采用激光扫描共聚焦显微镜观察陡脉冲电场作用下细胞内钙离子浓度的变化,采用流式细胞术Annexin V检测陡脉冲电场诱导细胞凋亡。结果发现,陡脉冲电场能使肝癌细胞内钙离子浓度发生变化,变化的程度与陡脉冲电场的参数和胞外是否有钙有关,使得细胞内钙离子浓度稳态失调或大幅度振荡;流式细胞检测结果证实了陡脉冲电场能有效诱导肝癌细胞凋亡(与对照组比较,P<0.01),并且较低的电压峰值、较宽的脉冲宽度(200V/1.3μs)比较高的电压峰值、较窄的脉冲宽度(600V/100ns)能更有效地(P<0.01)诱导肝癌细胞凋亡。实验结果为陡脉冲杀伤肿瘤细胞的机制和参数选择提供了依据。 展开更多
关键词 陡脉冲电场 细胞凋亡 细胞内钙离子浓度 流式细胞术 激光扫描共聚焦显微镜
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钙调蛋白激酶Ⅱ抑制剂对肥厚心肌细胞的影响 被引量:2
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作者 柯俊 陈锋 +5 位作者 肖幸 戴木森 王晓萍 陈兵 陈敏 张存泰 《中华急诊医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期151-155,共5页
目的 观察钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)抑制剂KN-93对肥厚心肌细胞L型钙电流(ICa,L)及细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的影响.方法 选取雌性新西兰大白兔48只,随机(随机数字法)分为4组:假手术组(sham组)、心肌肥厚组(LVH组)、心肌... 目的 观察钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)抑制剂KN-93对肥厚心肌细胞L型钙电流(ICa,L)及细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的影响.方法 选取雌性新西兰大白兔48只,随机(随机数字法)分为4组:假手术组(sham组)、心肌肥厚组(LVH组)、心肌肥厚+KN-93组(KN-93组)、心肌肥厚+KN-92组(KN-92组),每组12只,通过缩窄腹主动脉制备兔心肌肥厚模型,Sham组仅游离腹主动脉未进行缩窄.8周后,采用胶原酶消化法分离单个心肌细胞,应用穿孔膜片钳技术记录L型钙电流(ICa,L);应用钙荧光指示剂Fura-2/AM结合图像分析技术测定各组心肌细胞内[Ca2+]i.结果 8周后,心肌肥厚模型建立成功.在0 mV时LVH组、Sham组的峰值ICa.L分另为(1.38±0.3)nA、(0.87±0.1)nA(P<0.01,n=12),电流密度分别为(6.7±1.0)pA/pF、(6.3 ±0.7)pA/pF(P>0.05,n=12).当KN-92及KN-93在浓度为0.5μmol/L时,可分别使肥厚心肌细胞0 mV时的峰值ICa,L降低(9.4±2.8)%、(10.5±3)%(P>0.05,n=12);当浓度增至1 μmol/L时,其峰值ICa,L降低程度分别为(13.4±3.7)%、(40±4.9)%(P<0.01,n=12).Sham组、LVH组、KN-92组及KN-93组中心肌细胞[Ca2+]i分别为(98.0±12.3)nmol/L、(154.0±26.2)nmol/L、(147.0±29.6)nmol/L和(108.0±21.2)nmol/L.结论 CaMKⅡ特异性抑制剂KN-93可有效抑制肥厚心肌细胞ICa.L,减轻细胞内钙超载,这可能是其抗肥厚心肌室性心律失常发生的主要细胞电生理机制. 展开更多
关键词 钙调蛋白激酶Ⅱ KN-93 心肌肥厚 心肌细胞 电生理 L型钙电流 细胞内钙 离子浓度 穿孔膜片钳技术
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莪术抑制晶状体上皮细胞增殖的信号转导机制 被引量:2
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作者 吴正正 黄秀榕 +2 位作者 祁明信 胡艳红 严京 《中国中医眼科杂志》 2006年第4期205-208,共4页
