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抗巨细胞病毒早晚期抗原单克隆抗体制备及在病毒培养物鉴定中的初步应用
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作者 崔京涛 闫文娟 +4 位作者 张伟红 王巧凤 许少侠 谢宏杰 倪安平 《国际病毒学杂志》 2017年第1期13-17,共5页
目的制备抗CMV早晚期抗原单克隆抗体并在病毒培养物鉴定中初步应用。方法CMV感染MRC-5细胞24h、48h和72h后甲醛灭活的可溶性抗原免疫BALB/e小鼠,小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞NS-1进行融合。酶免法筛查阳性杂交瘤并有限性稀释法进行克隆。... 目的制备抗CMV早晚期抗原单克隆抗体并在病毒培养物鉴定中初步应用。方法CMV感染MRC-5细胞24h、48h和72h后甲醛灭活的可溶性抗原免疫BALB/e小鼠,小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞NS-1进行融合。酶免法筛查阳性杂交瘤并有限性稀释法进行克隆。免疫荧光及印迹对筛选后的克隆进行鉴定,最终获得的杂交瘤制备腹水并使用ProteinG进行纯化。纯化后单抗应用于CAP室间质评标本以及临床标本CMV培养物的鉴定。结果3只小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合后初步筛查出约110株阳性克隆。剔除与其它抗原有交叉反应、抗体效价低、非全覆盖早晚期抗原的克隆最终获得抗CMV单抗杂交瘤1株,即2385-1。免疫荧光显示2385-1株单抗与CklV感染后3h-120h的MRC-5细胞均反应,即覆盖即刻、早期和晚期抗原。免疫印迹试验显示2385-1株单抗与CMV抗原25KD-50KD之间的5个蛋白条带结合。2385-1株单抗免疫球蛋白亚型为IgGl。ProteinG纯化腹水后的单抗效价≥1:12800。纯化单抗染色鉴定6份室间质评及10份临床标本CMV培养物全部符合。结论初步应用显示制备的抗CMV早晚期抗原单克隆抗体性能良好。 展开更多
关键词 巨细胞病毒 单克隆抗体 即刻抗原 早期抗原 晚期抗原
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重庆地区胆汁淤积型婴儿肝炎综合征病因研究 被引量:7
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作者 赵瑞秋 管小琴 +1 位作者 罗治国 许红梅 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期1547-1549,共3页
目的:明确重庆地区胆汁淤积型婴儿肝炎综合征(Infantile hepatitis syndromeI,HS)的病因诊断。方法:ELISA常规检测血清HCMV-IgM、弓形体-IgM、RuV-IgM、HSV-IgM、甲乙丙戊肝炎病毒标志物,肝活检行光镜和电镜诊断,免疫组织化学染色检测... 目的:明确重庆地区胆汁淤积型婴儿肝炎综合征(Infantile hepatitis syndromeI,HS)的病因诊断。方法:ELISA常规检测血清HCMV-IgM、弓形体-IgM、RuV-IgM、HSV-IgM、甲乙丙戊肝炎病毒标志物,肝活检行光镜和电镜诊断,免疫组织化学染色检测肝组织HCMV极早期抗原(Immediate earlyantigenI,EA)和早期抗原(Earlyantigen,EA)、HBcAg、胆盐输出泵(Bile salt exportpump,BSEP)和多重耐药相关蛋白3(Multidrug resistance 3,MDR3)。结果:36例胆汁淤积型IHS中人巨细胞病毒(Human cy-tomegalovirus,HCMV)肝炎10例;HCMV肝炎合并风疹病毒(Rubella virus,RuV)感染1例;HCMV肝炎合并单纯疱诊病毒(Her-pds simplex virus,HSV)感染1例;HCMV、HSV和RuV混合感染1例;胆道闭锁7例[5例合并HCMV感染,1例合并HCMV和乙肝病毒(Hepatitis b virus,HBV)感染];糖原累积病2例;尼曼皮克病合并HCMV肝炎1例;分类不明脂质代谢障碍1例;HCMV肝炎合并疑诊线粒体肝病1例;HCMV肝炎合并疑诊铁沉积病1例;疑诊脂质代谢障碍、胆汁酸代谢障碍和进行性家族性肝内胆汁淤积Ⅰ型(Progressive familial intrahepatic cholestasis,PFICⅠ)各1例;7例病因仍不清。结论:HCMV肝炎是重庆地区胆汁淤积型IHS的首要原因,存在与其他病毒合并感染和参与代谢性肝病发病的现象。肝组织学检查可作为早期诊断胆道闭锁的补充,电镜检查有助于某些遗传代谢性肝病的诊断。暂未在重庆地区胆汁淤积型IHS中发现BSEP和MDR3基因变异。 展开更多
关键词 婴儿肝炎综合征 胆汁淤积型 组织形态学 巨细胞病毒 即刻早期抗原 早期抗原 胆盐输出泵 多重耐药相关蛋白3
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DETECTION OF CYTOMEGALOVIRUS(CMV) IMMEDIATE EARLY ANTIGEN IN KIDNEY BIOPSIES AND TRANSPLANT NEPHRECTOMIES 被引量:1
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作者 燕航 薛武军 +2 位作者 田普训 郭奇 何晓丽 《Journal of Pharmaceutical Analysis》 SCIE CAS 2004年第1期88-91,共4页
Objective To investigate the relationship between CMV infection and renal allograft rejection. Methods 39 kidney biopsies and transplant nephrectomies were collected and investigated for CMV immediate early antigen ... Objective To investigate the relationship between CMV infection and renal allograft rejection. Methods 39 kidney biopsies and transplant nephrectomies were collected and investigated for CMV immediate early antigen by immunohistochemistry. Results In 14 out of 39 tissue specimens CMV immediate early antigen were found. 