缺氧再给氧上调人血管内皮细胞TGFβ_1的基因转录 被引量：1

1

作者 尹志康 吴小候 +2 位作者 何云峰 刘川 杜虎 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2008年第6期694-696,共3页

目的:探讨缺氧再给氧对人血管内皮细胞中的TGFβ1基因转录的影响。方法:建立人脐静脉内皮细胞株的缺氧再给氧模型,采用改良的RT-PCR,半定量分析缺氧再给氧后内皮细胞中TGFβ1的mRNA的变化。结果:缺氧再给氧组与对照组相比,TGFβ1的mRNA... 目的:探讨缺氧再给氧对人血管内皮细胞中的TGFβ1基因转录的影响。方法:建立人脐静脉内皮细胞株的缺氧再给氧模型,采用改良的RT-PCR,半定量分析缺氧再给氧后内皮细胞中TGFβ1的mRNA的变化。结果:缺氧再给氧组与对照组相比,TGFβ1的mRNA明显升高。结论:缺氧再给氧上调血管内皮细胞TGFβ1基因的转录。 展开更多

关键词 缺氧再给氧 人脐静脉内皮细胞 TGFΒ1

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乌司他丁抑制TNF—α诱导血管内皮细胞高通透性的研究 被引量：6

2

作者 魏伏 张丹 +4 位作者 罗丽 古妮娜 曾燕 陈晓迎 刘景仑 《中华急诊医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期320-324,共5页

目的探讨乌司他丁（UTI）对肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导的血管内皮细胞高通透性的影响。方法建立人脐静脉内皮细胞系EA．hy926细胞TNF-α诱导炎症模型，将其分为正常组、TNF-α组、uTI组及TNF-α＋不同浓度的UTI组（T＋U组），分别... 目的探讨乌司他丁（UTI）对肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导的血管内皮细胞高通透性的影响。方法建立人脐静脉内皮细胞系EA．hy926细胞TNF-α诱导炎症模型，将其分为正常组、TNF-α组、uTI组及TNF-α＋不同浓度的UTI组（T＋U组），分别采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测EA．hy926细胞活性，EVOM法测单层细胞电阻。RT-PCR法、免疫细胞化学法检测血管内皮钙黏蛋白（VE-cadherin）的表达。结果与正常组相比，TNF-α作用下EA．hy926单层细胞电阻值明显降低（67．200±8．937vs33．600±8．771，P=0．010），通透性增加，UTI在1-100U／mL范围内以剂量依赖性方式改善TNF-α所致的EA．hy926细胞高通透性（40．133±7．484vs33．600±8．771，P=0．382；49．232±3．162vs．33．600±8．771，P=0．044；63．700±8．515vs．33．600±8．771，P=0．013）。TNF-α作用下EA．hy926细胞VE-cadherinmRNA的表达较正常组显著降低（1．089±0．018vs0．835±0．021，P=0．000），UTI可抑制TNF-α引起的VE-cadherin低表达，其中UTI浓度为10U／mL和100U／mL时VE-cadherin mRNA的表达较TNF-α．组差异具有统计学意义（0．976±0．014vs．0．835±0．021，P=0．001；1．115±0．015vs．0．835±0．021，P=0．000），UTI的上述作用在1-100U／mL浓度范围内呈现出剂量依赖性。免疫细胞化学结果显示，与正常组相比，TNF-α作用下VE-cadherin的表达明显降低（0．061±0．013vs0．093±0．014，P=0．049），而UTI可改善TNF-α导致的VE-cadherin表达降低（0．032±0．004vs．0．061±0．013，P=0．016）。结论UTI可抑制TNF-α引起的EA．hy926细胞通透性增加，且在一定范围内呈现出剂量依赖性。 展开更多

关键词 脐静脉内皮细株EA.hy926 高通透性 乌司他丁 肿瘤坏死因子-α 血管内皮钙黏蛋白

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三种人脐静脉内皮细胞的培养鉴定及表面抗原表达比较 被引量：2

