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大黄素抑制Akt/mTOR通路抗肾小管上皮细胞纤维化的作用研究 被引量:13
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作者 窦芳 丁一 +6 位作者 楚建杰 李韦韦 张伟 宁泽琼 赵先 王婧雯 文爱东 《中国药师》 CAS 2018年第10期1707-1711,共5页
目的:探讨大黄素(EM)在转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激的人肾小管上皮细胞(HK-2)纤维化相关蛋白表达的机制。方法:HK-2细胞随机分为正常对照组、TGF-β1刺激的模型对照组和大黄素(TGF-β1+EM)组。采用ELISA法检测培养细胞上清液中Collag... 目的:探讨大黄素(EM)在转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激的人肾小管上皮细胞(HK-2)纤维化相关蛋白表达的机制。方法:HK-2细胞随机分为正常对照组、TGF-β1刺激的模型对照组和大黄素(TGF-β1+EM)组。采用ELISA法检测培养细胞上清液中CollageⅠ和Fibronectin的含量。TGF-β1刺激HK-2细胞24 h后收集细胞用于免疫荧光、免疫印迹Western Blot和实时荧光定量PCR(RT-PCR)分析。Western Blot印迹法分别检测Akt/mTOR通路蛋白PI3K、p-Akt和mTOR的表达; RTPCR法分别检测Akt/mTOR通路蛋白PI3K、p-Akt和mTOR mRNA的表达;免疫荧光检测PI3K在HK-2细胞模型中的表达。结果:与模型对照组相比,大黄素组细胞培养液上清中CollageⅠ和Fibronectin的含量明显减少(P <0. 05);抑制PI3K蛋白表达水平增加,降低其下游p-Akt蛋白表达,进而降低下游mTOR蛋白表达,差异有统计学意义(P <0. 05); PI3K、p-Akt和mTOR mRNA的表达水平降低,差异有统计学意义(P <0. 05); PI3K荧光表达减少。结论:大黄素干预TGF-β1诱导的HK-2细胞纤维化模型后,可以通过抑制自噬经典Akt/mTOR通路,对细胞损伤有缓解作用,为进一步探索其机制奠定基础。 展开更多
关键词 大黄素 纤维化 人肾小管上皮细胞 AKT/MTOR 自噬
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动力相关蛋白-1在缺氧/复氧诱导人肾小管上皮细胞焦亡机制中的作用 被引量:12
2
作者 陈雨 侯卫平 袁发焕 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1251-1256,共6页
目的观察人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤时线粒体动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1,Drp1)、Nod样受体热蛋白结构域相关蛋白3(nucleotide binding oligomerization domain-like receptor f... 目的观察人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤时线粒体动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1,Drp1)、Nod样受体热蛋白结构域相关蛋白3(nucleotide binding oligomerization domain-like receptor family pyrin domain containing 3,Nlrp3)以及炎性因子的表达改变和细胞焦亡情况,探讨Drp1在H/R诱导肾小管上皮细胞焦亡中的作用。方法 HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12液培养于37℃、5%CO2和95%O2的恒温培养箱。将细胞分为正常对照组、H/R组、H/R+Drp1抑制剂(H/R+Mdivi-1)组、H/R+si Nlrp3腺病毒(H/R+si Nlrp3)组、H/R+空腺病毒(H/R+Scra)组。检测细胞培养液上清乳酸脱氢酶LDH活性,Western blot检测Drp1、Nlrp3、凋亡相关蛋白-1(caspase-1)、IL-1β表达,2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)检测细胞活性氧(ROS)水平,流式分析仪检测细胞焦亡情况。结果与正常对照组比较,H/R组培养液上清LDH和细胞内ROS水平明显升高,Drp1、Nlrp3、caspase-1、IL-1β表达增高,细胞焦亡明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);与H/R组比较,H/R+Mdivi-1组培养液上清LDH和细胞内ROS水平明显降低,Nlrp3、caspase-1、IL-1β表达降低,细胞焦亡明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在H/R条件下,Drp1通过激活Nlrp3炎性体诱导人肾小管上皮细胞焦亡。 展开更多
关键词 动力相关蛋白1 Nod样受体热蛋白结构域相关蛋白3 细胞焦亡 人肾小管上皮细胞 缺氧/复氧损伤
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镰形棘豆总黄酮对TGF-β_1诱导的人肾小管上皮细胞纤维化因子的影响 被引量:12
3
