细胞工厂在制备口服脊髓灰质炎减毒活疫苗中的应用 被引量：7

1

作者 王红燕 张晋 +4 位作者 金歌 佟丁丁 沈莉 郑小滨 柯伟华 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2014年第4期550-554,共5页

目的 采用细胞工厂替代转瓶培养Sabin株脊髓灰质炎病毒，制备脊髓灰质炎减毒活疫苗。方法用细胞工厂和15L转瓶分别培养人二倍体细胞（2BS），扩增至36代后，分别接种0.20MOI的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin株脊髓灰质炎工作代毒种，待细胞病变达10... 目的 采用细胞工厂替代转瓶培养Sabin株脊髓灰质炎病毒，制备脊髓灰质炎减毒活疫苗。方法用细胞工厂和15L转瓶分别培养人二倍体细胞（2BS），扩增至36代后，分别接种0.20MOI的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin株脊髓灰质炎工作代毒种，待细胞病变达100％时收获病毒液，加入保护剂（4.5mol／L氯化镁溶液），制备单价疫苗，分别将Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ3个型别的单价疫苗按照病毒数10：1：6的比例混匀，制备成三价疫苗半成品，分装入1ml西林瓶中（每瓶为10人份剂量），即为疫苗成品。采用微量滴定法测定疫苗原液及成品的病毒滴度，同时进行其他各项检定，并考察疫苗成品的稳定性。结果采用相同的感染复数接种病毒，细胞工厂制备的3个型别疫苗原液的病毒滴度均高于转瓶制备的疫苗原液，Ⅰ型平均滴度高0.17 log10 CCID50／ml，Ⅱ型平均滴度高0.33 log10 CCID50／ml，Ⅲ型平均滴度高0.27 log10 CCID50／ml；细胞工厂制备的疫苗成品3个型别的病毒滴度均高于转瓶制备的疫苗，三价疫苗的平均滴度均高于6.24 log10 CCID50／ml，符合国内外标准；疫苗原液及疫苗成品的其他各项检定均合格；细胞工厂制备的3批疫苗成品于37℃放置2d，疫苗的总病毒含量不低于6.24 log10 CCID50／0.1ml，且病毒滴度下降未超过0.5 log10 CCID50／0.1ml，于2～8℃放置9个月，疫苗的总病毒含量仍不低于6.24 log10 CCID50／0.1ml，均符合WHO的标准要求。结论利用细胞工厂替代转瓶培养2BS细胞制备脊髓灰质炎减毒活疫苗，可获得高于转瓶培养3个型别疫苗的滴度，且工艺稳定，质量可控，可用于规模化脊髓灰质炎减毒活疫苗的生产。 展开更多

关键词 脊髓灰质炎减毒活疫苗 细胞工厂 人二倍体细胞

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人二倍体细胞乙型脑炎灭活疫苗毒种的质量评价

2

作者 徐宏山 沈慧莉 +3 位作者 付瑞 刘欣玉 李玉华 叶强 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期542-546,共5页

目的:对人二倍体细胞(ZFB-3)乙型脑炎灭活疫苗毒种进行质量评价。方法:通过鉴别试验对毒种进行鉴别,以鉴别是否为乙脑病毒;通过脑内滴定法对毒种进行病毒滴度检测,以评估其在人二倍体细胞(ZFB-3)上的适应性和增殖能力;对毒种进行无菌检... 目的:对人二倍体细胞(ZFB-3)乙型脑炎灭活疫苗毒种进行质量评价。方法:通过鉴别试验对毒种进行鉴别,以鉴别是否为乙脑病毒;通过脑内滴定法对毒种进行病毒滴度检测,以评估其在人二倍体细胞(ZFB-3)上的适应性和增殖能力;对毒种进行无菌检查、支原体检查、外源病毒因子检查,以检测是否有外源性污染。结果:证明毒种为乙脑病毒,且具有较高的病毒滴度,在人二倍体细胞(ZFB-3)上已较好地适应,且无细菌、真菌、支原体、外源病毒因子污染。结论:人二倍体细胞(ZFB-3)乙型脑炎灭活疫苗毒种质量符合要求,可应用于疫苗的生产。 展开更多

关键词 乙型脑炎病毒 灭活疫苗 人二倍体细胞 毒种 质量评价

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狂犬病毒PM株在人用狂犬病疫苗中的研究及应用回顾 被引量：3