3

作者 谭小兵 戴青原 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第33期1-5,共5页

目的探索建立稳定有效的原代人脐静脉内皮细胞(HUVECs)体外培养方法,并比较原代HUVECs与HUVEC-CS、EA.hy926细胞株之间的表面抗原表达情况。方法Ⅱ型胶原酶消化人脐静脉分离HUVEC,M199完全培养液培养,HUVEC-CS及EA.hy926用DMEM完全培养... 目的探索建立稳定有效的原代人脐静脉内皮细胞(HUVECs)体外培养方法,并比较原代HUVECs与HUVEC-CS、EA.hy926细胞株之间的表面抗原表达情况。方法Ⅱ型胶原酶消化人脐静脉分离HUVEC,M199完全培养液培养,HUVEC-CS及EA.hy926用DMEM完全培养液。胰蛋白酶消化传代,对三种细胞进行形态学观察,流式细胞仪分析比较表面抗原的表达率。结果原代HUVECs细胞为多角形,"铺路石样"排列;HUVEC-CS和EA.hy926细胞为圆形或扁平形,生长速度快,呈典型"鹅卵石状排列。v WF因子免疫荧光染色:原代HUVECs及EA.hy926大部分细胞内可见绿色荧光,而HUVEC-CS为阴性。流式细胞仪分析原代HUVECs(77.7%)或EA.hy926(78.6%)CD31表达率明显高于HUVEC-CS(4.2%),原代HUVECs CD34表达率(43.3%)明显高于HUVEC-CS或EA.hy926(分别为1.6%、0.2%),差异有统计学意义。结论脐静脉灌注Ⅱ型胶原酶消化法配合M199完全培养液可获得高纯度的内皮细胞,EA.hy926永生细胞株培养方法简单,短时间内可获得足够数量的细胞,两者均是组织工程及相关医学基础研究较好的细胞来源。 展开更多

关键词 原代人脐静脉内皮细胞 细胞株 细胞培养 表面抗原表达

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高尿酸对血管内皮细胞增殖凋亡作用及其机制研究 被引量：2

4

作者 黄修献 李海涛 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第22期2894-2897,共4页

目的研究尿酸对人脐静脉内皮细胞株(ECV304)增殖凋亡的影响及可能的机制分析。方法(1)将人脐静脉内皮细胞株(ECV304)分为3组:溶剂对照组和低、高2个剂量实验组。2个剂量实验组加入10,20 mg·d L^-1的尿酸,溶剂对照组不作任何处理。... 目的研究尿酸对人脐静脉内皮细胞株(ECV304)增殖凋亡的影响及可能的机制分析。方法(1)将人脐静脉内皮细胞株(ECV304)分为3组:溶剂对照组和低、高2个剂量实验组。2个剂量实验组加入10,20 mg·d L^-1的尿酸,溶剂对照组不作任何处理。(2)将ECV304分为4组:溶剂对照组、低剂量尿酸实验组(10 mg·d L^-1)、p38抑制剂(SB)组(SB,20μmol·L^-1)和联合组(尿酸10 mg·d L^-1+p38抑制剂20μmol·L^-1)。用CCK8检测给予尿酸后ECV304细胞增殖水平;用蛋白质印迹法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase 3)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cleaved caspase-3)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和磷酸化-p38 MAPK(p-p38 MAPK)的蛋白水平。结果(1)在24 h后,溶剂对照组和低、高2个剂量实验组的细胞增殖率分别为(100.00±4.00)%,(80.52±3.11)%和(60.49±3.57)%;这3组的Caspase-3蛋白表达分别为0.99±0.11,1.26±0.15和1.59±0.13;这3组的Cleaved caspase-3的蛋白表达分别为0.98±0.14,1.70±0.10和2.19±0.11;这3组的p-p38 MAPK蛋白表达量为0.97±0.15,1.81±0.06和2.12±0.10;这3组的p38 MAPK蛋白表达量为1.30±0.11,1.00±0.10和0.88±0.04;上述指标:低、高2个剂量实验组与溶剂对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。(2)在24 h后,溶剂对照组、低剂量尿酸实验组、p38抑制剂组和联合组的细胞增殖率分别为(100.00±7.21)%,(79.61±3.34)%,(109.30±1.18)%和(90.69±1.89)%;这4组的Caspase-3的蛋白表达分别为1.24±0.04,1.63±0.06,1.04±0.04和1.29±0.03;这4组的Cleaved caspase-3的蛋白表达分别为0.93±0.05,1.49±0.12,0.73±0.05和0.97±0.05;这4组的p-p38蛋白的表达分别为1.16±0.07,1.56±0.07,0.89±0.06和1.02±0.05;这4组的p38蛋白的表达分别为1.27±0.12,0.98±0.02,0.88±0.03和0.69±0.05;3个处理组与溶剂对照组相比,Caspas-3表达差异均有统计学意义(均P<0.01);p38抑制剂组和联合组与溶剂对照组相比,Cleaved caspase-3和p38MAPK的表达差异均有� 展开更多