作者 李钦 李晓东 +1 位作者 姜华 杨丽霞 《中国实验方剂学杂志》 CAS 北大核心 2013年第11期220-223,共4页
目的:研究镰形棘豆总黄酮防治肾间质纤维化作用及其机制。方法:大鼠按300 mg.kg-1ig镰形棘豆总黄酮,连续给药3 d后制备含药血清,空白组大鼠ig同体积生理盐水制备空白血清。将人肾小管上皮细胞(HK-2)用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培... 目的:研究镰形棘豆总黄酮防治肾间质纤维化作用及其机制。方法:大鼠按300 mg.kg-1ig镰形棘豆总黄酮,连续给药3 d后制备含药血清,空白组大鼠ig同体积生理盐水制备空白血清。将人肾小管上皮细胞(HK-2)用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养,分为4组:空白对照组、单纯转化生长因子-β1(TGF-β110μg.L-1)诱导组、空白血清对照组(TGF-β110μg.L-1+10%空白血清)、干预组(TGF-β110μg.L-1+10%镰形棘豆总黄酮含药血清)。药物干预24 h后,荧光定量PCR检测结缔组织生长因子(CTGF)、纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA的表达。结果:HK-2细胞经TGF-β1诱导后,CTGF,PAI-1 mRNA的表达显著上升,而MMP-9 mRNA的表达减弱,与空白对照组相比有统计学意义(P<0.05),经镰形棘豆总黄酮药物血清干预后,CTGF、PAI-1 mRNA的表达逐步下降,而MMP-9 mRNA的表达逐步上升,与单纯TGF-β1诱导组相比有统计学意义(P<0.05)。结论:镰形棘豆总黄酮在一定程度上能够抑制TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞纤维化,其机制可能与调节纤维化细胞因子CTGF,PAI-1和MMP-9的mRNA表达有关。 展开更多
关键词 镰形棘豆总黄酮 转化生长因子-Β1 人肾小管上皮细胞 结缔组织生长因子 纤溶酶原激活物抑制物-1 基质金属蛋白酶-9
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高锶矿泉水的细胞毒性研究 被引量:6
4
作者 蔺艳 张莹茜 +4 位作者 盘强文 冯志强 李著华 赵成涛 冉兵 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第14期2125-2128,共4页
目的比较不同浓度的高锶矿泉水对人肝细胞(LO2)、肾小管细胞(HK-2)和人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)增殖的影响,以了解高锶矿泉水的细胞毒性,探索对人体有益的锶矿泉水浓度及作用。方法将LO2、HK-2、HUVEC分为2、4、6、8 mg/L锶矿泉水组... 目的比较不同浓度的高锶矿泉水对人肝细胞(LO2)、肾小管细胞(HK-2)和人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)增殖的影响,以了解高锶矿泉水的细胞毒性,探索对人体有益的锶矿泉水浓度及作用。方法将LO2、HK-2、HUVEC分为2、4、6、8 mg/L锶矿泉水组和对照组,先以4×104.mL-1的浓度接种于培养板中,18 h后,分别换成2、4、6、8 mg/L的锶矿泉水和双蒸水配制的DMEM高糖培养基继续培养。根据不同细胞的增殖周期,分别于1、2、3、4、5和7 d时,以CCK-8法观察细胞的增殖情况,用细胞相对增殖率按美国药典标准评价细胞毒性。用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验检测培养3 d后的HUVEC培养基中血管内皮生长因子(VEGF)的分泌量。结果 2、4、6 mg/L锶矿泉水组中锶矿泉水对LO2、HK-2、HUVEC的毒性均为0~1级,8 mg/L锶矿泉水组中锶矿泉水在上述细胞增殖的早期或晚期对细胞的毒性为2~3级。LO2在4、6 mg/L锶矿泉水组中提前出现增殖峰,并较长时间地保持旺盛的增殖状态(P<0.05);HK-2在4、6、8 mg/L锶矿泉水组中生长周期延长(P<0.05),尤以4 mg/L锶矿泉水组的效果最突出(P<0.05)。HUVEC在2、4 mg/L锶矿泉水组中培养3 d后增殖速度加快(P<0.05),明显快于对照组和其他锶矿泉水组(P<0.05),而8 mg/L锶矿泉水组细胞增殖速度总体慢于对照组(P<0.05)。锶矿泉水组细胞分泌VEGF的总量均较对照组减少(P<0.05),但锶矿泉水组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论高锶矿泉水在锶浓度不超过8 mg/L时对肝、肾和血管内皮细胞无明显毒性,对细胞增殖有益,其中锶浓度为4 mg/L的效果最突出,以延长其增殖周期为主。VEGF可能并不是高锶矿泉水促HUVEC增殖的主要作用。 展开更多
关键词 锶矿泉水 细胞毒性 肝细胞 肾小管细胞 血管内皮细胞 增殖 血管内皮生长因子
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大黄素对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞间质转分化的影响 被引量:5
5
作者 窦芳 丁一 +5 位作者 郭奇彦 王文军 简宇凡 赵先 王婧雯 文爱东 《现代生物医学进展》 CAS 2018年第21期4007-4011,共5页