3

作者 石磊泰(综述) 李玉华(审校) 俞永新(审校) 《微生物学免疫学进展》 CAS 2022年第5期53-59,共7页

PM株源于1882年巴斯德最初分离的狂犬病毒,经兔脑传代保存后,又历经人二倍体细胞、原代犬肾细胞、禽胚/细胞及Vero细胞等多种细胞适应传代,目前普遍应用的是人二倍体细胞适应株和Vero细胞适应株。PM株于2005年被WHO生物标准化专家委员... PM株源于1882年巴斯德最初分离的狂犬病毒,经兔脑传代保存后,又历经人二倍体细胞、原代犬肾细胞、禽胚/细胞及Vero细胞等多种细胞适应传代,目前普遍应用的是人二倍体细胞适应株和Vero细胞适应株。PM株于2005年被WHO生物标准化专家委员会纳入人用狂犬病疫苗生产用毒种库,在法国、美国、伊朗、瑞士、德国、印度和中国等100多个国家和地区用于生产人用狂犬病疫苗,为全球狂犬病疫情防控发挥了积极作用。现仅就狂犬病毒PM株的由来、适应和应用作一回顾。 展开更多

关键词 狂犬病毒 PM株 人二倍体细胞 原代犬肾细胞 禽胚/细胞 VERO细胞 人用狂犬病疫苗

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新生牛血清的质量控制对SPF鸡胚细胞和人二倍体(2BS)细胞生长的影响 被引量：5

4

作者 付永其 金珏艳 +6 位作者 张颖欣 刘辉 陆晨 宋艳梅 杨琦 陆梦溪 王为 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第11期1182-1187,1191,共7页

目的考察新生牛血清质量控制对SPF鸡胚细胞和人二倍体(2BS)细胞生长的影响。方法选择来源可追溯性、工艺质量稳定,且检定合格的新生牛血清样品配制细胞生长液,用于SPF鸡胚细胞和2BS细胞的培养。待细胞生长成致密成纤维单层细胞,记录细... 目的考察新生牛血清质量控制对SPF鸡胚细胞和人二倍体(2BS)细胞生长的影响。方法选择来源可追溯性、工艺质量稳定,且检定合格的新生牛血清样品配制细胞生长液,用于SPF鸡胚细胞和2BS细胞的培养。待细胞生长成致密成纤维单层细胞,记录细胞成单层的时间,用胰酶消化细胞,通过全自动细胞计数仪对细胞悬液进行测定,观察总细胞数、活细胞数,计算细胞存活率。根据活细胞数计算MOI,分别用腮腺炎及风疹病毒接种SPF鸡胚细胞和2BS细胞,检测收获病毒液的滴度。结果SPF鸡胚细胞总细胞数不低于3.5×10~6个/mL,活细胞数不低于2.1×10~6个/mL,细胞存活率不低于60%;2BS细胞总细胞数不低于7.0×10~5个/mL,活细胞数不低于4.2×10~5个/mL,细胞存活率不低于60%。腮腺炎病毒原液滴度在6.1～6.6 lgCCID_(50)/mL之间,平均值为6.28 lgCCID_(50)/mL,SD为0.11,生产过程加工能力指数(process capability index,Cpk)为1.51,批间质量趋于一致;风疹病毒原液滴度均在5.5～6.2 lgCCID_(50)/mL之间,平均值为5.8 lgCCID_(50)/mL,SD为0.17,Cpk值为1.40,批间质量趋于一致。结论新生牛血清的质量良好,用其培养SPF鸡胚细胞和2BS细胞的活细胞比率可控,收获的病毒液滴度较均一,差异性较小。 展开更多

关键词 新生牛血清 质量控制 SPF鸡胚细胞 人二倍体(2BS)细胞 细胞存活率 病毒滴度

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人用疫苗生产用细胞基质使用现状及研究进展

5

作者 程尧 程小玲 +1 位作者 申瑷琳(综述) 施金荣(审校) 《国际生物制品学杂志》 CAS 2023年第5期295-299,共5页

疫苗是预防控制传染性疾病的最有效手段,传染性疾病中约80%是由病毒引起的。传统的病毒类疫苗需要经过病毒培养、抗原收获、抗原浓缩、纯化过滤等过程制备而成。由于病毒的生长和繁殖必须在细胞内进行,因此细胞基质的优劣直接影响疫苗... 疫苗是预防控制传染性疾病的最有效手段,传染性疾病中约80%是由病毒引起的。传统的病毒类疫苗需要经过病毒培养、抗原收获、抗原浓缩、纯化过滤等过程制备而成。由于病毒的生长和繁殖必须在细胞内进行,因此细胞基质的优劣直接影响疫苗的质量。此文对各类细胞基质使用情况及优缺点进行综述,旨在为选择合适的人用疫苗生产用细胞基质提供参考。 展开更多