关键词 尿酸 人脐静脉内皮细胞株 增殖 凋亡 p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路

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一种大容量细胞灌流液中外泌体的提取方法及鉴定 被引量：1

5

作者 李兰兰 聂文青 +5 位作者 贺燕婷 王美月 李振凤 李宏 官秀梅 成敏 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期524-528,共5页

目的:建立一种从大容量细胞灌流液中提取外泌体的方法,并进行外泌体的鉴定。方法:人脐静脉内皮细胞株(EA.HY926)是人脐静脉内皮细胞和人肺腺癌细胞株A549杂交成的永生化细胞株,因其具有血管内皮细胞的特性,广泛用于内皮细胞相关研究。... 目的:建立一种从大容量细胞灌流液中提取外泌体的方法,并进行外泌体的鉴定。方法:人脐静脉内皮细胞株(EA.HY926)是人脐静脉内皮细胞和人肺腺癌细胞株A549杂交成的永生化细胞株,因其具有血管内皮细胞的特性,广泛用于内皮细胞相关研究。本研究采用含10%胎牛血清的M199培养基培养,利用Flexcell STR-4000平行板流室系统对EA.HY926施以振荡剪切应力。收集流体剪切应力处理后的细胞灌流液,去除细胞碎片后冻成干粉,脱盐、提取纯化外泌体。电镜观察外泌体形态、纳米粒径电位分析仪检测外泌体大小、PKH26染色检测外泌体膜性结构、BCA蛋白定量法检测外泌体的蛋白浓度、Western blot检测外泌体特异性蛋白CD9和CD81的表达,荧光定量RT-PCR检测内皮细胞相关基因的表达。结果:该方法提取的外泌体,大小均一,结构完整,呈典型囊泡样结构;粒径集中在30~150 nm,多数粒径为97.63 nm;表达外泌体特异性蛋白CD9和CD81;PKH26染色阳性,并可被细胞摄取;EA.HY926分泌的外泌体表达内皮细胞相关的CD31、vWF等mRNA,以及miR-126、miR-21、miR-155等microRNA分子。结论:本方法能够有效从大容量细胞灌流液中提取到结构完整的、高浓度、高质量的外泌体,为开展以流体力学干预细胞为基础的外泌体相关研究提供技术方法。 展开更多

关键词 外泌体 细胞灌流液 流体剪切应力 人脐静脉内皮细胞株

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基质溶解素及其反义寡核苷酸对肺腺癌A549细胞增殖的作用 被引量：1

6

作者 王志新 徐飞 +1 位作者 谢启超 陈正堂 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第20期2044-2046,共3页

