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人巨细胞病毒感染及其IE86蛋白对ARPE-19细胞周期的影响 被引量：2
1
作者 刘海燕 王斌 +8 位作者 李玲 白志强 姜光域 王海涛 钱冬萌 赵巍 闫志勇 丁守怡 宋旭霞 《医学研究生学报》 CAS 2010年第5期452-455,共4页
目的研究人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染ARPE-19细胞后对其细胞周期的影响,观察这种变化与HCMVIE2基因的关系,探讨HCMV感染的发病机制。方法用HCMV感染同步化的ARPE-19作为感染组,同时设模拟感染组为对照组。于感染后第1... 目的研究人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染ARPE-19细胞后对其细胞周期的影响,观察这种变化与HCMVIE2基因的关系,探讨HCMV感染的发病机制。方法用HCMV感染同步化的ARPE-19作为感染组,同时设模拟感染组为对照组。于感染后第1、2、3、4、5天收获细胞,RT-PCR方法检测HCMV IE mRNA的表达水平,用免疫荧光法检测细胞核内HCMV IE蛋白的表达,Western blot法检测HCMV早期蛋白IE和晚期蛋白pp65的表达。采用PCR方法从质粒pIEP86AD169扩增出IE2片段,构建真核表达质粒pEGFP-N3-IE2,脂质体介导瞬时转染ARPE-19细胞,RT-PCR、免疫荧光法分析IE2基因的表达。流式细胞术检测细胞周期的变化。结果 HCMV IE72、IE86和pp65可分别在病毒感染ARPE-19细胞后第2、3和5天时检测到表达,流式细胞术示感染组在感染第3、4、5天细胞周期的S期细胞比例显著增高,与对照组比较差异均有显著性统计学意义,P(0.05。瞬时转染质粒pEGFP-N3-IE2后细胞周期表现为S期细胞比例显著增高。结论 ARPE-19是HCMV的允许细胞,HCMV可引起ARPE-19细胞周期的改变,这种变化与IE2基因的表达有一定的关系。 展开更多
关键词 人巨细胞病毒 ARPE-19 ie2基因 细胞周期
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HCMV的IE2介导野生型p53基因促凋亡作用的研究 被引量：1
2
作者 阎庆国 黄高昇 +3 位作者 王哲 郭英 冯骥良 杨国嵘 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期522-524,共3页
选择野生型P5 3缺失型的Jurkat细胞系 ,首先将wt p5 3 pLXSN稳定转染入Jurkat细胞 (Jurkat wt p5 3) ,再分别或联合转染IE1、IE2基因 ,并利用流式细胞仪分析。结果显示 ,转染了IE2基因的Jurkat wt p5 3细胞在瞬时转染 2 4h后出现光镜下... 选择野生型P5 3缺失型的Jurkat细胞系 ,首先将wt p5 3 pLXSN稳定转染入Jurkat细胞 (Jurkat wt p5 3) ,再分别或联合转染IE1、IE2基因 ,并利用流式细胞仪分析。结果显示 ,转染了IE2基因的Jurkat wt p5 3细胞在瞬时转染 2 4h后出现光镜下可见的细胞凋亡改变 ,此时取样进行流式细胞仪测定细胞周期分布状况 ,可见转染了IE2基因的Jurkat wt p5 3细胞周期分布较其他各组发生了明显的变化 ,G1期和S期细胞分布减少 ,而G2 期细胞增多 ,细胞阻滞于G2 /M期 ,并且出现了细胞凋亡亚二倍体峰 ,引起细胞凋亡。研究表明 ,在Jurkat细胞中HCMV的IE2基因可介导野生型p5 3基因的促凋亡作用。 展开更多
关键词 人巨细胞病毒 细胞凋亡 急性T淋巴细胞白血病 JURKAT细胞 HCVMV ie2 野生型P53基因
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质粒介导的RNAi技术对截短HCMV IE2基因表达的抑制作用 被引量：1
3
作者 高荣保 胡勇 王明丽 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期593-597,共5页
目的应用质粒介导的RNA干扰技术研究siRNA抑制截短HCMV IE2基因的表达的作用。方法以pLL3．7质粒为模板,采用半套式PCR的方法扩增出含U6启动子的siRNA表达片段,连接pMD-T simple vector构建效应质粒表达重组体pMD-T-shRNAR1和pMD-T-shRN... 目的应用质粒介导的RNA干扰技术研究siRNA抑制截短HCMV IE2基因的表达的作用。方法以pLL3．7质粒为模板,采用半套式PCR的方法扩增出含U6启动子的siRNA表达片段,连接pMD-T simple vector构建效应质粒表达重组体pMD-T-shRNAR1和pMD-T-shRNAR2。同时采用RT- PCR方法从HCMV AD169株基因组中调取目的截短基因IE2,定向克隆到带有绿色荧光蛋白(GFP)作为报告基因的真核表达载体pEGFP-C1上,构建HCMV AD169株截短IE2基因重组表达质粒pEGFP- C1-IE2;用脂质体共转染效应质粒和靶基因表达重组体至Hep-2细胞中,荧光显微镜下观察效应质粒的RNA干涉作用,并观察RNA干扰的时效和量效改变。结果三组质粒重组体构建成功,克隆到的2个shRNA表达载体对截短IE2基因的表达都有干涉作用。在与靶基因质粒量比为1:1和1:2时,其中pMD-T-shRNAR1 48～72 h间干涉效应为100％,可完全封闭IE2的表达;pMD-T-shRNAR2使IE2处于极低水平表达,48-72 h间干涉效应达到98．4％～99％。结论通过质粒介导的RNAi技术能够有效地抑制HCMV IE2基因的表达,为治疗HCMV感染的药物开发提供了思路。 展开更多