关键词 人用疫苗 细胞基质 原代细胞 VERO细胞 Madin-Darby犬肾细胞 二倍体细胞

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新建人二倍体细胞株国内外研究概况 被引量：4

6

作者 张燕 石金辉 +4 位作者 朱梦然 金相林 刘建凯 郑海发(综述) 宋雪(审校) 《国际生物制品学杂志》 CAS 2018年第4期179-184,共6页

在病毒疫苗生产中，人二倍体细胞较原代细胞更具优势，可解决原代细胞易受外源污染、稳定性差、抗原性不一致的问题，并可用于建立细胞种子库系统，利于质量控制。目前常用作细胞基质的人二倍体细胞株包括MRC-5、2BS、KMB-17、WI-38以及... 在病毒疫苗生产中，人二倍体细胞较原代细胞更具优势，可解决原代细胞易受外源污染、稳定性差、抗原性不一致的问题，并可用于建立细胞种子库系统，利于质量控制。目前常用作细胞基质的人二倍体细胞株包括MRC-5、2BS、KMB-17、WI-38以及SV-1等。此文综述了国内外法规对人二倍体细胞株的要求以及质量评价，以促进人二倍体细胞株的建立及广泛应用。 展开更多

关键词 病毒疫苗 人二倍体细胞 应用

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不同批次肠道病毒71型(EV71)灭活疫苗的一致性分析 被引量：4

7

作者 张莹 刘龙丁 +8 位作者 董承红 王丽春 廖芸 郭磊 王晶晶 梁燕 冯敏 崔伟 李琦涵 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2015年第3期223-227,232,共6页

目的分析不同批次的肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）灭活疫苗（人二倍体细胞）全程免疫后免疫原性及安全性的一致性。方法检测3批EV71灭活疫苗成品的抗原含量、游离甲醛含量、铝含量、内毒素含量、抗生素残留量,并免疫动物检测异... 目的分析不同批次的肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）灭活疫苗（人二倍体细胞）全程免疫后免疫原性及安全性的一致性。方法检测3批EV71灭活疫苗成品的抗原含量、游离甲醛含量、铝含量、内毒素含量、抗生素残留量,并免疫动物检测异常毒力及效力。采用随机、双盲的方法,将3批疫苗于第0、28天分别免疫900名6~72月龄的受试人群。于接种前（第0天）、完成2剂疫苗接种后28天（第56天）,采集静脉血,分离血清,采用微量细胞病变法检测EV71中和抗体（neutralizing antibody,Nab）效价;于每次接种后30 min内记录即时反应,每剂接种后0~7 d内记录各种征集性局部和全身症状,0~28 d内记录非征集性不良反应事件,并在整个观察期间报告严重不良反应事件。结果 3批EV71灭活疫苗成品的各项检定结果均在合格范围内。经2剂EV71灭活疫苗全程免疫后,20120101、20120102和20120203批疫苗受试者的抗体阳转率分别为98.00%、95.67%和98.67%,易感人群（Nab〈1∶8）免后抗体阳转率分别为96.45%、92.44%和97.60%,非易感人群（Nab≥1∶8）免后抗体水平的4倍增长率分别为67.94%、65.63%和71.43%;免后抗体GMT分别为283.79、231.48和285.78,组间差异均无统计学意义（P均〉0.05）。3批疫苗诱导的与疫苗相关的不良反应及严重不良反应事件,组间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论通过比较3批疫苗的各项生产质量控制指标及其诱导的抗体水平,证实该疫苗的生产工艺较稳定。 展开更多

关键词 EV71灭活疫苗 人二倍体细胞 免疫原性 安全性 一致性

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500L生物反应器生产人二倍体细胞狂犬病疫苗工艺的研究 被引量：3

8

作者 赵志鹏 《职业卫生与病伤》 2017年第1期34-37,共4页

目的通过500 L生物反应器培养人二倍体细胞,接种感染PM株狂犬病毒,监测人二倍体细胞生长情况和病毒表达情况,确定一套可行的疫苗生产放大工艺。方法采用一定细胞传代接种比例培养人二倍体细胞、同时按照一定的病毒接种比例感染细胞,监... 目的通过500 L生物反应器培养人二倍体细胞,接种感染PM株狂犬病毒,监测人二倍体细胞生长情况和病毒表达情况,确定一套可行的疫苗生产放大工艺。方法采用一定细胞传代接种比例培养人二倍体细胞、同时按照一定的病毒接种比例感染细胞,监测细胞病毒培养过程中的细胞密度及病毒表达情况,从而确定生产工艺的可行性。结果经过50 L和500 L生物反应器培养MRC-5细胞,接种感染狂犬病毒PM株毒种后,细胞生长良好,细胞密度、病毒滴度表达水平及表达持续时间均能达到疫苗生产要求。结论用500 L生物反应器培养MRC-5细胞,生产人二倍体细胞狂犬病疫苗,该生产放大工艺是可行的。 展开更多

