腺苷钴胺与丹红注射液联合硫辛酸对老年2型糖尿病周围神经病变患者神经传导及血清IGF-1、NGF水平的影响 被引量：18

1

作者 罗一青 圈启芳 +3 位作者 余平 李娜 周星利 刘玲玲 《临床和实验医学杂志》 2017年第23期2350-2353,共4页

目的探讨腺苷钴胺与丹红注射液联合硫辛酸对老年2型糖尿病周围神经病变患者神经传导及血清人胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、人神经生长因子(NGF)水平的影响。方法选取79例老年2型糖尿病周围神经病变患者,按照随机数字表法分组,对照组39例... 目的探讨腺苷钴胺与丹红注射液联合硫辛酸对老年2型糖尿病周围神经病变患者神经传导及血清人胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、人神经生长因子(NGF)水平的影响。方法选取79例老年2型糖尿病周围神经病变患者,按照随机数字表法分组,对照组39例予以腺苷钴胺+硫辛酸治疗,观察组40例予以硫辛酸+腺苷钴胺+丹红注射液治疗。观察比较两组正中、腓总神经感觉传导速度(SNCV)与运动传导速度(MNCV)及临床疗效各症状(灼热感、麻木、疼痛、感觉异常)评分,并统计两组血清IGF-1、NGF水平及毒副作用发生情况。结果观察组治疗1个月后正中、腓总神经SNCV及MNCV均高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);观察组治疗总有效率为87.50%(35/40),高于对照组66.67%(26/39),差异具有统计学意义(P<0.05);治疗1个月后观察组灼热感、麻木及疼痛、感觉异常症状评分均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组治疗1个月后血清IGF‐1、NGF水平高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);观察组毒副作用发生率为15.00%(6/40),对照组为10.26%(4/39),组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论硫辛酸、腺苷钴胺与丹红注射液联合治疗老年2型糖尿病周围神经病变,效果显著,安全性高,可改善患者神经传导速度及神经生长相关因子水平。 展开更多

关键词 2型糖尿病 周围神经病变 腺苷钴胺 丹红注射液 硫辛酸 神经传导 IGF-1 NGF

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人β-NGF真核表达载体的构建及其表达产物的生物活性 被引量：7

2

作者 陈勇 蒋琳 +4 位作者 杨军 李萍 梁凌宇 沈心亮 谢云飞 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2005年第6期457-460,共4页

目的在CHO细胞中共表达二氢叶酸还原酶(DHFR)基因及人神经生长因子β亚基(-βhNGF)基因,并对表达产物进行鉴定和生物活性分析。方法克隆DHFR和-βhNGF基因,测序,酶切,连接到真核表达载体pBudCE4.1中,构建人NGF基因重组表达质粒pBudCE4.1... 目的在CHO细胞中共表达二氢叶酸还原酶(DHFR)基因及人神经生长因子β亚基(-βhNGF)基因,并对表达产物进行鉴定和生物活性分析。方法克隆DHFR和-βhNGF基因,测序,酶切,连接到真核表达载体pBudCE4.1中,构建人NGF基因重组表达质粒pBudCE4.1/DHFR/-βhNGF,经电转染法导入二氢叶酸还原酶缺陷型中国仓鼠卵巢细胞(CHO-DHFR-)中,经添加Zeocin抗生素和撤除H、T(次黄嘌呤、胸腺嘧啶脱氧核苷)双筛选,获得了DHFR+细胞克隆。经MTX加压筛选高表达-βhNGF的CHO细胞株。SDS-PAGE、ELISA和Western blot对表达产物进行鉴定,并利用鸡胚背根神经节法检测表达蛋白的生物活性。结果人神经生长因子在CHO细胞中得到较高表达,表达量达0.3μg/ml,且表达产物具有良好的生物活性。结论为大规模工业化生产重组人神经生长因子奠定了基础。 展开更多

关键词 真核表达载体 基因表达 生物活性 二氢叶酸还原酶 人神经生长因子β亚基

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重组人βNGF在大肠杆菌中的可溶表达、纯化及活性鉴定 被引量：5

3

作者 白羊 章永垒 +7 位作者 邹有土 黄奋飞 陈胜亮 阮卡 葛平辉 马燕玲 王明灶 陈星 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期202-207,共6页