8 biopsies from normal donor kidneys were negative; only 1 (10%) in 10 tissue specimens with early stage acute rejection was positive; 5(55.6%) in 9 biopsies with late stage acute rejection and 8 (66.7%) in 12 tissue blocks with chronic rejection were positive. Compared with normal kidney tissues, the infections in tissues with early stage acute rejection didn't increase obviously, but increased obviously in kidney tissue specimens with late stage rejection and with chronic rejection (P< 0.05). Conclusion CMV infection appears to contribute to late stage acute rejection and chronic rejection after renal transplantation. 展开更多
关键词 renal transplantation CYTOMEGALOVIRUS IMMUNOHISTOCHEMISTRY immediate early antigen allograft rejection
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小儿巨细胞病毒活动性感染的两种诊断方法比较 被引量:6
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作者 聂兴草 方峰 +1 位作者 董永绥 李革 《中国实用儿科杂志》 CSCD 北大核心 2002年第7期422-424,共3页
目的 通过血清人巨细胞病毒 (HCMV)IgM和尿快速培养HCMV检测临床标本的比较 ,进一步评价血清特异性IgM诊断活动性HCMV感染的价值。 方法 ①ELISA法检测患儿血抗HCMV IgG、IgM。②通过检测尿培养物中HCMV即刻早期抗原 (IEA)快速诊断活... 目的 通过血清人巨细胞病毒 (HCMV)IgM和尿快速培养HCMV检测临床标本的比较 ,进一步评价血清特异性IgM诊断活动性HCMV感染的价值。 方法 ①ELISA法检测患儿血抗HCMV IgG、IgM。②通过检测尿培养物中HCMV即刻早期抗原 (IEA)快速诊断活动性HCMV感染。结果 ① 119例尿培养阳性者 ,血抗HCMV IgG均为阳性。②与尿快速培养法相比 ,血IgM的特异性和敏感性分别达到 97 7%和 6 9 7% ;血IgM阳性数与尿快速培养阳性数比率在≤ 1个月、~ 1岁和~ 3岁组分别为 4 5 8%、75 75和 82 4 % ,表明IgM检测结果在各年龄组均有假阴性 ,其中尤以 1个月以下婴儿多见。③ 2例 3个月左右患儿血IgM阳性而尿培养阴性。 11例随访患儿中 ,9例在结束更昔洛韦治疗后 1个月复查 ,3例IgM迟于尿培养转阴 ,2例尿培养阴性而血IgM仍为阳性 ,表明IgM检测结果可有假阳性。 结论 血清特异性IgM检测可用于诊断活动性CMV感染 ,但其意义有一定局限性 。 展开更多
关键词 人巨细胞病毒 抗HCMV-IgM 即刻早期抗原 抗体检测 抗原检测 活动性巨细胞病毒感染 儿童
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组织学、血清学、尿荧光定量聚合酶链反应及尿沉渣中巨细胞包涵体检测方法在诊断巨细胞病毒所致胆汁淤积型婴儿肝炎综合征作用的研究 被引量:6
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作者 赵瑞秋 管晓琴 许红梅 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期608-612,共5页
目的:探讨肝脏光镜组织学检查、血清学检测巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)特异性免疫球蛋白M(Immune globulin M,IgM)、尿HCMV荧光定量PCR(Fluorescence quantitative polumerase chain reaction,QPCR)检测和晨尿找包涵体方法... 目的:探讨肝脏光镜组织学检查、血清学检测巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)特异性免疫球蛋白M(Immune globulin M,IgM)、尿HCMV荧光定量PCR(Fluorescence quantitative polumerase chain reaction,QPCR)检测和晨尿找包涵体方法在诊断婴儿肝炎综合征中HCMV感染的作用。方法:免疫组织化学法检测肝组织HCMV的极早期抗原(Immediatelyearlyantigen,IEA)和早期抗原(Early antigen,EA)。采用Fisher精确检验比较HCMV-IEA/EA阳性组和阴性组在组织形态改变上的差异。运用ELISA方法常规检测血清HCMV抗体IgM、荧光定量PCR技术检测尿HCMV-DNA和瑞氏染色后显微镜下检测晨尿脱落细胞沉渣中包涵体,分析上述检查方法的灵敏度和特异度。结果:淤胆型婴儿肝炎综合征(Infantilehepatitissyndrome,IHS)患儿肝组织HCMV-IEA/EA阳性22/36例。HCMV-IEA/EA阳性组及阴性组比较,光镜组织形态学分析无明显特异性,晨尿脱落细胞找HCMV包涵体差异无统计学意义(P均>0.05),而血清HCMV-IgM、荧光定量PCR技术检测尿HCMV-DNA差异有统计学意义(P均<0.01)。血清HCMV-IgM、荧光定量PCR技术检测尿HCMV-DNA和晨尿脱落细胞找HCMV包涵体诊断符合率分别为77.8%、69.4%和50.0%。结论:普通组织病理对淤胆型婴儿HCMV肝炎的诊断缺乏诊断特异性,血清HCMV-IgM检测仍不失为简单易行的实验室诊断方法。 展开更多
关键词 婴儿肝炎综合征 巨细胞病毒 胆汁淤积 极早期抗原/早期抗原 IgM DNA定量PCR 包涵体 病理学改变
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