关键词 生物反应器 人二倍体细胞 狂犬病疫苗 病毒表达 生产工艺

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细胞工厂中F基因型腮腺炎病毒SP-A株在人二倍体细胞上的增殖研究 被引量：3

9

作者 王微 邱恒 +4 位作者 杨振清 丁开云 樊会青 李琦涵 王晶晶 《微生物学免疫学进展》 2020年第1期63-68,共6页

目的利用细胞工厂,探讨F基因型腮腺炎病毒SP-A株在KMB17细胞上的增殖特性,为腮腺炎疫苗的研制提供基础数据。方法分别以体积分数为10%、8%和5%的血清浓度将细胞培养至单层后,观察病毒接种后细胞病变情况,初步确定最低血清含量后;在不含... 目的利用细胞工厂,探讨F基因型腮腺炎病毒SP-A株在KMB17细胞上的增殖特性,为腮腺炎疫苗的研制提供基础数据。方法分别以体积分数为10%、8%和5%的血清浓度将细胞培养至单层后,观察病毒接种后细胞病变情况,初步确定最低血清含量后;在不含血清培养基条件下,按照不同接种感染复数(multiplicity of infection,MOI)接种细胞,确定病毒增殖峰值后,进一步观察不同吸附条件对病毒增殖的影响;同时进行荧光实时定量PCR,验证病毒增殖变化。结果在体积分数为5%的血清条件下,细胞可生长成致密单层;高MOI(0.500)感染细胞后,在4~5 d内进入增殖高峰,中MOI(0.050)、低MOI(0.005)感染细胞后,在5~6 d进入增殖高峰,维持48 h后,呈现缓慢下降趋势;在比较37℃吸附试验中,非吸附组病毒增殖高峰明显迟于吸附组,荧光实时定量PCR检测结果显示在病毒感染细胞6 d时病毒载量达到峰值。结论5%新生牛血清即可获得生长状态良好的细胞,MOI对腮腺炎病毒在KMB17细胞株中的增殖有较大的影响,当使用适宜范围的MOI(0.01~0.02),在非吸附的条件下,腮腺炎病毒SP-A株在KMB17株中能够良好地增殖,在病毒培养至7~9 d可获得高滴度的病毒收获液。 展开更多

关键词 腮腺炎病毒 F基因型 病毒增殖 人二倍体细胞 细胞工厂

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人二倍体细胞2BS株和KMB17株在疫苗研发中的应用 被引量：3

10

作者 叶华跃 杨二霞(综述) 姜莉(审校) 《国际生物制品学杂志》 CAS 2019年第1期29-33,共5页

人二倍体细胞是WHO认可的更安全的疫苗生产用细胞基质,已成为全世界疫苗生产首选的细胞基质.我国自主研制的二倍体细胞2BS株和KMB17株来源于人胚肺细胞,因其无致癌性、无外源因子污染,且细胞性状比较稳定,越来越多地在人用疫苗研发与生... 人二倍体细胞是WHO认可的更安全的疫苗生产用细胞基质,已成为全世界疫苗生产首选的细胞基质.我国自主研制的二倍体细胞2BS株和KMB17株来源于人胚肺细胞,因其无致癌性、无外源因子污染,且细胞性状比较稳定,越来越多地在人用疫苗研发与生产中使用.由于2BS和KMB17细胞对多种病毒具有敏感性,因此也作为细胞基质被应用于许多病毒性疫苗的研究开发.目前,用这两种人二倍体细胞生产的疫苗,包括甲型肝炎疫苗、脊髓灰质炎疫苗和肠道病毒71型灭活疫苗等,已在我国广泛上市. 展开更多

关键词 人二倍体细胞 研究 疫苗 病毒

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轮状病毒P[2]G3株在人二倍体细胞KMB17上的适应性 被引量：2

11

作者 张光明 刘馨 +3 位作者 张永欣 徐婧雯 洪超 孙茂盛 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第11期969-971,共3页