旨在大肠杆菌中可溶表达重组人神经生长因子（Recombinant humanβnerve growth factor,rhβNGF）,并对表达产物进行分离纯化和生物学活性鉴定。成功扩增h NGFβ亚基基因,将其克隆入pMAL-c2X表达载体,构建了hβNGF-MBP的大肠杆菌表达体... 旨在大肠杆菌中可溶表达重组人神经生长因子（Recombinant humanβnerve growth factor,rhβNGF）,并对表达产物进行分离纯化和生物学活性鉴定。成功扩增h NGFβ亚基基因,将其克隆入pMAL-c2X表达载体,构建了hβNGF-MBP的大肠杆菌表达体系并进行诱导表达,表达产物经纯化后以Factor Xa酶切去除麦牙糖结合蛋白（MBP）,Western blot鉴定后以TF-1细胞法检测生物学活性。结果显示,pMAL-c2X-hβNGF经酶切和测序证实构建正确,25℃、180 r/min、0.5 mmol/L IPTG诱导下可溶表达hβNGF-MBP融合蛋白。hβNGF-MBP经Factor Xa酶切后可去除MBP标签,SDS-PAGE分析纯化的hβNGF位于13 k D左右,纯度可达95%。Western blot鉴定为hβNGF,结果表明,比活约为1×10~6 U/mg。在大肠杆菌中成功可溶表达hβNGF,并具有较高的生物学活性。 展开更多

关键词 人神经生长因子 大肠杆菌 可溶表达 生物学活性

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人神经生长因子对小鼠外周神经损伤的保护作用 被引量：2

4

作者 朱东亚 李法卿 +3 位作者 谭维国 李素芹 邓德峰 易宏伟 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第10期613-617,共5页

制备了小鼠坐骨神经和舌下神经损伤动物模型,观察人神经生长因子(hNGF)im对外周感觉和运动神经损伤的保护作用,结果hNGF 100～400 u/kg呈剂量依赖性加快坐骨神经损伤小鼠痛觉和后肢运动功能以及舌下神经损伤小鼠舌运动功能的恢复,表明... 制备了小鼠坐骨神经和舌下神经损伤动物模型,观察人神经生长因子(hNGF)im对外周感觉和运动神经损伤的保护作用,结果hNGF 100～400 u/kg呈剂量依赖性加快坐骨神经损伤小鼠痛觉和后肢运动功能以及舌下神经损伤小鼠舌运动功能的恢复,表明该药对外周神经损伤有一定的保护作用。 展开更多

关键词 坐骨神经损伤 神经生长因子

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人神经生长因子对糖尿病多发性神经病大鼠坐骨神经calpainⅡ的作用 被引量：2

5

作者 张云云 王坚 +1 位作者 蒋雨平 任惠民 《中国临床神经科学》 2006年第1期20-24,共5页

目的:观察人神经生长因子(hNGF)对早期糖尿病多发性神经病(DPN)大鼠坐骨神经中calpainⅡ表达的影响。方法:用链佐星(STZ)一次性腹腔注射诱导糖尿病大鼠模型,在DPN4周(造模后4周)腹腔注射hNGF90U/(kg·d),共4周。用原位杂交和免疫组... 目的:观察人神经生长因子(hNGF)对早期糖尿病多发性神经病(DPN)大鼠坐骨神经中calpainⅡ表达的影响。方法:用链佐星(STZ)一次性腹腔注射诱导糖尿病大鼠模型,在DPN4周(造模后4周)腹腔注射hNGF90U/(kg·d),共4周。用原位杂交和免疫组化方法观察坐骨神经calpainⅡmRNA和蛋白表达。结果:DPN8周大鼠坐骨神经calpainⅡmRNA和蛋白表达明显减少。用hNGF治疗的DPN大鼠calpainⅡmRNA和蛋白表达增加。结论:hNGF治疗能纠正早期DPN大鼠坐骨神经calpainⅡmRNA和蛋白表达异常。 展开更多

关键词 糖尿病多发性神经病 caloainⅡ 人神经生长因子

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性别及日龄对转人神经生长因子基因小鼠唾液中蛋白分泌的影响 被引量：2

6

作者 廖莎 朱庆春 +2 位作者 吴珍芳 李紫聪 曾芳 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1041-1049,共9页