目的:探讨大黄素对TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)间质转分化的影响。方法:不同浓度大黄素分别作用于TGF-β1诱导HK-2细胞24 h和48 h,通过细胞增殖实验确定最佳大黄素最佳给药浓度。TGF-β1诱导HK-2细胞24 h后收集细胞用于免疫印... 目的:探讨大黄素对TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)间质转分化的影响。方法:不同浓度大黄素分别作用于TGF-β1诱导HK-2细胞24 h和48 h,通过细胞增殖实验确定最佳大黄素最佳给药浓度。TGF-β1诱导HK-2细胞24 h后收集细胞用于免疫印迹Western blot和实时荧光定量PCR(RT-PCR)分析。Western印迹法分别检测纤维化相关蛋白Collagen IV的表达,和肾小管上皮细胞向间充质细胞转分化关键蛋白α-SMA和E-Cadherin的表达;RT-PCR法检测肾小管上皮细胞向间充质细胞转分化关键蛋白α-SMA的表达。结果:由细胞增殖实验结果表明40μM大黄素是最佳给药浓度。Western结果表明,与模型组相比,大黄素组下调纤维化相关蛋白Collagen IV的表达,大黄素组与模型组蛋白差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组相比,大黄素组下调α-SMA蛋白表达水平,而上调E-Cadherin蛋白表达,差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR结果表明,与模型组相比,大黄素组降低α-SMA mRNA的含量,大黄素组与模型组α-SMA mRNA含量差异有统计学意义(P<0.05)。结论:大黄素可通过抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞间质转分化,从而发挥延缓肾间质纤维化的过程。 展开更多
关键词 大黄素 上皮间质转分化 人肾小管上皮细胞 转化生长因子-Β1 Α-平滑肌肌动蛋白
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The Effect of Connective Tissue Growth Factor on Human Renal Tubular Epithelial Cell Transdifferentiation 被引量:2
6
作者 张春 朱忠华 邓安国 《Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences)》 SCIE CAS 2004年第4期350-353,共4页
To investigate the role of connective tissue growth factor (CTGF) in transdifferentiation of human renal tubular epithelial cell (HKC), in vitro cultured HKC cells were divided into 3 groups: negtive control, low dose... To investigate the role of connective tissue growth factor (CTGF) in transdifferentiation of human renal tubular epithelial cell (HKC), in vitro cultured HKC cells were divided into 3 groups: negtive control, low dose CTGF-treated group (rh CTGF, 2.5 ng/ml) and high dose CTGF-treated (rhCTGF, 5.0 ng/ml). Then the expression of α-smooth muscle actin (α-SMA) were assessed by indirect immuno-fluorescence, and the percentage of α-SMA positive cells were assessed by flow cytometry. RT-PCR were also performed to examine the mRNA level of α-SMA. Upon the stimulation of different concentrations of rhCTGF, the expression of α-SMA were markedly stronger than that in negative controls. The percentages of α-SMA positive cells were significantly higher in the stimulated groups than that of negative controls (38.9 %, 65.5 % vs 2.4 %, P<0.01) .α-SMA mRNA levels were also up-regulated by the stimulation of rhCTGF (P<0.01). These results suggest that CTGF can promote the transdifferentiation of human renal tubular epithelial cells towards myofibroblast (Myo-F). 展开更多
关键词 connective tissue growth factor human renal tubular epithelial cell TRANSDIFFERENTIATION