目的探讨重组基质溶解素(recombinantmatrilysin,rMMP-7)和脂质体-MMP-7反义寡核苷酸(antisenseoli-gonucleotideofmatrilysinbyliposometransfection,LIPO-MAON)对肺腺癌A549细胞和人脐静脉血管内皮细胞(humanum-bilicalveinendothelia... 目的探讨重组基质溶解素(recombinantmatrilysin,rMMP-7)和脂质体-MMP-7反义寡核苷酸(antisenseoli-gonucleotideofmatrilysinbyliposometransfection,LIPO-MAON)对肺腺癌A549细胞和人脐静脉血管内皮细胞(humanum-bilicalveinendothelialcell,HUVEC)增殖的影响。方法①构建MMP-7的反义寡核苷酸。②MTT法检测rMMP-7和LI-PO-MOAN作用下A549和HUVEC的增殖状况。③RT-PCR法检测rMMP-7和LIPO-MAON作用下腺癌A549细胞和HU-VECMMP-7mRNA的表达。结果0.75、1.0μg/mlrMMP-7对HUVEC增殖有促进作用,各种浓度的LIPO-MAON无作用;对A549细胞的增殖,0.5、0.75、1.0μg/ml的rMMP-7均有促进作用;而高浓度(7.5、10nmol/ml)的LIPO-MAON对A549细胞增殖有明显抑制作用。RT-PCR检测结果表明,HUVEC不表达MMP-7mRNA;rMMP-7能增加A549细胞MMP-7mRNA的表达,LIPO-MAON可降低其MMP-7mRNA的表达(P<0.05)。结论在本试验浓度范围内高浓度的MMP-7能促进正常血管内皮细胞和肺腺癌细胞的增殖,其反义寡核苷酸不能抑制正常血管内皮细胞增殖,但高浓度的反义寡核苷酸能抑制肺腺癌细胞的增殖。 展开更多

关键词 基质溶解 MMP-7反义寡核苷酸 肺腺癌细胞A549 人脐静脉血管内皮细胞

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乌司他丁抑制脓毒症患者血清诱导的血管内皮细胞高通透性 被引量：7

7

作者 刘思佚 魏伏 +3 位作者 罗丽 许珊 刘疏柯 张丹 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1600-1604,共5页

目的观察乌司他丁(UTI)对脓毒症休克患者血清诱导的人脐静脉血管内皮细胞高通透性的影响。方法 ELISA检测5例健康志愿者和5例脓毒症休克患者血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;分别以(10、100、1000)U/mL UTI、300μL脓毒症休克患者血清、... 目的观察乌司他丁(UTI)对脓毒症休克患者血清诱导的人脐静脉血管内皮细胞高通透性的影响。方法 ELISA检测5例健康志愿者和5例脓毒症休克患者血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;分别以(10、100、1000)U/mL UTI、300μL脓毒症休克患者血清、22 ng/mL TNF-α作用于体外培养的EA.hy926人脐静脉内皮细胞,采用Transwell^(TM)法检测细胞通透性;跨上皮细胞电阻法(EVOM)检测单层细胞电阻;免疫荧光细胞化学染色法检测细胞纤维型肌动蛋白(F-actin)形态及分布情况。结果与健康志愿者相比,脓毒症患者血清中TNF-α含量明显增高;脓毒症血清作用于EA.hy926单层细胞后,细胞电阻值明显降低,细胞通透性显著升高,F-actin重新分布,细胞内应力纤维增多,而UTI可改善EA.hy926细胞的上述变化。结论 UTI能够抑制脓毒症血清引起的EA.hy926细胞通透性增加,且呈现一定的剂量依赖性。 展开更多

关键词 乌司他丁 EA.hy926血管内皮细胞 高通透性 肿瘤坏死因子Α

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常规制备家兔血清对人脐静脉内皮细胞-304的影响 被引量：4

8

作者 秦英 杨君 +4 位作者 姜良铎 王硕仁 朱陵群 牛福玲 周春华 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第11期845-848,共4页