神经生长因子(Nerve growth factor,NGF)是一种能促进神经元发育、分化、再生的蛋白。为高效生产药效更佳的人源NGF (hNGF)药物,最近,笔者实验室构建出唾液腺特异表达hNGF的转基因小鼠,并从该转基因小鼠唾液中纯化获得具有高生物学活性... 神经生长因子(Nerve growth factor,NGF)是一种能促进神经元发育、分化、再生的蛋白。为高效生产药效更佳的人源NGF (hNGF)药物,最近,笔者实验室构建出唾液腺特异表达hNGF的转基因小鼠,并从该转基因小鼠唾液中纯化获得具有高生物学活性的h NGF蛋白。为了选择性别和日龄最适宜的转hNGF基因小鼠用于收集纯化hNGF蛋白,文中比较了28日龄(性成熟前)雄性、雌性,63日龄(性成熟后)雄性、雌性转hNGF基因小鼠,共4组转hNGF基因小鼠分泌的唾液量、唾液总蛋白量、唾液鼠源NGF (mNGF)蛋白量和唾液h NGF蛋白量等指标。结果显示,63日龄的转hNGF基因小鼠分泌的唾液量、唾液总蛋白量、唾液mNGF蛋白量和唾液hNGF蛋白量显著高于28日龄同一性别的转hNGF基因小鼠,且63日龄的雄性转hNGF基因小鼠分泌的唾液hNGF蛋白量显著高于同一日龄的雌性转hNGF基因小鼠;在4组小鼠中,63日龄的雄性转hNGF基因小鼠分泌的唾液hNGF含量最高,比28日龄雌性转hNGF基因小鼠高出约46倍,最适宜用于收集唾液并从中纯化hNGF。 展开更多

关键词 转基因小鼠 性别 日龄 人神经生长因子 唾液

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鞘内注射Ad-hNGFβ对神经痛大鼠的镇痛作用及背根神经节Kv1 mRNA表达的影响 被引量：1

7

作者 张瑞 郭慧琴 +3 位作者 王清秀 杨进国 翁浩 周显进 《郧阳医学院学报》 CAS 2010年第4期325-329,共5页

目的:观察鞘内注射重组腺病毒介导人神经生长因子β基因(Ad-hNGFβ)对坐骨神经慢性压迫性损伤(CCI)大鼠痛阈及背根神经节(DRG)Kv1mRNA表达的影响,探讨其镇痛作用及可能机制。方法:SD雄性大鼠99只,随机分为3组:A组(CCI+Ad-hNGFβ组)(33只... 目的:观察鞘内注射重组腺病毒介导人神经生长因子β基因(Ad-hNGFβ)对坐骨神经慢性压迫性损伤(CCI)大鼠痛阈及背根神经节(DRG)Kv1mRNA表达的影响,探讨其镇痛作用及可能机制。方法:SD雄性大鼠99只,随机分为3组:A组(CCI+Ad-hNGFβ组)(33只);B组[CCI+ACSF(人工脑脊液)组](33只);C组(假手术+ACSF组)(33只)。术前、术后3、7、14、28d分别测定各组大鼠热痛、机械痛阈值以及疼痛行为学评分。术后3、7、14、28d每组取4只麻醉后处死,取L4～L6段DRG,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,半定量分析Kv1mRNA表达变化。结果:所有CCI动物从术后第3天起,出现明显疼痛行为学改变和热痛、机械痛阈值的降低,与C组比差异有显著性(P<0.05)。CCI术后立即鞘内注射Ad-hNGFβ,术后第14天起,该组行为学评分明显低于B组(P<0.05);术后第7天起,热痛阈值明显高于B组(P<0.05)。RT-PCR结果显示A组和B组术后3dKv1.2,Kv1.4,Kv1.6mRNAs明显减少,显著低于C组(P<0.05),术后7dKv1.1mRNAs明显减少,显著低于C组(P<0.05),术后Kv1.5mRNAs均无减少(P>0.05),术后14dA组与B组比Kv1.1,Kv1.2,Kv1.4mRNAs明显增高(P<0.05)。结论:CCI术后立即鞘内注射Ad-hNGFβ可缓解大鼠神经痛,降低行为学评分,增加热痛阈值,可增加钾通道Kv1.1,Kv1.2,Kv1.4mRNAs表达,说明CCI大鼠痛觉过敏与背根神经节Kv1.1,Kv1.2,Kv1.4,Kv1.6mRNAs表达的减少有关。 展开更多