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四妙散对尿酸诱导人肾小管上皮细胞结缔组织生长因子及骨形成蛋白-7表达的影响 被引量:4
7
作者 康洁 陈继承 +2 位作者 张凌媛 丁珊珊 高碧珍 《中国中医药信息杂志》 CAS CSCD 2015年第1期73-76,共4页
目的探讨四妙散药物血清防治肾间质纤维化的作用机制。方法将人肾小管上皮细胞(HK-2)分为空白组、模型组、对照组及药物血清高、中、低剂量组。实时荧光定量PCR检测结缔组织生长因子(CTGF)、骨形成蛋白-7(BMP-7),免疫组织化学检测CTGF、... 目的探讨四妙散药物血清防治肾间质纤维化的作用机制。方法将人肾小管上皮细胞(HK-2)分为空白组、模型组、对照组及药物血清高、中、低剂量组。实时荧光定量PCR检测结缔组织生长因子(CTGF)、骨形成蛋白-7(BMP-7),免疫组织化学检测CTGF、BMP-7蛋白的表达。结果尿酸诱导后CTGF的m RNA和蛋白表达量明显增加(P<0.05),BMP-7的m RNA和蛋白表达量明显降低(P<0.05);经药物血清干预后,随剂量增加CTGF的表达逐步下降(P<0.05),BMP-7的表达逐步上升(P<0.05),呈现一定剂量依赖性。结论四妙散抗肾间质纤维化的机制可能是通过下调CTGF的表达和上调BMP-7的表达抑制上皮细胞转分化完成的。 展开更多
关键词 四妙散 尿酸 人肾小管上皮细胞 纤维化 上皮细胞转分化
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方格星虫酶解超滤组分对顺铂所致HK-2人肾小管上皮细胞损伤的保护作用研究
8
作者 陶素素 彭志兰 +4 位作者 陈晖 李茹 刘华锋 杨陈 戚怡 《中国海洋药物》 CAS CSCD 2024年第2期41-52,共12页
目的探究方格星虫酶解产物对顺铂诱导的HK-2人肾小管上皮细胞损伤的改善作用。方法方格星虫酶解后的离心液逐级通过50 kDa和2.5 kDa超滤膜后,获得>50 kDa(F-Ⅰ),2.5 kDa~50 kDa(F-Ⅱ),<2.5 kDa(F-Ⅲ)3个超滤组分,分析其营养成分... 目的探究方格星虫酶解产物对顺铂诱导的HK-2人肾小管上皮细胞损伤的改善作用。方法方格星虫酶解后的离心液逐级通过50 kDa和2.5 kDa超滤膜后,获得>50 kDa(F-Ⅰ),2.5 kDa~50 kDa(F-Ⅱ),<2.5 kDa(F-Ⅲ)3个超滤组分,分析其营养成分、分子量排布和氨基酸组成;在顺铂诱导HK-2细胞损伤模型上,评价各超滤组分对顺铂损伤的HK-2细胞活力、细胞凋亡以及细胞内ROS的产生的影响;采用Western blotting探究其中活性最优F-Ⅰ超滤组分对NF-κB信号通路的影响。结果营养成分和分子量排布分析发现,F-Ⅰ超滤组分中总糖所占的比例最高,以干基计约占48.59%,逐级超滤可以提高超滤组分中多肽的含量,F-Ⅲ组分主要为<2.5 kDa的小分子肽。氨基酸组成分析发现3个超滤组分氨基酸组成齐全,疏水性氨基酸含量高。细胞实验结果表明3个超滤组分均能显著提高顺铂损伤后的HK-2细胞的细胞活力,抑制细胞凋亡和减少细胞内活性氧ROS的累积。其中F-Ⅰ组分缓解顺铂对HK-2细胞损伤的效果最好,能抑制NF-κB信号通路p65和Iκb-α蛋白的磷酸化。结论方格星虫的3个酶解超滤组分均对顺铂损伤后的HK-2细胞具有保护作用。相较于其他两个组分,含有较高多糖的F-Ⅰ组分具有更好的改善作用,可能机制与F-Ⅰ组分能更好抑制ROS的积累、细胞凋亡以及NF-κB信号通路有关。 展开更多
关键词 方格星虫 超滤组分 NF-ΚB信号通路 顺铂 人肾小管上皮细胞
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肾康注射液调节TGF-βⅠ型受体/Smad通路抑制肾纤维化的作用机制 被引量:2
9
作者 崔天梦 黄更珍 +1 位作者 张莹莹 马跃荣 《世界科学技术-中医药现代化》 CSCD 北大核心 2023年第10期3355-3363,共9页
目的肾康注射液(Shenkang injection,SKI)作为一种中药静脉注射剂,已在临床用于治疗慢性肾病。本研究探讨SKI调节TGF-βⅠ型受体/Smad通路抑制肾纤维化的作用机制。方法在37℃环境中,使用10 ng·mL^(-1)TGF-β1处理人小管上皮细胞(H... 目的肾康注射液(Shenkang injection,SKI)作为一种中药静脉注射剂,已在临床用于治疗慢性肾病。本研究探讨SKI调节TGF-βⅠ型受体/Smad通路抑制肾纤维化的作用机制。方法在37℃环境中,使用10 ng·mL^(-1)TGF-β1处理人小管上皮细胞(Human kidney proximal tubular cell,HK-2)48 h,建立体外肾纤维化模型。用SKI处理细胞48 h后,通过显微镜观察细胞的形态;采用Western blot、RT-PCR和免疫荧光技术检测α-平滑肌肌动蛋白(α-Smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅲ型胶原(Collagen typeⅢ,COI-Ⅲ)、TGF-β1、Smad3、Smad7和TβR-Ⅰ蛋白和基因的表达变化。结果SKI能抑制肾纤维化相关蛋白和基因的表达,如α-SMA和COI-Ⅲ。SKI调控与TGF-β/Smad信号通路相关蛋白的表达,通过下调TGF-β1、Smad3和TβR-Ⅰ蛋白,上调Smad7蛋白表达,延缓肾脏纤维化。结论SKI抑制肾纤维化,可能通过下调TβR-Ⅰ、调控TGF-β/Smad通路相关分子的表达。 展开更多
关键词 肾康注射液 肾纤维化 TβR-Ⅰ型受体 HK-2细胞 TGF-Β/SMAD信号通路