关键词 载体介导RNA干涉 人巨细胞病毒 截短ie2基因 绿色荧光蛋白 转染
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柞蚕核型多角体病毒ie-2和pe-38基因的克隆与序列分析 被引量：1
4
作者 李卫国 夏爱华 +2 位作者 张志芳 李季生 牟志美 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期193-198,共6页
采用随机克隆方法,通过对插入pGEM-3Z载体的柞蚕核型多角体病毒基因组的部分片段进行测序和序列分析,获得了柞蚕核型多角体病毒基因组的2个极早期基因ie-2和pe-38的序列及pe-38的5′启动子区,其推定的开放阅读框分别编码295和302个氨基... 采用随机克隆方法,通过对插入pGEM-3Z载体的柞蚕核型多角体病毒基因组的部分片段进行测序和序列分析,获得了柞蚕核型多角体病毒基因组的2个极早期基因ie-2和pe-38的序列及pe-38的5′启动子区,其推定的开放阅读框分别编码295和302个氨基酸,并且内部含有一个保守的锌指结构和亮氨酸拉链。核苷酸和氨基酸同源性比较结果显示:柞蚕核型多角体病毒的ie-2和pe-38基因与黄杉毒蛾多角体病毒的同源性较高,与家蚕核型多角体病毒的同源性都很低;在分子进化方面,这2个基因的保守性不强,出现大片段缺失,是研究分子进化及物种关系比较典型的基因。 展开更多
关键词 柞蚕核型多角体病毒 ie-2基因 pe-38基因 序列分析
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干涉BmNPV极早期非必需基因ie-2的转基因家蚕系统构建和抗性检测 被引量：2
5
作者 蒋亮 彭正文 +4 位作者 党颖慧 赵萍 肖阳 邢东旭 夏庆友 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期710-715,共6页
家蚕核型多角体病毒(BmNPV)是严重危害家蚕的病原之一。为了探究通过转基因干涉BmNPV非必需基因抑制病毒的增殖,提高家蚕抗性的可行性,选择BmNPV极早期非必需基因ie-2作为靶标,构建转基因干涉载体,通过显微注射获得转基因家蚕系统A4Pie2... 家蚕核型多角体病毒(BmNPV)是严重危害家蚕的病原之一。为了探究通过转基因干涉BmNPV非必需基因抑制病毒的增殖,提高家蚕抗性的可行性,选择BmNPV极早期非必需基因ie-2作为靶标,构建转基因干涉载体,通过显微注射获得转基因家蚕系统A4Pie2H-A和A4Pie2H-B。3龄幼虫添食感染BmNPV后,A4Pie2H-A与A4Pie2H-B的幼虫死亡率分别比非转基因对照品种降低19%和24%;定量PCR结果显示A4Pie2H-A与A4Pie2H-B的幼虫体内的ie-2 mRNA表达量分别为非转基因对照品种的50%和20%,病毒DNA含量分别为非转基因对照品种的32%和12%。此外,2个转基因家蚕系统的全茧量和茧层率与正常家蚕品种比较无显著差异。研究结果表明,干涉BmNPV极早期非必需基因ie-2可以显著抑制转基因家蚕体内病毒的复制增殖,使幼虫死亡率降低。 展开更多
关键词 家蚕核型多角体病毒 非必需基因 ie-2 转基因干涉 家蚕 抗性 经济性状
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家蚕核型多角体病毒ie-2基因dsRNA表达载体的构建 被引量：1
6
作者 杨金宏 卢从德 +1 位作者 王代刚 孔卫青 《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期23-26,共4页
为了研究ie-2基因的dsRNA对家蚕核型多角体病毒增殖的抑制效果,根据NCBI公布的BmNPV(T3株)基因组序列,克隆了BmNPV极早期表达因子ie-2.将该基因用亚克隆的方法导入到L4440载体中构建L4440-ie-2,并成功转入大肠杆菌HT115(DE3).IPTG诱导... 为了研究ie-2基因的dsRNA对家蚕核型多角体病毒增殖的抑制效果,根据NCBI公布的BmNPV(T3株)基因组序列,克隆了BmNPV极早期表达因子ie-2.将该基因用亚克隆的方法导入到L4440载体中构建L4440-ie-2,并成功转入大肠杆菌HT115(DE3).IPTG诱导可以成功表达相应的dsRNA. 展开更多
关键词 家蚕核型多角体病毒 双链RNA ie-2基因
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IE_-K2:一种基于贝叶斯网络的高效基因调控网络构建方法
7
作者 王浩 何海燕 +1 位作者 姚宏亮 胡大伟 《大连海事大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期111-114,120,共5页
为获得正确的节点次序,提高K2算法的执行效率和精确度,提出一种构建基因调控网络的IE-K2算法.基于两个节点互信息构建无向图,通过引入联合信息熵来获得最佳的节点次序.在Alarm网络中的实验结果表明,其预测的准确率优于爬山算法和随机节... 为获得正确的节点次序,提高K2算法的执行效率和精确度,提出一种构建基因调控网络的IE-K2算法.基于两个节点互信息构建无向图,通过引入联合信息熵来获得最佳的节点次序.在Alarm网络中的实验结果表明,其预测的准确率优于爬山算法和随机节点顺序的K2算法;将IE-K2算法用于构建酿酒酵母的基因调控网络,通过现有文献证明了调控关系的正确性,结果显示了该算法的有效性. 展开更多
关键词 基因调控网络 贝叶斯结构学习 K2算法 ie_K2算法 信息熵
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