关键词 坐骨神经慢性压迫性损伤 背根神经节 神经生长因子 钾通道

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带有HIV Tat-蛋白转导域的人成熟神经生长因子的分泌表达及鉴定 被引量：1

8

作者 李素芹 潘英 +1 位作者 潘明洁 李越希 《药物生物技术》 CAS CSCD 2009年第4期291-295,共5页

HIV-Tat蛋白转导域(protein transduction domain,PTD)是一个公认的具有介导靶蛋白跨膜作用的肽段。为了表达出可溶的并具有生物学活性的PTD-NGF融合蛋白,作者首先根据人神经生长因子成熟肽(hNGFm)的基因序列设计引物,利用PCR技术直接... HIV-Tat蛋白转导域(protein transduction domain,PTD)是一个公认的具有介导靶蛋白跨膜作用的肽段。为了表达出可溶的并具有生物学活性的PTD-NGF融合蛋白,作者首先根据人神经生长因子成熟肽(hNGFm)的基因序列设计引物,利用PCR技术直接从人胎盘的基因组DNA中扩增出hNGFm的编码序列,同时利用PCR引物在其5和3末端分别加上HIV-Tat-PTD及组氨酸标签(His-Tag)的序列,然后将PCR产物克隆于原核表达质粒pET22b中pelB leader的下游,构建分泌表达质粒pET22b-PTD-hNGFm-His,将该质粒转入宿主大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE检测显示有两种表达产物,Mr分别为16ku和18.4ku,分别位于大肠杆菌周质腔和细胞质中,两者均可与抗hNGF抗体反应。周质腔表达产物(PTD-hNGFm-His)经Ni2+螯合亲和层析纯化后纯度达98%以上,纯化的PTD-hNGFm-His融合蛋白刺激神经突起生长的最适浓度为20ng/ml。因此成功构建了PTD-hNGFm-His分泌表达载体并在大肠杆菌中进行了分泌表达,得到了可溶且具有生物活性的PTD-hNGFm-His融合蛋白。 展开更多

关键词 人神经生长因子 克隆 蛋白转导域 原核分泌表达 纯化

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人神经生长因子基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

9

作者 俞萍 王会信 +2 位作者 柳川 刘莉 丁红梅 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期224-226,共3页

人神经生长因子基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达俞萍王会信柳川刘莉丁红梅（军事医学科学院基础医学研究所北京１００８５０）神经生长因子（ＮｅｒｖｅＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒ，ＮＧＦ）是最早发现的生长因子之一，它对中枢和周围... 人神经生长因子基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达俞萍王会信柳川刘莉丁红梅（军事医学科学院基础医学研究所北京１００８５０）神经生长因子（ＮｅｒｖｅＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒ，ＮＧＦ）是最早发现的生长因子之一，它对中枢和周围神经元具有存活分化效应［１］。ＮＧ... 展开更多

关键词 神经生长因子 基因克隆 表达

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人神经生长因子β亚基cDNA的克隆及序列分析 被引量：1

10

作者 毛亚伦 张更荣 +2 位作者 刘东海 董虹 张顺 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第11期1009-1012,共4页

目的：对国人神经生长因子β亚基（βＮＧＦ）ｃＤＮＡ 进行克隆及序列分析，为研究βＮＧＦ 的生理功能及其在临床应用提供基础与手段。方法：从人海马组织分离，纯化总ＲＮＡ，直接进行逆转录，用ＰＣＲ 扩增βＮＧＦ 的ｃＤＮＡ 得... 目的：对国人神经生长因子β亚基（βＮＧＦ）ｃＤＮＡ 进行克隆及序列分析，为研究βＮＧＦ 的生理功能及其在临床应用提供基础与手段。方法：从人海马组织分离，纯化总ＲＮＡ，直接进行逆转录，用ＰＣＲ 扩增βＮＧＦ 的ｃＤＮＡ 得到６５０ｂｐ 的ＤＮＡ 片段，利用Ｔ－ Ａ 克隆载体法，制备重组质粒，克隆βＮＧＦｃＤＮＡ。结果：βＮＧＦ 的ｃＤＮＡ 全序列１０７４ ｂｐ ，其蛋白编码为６３０ ｂｐ ，由２１２ 个氨基酸组成，Ｎ 端为信号肽，中间区为前肽，Ｃ 端为成熟肽。结论：国人βＮＧＦ 序列分析结果与ｇｅｎｅ ｂａｎｋ 中的βＮＧＦ 序列完全一致。 展开更多