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复肾颗粒对人肾小管上皮细胞TAK1表达的影响 被引量:3
10
作者 刘明龙 曾永祥 +3 位作者 卢守燕 李建华 刘天喜 赵建雄 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期221-225,共5页
目的:探讨复肾颗粒(生黄芪、丹参、川芎、大黄和鳖甲)含药血清对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导下人肾小管上皮细胞(HK-2)增殖时转化生长因子β激活激酶(TAK1)表达的影响。方法:体外培养HK-2细胞并制备复肾颗粒含药血清,分为对照组、TGF... 目的:探讨复肾颗粒(生黄芪、丹参、川芎、大黄和鳖甲)含药血清对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导下人肾小管上皮细胞(HK-2)增殖时转化生长因子β激活激酶(TAK1)表达的影响。方法:体外培养HK-2细胞并制备复肾颗粒含药血清,分为对照组、TGF-β1诱导组(5ng/mL)、干预1组(TGF-β1 5 ng/mL+复肾颗粒100μg/mL)、干预2组(TGF-β1 5 ng/mL+复肾颗粒500μg/mL)、干预3组(TGF-β1 5 ng/mL+复肾颗粒1 mg/mL)。培养12、24、48h以MTT法检测细胞增殖情况,ELISA法检测细胞上清IV型胶原蛋白(Col IV)含量,实时荧光定量PCR检测TAK1 mRNA的相对含量,Western-bloting法检测TAK1蛋白表达。结果:TGF-β1组细胞的增殖及Col IV含量、TAK1蛋白及mRNA的表达显著高于对照组(P<0.05,P<0.01),复肾颗粒含药血清干预后细胞增殖和Col IV的含量、TAK1表达显著低于TGF-β1组(P<0.05,P<0.01)。结论:在体外试验中,复肾颗粒含药血清对TGF-β1诱导HK-2细胞增殖过程中TAK1蛋白及mRNA的表达有下调作用,其可能是通过激活肾小管上皮细胞某些抑制因子抑制TAK1转录和表达。 展开更多
关键词 复肾颗粒 人肾小管上皮细胞 细胞增殖 肾纤维化 转化生长因子β激活激酶
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糖肾康对高糖诱导人肾小管上皮细胞分泌基质金属蛋白酶-9及其抑制剂-1的影响 被引量:3
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作者 柴青春 杨丽霞 +3 位作者 薛建军 程涛 张定华 刘铜华 《中国中医药信息杂志》 CAS CSCD 2014年第10期58-60,共3页
目的探讨糖肾康防治糖尿病肾病的作用机制。方法将体外培养的人肾小管上皮细胞(HK-2)分为空白组、高糖诱导组(30 mmol/L D-葡萄糖)、对照组(30 mmol/L D-葡萄糖+10%空白血清)和糖肾康低(30 mmol/L D-葡萄糖+5%糖肾康药物血清)、中(30 mm... 目的探讨糖肾康防治糖尿病肾病的作用机制。方法将体外培养的人肾小管上皮细胞(HK-2)分为空白组、高糖诱导组(30 mmol/L D-葡萄糖)、对照组(30 mmol/L D-葡萄糖+10%空白血清)和糖肾康低(30 mmol/L D-葡萄糖+5%糖肾康药物血清)、中(30 mmol/L D-葡萄糖+10%糖肾康药物血清)、高剂量组(30 mmol/L D-葡萄糖+20%糖肾康药物血清)。药物干预24、48 h后,ELISA检测细胞培养上清液中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及其抑制剂-1(TIMP-1)的含量。结果 HK-2经高糖诱导后,MMP-9分泌显著减少,TIMP-1分泌显著增加,与空白组比较,差异有统计学意义(P<0.05);经糖肾康干预后,MMP-9含量显著上升,TIMP-1含量显著下降,与高糖诱导组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论糖肾康通过调控高糖诱导人肾HK-2纤维化因子的分泌,达到防治糖尿病肾病的目的。 展开更多
关键词 糖肾康 高糖 人肾小管上皮细胞 基质金属蛋白酶-9 基质金属蛋白酶抑制剂-1
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人肾小管上皮细胞蛋白质组的双向电泳及计算机图像分析 被引量:1
12
作者 李娅 陈楠 +2 位作者 王伟铭 张群业 黄秋花 《中华肾脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期402-405,共4页
目的 双向电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2DGE)技术是蛋白质组研究中最为重要的蛋白质分离方法。建立并优化人肾小管上皮细胞蛋白质组分析所需的固相pH梯度等电聚焦双向电泳及相关技术。方法 由于不同的细胞系特殊性,样品... 目的 双向电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2DGE)技术是蛋白质组研究中最为重要的蛋白质分离方法。建立并优化人肾小管上皮细胞蛋白质组分析所需的固相pH梯度等电聚焦双向电泳及相关技术。方法 由于不同的细胞系特殊性,样品处理亦不同,因此以人肾小管上皮细胞HK-2为研究对象,对样品液组成、样品处理、上样方式、上样量、IPG胶条和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳染色方法等相关技术进行了研究和条件优化后,以固相pH梯度等电聚焦为第一向和SDS均一胶(T=12.5%)的水平电泳为第二向,研究人肾小管上皮细胞蛋白质组。结果 成功地得到了人肾小管上皮细胞双向电泳图谱,并通过ImageMaster 2D Elite 3.01软件进行图像分析,输出初步的检测结果。结论 建立蛋白质组研究的技术平台,为从更高的水平来寻找肾脏疾病的功能蛋白和特异性蛋白,阐明肾脏疾病发生发展的网络机制等后续研究工作奠定基础。 展开更多