目的探讨轮状病毒P[2]G3株在人二倍体细胞KMB17上的适应性。方法轮状病毒P[2]G3株在猴肾细胞MA104上经蚀斑筛选纯化后,得到的克隆以不同MOI接种至人二倍体细胞KMB17上。用微量滴定法与蚀斑法平行检测病毒滴度,用免疫荧光法检测病毒的增... 目的探讨轮状病毒P[2]G3株在人二倍体细胞KMB17上的适应性。方法轮状病毒P[2]G3株在猴肾细胞MA104上经蚀斑筛选纯化后,得到的克隆以不同MOI接种至人二倍体细胞KMB17上。用微量滴定法与蚀斑法平行检测病毒滴度,用免疫荧光法检测病毒的增殖情况,最后进行病毒基因组稳定性检测。结果经MA104细胞培养的轮状病毒P[2]G3株在人二倍体细胞KMB17上可产生明显的细胞病变(CPE),但病变出现的时间随病毒传代次数的增加而延迟,抗原性也逐渐减弱。通过蚀斑筛选纯化得到的克隆病毒,可在KMB17细胞上稳定地增殖。以0.05MOI病毒量接种可产生稳定的CPE,时间为72～96h。连续传代至第10代,病毒滴度达105.5PFU/ml,病毒基因组稳定。结论轮状病毒P[2]G3株在人二倍体细胞KMB17上表现出毒力及增殖能力的衰退;经蚀斑筛选纯化可获得毒力较强的病毒株,并在KMB17细胞中稳定复制、增殖。 展开更多

关键词 轮状病毒 人二倍体细胞 蚀斑筛选 适应性

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人二倍体细胞对不同病毒感染过程的生物学效应比较分析 被引量：2

12

作者 王辉 张莹 +7 位作者 刘龙丁 廖芸 王建斌 胡雅洁 王丽春 赵婷 王艳翠 李琦涵 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2016年第9期907-912,共6页

目的分析人二倍体细胞对不同病毒感染的生物学反应差异性及相关分子生物学机制。方法用人类肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)和人单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type 1,HSV-1)感染人二倍体细胞,光镜和电镜下观察感染细胞形态... 目的分析人二倍体细胞对不同病毒感染的生物学反应差异性及相关分子生物学机制。方法用人类肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)和人单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type 1,HSV-1)感染人二倍体细胞,光镜和电镜下观察感染细胞形态学特征;比较两种病毒在人二倍体细胞上的增殖动力学及两种病毒感染后细胞酶谱的变化;采用基因芯片检测两种病毒感染后人二倍体细胞基因反应的差异。结果感染细胞的光镜或电镜的超微结构观察均表现出许多相同的特点,包括细胞变圆、肿胀、折光性增强,以及细胞细微结构的受损,大多数细胞器的破坏等。两种病毒在人二倍体细胞上具有不同滴度峰值的增殖动力学过程;对细胞超氧化物歧化酶的动力学改变趋势有不同影响,但对乳酸脱氢酶和琥珀酸脱氢酶动力学变化趋势无明显影响;两种病毒感染引起人二倍体细胞出现不同的基因反应,其中与信号转导及与天然免疫反应有关的mRNA转录效率具有一定的差异。结论人二倍体细胞对EV71、HSV-1感染过程表现不同的生物学效应。 展开更多

关键词 二倍体细胞 肠道病毒71型 单纯疱疹病毒1型 酶谱 基因表达谱

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不同材质细胞培养容器培养甲型肝炎病毒的比较 被引量：2

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作者 邵聪文 杨晓蕾 +8 位作者 梁海孝 曹洁 张名 杨建波 冯昌增 郑惠文 陈梦娇 俞建昆 杨净思 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2015年第2期190-193,共4页

目的比较中性玻璃转瓶和聚苯乙烯细胞工厂两种材质的培养容器培养人二倍体细胞和甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)的差异。方法采用相同的培养条件,在中性玻璃转瓶和聚苯乙烯细胞工厂中分别培养人胚肺二倍体细胞KMB17,并接种HAV H2... 目的比较中性玻璃转瓶和聚苯乙烯细胞工厂两种材质的培养容器培养人二倍体细胞和甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)的差异。方法采用相同的培养条件,在中性玻璃转瓶和聚苯乙烯细胞工厂中分别培养人胚肺二倍体细胞KMB17,并接种HAV H2株,倒置光学显微镜下观察细胞的形态变化;细胞接种病毒后第0、7、14、18、22、26、30天时取样,ELISA法测定病毒的感染性滴度,分析病毒的增殖动力学。结果两种材质的容器培养的KMB17细胞的生长状态和形态无明显差异;HAV H2株增殖动力学相似;单位体积病毒收获液中的病毒产量无显著差异;聚苯乙烯细胞工厂培养的HAV的单位培养容积产量是中性玻璃转瓶的7.28倍。结论聚苯乙烯细胞工厂和中性玻璃转瓶培养的人二倍体细胞和HAV均能良好生长,细胞工厂可替代转瓶成为新的疫苗规模化生产的细胞培养技术。 展开更多

