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SIRT1通过AKT通路和ERK1/2通路共同调节退变髓核细胞细胞外基质的合成 被引量：4
1
作者 沈皆亮 胡侦明 +1 位作者 钟小明 张晓军 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期1811-1814,共4页
目的研究沉默信息调节因子2同源蛋白1(SIRT1/sirtuin 1)对已退变的人椎间盘髓核细胞(DNPCs)合成细胞外基质的影响。方法对人DNPCs进行分离、培养及其细胞鉴定,第一部分取P2代细胞用白藜芦醇(RES,SIRT1激动剂)、二甲双胍(MET,SIRT1激动剂... 目的研究沉默信息调节因子2同源蛋白1(SIRT1/sirtuin 1)对已退变的人椎间盘髓核细胞(DNPCs)合成细胞外基质的影响。方法对人DNPCs进行分离、培养及其细胞鉴定,第一部分取P2代细胞用白藜芦醇(RES,SIRT1激动剂)、二甲双胍(MET,SIRT1激动剂)、尼克酰胺(NAM,SIRT1抑制剂)、SIRT1-siRNA进行相应处理,采用Western印迹检测Ⅱ型胶原(COLLA2α1)、聚蛋白多糖(Aggrecan)及其p-AKT、t-AKT、p-ERK1/2、t-EKR1/2。第二部分先RES与P2代细胞共培养后分别加入PI3K与ERK的特异性抑制剂LY294002、PD98059,观察COLLA2α1、Aggrecan的表达情况。结果用SIRT1激动剂刺激以后COLLA2α1、Aggrecan的表达显著提高,AKT及其ERK1/2的磷酸化水平也相应提高,用NAM及其SIRT1-siRNA处理后COLLA2α1、Aggrecan的表达显著降低,AKT及其ERK1/2的磷酸化水平也显著降低。用LY294002和PD98059分别处理后观察到COLLA2α1、Aggrecan的表达亦显著降低。结论 SIRT1可通过AKT及其ERK1/2两条通路上调人DNPCs细胞外基质的表达,抑制椎间盘的变性,为进一步研究椎间盘退变的机制、组织工程学、基因治疗等奠定了基础。 展开更多
关键词 SIRT1 人退变髓核细胞 AKT通路 ERK1 2通路 细胞外基质
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锌指蛋白A20对LPS刺激时人退变髓核细胞衰老与凋亡的影响
2
作者 唐盼 刘渤 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第16期1613-1620,共8页
目的探究人退变髓核细胞中锌指蛋白A20对衰老及凋亡的影响。方法提取并培养人退变髓核细胞,小干扰RNA(siRNA)降低A20表达,脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)作为炎症诱导因素,设置对照组、LPS组、siRNA-A20组、siRNA-A20+LPS组。通过Weste... 目的探究人退变髓核细胞中锌指蛋白A20对衰老及凋亡的影响。方法提取并培养人退变髓核细胞,小干扰RNA(siRNA)降低A20表达,脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)作为炎症诱导因素,设置对照组、LPS组、siRNA-A20组、siRNA-A20+LPS组。通过Western blot检测A20、P21、P16、BAX、BID、BCL2、P65、p-P65蛋白表达量。细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒检测β-半乳糖苷酶。应用AnnexinV-PI双标法及TUNEL染色检测细胞凋亡,观察锌指蛋白A20对髓核细胞衰老及凋亡的影响。应用咖啡酸苯乙酯(caffeic acid phenethyl ester,CAPE)进行挽救实验,检测A20、P21、P16、BAX、BID、BCL2、P65、P-P65蛋白表达量,探索下调锌指蛋白A20诱导细胞衰老及凋亡可能通路。结果与对照组相比,LPS组P21、P16蛋白表达量无明显变化,siRNA-A20组及siRNA-A20+LPS组P21、P16蛋白表达明显增加(P<0.05),β-半乳糖苷酶染色实验显示着色阳性细胞数显著增多(P<0.05)。Annexin V-PI双标法凋亡结果显示,单纯LPS刺激及单纯siRNA-A20处理组中细胞凋亡占比高于对照组(P<0.05),但低于siRNA-A20+LPS组(P<0.05),TUNEL染色结果与Annexin V-PI双标法结果一致(P<0.05)。凋亡相关蛋白BAX、BID在siRNA-A20+LPS中显著增加(P<0.05),BCL2则明显降低(P<0.05),P-P65蛋白表达量在siRNA-A20+LPS组明显上升(P<0.05)。与siRAN-A20+LPS组相比,应用CAPE预处理后P-P65、P21、P16、BID、BAX蛋白表达量明显下降(P<0.05),BCL2上升(P<0.05)。结论下调锌指蛋白A20,LPS过度激活NF-κB信号通路诱导人退变髓核细胞衰老与凋亡。 展开更多
关键词 锌指蛋白A20 人退变髓核细胞 衰老 凋亡
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