关键词 肾小管 上皮细胞 蛋白质组 双向电泳 计算机图像分析 肾脏疾病
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氟伐他汀干预血管紧张素Ⅱ对肾小管上皮细胞分泌纤维连接蛋白的作用 被引量:2
13
作者 刘佳 储腊萍 +1 位作者 王宁宁 邢昌赢 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1012-1014,共3页
目的观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及氟伐他汀对体外培养的肾小管上皮细胞分泌细胞外基质成分的影响。方法用10-6mol/LAngⅡ刺激肾小管上皮细胞6、12、24、48、72、96h,不同浓度(10-9~10-5mol/L)氟伐他汀干预48h,免疫印迹及细胞免疫荧光法... 目的观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及氟伐他汀对体外培养的肾小管上皮细胞分泌细胞外基质成分的影响。方法用10-6mol/LAngⅡ刺激肾小管上皮细胞6、12、24、48、72、96h,不同浓度(10-9~10-5mol/L)氟伐他汀干预48h,免疫印迹及细胞免疫荧光法检测纤维连接蛋白(FN)的表达。结果AngⅡ刺激体外培养的肾小管上皮细胞12h后FN表达开始增加,72h到达高峰。氟伐他汀干预组与AngⅡ刺激(未干预)组比较,FN表达明显下降,浓度10-5mol/L下降最明显,10-6mol/L次之,10-7~10-9mol/L抑制作用没有明显的差别。结论AngⅡ促进肾小管上皮细胞产生FN,具有一定的时间依赖性,而氟伐他汀能够抑制此作用,并在一定范围内呈浓度依赖。 展开更多
关键词 血管紧张素Ⅱ 氟伐他汀 肾小管上皮细胞 纤维连接蛋白
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人参皂甙对缺氧复氧致肾小管上皮细胞损伤保护作用的蛋白质组学分析 被引量:2
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作者 张春燕 肖斌 +2 位作者 邵军 陶忠桦 甘淋 《西南医科大学学报》 2019年第3期207-210,共4页
目的:从蛋白质水平探讨人参皂甙(ginsenosides,GS)对人肾小管上皮细胞(HK-2)缺氧复氧(hypoxia-reoxygenation,HR)损伤的保护作用及其作用机制。方法:以人肾小管上皮细胞株HK-2为研究对象,建立细胞HR模型,分为对照组、HR组、HR+GS组。倒... 目的:从蛋白质水平探讨人参皂甙(ginsenosides,GS)对人肾小管上皮细胞(HK-2)缺氧复氧(hypoxia-reoxygenation,HR)损伤的保护作用及其作用机制。方法:以人肾小管上皮细胞株HK-2为研究对象,建立细胞HR模型,分为对照组、HR组、HR+GS组。倒置显微镜观察细胞形态,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法筛选最佳药物浓度,蛋白质组学技术鉴定差异表达蛋白。结果:HR组的细胞平均吸光度(A)值较对照组明显减少,细胞存活率明显下降(P<0.05)。浓度为2.0μg/mL的GS可显著提高HR损伤后的HK-2细胞存活率(P<0.01)。蛋白质组学技术鉴定出HR组与HR+GS组共3个差异表达蛋白点,包括凋亡相关蛋白、应激反应蛋白、细胞骨架蛋白等。结论:HR+GS组的蛋白质表达谱发生了改变,这些改变的蛋白质可能与GS对HR致HK-2损伤的保护作用有关。 展开更多
关键词 人参皂甙 人肾小管上皮细胞 缺氧复氧 抗氧化 凋亡
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葛根素对肾小管上皮细胞缺氧复氧损伤的保护作用及机制研究 被引量:2
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作者 张春燕 肖斌 +2 位作者 邵军 陶忠桦 甘淋 《西南医科大学学报》 2017年第4期379-382,共4页
目的:探讨葛根素对人肾小管上皮细胞(HK-2)缺氧复氧(HR)损伤的保护作用及机制。方法:以人肾小管上皮细胞株HK-2为研究对象,建立细胞HR模型,分为对照组、HR组、HR+葛根素组。倒置显微镜观察细胞形态,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力,... 目的:探讨葛根素对人肾小管上皮细胞(HK-2)缺氧复氧(HR)损伤的保护作用及机制。方法:以人肾小管上皮细胞株HK-2为研究对象,建立细胞HR模型,分为对照组、HR组、HR+葛根素组。倒置显微镜观察细胞形态,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力,丙二醛(MDA)试剂盒检测细胞MDA含量,乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测细胞LDH释放量,超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒检测细胞SOD活性,Western-blotting法检测细胞bax、bcl-2蛋白的表达水平。结果:葛根素可减少HR性损伤HK-2的MDA生成及LDH释放,增强SOD活性,上调bcl-2蛋白的表达,下调bax蛋白的表达。结论:葛根素对HK-2的HR性损伤有明确的保护作用,其机制与降低细胞氧化应激损伤和减少细胞凋亡有关。 展开更多
