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IQCE mRNA与FXR1P在酵母三杂交体系中的相互作用
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作者 马云 何淑雅 +4 位作者 喻长顺 苏娇 张晋 王茹静 胡维新 《氨基酸和生物资源》 CAS 2007年第3期26-29,共4页
脆性X相关基因1编码蛋白FXR1P是一种RNA结合蛋白,其所结合的靶RNA目前所知甚少。本研究应用酵母三杂交技术对本课题组从pRH3-cDNA人脑海马RNA表达文库中筛选到的一种可能与FXR1P存在相互作用的RNA IQCE进行研究,以验证该RNA与FXR1P的相... 脆性X相关基因1编码蛋白FXR1P是一种RNA结合蛋白,其所结合的靶RNA目前所知甚少。本研究应用酵母三杂交技术对本课题组从pRH3-cDNA人脑海马RNA表达文库中筛选到的一种可能与FXR1P存在相互作用的RNA IQCE进行研究,以验证该RNA与FXR1P的相互作用。方法为:提取利用酵母三杂交技术初步筛选得到的酵母阳性克隆的质粒,转化大肠杆菌Top10,利用其质粒不相容性分离插入了目的片段的pRH3′-cDNA质粒,将该质粒转化入含目的基因FXR1的酵母菌株L40-ura3/pHyb lex/Zeo-MS2/pYESTrp3/FXR1,进行一对一的酵母三杂交验证,最后将该片段进行测序。测序结果为IQCE的一段编码序列,而目前尚无研究报导FXR1与IQCE的相互关系。结论:提示FXR1P与IQCE mRNA存在相互作用,IQCE可能是FXR1P发育调控网络组成成员之一。 展开更多
关键词 酵母三杂交 FXR1P iqce 脆性X综合征 RNA-蛋白质相互作用
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分泌型碱性磷酸酶报告基因重组载体pSEAP—IQCE3’UTR的构建
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作者 王三虎 马云 +4 位作者 秦凌雪 何彬彬 李斌元 苏泽红 何淑雅 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2012年第5期355-359,共5页
目的构建分泌型碱性磷酸酶(secretedalkalinephosphatasereportergene。SEAP)报告基因重组载体pSEAP—IQCE3’UTR,为鉴定FXR1P是否是通过与IQCE的3’UTR发生相互作用,进一步探索FXR1P的功能奠定基础。方法首先设计目的基因片段IQCE3... 目的构建分泌型碱性磷酸酶(secretedalkalinephosphatasereportergene。SEAP)报告基因重组载体pSEAP—IQCE3’UTR,为鉴定FXR1P是否是通过与IQCE的3’UTR发生相互作用,进一步探索FXR1P的功能奠定基础。方法首先设计目的基因片段IQCE3’UTR的PCR引物,然后通过RT—PCR扩增加CE基因3’UTR基因片段,酶切扩增的片段和报告基因空载体,并将空载体去磷酸化,去磷酸化后的空载体与目的基因片段进行连接反应,将连接产物转化人大肠埃希菌JM109,最后筛选阳性克隆,PCR鉴定插入序列的正反。结果构建了分泌型碱性磷酸酶报告基因重组载体pSEAP—IQCE3’UTR,经酶切鉴定、正反鉴定和测序分析可知重组载体构建成功。结论成功构建了分泌型碱性磷酸酶报告基因重组载体pSEAP—IQCE3’UTR,为进一步探索FXR1P的功能及其在脆性X综合征中的发病机理有着重要的意义。 展开更多
关键词 FXR1P iqce SEAP 脆性X综合征
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