关键词 人神经生长因子 基因克隆 序列分析 Β亚基

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人神经生长因子对DPN大鼠坐骨神经CGT的作用

11

作者 张云云 王坚 +1 位作者 蒋雨平 任惠民 《中风与神经疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期365-367,共3页

目的　观察人神经生长因子 ( h NGF)对早期糖尿病多发性神经病 ( DPN)大鼠坐骨神经中半乳糖神经酰胺转移酶 m RNA( CGTm RNA)表达的影响。方法　用链脲佐菌素 ( STZ)一次性腹腔注射诱导糖尿病大鼠模型 ,在 DPN 4周 (造模后 4周 )腹腔注... 目的　观察人神经生长因子 ( h NGF)对早期糖尿病多发性神经病 ( DPN)大鼠坐骨神经中半乳糖神经酰胺转移酶 m RNA( CGTm RNA)表达的影响。方法　用链脲佐菌素 ( STZ)一次性腹腔注射诱导糖尿病大鼠模型 ,在 DPN 4周 (造模后 4周 )腹腔注射 h NGF( 90 U .kg- 1 .d- 1 ) ,共 4周。用 RT- PCR和免疫组化方法观察坐骨神经CGTm RNA,NGFm RNA和蛋白表达。结果　 DPN 8周大鼠坐骨神经 CGTm RNA升高 ,NGFm RNA和蛋白表达减少。用 h NGF治疗的 DPN大鼠 CGTm RNA明显降低 ,NGFm RNA和蛋白表达增加。结论　 h NGF治疗能纠正早期DPN大鼠坐骨神经 CGTm 展开更多

关键词 人神经生长因子 DPN 大鼠 坐骨神经 CGT 半乳糖神经酰胺转移酶 糖尿病 多发性神经病

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EGFP-N1/hNGFβ逆转录病毒载体的构建及其表达

12

作者 陈钢 杨彩虹 +2 位作者 田林强 郭风劲 陈安民 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第13期1426-1429,共4页

目的构建高表达含人神经生长因子β基因(hNGF-β)的逆转录病毒载体,并检测其在施万细胞中的表达情况。方法从含有hNGF-β的pAAV-SP质粒中克隆出hNGF-β,连接到pEGFP-N1载体中,形成重组逆转录病毒载体pEGFP-N1-NGFβ。用重组体转染施万细... 目的构建高表达含人神经生长因子β基因(hNGF-β)的逆转录病毒载体,并检测其在施万细胞中的表达情况。方法从含有hNGF-β的pAAV-SP质粒中克隆出hNGF-β,连接到pEGFP-N1载体中,形成重组逆转录病毒载体pEGFP-N1-NGFβ。用重组体转染施万细胞,经G418筛选出阳性克隆后,用ELISA法检测NGF的表达量。结果 hNGF-β的RT-PCR产物约750bp,双酶切鉴定重组载体为正确重组子。荧光显微镜下观察证实转染的施万细胞表达EGFP,ELISA检测证实转染的施万细胞分泌hNGFβ升高。结论应用体外连接法成功构建了hNGF-β逆转录病毒载体,而且施万细胞能够高效表达NGFβ。 展开更多

关键词 神经生长因子 施万细胞 基因表达

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单抗体夹心ELISA定量检测人神经生长因子试剂盒的研制

13

作者 徐春娥 王威 +3 位作者 丁锐 纪宏 吴小红 田光 《中国当代医药》 2016年第15期8-12,共5页

目的制备抗人神经生长因子（h NGF）单克隆抗体,并开发一种检测h NGF含量的ELISA试剂盒。方法以重组人神经生长因子抗原与弗氏完全佐剂混合免疫BALB/c小鼠,并采用杂交瘤技术制备抗h NGF的单克隆抗体,然后建立快速检测h NGF含量的ELISA... 目的制备抗人神经生长因子（h NGF）单克隆抗体,并开发一种检测h NGF含量的ELISA试剂盒。方法以重组人神经生长因子抗原与弗氏完全佐剂混合免疫BALB/c小鼠,并采用杂交瘤技术制备抗h NGF的单克隆抗体,然后建立快速检测h NGF含量的ELISA检测试剂盒。结果获得1株可分泌抗h NGF单克隆抗体的杂交瘤细胞株。建立1种检测h NGF含量的ELISA试剂盒,该检测方法的回收率为85%-105%,灵敏度为0.63 ng/ml,变异系数〈10%,且特异性良好。结论成功制备了抗h NGF的单克隆抗体,并建立了一种可快速检测h NGF含量的ELISA试剂盒。 展开更多