关键词 葛根素 人肾小管上皮细胞 缺氧复氧 抗氧化 凋亡
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槐耳清膏对人肾小管上皮细胞内质网应激损伤的保护作用 被引量:2
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作者 傅桐 侯玲 +1 位作者 范洋 杜悦 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期147-150,共4页
目的探讨槐耳清膏对人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)内质网应激的保护作用。方法将HK-2细胞分为对照组(正常HK-2细胞),毒胡萝卜素(TG)组(5μmol/L TG处理8 h),5 mg/mL、10 mg/mL中药组(5、10 mg/mL槐耳清膏处理12 h),中药+TG组(5、10 mg/mL... 目的探讨槐耳清膏对人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)内质网应激的保护作用。方法将HK-2细胞分为对照组(正常HK-2细胞),毒胡萝卜素(TG)组(5μmol/L TG处理8 h),5 mg/mL、10 mg/mL中药组(5、10 mg/mL槐耳清膏处理12 h),中药+TG组(5、10 mg/mL槐耳清膏处理4 h后加入5μmol/L TG共同作用8 h)。采用Western blotting检测各组细胞内质网源性转录因子(CHOP)和内质网分子伴侣葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达情况。结果与对照组相比,TG组细胞CHOP和GRP78的表达显著增加(P<0.05),中药组CHOP及GRP78表达无明显变化(P>0.05)。与TG组相比,中药(5、10 mg/mL)+TG组CHOP与GRP78表达显著减少。结论TG可诱导人肾小管上皮HK-2细胞发生内质网应激反应。适宜浓度的槐耳清膏可能通过下调CHOP、GRP78表达,抑制HK-2细胞内质网应激反应,从而发挥保护肾小管上皮细胞的作用。 展开更多
关键词 槐耳清膏 人肾小管上皮细胞 内质网应激
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还原型谷胱甘肽对高糖环境下肾小管细胞活性氧、核因子-κB及骨桥蛋白的影响 被引量:2
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作者 肖曼 董吉祥 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期441-443,共3页
目的观察高糖对人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)产生活性氧、核因子-κB(NF-κB)及骨桥蛋白(OPN)的影响及还原型谷胱甘肽(GSH)的干预作用。方法用分光光度比色法测定上清液超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,用RT-PCR法测定细胞内NF... 目的观察高糖对人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)产生活性氧、核因子-κB(NF-κB)及骨桥蛋白(OPN)的影响及还原型谷胱甘肽(GSH)的干预作用。方法用分光光度比色法测定上清液超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,用RT-PCR法测定细胞内NF-κB mRNA的变化及用ELISA法测定上清液中OPN的含量。结果高糖组SOD活力显著低于正常组(P<0.01),MDA含量、NF-κB mRNA的表达及OPN含量明显高于正常组(P<0.01),GSH可增加SOD活力(P<0.05),并减少MDA及OPN的含量、NF-κB mRNA的表达(P<0.01)。结论高糖可导致HK-2细胞活性氧产生增多及NF-κB、OPN的高表达,而GSH可进行有效干预。 展开更多
关键词 还原型谷胱甘肽 高糖 人肾小管上皮细胞 活性氧
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毒胡萝卜素诱导肾小管上皮细胞内质网应激后中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的变化 被引量:2
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作者 付晓鸥 侯玲 杜悦 《国际儿科学杂志》 2017年第5期352-355,共4页