目的 :探讨中药血清药理学研究中常规制备的正常家兔血清浓度变化对培养体系中细胞的影响。方法 :常规制备无污染、无溶血正常家兔血清 ,通过细胞形态学、台盼蓝染色活细胞计数、细胞毒四唑盐 (MTT)比色试验、乳酸脱氢酶 (LDH)及血管紧... 目的 :探讨中药血清药理学研究中常规制备的正常家兔血清浓度变化对培养体系中细胞的影响。方法 :常规制备无污染、无溶血正常家兔血清 ,通过细胞形态学、台盼蓝染色活细胞计数、细胞毒四唑盐 (MTT)比色试验、乳酸脱氢酶 (LDH)及血管紧张素转换酶 (ACE)等指标 ,观察 5 %、10 %、2 0 %、4 0 %、60 %和 80 %家兔血清对人脐静脉内皮细胞 (VEC) 30 4的影响。结果 :5 %和 10 %两浓度组各指标均无变化 ,对VEC 30 4没有损伤作用。 4 0 %、60 %和 80 % 3个浓度组家兔血清浓度对细胞均有不同程度的损伤 ,而且随着浓度的增加 ,呈现出损伤加重的趋势 ,而 2 0 %的浓度从细胞形态、台盼蓝染色活细胞计数、MTT及ACE方面没有表现出明显的损伤作用 ,只有LDH含量差异有显著性 (P <0 0 1)。结论 :常规制备的家兔血清在无污染和无溶血的情况下 ,其对细胞的作用浓度是有一定限制的 ,当达到 4 0 %或更高浓度时有较为明显的损伤。所以 ,在中药血清药理学研究中 ,应进行常规制备正常血清及含药血清的细胞毒实验 。 展开更多

关键词 细胞毒性 人脐静脉内皮细胞-304 乳酸脱氢酶 血管紧张素转换酶 中药血清药理学

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川芎嗪对人脐静脉内皮细胞株(Eahy926)氯化钴诱导缺氧后纤溶功能的影响 被引量：3

9

作者 吴昊 孙昊 +6 位作者 王军 黄培培 程洁 陈旭峰 陈彦 肖杭 张劲松 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期641-645,共5页

目的:建立人脐静脉内皮细胞株(Eahy926)缺氧细胞模型,探讨川芎嗪在缺氧条件下对血管内皮细胞纤溶功能的影响。方法:细胞分为对照组、缺氧组和川芎嗪(TMP)干预组,利用氯化钴(1.6mmol/L)模拟Eahy926细胞缺氧环境,建立缺氧模型,TMP干预组... 目的:建立人脐静脉内皮细胞株(Eahy926)缺氧细胞模型,探讨川芎嗪在缺氧条件下对血管内皮细胞纤溶功能的影响。方法:细胞分为对照组、缺氧组和川芎嗪(TMP)干预组,利用氯化钴(1.6mmol/L)模拟Eahy926细胞缺氧环境,建立缺氧模型,TMP干预组分别用0.08和0.16g/L的TMP干预。Hoechst法、CCK-8法检测各组细胞活力,RT-PCR观察各组细胞组织型纤溶酶原激活物(tissue-type plasminogen activator,t-PA)、尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase-type plasminogen activator,u-PA)、纤溶酶原激活物抑制物-1(plasminogen activator inhibit ortype-1,PAI-1)mRNA表达,双抗体夹心ELISA法检测各组细胞培养上清液中t-PA、u-PA、PAI-1含量。结果:与对照组相比,缺氧组及TMP干预组均出现细胞活力下降(P<0.01),但与缺氧组相比,TMP干预组细胞活力上升(P<0.01),且高浓度组较低浓度组上升明显(P<0.01);RT-PCR和ELISA结果显示:与对照组相比,缺氧组t-PAmRNA表达量降低(P<0.01),细胞培养上清液t-PA含量减少(P<0.01);与缺氧组比,高低浓度TMP处理组t-PAmRNA表达量及细胞培养上清液t-PA含量均增高,具有统计学差异(P<0.01);而高浓度较低浓度TMP干预组t-PAmRNA表达量升高(P<0.05),细胞培养上清液t-PA含量增加(P<0.01)。结论:川芎嗪能够浓度依赖性减轻Eahy926细胞的缺氧损伤,并通过调节其t-PAmRNA表达及上清液t-PA的分泌,影响内皮细胞的纤溶功能。 展开更多