关键词 人神经生长因子 单克隆抗体 ELISA定量检测

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人神经生长因子治疗糖尿病性多发性神经病的随机双盲研究 被引量：5

14

作者 张云云 苏雅茹 +1 位作者 杨莉芹 蒋雨平 《中国临床神经科学》 2003年第1期67-70,共4页

目的:观察人神经生长因子(hNGF)治疗糖尿病性多发性神经病(DPN)的有效性及安全性。方法:采用双盲随机对照研究,48例DPN病人随机分为2组:hNGF组24例,每日给予hNGF 4 mL(1000 u),肌注:对照组 24例,每日给予安慰剂 4 mL,肌注,疗程均为12周... 目的:观察人神经生长因子(hNGF)治疗糖尿病性多发性神经病(DPN)的有效性及安全性。方法:采用双盲随机对照研究,48例DPN病人随机分为2组:hNGF组24例,每日给予hNGF 4 mL(1000 u),肌注:对照组 24例,每日给予安慰剂 4 mL,肌注,疗程均为12周。结果:hNGF组治疗12周后,患者MDNS和自觉感觉障碍有效率分别为73.83％和83.33％,明显高于安慰剂组。治疗结束后4及12周,其有效率仍显著高于对照组。治疗期间未发现严重不良反应。结论:hNGF治疗DPN有效且安全。 展开更多

关键词 人神经生长因子 糖尿病性多发性神经病 双盲研究

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细菌体内同源重组构建pAdEasy-1-hNGFβ重组体 被引量：8

15

作者 王清秀 钟和英 +5 位作者 周青山 王家宁 黄永章 余开峰 马大青 姚尚龙 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期287-290,共4页

目的采用细菌内同源重组法高效制备含神经生长因子β基因(hNGFβ)的重组腺病毒质粒。方法hNGFβ自载体pBLAST44hNGFβv02中切出,亚克隆至质粒pBluescriptⅡsk(+)中,形成pBluescriptⅡsk(+)hNGFβ,自pBluescriptⅡsk(+)hNGFβ中酶切出hNG... 目的采用细菌内同源重组法高效制备含神经生长因子β基因(hNGFβ)的重组腺病毒质粒。方法hNGFβ自载体pBLAST44hNGFβv02中切出,亚克隆至质粒pBluescriptⅡsk(+)中,形成pBluescriptⅡsk(+)hNGFβ,自pBluescriptⅡsk(+)hNGFβ中酶切出hNGFβDNA,亚克隆至腺病毒穿梭质粒pShuttleCMV中,形成转移质粒pShuttleCMVhNGFβ,在感受态大肠杆菌BJ5183内与腺病毒骨架质粒pAdEasy1同源重组,得到重组腺病毒载体pAdEasy1hNGFβ。结果线性化的pShuttleCMVhNGFβ转化含pAdEasy1的高效感受态大肠杆菌BJ5183,24h后获得了30%阳性重组质粒克隆,经酶切获得大于20kb的大片段和4.5kb的特征性条带,PCR反应扩增出731bp片段。结论应用细菌内同源重组能快速构建含hNGFβ基因的重组腺病毒载体pAdEasy1hNGFβ,为hNGFβ基因的研究及应用奠定了基础。 展开更多

关键词 同源重组 腺病毒 人β神经生长因子

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重组人神经生长因子对糖尿病大鼠难愈创面愈合的影响 被引量：7