目的观察毒胡萝卜素引起肾小管上皮细胞内质网应激后中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase associated lipocalin,NGAL)的改变及意义。方法使用毒胡萝卜素构建人肾小管上皮细胞内质网应激模型,免疫印迹法检测模... 目的观察毒胡萝卜素引起肾小管上皮细胞内质网应激后中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase associated lipocalin,NGAL)的改变及意义。方法使用毒胡萝卜素构建人肾小管上皮细胞内质网应激模型,免疫印迹法检测模型中内质网应激蛋白CHOP、GRP78表达水平,验证模型构建情况。Western—blot检测实验组(毒胡萝素组)与对照组(正常肾小管上皮细胞)中NGAL蛋白的表达情况。结果毒胡萝卜素的最佳给药浓度分别为2.5μmol/L和5μmol/L,分别作用4h和8h。与毒胡萝卜素作用4h比较,作用8h后细胞中内质网应激指标CHOP和GRP78蛋白的表达量显著增加(0.785±0.049比0.585±0.045),(0.728±0.064比0.523±0.030),差异有统计学意义(P〈0.05)。与毒胡萝卜素作用4h细胞中NGAL蛋白的表达量比较,作用8h后表达量显著增加(0.826±0.057比0.567±0.024),并随着内质网应激的加重增加得更为明显(P〈0.05)。结论用毒胡萝卜素诱导正常人肾小管上皮细胞,能够出现内质网应激现象,可引起CHOP、GRP78和NGAL表达增加。随着内质网应激的加重,NGAL增加得更为明显。在内质网发生应激时NGAL表达增加,两者可能存在相关性。 展开更多
关键词 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白 内质网应激 人肾小管上皮细胞
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对比剂通过内质网应激诱导人肾小管上皮细胞凋亡 被引量:2
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作者 孙丽娜 黄敏 +1 位作者 张丹凤 苏津自 《中华高血压杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1169-1174,共6页
目的探讨内质网应激在对比剂诱导人肾小管上皮细胞(HKC)凋亡中的作用。方法在缺血、缺氧(0.2%胎牛血清,5%CO2-95%N2饱合混合气体)环境下,以HKC为研究对象,将HKC细胞株随机分为3组:空白组、对比剂组(加入120g I/L碘普罗胺预处理2h)和N-... 目的探讨内质网应激在对比剂诱导人肾小管上皮细胞(HKC)凋亡中的作用。方法在缺血、缺氧(0.2%胎牛血清,5%CO2-95%N2饱合混合气体)环境下,以HKC为研究对象,将HKC细胞株随机分为3组:空白组、对比剂组(加入120g I/L碘普罗胺预处理2h)和N-乙酰半胱氨酸(NAC)组(加入10mmol/L NAC预处理2h,再加120g I/L碘普罗胺处理2h)。细胞增殖试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡,实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)检测细胞中半胱氨酸蛋白酶-12(caspase-12)、葡萄糖调节蛋白-78(GRP78)和CAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)的mRNA表达水平,蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中caspase-12、GRP78和CHOP的蛋白表达水平。结果对比剂可呈时间依赖性抑制HKC活性,与0h相比,1hHKC活性显著降低(0.351±0.066比0.447±0.087,P<0.05);流式细胞术结果示对比剂可促进缺血缺氧HKC凋亡(P<0.05);real-time PCR结果示,对比剂组和NAC组GRP78和CHOP的mRNA水平明显高于空白组(P<0.05),对比剂组caspase-12的mRNA水平明显高于空白组和NAC组(P<0.05);Western blot结果示,对比剂明显增加了caspase-12、GRP78和CHOP的蛋白表达,而NAC明显降低了caspase-12的表达,但不能明显降低对比剂诱导的GRP78和CHOP高表达(P<0.05)。结论在缺血缺氧条件下,对比剂诱导HKC活性下降、凋亡,此作用可能与细胞内氧化应激及内质网应激相关。 展开更多
关键词 内质网应激 对比剂 细胞凋亡 人肾小管上皮细胞
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高糖环境下脂联素对人肾小管上皮细胞转化生长因子-β1表达的影响 被引量:2
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作者 刘玉芳 李兴 《临床医药实践》 2009年第2期104-106,共3页
目的:探讨脂联素(ADPN)对体外高糖培养的人肾小管上皮细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响,以揭示ADPN对高糖环境中的肾小管上皮细胞的可能保护作用机制。方法:人肾小管上皮细胞分别培养于不同的培养基中,在高糖环境中加... 目的:探讨脂联素(ADPN)对体外高糖培养的人肾小管上皮细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响,以揭示ADPN对高糖环境中的肾小管上皮细胞的可能保护作用机制。方法:人肾小管上皮细胞分别培养于不同的培养基中,在高糖环境中加入脂联素,分别培育48h后采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞上清液中TGF—β1的含量。结果:TGF—β1在高糖组表达较高,加入中等浓度(ADPN浓度为10.0,15.0,20.0ug/mL)TGF—β1的表达减少,和高糖组相比,两者的差异有统计学意义。结论:中等浓度ADPN可以抑制TGF—β1在人肾小管上皮细胞的表达。 展开更多
关键词 脂联素:人肾小管上皮细胞 转化生长因子-1β
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