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IK4基因突变体与其逆转录病毒载体的构建及在白血病细胞中的表达
1
作者
史柳芝
郑倩倩
贺立彩
《中国科技论文》
CAS
北大核心
2016年第6期684-687,693,共5页
对造血调控中发挥重要作用的IKAROS基因亚型IK4进行突变,并构建重组逆转录病毒表达载体及使其在白血病细胞中表达。采用重叠延伸PCR定点突变技术,成功构建了4个IK4单突变或多突变突变体。将这4个突变体克隆至Pmscvpuro逆转录病毒载体中...
对造血调控中发挥重要作用的IKAROS基因亚型IK4进行突变,并构建重组逆转录病毒表达载体及使其在白血病细胞中表达。采用重叠延伸PCR定点突变技术,成功构建了4个IK4单突变或多突变突变体。将这4个突变体克隆至Pmscvpuro逆转录病毒载体中,构建重组蛋白表达载体。基因测序验证突变序列正确后,将重组逆转录病毒载体与病毒包装质粒VSVG、Gag-Pol共同感染293T细胞,过滤收集病毒上清,将病毒上清转染白血病NB4细胞。用Puromycin对细胞进行筛选,并通过Western印迹法对突变体表达细胞系进行验证。通过重叠延伸PCR法成功构建了4个IK4的定点单突变和定点多突变体,利用逆转录病毒介导的转染方法使IK4的4个突变体在白血病细胞中成功稳定表达,为后续的功能和机制的研究奠定了基础。
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关键词
生物化学与分子生物学
IKAROS4基因
重叠延伸PCR
突变
逆转录病毒载体
表达
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题名
IK4基因突变体与其逆转录病毒载体的构建及在白血病细胞中的表达
1
作者
史柳芝
郑倩倩
贺立彩
机构
温州医科大学检验医学与生命科学学院
出处
《中国科技论文》
CAS
北大核心
2016年第6期684-687,693,共5页
基金
高等学校博士学科点专项科研基金资助项目(20133321120003)
国家自然科学基金资助项目(81400125)
浙江省自然科学基金资助项目(LQ13H080002)
文摘
对造血调控中发挥重要作用的IKAROS基因亚型IK4进行突变,并构建重组逆转录病毒表达载体及使其在白血病细胞中表达。采用重叠延伸PCR定点突变技术,成功构建了4个IK4单突变或多突变突变体。将这4个突变体克隆至Pmscvpuro逆转录病毒载体中,构建重组蛋白表达载体。基因测序验证突变序列正确后,将重组逆转录病毒载体与病毒包装质粒VSVG、Gag-Pol共同感染293T细胞,过滤收集病毒上清,将病毒上清转染白血病NB4细胞。用Puromycin对细胞进行筛选,并通过Western印迹法对突变体表达细胞系进行验证。通过重叠延伸PCR法成功构建了4个IK4的定点单突变和定点多突变体,利用逆转录病毒介导的转染方法使IK4的4个突变体在白血病细胞中成功稳定表达,为后续的功能和机制的研究奠定了基础。
关键词
生物化学与分子生物学
IKAROS4基因
重叠延伸PCR
突变
逆转录病毒载体
表达
Keywords
biochemistry
and
molecular
biology
ikarosi
gene
overlap
extension
PCR
mutation
retrovirus
vector
expression
分类号
R733.7 [医药卫生—肿瘤]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
IK4基因突变体与其逆转录病毒载体的构建及在白血病细胞中的表达
史柳芝
郑倩倩
贺立彩
《中国科技论文》
CAS
北大核心
2016
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