16

作者 王甜甜 程玉芳 徐江平 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期793-796,共4页

目的研究重组人神经生长因子(recombinant human nerve growth factor,rh NGF)对糖尿病大鼠合并难愈创面的治疗效果。方法腹腔注射链脲佐菌素(60 mg·kg^(-1))诱导大鼠糖尿病模型,并在大鼠背部造成一圆形烫伤创面,建立糖尿病合并难... 目的研究重组人神经生长因子(recombinant human nerve growth factor,rh NGF)对糖尿病大鼠合并难愈创面的治疗效果。方法腹腔注射链脲佐菌素(60 mg·kg^(-1))诱导大鼠糖尿病模型,并在大鼠背部造成一圆形烫伤创面,建立糖尿病合并难愈创面的动物模型。用药组rh NGF(3、6、12μg·kg^(-1))肌肉注射给药,每天1次,连续21 d。测定大鼠伤口面积,HE染色和透射电镜检查创面皮肤组织病理形态学变化。结果 rh NGF明显减小糖尿病大鼠烫伤创伤面积(P <0. 05); HE染色结果表明,rh NGF明显促进糖尿病大鼠烫伤创面纤维细胞和毛细血管再生;透射电镜结果表明,rh NGF对糖尿病大鼠烫伤创面皮肤的上皮细胞结构排列、细胞连接以及上皮下胶原等超微结构有明显改善作用。结论rh NGF对糖尿病大鼠烫伤性难愈创面具有促进愈合的作用。 展开更多

关键词 重组人神经生长因子 链脲佐菌素 糖尿病 大鼠 溃疡 创面愈合

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中华仓鼠卵巢(CHO)工程细胞无血清培养的研究 被引量：5

17

作者 李萍 蒋琳 +3 位作者 黄思扬 杨军 李薇 沈心亮 《微生物学免疫学进展》 2004年第4期46-50,共5页

以DMEM∶F12(1∶1)为基础培养基,通过观察细胞生长状态和检测乙肝表面抗原的表达量作为评价指标,筛选适合于CHO工程细胞生长的生长因子,如胰岛素、转铁蛋白、氢化可的松、硒酸钠,丁二胺等。并且建立了J5SFM培养基。该培养基与商品化的... 以DMEM∶F12(1∶1)为基础培养基,通过观察细胞生长状态和检测乙肝表面抗原的表达量作为评价指标,筛选适合于CHO工程细胞生长的生长因子,如胰岛素、转铁蛋白、氢化可的松、硒酸钠,丁二胺等。并且建立了J5SFM培养基。该培养基与商品化的无血清培养基比较,能够使细胞生长维持较长的时间,表达产物分泌量也相对较高。 展开更多

关键词 中华仓鼠卵巢细胞 无血清培养基 乙肝表面抗原 重组人神经生长因子

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不同载体构建人神经生长因子的比较 被引量：4

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作者 戚菁 李素芹 +2 位作者 李琳 潘明洁 李越希 《药物生物技术》 CAS CSCD 2009年第1期37-42,共6页

探讨人神经生长因子(hNGF)在不同信号肽同一载体与不同载体表达量的差异。应用分子生物学技术从pcDNA3·1-β-NGF中获得β-NGF基因,并对它进行替换载体和优化信号肽,构建两个新重组质粒pMD902-β-NGF和pcDNA3·1-His-β-NGF,通... 探讨人神经生长因子(hNGF)在不同信号肽同一载体与不同载体表达量的差异。应用分子生物学技术从pcDNA3·1-β-NGF中获得β-NGF基因,并对它进行替换载体和优化信号肽,构建两个新重组质粒pMD902-β-NGF和pcDNA3·1-His-β-NGF,通过酶切、PCR及测序鉴定,重组质粒构建成功;利用脂质体转染技术,将重组质粒pMD902-β-NGF、pcDNA3·1-β-NGF和pcDNA3·1-His-β-NGF转入中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)中,通过ELISA技术,检测到CHO细胞上清中有NGF的表达,优化信号肽的pcDNA3·1-His-β-NGF表达量高于没有优化信号肽的pcDNA3·1-β-NGF,重组质粒pMD902-β-NGF表达量最低。鸡胚背根神经节法检测,表达产物都能促进神经节的生长。通过实验分析发现,3个重组质粒表达水平有较大差异。 展开更多

关键词 人神经生长因子 基因克隆 真核表达 生物活性

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人神经生长因子对大鼠中枢胆碱能神经元损伤后作用的实验研究 被引量：2

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作者 程钢戈 张纪 +5 位作者 汪家政 段国升 周定标 赵楠 雪梅 朱萍 《中华神经外科杂志》 CSCD 北大核心 1999年第4期237-239,共3页