关键词 川芎嗪 人脐静脉内皮细胞株(Eahy926) 氯化钴 缺氧 纤溶

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乌司他丁抑制肿瘤坏死因子-α诱导血管内皮细胞高通透性的机制研究 被引量：1

10

作者 刘思佚 魏伏 +3 位作者 刘疏柯 罗丽 许珊 张丹 《中华重症医学电子杂志》 2018年第2期170-175,共6页

目的探讨乌司他丁(UTI)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的血管内皮细胞通透性增高的影响及其主要分子机制。方法离体培养人脐静脉内皮细胞系EA.hy926,分别以UTI和TNF-α作用于EA.hy926,小室法测单层细胞通透性,免疫荧光法测磷酸化肌球蛋... 目的探讨乌司他丁(UTI)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的血管内皮细胞通透性增高的影响及其主要分子机制。方法离体培养人脐静脉内皮细胞系EA.hy926,分别以UTI和TNF-α作用于EA.hy926,小室法测单层细胞通透性,免疫荧光法测磷酸化肌球蛋白磷酸酶靶向亚基1(p-MYPT1)的表达;分别采用免疫细胞化学法、Western Blot法测与通透性相关的关键分子(RhoA、ROCK2、MYPT1、p-MYPT1及VE-cadherin)表达的变化情况。结果 TNF-α作用下EA.hy926单层细胞通透性增加,细胞内p-MYPT1的表达量较正常对照组明显增加,而UTI可改善EA.hy926细胞的上述变化情况;免疫细胞化学结果显示,与正常对照组比较,TNF-α作用下RhoA、ROCK2的表达明显增加,而UTI可抑制RhoA、ROCK2的高表达;Western Blot结果显示,与正常对照组比较,TNF-α作用下p-MYPT1、RhoA和ROCK2的表达明显增加,VE-cadherin的表达明显降低(均P<0.05),而UTI可抑制p-MYPT1、RhoA和ROCK2蛋白的高表达,增加VE-cadherin的表达。结论 UTI可能通过Rho/ROCK信号通路抑制TNF-α引起的EA.hy926细胞通透性增加。 展开更多

关键词 血管内皮细胞EA.hy926 高通透性 乌司他丁 肿瘤坏死因子-Α RHO/ROCK信号通路

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不同浓度IL-1对人脐静脉内皮细胞EA.hy926表达CD62p的影响

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作者 王晖 楚雍烈 +2 位作者 徐仓宝 周览 任娟 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期264-264,301,共2页

目的 :研究白介素 1( 1L 1)作用于人脐静脉内皮EA .hy92 6细胞对CD6 2 p表达的影响。 方法 :采用流式细胞仪分群作用衡量EA细胞株和单核细胞之间的粘附率 ,用细胞免疫组化法检测IL 1作用于EA株后引起的CD6 2p蛋白水平的表达。结果和结... 目的 :研究白介素 1( 1L 1)作用于人脐静脉内皮EA .hy92 6细胞对CD6 2 p表达的影响。 方法 :采用流式细胞仪分群作用衡量EA细胞株和单核细胞之间的粘附率 ,用细胞免疫组化法检测IL 1作用于EA株后引起的CD6 2p蛋白水平的表达。结果和结论 :EA株取代在粘附分子CD6 2p表达方面与正常体内血管内皮细胞非常一致 。 展开更多

关键词 人脐静脉内皮细胞 表达 CD62P 动脉粥样硬化 白介素-1

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