目的探讨天然药物莪术(rhizoma curcumae,RC)对体外培养的晶状体上皮细胞(lens ep-ithelial cell,LEC)增殖的抑制作用,并从信号转导方面研究其抑制LEC增殖的作用机制,为寻求防治后发性白内障(after cataract)的确切有效药物提供实验依... 目的探讨天然药物莪术(rhizoma curcumae,RC)对体外培养的晶状体上皮细胞(lens ep-ithelial cell,LEC)增殖的抑制作用,并从信号转导方面研究其抑制LEC增殖的作用机制,为寻求防治后发性白内障(after cataract)的确切有效药物提供实验依据。方法用牛LEC进行原代和传代培养,取第三代细胞。用10ng/ml重组人碱性成纤维细胞生长因子(recombinant human basic fibroblast growthfactor,rhbFGF)诱导LEC增殖。同时分别将5mg/ml、10mg/ml、20mg/ml的莪术作用于增殖状态下的LEC72小时。(1)通过四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色测定法检测莪术对LEC增殖的抑制程度;(2)用钙荧光指示剂Fura-2/AM测定莪术抑制LEC增殖时细胞内游离钙离子浓度(Ca2+i)变化;(3)用放射免疫分析法测定莪术抑制LEC增殖时细胞内环化腺苷酸(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)和环化鸟苷酸(cyclicguanosine monophosphate,cGMP)浓度变化。结果莪术可明显抑制LEC增殖。抑制LEC增殖时细胞内游离钙离子浓度(Ca2+i)升高,细胞内cAMP浓度显著升高,细胞内cGMP浓度显著降低,cAMP/cGMP比值升高,并具有剂量依赖关系。结论诱导Ca2+i升高,激活细胞内Ca2+信号转导途径;上调细胞内cAMP水平,下调细胞内cGMP水平,使cAMP/cGMP比值升高,激活细胞内cAMP-PKA、cGMP-PKG信号转导途径可能是莪术抑制LEC增殖的作用机制之一。莪术能够明显抑制LEC增殖的作用,有望成为防治后发性白内障的有效药物。 展开更多
关键词 莪术 晶状体上皮细胞 细胞内游离钙离子浓度 环化腺苷酸 环化鸟苷酸
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微激光照射肥大细胞对胞内钙离子浓度的影响
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作者 钟会清 杨辉 +10 位作者 周艳 郭周义 黄汉传 叶丙刚 倪艺榕 熊红莲 金梅 吴秀丽 苏成康 龙佳 林锦 《激光生物学报》 CAS 2015年第4期326-330,共5页
目的:研究850 nm波长微激光对肥大细胞照射后胞内钙离子浓度的影响。方法:实验前12 h,将肥大细胞接种于激光共聚焦专用培养皿中,然后用D-Hank’s液洗涤3次,加入2 m L D-Hank’s液,按照照射时间不同共分六组(Control,1 min,2 min,2.5 min... 目的:研究850 nm波长微激光对肥大细胞照射后胞内钙离子浓度的影响。方法:实验前12 h,将肥大细胞接种于激光共聚焦专用培养皿中,然后用D-Hank’s液洗涤3次,加入2 m L D-Hank’s液,按照照射时间不同共分六组(Control,1 min,2 min,2.5 min,3 min,4 min),其中,空白对照组不进行激光照射处理;激光照射后,弃去D-Hank’s液,加入含有Fluo-3/AM的D-Hank’s液1 m L,放入培养箱中孵育30 min后,用D-Hank’s液洗涤3次去除胞外多余的Fluo-3/AM,再加入含有10%FBS的D-Hank’s液2 m L,置激光扫描共聚焦显微镜检测。结果:空白对照组中细胞内未见荧光,说明此时胞内无钙离子,但从1 min开始在细胞中发现荧光,而且发现随着照射时间的加长,其荧光强度越来越强,这可能与微激光照射时间越长从而刺激胞内出现更多的钙离子有关。从上面的实验说明850 nm微激光能作为仿灸仪器的光源。 展开更多
关键词 生物光学 细胞内钙离子浓度 微激光 肥大细胞 激光扫描共聚焦显微镜
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