目的　研究人神经生长因子（ Ｈ Ｎ Ｇ Ｆ） 对大鼠中枢胆碱能神经元轴突切断后的保护作用。方法　向双侧海马伞切断所致的痴呆大鼠脑室内注入 Ｈ Ｎ Ｇ Ｆ， 采用穿梭箱训练， 检测大鼠学习记忆功能恢复状况， 对脑内隔斜带复合体（... 目的　研究人神经生长因子（ Ｈ Ｎ Ｇ Ｆ） 对大鼠中枢胆碱能神经元轴突切断后的保护作用。方法　向双侧海马伞切断所致的痴呆大鼠脑室内注入 Ｈ Ｎ Ｇ Ｆ， 采用穿梭箱训练， 检测大鼠学习记忆功能恢复状况， 对脑内隔斜带复合体（ Ｓ Ｄ Ｂ） 中隔区（ Ｍ Ｓ） 胆碱能神经元采用胆碱乙酰基转移酶（ Ｃ Ｈ Ａ Ｔ） 免疫组化法观察其存活状态。结果　 Ｈ Ｎ Ｇ Ｆ 组大鼠术后两周内穿梭箱回避次数高于对照组（ Ｐ＜ ００１） ， 回避潜伏期短于对照组（ Ｐ＜ ００１） 。免疫组化及图像分析显示， 其胆碱能神经元存活状态优于对照组。结论　 Ｈ Ｎ Ｇ Ｆ 对大鼠中枢胆碱能神经元损伤具有短期保护作用； 减缓轴突切断引起的退行性变， 对痴呆大鼠学习记忆功能恢复有促进作用。 展开更多

关键词 神经生长因子 胆碱能 神经元损伤 实验研究

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重组人神经生长因子治疗大鼠糖尿病周围神经病变的效果 被引量：2

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作者 白羊 章永垒 +3 位作者 黄奋飞 陈胜亮 阮卡 陈星 《中国医药导报》 CAS 2015年第18期4-7,15,共5页

目的观察重组人神经生长因子(rhNGF)治疗大鼠糖尿病周围神经病变(DPN)效果。方法选用健康成年的雄性SD大鼠,腹腔注射链脲霉素(STZ)建立糖尿病(DM)大鼠模型。1个月后检测大鼠尾部感觉神经传导速度(SNCV),以SNCV<30 m/s为DPN成模标准。... 目的观察重组人神经生长因子(rhNGF)治疗大鼠糖尿病周围神经病变(DPN)效果。方法选用健康成年的雄性SD大鼠,腹腔注射链脲霉素(STZ)建立糖尿病(DM)大鼠模型。1个月后检测大鼠尾部感觉神经传导速度(SNCV),以SNCV<30 m/s为DPN成模标准。将DPN大鼠随机分为6组,分别为模型对照组、受试药rhNGFⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ(剂量分别为0.3、1、3、9μg/kg)4个剂量组,阳性对照组(依帕司他15 mg/kg),同时设正常对照组。连续给药2个月,检测大鼠体重、血糖、大鼠尾部SNCV、坐骨神经传导速度(MNCV)以及坐骨神经中果糖及山梨醇含量。结果 DM造模1个月后,模型对照组大鼠体重、血糖值、尾部SNCV和坐骨神经MNCV均与正常对照组有明显差异(P<0.01),表明DPN造模成功。受试药rhNGF对DPN大鼠体重和血糖值无显著影响(P>0.05),对大鼠尾部SNCV和坐骨神经MNCV具有明显改善作用,给药2个月rhNGF受试组(Ⅲ)大鼠尾部SNCV、rhNGF受试组(Ⅱ、Ⅲ)坐骨神经MNCV较模型对照组高且差异有统计学意义(P<0.05)。DPN大鼠坐骨神经中果糖及山梨醇的含量显著升高,说明DPN的发生与多元醇代谢紊乱具有相关性。受试药rhNGF能降低DPN大鼠坐骨神经中果糖及山梨醇的含量,其中果糖含量变化具有一定的剂量相关性,而山梨醇含量变化未发现明显的剂量效应。结论受试药rhNGF对DPN大鼠神经具有较好的保护作用,与阳性对照药依帕司他作用相似,可能与改善DPN大鼠的多元醇代谢相关。 展开更多

关键词 糖尿病 糖尿病周围神经病变 神经生长因子 神经传导速度 山梨醇 果糖

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