关键词 甲型肝炎病毒 人二倍体细胞 转瓶 细胞工厂

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一次性培养瓶在水痘减毒活疫苗生产中的应用 被引量：2

14

作者 戴长河 王斐 +4 位作者 单雪峰 李睛 双惠 赵红丹 邹勇 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第10期1376-1378,共3页

目的比较一次性培养瓶与方瓶培养人二倍体细胞2BS株的效果。方法接种相同浓度的人二倍体细胞2BS株至一次性培养瓶和小方瓶中,(37±0.5)℃静置培养3 d,于显微镜下观察细胞生长状态,并进行细胞计数。用0.025～0.05 MOI水痘-带状疱疹病... 目的比较一次性培养瓶与方瓶培养人二倍体细胞2BS株的效果。方法接种相同浓度的人二倍体细胞2BS株至一次性培养瓶和小方瓶中,(37±0.5)℃静置培养3 d,于显微镜下观察细胞生长状态,并进行细胞计数。用0.025～0.05 MOI水痘-带状疱疹病毒Oka株感染2BS细胞,(35±0.5)℃静置培养3 d,待细胞病变达70%以上时,收获病变细胞,制备冻干水痘减毒活疫苗,并参考水痘减毒活疫苗注册标准及《中国药典》(三部)2010版,进行各项指标检定。结果在接种2BS细胞浓度相同的情况下,与方瓶相比,一次性培养瓶可增加一定的细胞培养面积,细胞总数相对较高;一次性培养瓶培养的2BS细胞贴壁速度较快,呈梭形,密度高,方向性好,轮廓清晰,分布均匀,胞质饱满,而方瓶培养的2BS细胞贴壁速度较慢,生长不均匀;使用一次性培养瓶及方瓶培养2BS细胞生产的水痘减毒活疫苗,各项检定指标结果均符合《中国药典》(三部)2010版相关要求,在病毒滴度无明显差异的情况下,使用一次性培养瓶可使水痘疫苗产量大幅度增加。结论使用一次性培养瓶培养人二倍体细胞2BS株生产的水痘减毒活疫苗疫苗产量较方瓶有较大幅度的提高。 展开更多

关键词 一次性培养瓶 人二倍体细胞 水痘减毒活疫苗

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甲肝病毒YN5D株在人二倍体细胞系W2上的适应性 被引量：1

15

作者 徐道俊 陆伟 +3 位作者 钱雯 段清堂 马波 刘馨 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第4期337-340,共4页

目的研究甲肝病毒YN5D株在人二倍体细胞Walvax-2(W2)上的传代适应性,并确定其在W2细胞上培养的最适条件。方法将甲肝病毒YN5株P23代采用混合吸附的方式接种于T225细胞培养瓶,连续传至30代,检测各代次YN5D株病毒的抗原滴度及感染性滴度;... 目的研究甲肝病毒YN5D株在人二倍体细胞Walvax-2(W2)上的传代适应性,并确定其在W2细胞上培养的最适条件。方法将甲肝病毒YN5株P23代采用混合吸附的方式接种于T225细胞培养瓶,连续传至30代,检测各代次YN5D株病毒的抗原滴度及感染性滴度;将甲肝病毒YN5D株P29代以不同的MOI接种W2细胞,以最佳MOI接种细胞,确定最佳收毒时间;建立甲肝病毒YN5D株三级种子库,并进行检定。结果甲肝病毒YN5株连续传至30代,抗原滴度及感染性滴度均保持在10 240 EU/mL和7.00 lgCCID_(50)/mL以上;当接毒比例为0.5 MOI时,抗原滴度及感染性滴度均达到最高;当培养至24~28 d时,抗原滴度及感染性滴度均达到最高,分别为2 560 EU/mL和7.24 lgCCID_(50)/mL。三级毒种库各项检定结果均符合《中国药典》三部(2015版)要求。结论确定了甲肝病毒YN5D株在人二倍体细胞系W2上的传代适应性,并优化了细胞工厂的培养条件,为人二倍体甲肝疫苗临床申报样品的制备工艺奠定了基础。 展开更多

关键词 甲型肝炎病毒 YN5D株 人二倍体细胞 适应性

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麻疹病毒长-47纯化株(2BS细胞)毒种库的建立 被引量：1

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作者 沈红杰 张宇 +4 位作者 黄果勇 李海燕 闫磊 王玮 郑晓丽 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2015年第12期1339-1343,共5页

目的建立以人胚肺二倍体细胞（2BS）为基质的麻疹病毒长-47纯化株毒种库。方法将麻疹病毒长-47纯化株毒种（CEC）主代主种子批适应于2BS细胞,传至第4代和第8代,分别作为主种子批及工作种子批,对毒种进行鉴别试验、无菌试验、支原体检查... 目的建立以人胚肺二倍体细胞（2BS）为基质的麻疹病毒长-47纯化株毒种库。方法将麻疹病毒长-47纯化株毒种（CEC）主代主种子批适应于2BS细胞,传至第4代和第8代,分别作为主种子批及工作种子批,对毒种进行鉴别试验、无菌试验、支原体检查、外源因子检查和病毒滴度检测,并对主种子批毒种进行猴体神经毒力试验和猴体免疫原性检测。将毒种连续传代,观察各代次病毒的收获时间,并测定病毒滴度,分析毒种的传代稳定性;将主种子批和工作种子批分别置于-20和-70℃保存,不同时间取样,检测病毒滴度,分析毒种保存温度稳定性;选取4个代次毒种（D4、D8、D15、D19）提取病毒核酸,扩增H基因序列,分析H基因在传代过程中的遗传稳定性。结果主种子批和工作种子批毒种鉴别试验、无菌试验、支原体及外源因子检查均符合《中国药典》三部（2010版）要求,病毒滴度分别为5.88和6.00 log CCID50/ml,主种子批毒种具有良好的安全性及免疫原性。麻疹病毒长-47纯化株毒种适应于2BS细胞后,收获病毒时间一般在6-7 d,病毒滴度稳定在5.5-6.5 log CCID50/ml之间。主种子批和工作种子批病毒于-20和-70℃保存10个月,病毒滴度无明显变化。D4-D19代病毒无核苷酸发生改变,与麻疹病毒Chang-47（Gen Bank登录号：EF033071）比对结果显示,D4-D19代病毒核苷酸序列21 nt由G→C,属于同义突变,同源性达99.9%。结论建立了麻疹病毒长-47纯化株（2BS）毒种库,并按照《中国药典》三部（2010版）要求进行了全面检定,为制备以人胚肺二倍体细胞为基质的麻疹减毒活疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 麻疹病毒长-47纯化株 人二倍体细胞 毒种库 基因稳定性

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用于疫苗生产的人二倍体细胞研究进展 被引量：1

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作者 肖云喜 张俊河 +1 位作者 杨雯雯 程洪伟 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期74-81,共8页

人二倍体细胞(human diploid cells,HDCs)作为制备疫苗的重要培养细胞基质备受人们的关注。由于人二倍体细胞与人类基因组相同、无外源因子、对多种病毒易感性、无潜在致瘤性、所制备的人二倍体疫苗(human diploid cell vaccine,HDCV)... 人二倍体细胞(human diploid cells,HDCs)作为制备疫苗的重要培养细胞基质备受人们的关注。由于人二倍体细胞与人类基因组相同、无外源因子、对多种病毒易感性、无潜在致瘤性、所制备的人二倍体疫苗(human diploid cell vaccine,HDCV)具有良好的免疫原性和安全性,适合于疫苗的工业化生产。当前,人群中使用的灭活疫苗、减毒疫苗或亚单位疫苗等均依赖于原代细胞、传代细胞和人二倍体细胞,其中用于疫苗制备的人二倍体细胞主要有WI-38、MRC-5、2BS和KMB-17等细胞系。然而,人二倍体细胞为有限性细胞,细胞的来源和培养技术等存在某些缺陷,进而影响其应用。综述了用于疫苗生产的人二倍体细胞及其疫苗制备技术的研究进展,并分析了存在的问题及改进策略。 展开更多

关键词 人二倍体细胞 疫苗 细胞系 疫苗制备技术

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不同细胞工厂制备F基因型腮腺炎减毒活疫苗(人二倍体细胞)的比较

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作者 杨振清 刘喜苹 +6 位作者 文韬 李涛 艾晗 段黎恒 张玉平 王文慧 王晶晶 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期918-921,927,共5页

目的比较两种不同厂牌聚苯乙烯细胞工厂制备F基因型腮腺炎减毒活疫苗(人二倍体细胞)的差异。方法采用不同浓度血清(10%、8%、5%),在两组不同厂牌细胞工厂(A组:无锡耐思生物科技有限公司,B组:美国康宁公司)中分别培养人胚肺二倍体细胞KMB... 目的比较两种不同厂牌聚苯乙烯细胞工厂制备F基因型腮腺炎减毒活疫苗(人二倍体细胞)的差异。方法采用不同浓度血清(10%、8%、5%),在两组不同厂牌细胞工厂(A组:无锡耐思生物科技有限公司,B组:美国康宁公司)中分别培养人胚肺二倍体细胞KMB17,观察细胞形态变化并计数;在细胞长成致密单层后,接种SP-A株F基因型腮腺炎病毒,37℃培养7~9 d收获病毒液,经过滤后,获得疫苗原液。将病毒收获液、疫苗原液样品于4℃放置14 d、37℃放置7 d后检测病毒滴度,并按《中国药典》三部(2020版)要求检测相关安全性指标。结果两种不同厂牌细胞工厂培养的KMB17细胞生长状态和形态无明显差异,在细胞培养基的血清浓度为5%时,可获得较高滴度的病毒收获液;在该血清浓度下,两种不同厂牌细胞工厂培养的病毒收获液和疫苗原液感染性滴度均值为6.50 LgCCID50/mL,4℃放置14 d和37℃放置7 d后,A组与B组细胞工厂病毒滴度下降范围差异均无统计学意义(P>0.05);两种不同厂牌细胞工厂制备的病毒收获液和疫苗原液的无菌、分枝杆菌、支原体和细菌内毒素检查指标均符合《中国药典》三部(2020版)要求。结论两种不同厂牌细胞工厂均可用于制备SP-A株F基因型腮腺炎减毒活疫苗,本研究为F基因型腮腺炎减毒活疫苗的规模化生产提供了实验依据。 展开更多

关键词 细胞工厂 F基因型腮腺炎减毒活疫苗 人二倍体细胞 病毒滴度

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人二倍体细胞株KMB-17细胞代次检测模型的建立

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作者 李育中 陈晨 +3 位作者 杨建波 杨勤兴 周海军 寸韡 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第1期28-30,34,共4页

目的建立人二倍体细胞株KMB-17细胞代次与端粒长度之间的关系模型。方法将KMB-17细胞按照1∶2的分种率连续传代,以传代后再长满瓶为1代,取第22、25、28和30代KMB-17细胞,提取基因组DNA,采用实时荧光定量PCR法检测端粒重复拷贝数(T)及单... 目的建立人二倍体细胞株KMB-17细胞代次与端粒长度之间的关系模型。方法将KMB-17细胞按照1∶2的分种率连续传代,以传代后再长满瓶为1代,取第22、25、28和30代KMB-17细胞,提取基因组DNA,采用实时荧光定量PCR法检测端粒重复拷贝数(T)及单个拷贝基因(S),以T/S值表示不同代次KMB-17细胞的端粒长度。结果第22、25、28和30代KMB-17细胞的T/S值分别为1 224±48、818±86、671±118和505±41,T/S值随细胞代次的增加而降低。结论 KMB-17细胞代次与细胞端粒长度间具有明显相关性,即细胞代次越高,细胞端粒长度越短。 展开更多

关键词 人二倍体细胞 KMB-17细胞 细胞代次 端粒

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F基因型腮腺炎减毒活疫苗(人二倍体细胞)的质量稳定性分析

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作者 易力 邹俊如 +4 位作者 乔燕 何云龙 樊会青 李琦涵 王晶晶 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期1-4,19,共5页

目的分析在细胞工厂上生产的F基因型腮腺炎减毒活疫苗(人二倍体细胞)的质量稳定性。方法将KMB17细胞在细胞工厂中传代,待细胞长为单层时,将腮腺炎病毒SP-A株按MOI 0.02接种于KMB17细胞,在细胞工厂上连续制备6批F基因型腮腺炎减毒活疫苗... 目的分析在细胞工厂上生产的F基因型腮腺炎减毒活疫苗(人二倍体细胞)的质量稳定性。方法将KMB17细胞在细胞工厂中传代,待细胞长为单层时,将腮腺炎病毒SP-A株按MOI 0.02接种于KMB17细胞,在细胞工厂上连续制备6批F基因型腮腺炎减毒活疫苗,对病毒收获液、原液、半成品和成品进行病毒滴度检测,其中成品还进行热稳定性试验及无菌检查、异常毒性检查、细菌内毒素、牛血清白蛋白残留量和抗生素残留量等检测。对检测数据进行统计学分析,对实验结果进行正态性检验,并绘制2倍标准差及3倍标准差质量控制图,进一步分析其质量稳定性。结果不同阶段产品的病毒滴度、牛血清白蛋白残留量、抗生素残留量检测值均符合正态分布,且在2倍标准差控制限范围内波动;无菌试验、异常毒性试验、细菌内毒素检测结果均符合《中国药典》三部(2015版)要求。结论利用细胞工厂在人二倍体细胞基质上制备F基因型腮腺炎减毒活疫苗的工艺,能持续稳定地获得有效性与安全性可靠的疫苗成品,且各项检测指标均符合《中国药典》三部(2015版)要求。本研究为F基因型腮腺炎减毒活疫苗的规模化生产提供了实验依据。 展开更多

关键词 F基因型腮腺炎减毒活疫苗 人二倍体细胞 细胞工厂 病毒滴度 质量稳定性

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