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Ultrastructure of neuronal-like cells differentiated from adult adipose-derived stromal cells 被引量:16
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作者 Changqing Ye Xiaodong Yuan Hui Liu Yanan Cai 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2010年第19期1456-1463,共8页
β-mercaptoethanol induces in vitro adult adipose-derived stromal cells (ADSCs) to differentiate into neurons. However, the ultrastructural features of the differentiated neuronal-like cells remain unknown. In the p... β-mercaptoethanol induces in vitro adult adipose-derived stromal cells (ADSCs) to differentiate into neurons. However, the ultrastructural features of the differentiated neuronal-like cells remain unknown. In the present study, inverted phase contrast microscopy was utilized to observe β-mercaptoethanol-induced differentiation of neuronal-like cells from human ADSCs, and immunocytochemistry and real-time polymerase chain reaction were employed to detect expression of a neural stem cells marker (nestin), a neuronal marker (neuron-specific enolase), and a glial marker (glial fibrillary acidic protein). In addition, ultrastructure of neuronal-like cells was observed by transmission election microscopy. Results revealed highest expression rate of nestin and neuron-specific enolase at 3 and 5 hours following induced differentiation; cells in the 5-hour induction group exhibited a neuronal-specific structure, i.e., Nissl bodies. However, when induction solution was replaced by complete culture medium after 8-hour induction, the differentiated cells reverted to the fibroblast-like morphology from day 1. These results demonstrate that β-mercaptoethanol-induced ADSCs induced differentiation into neural stem cells, followed by morphology of neuronal-like cells. However, this differentiation state was not stable. 展开更多
关键词 human adipose-derived stromal cells β-mercaptoethanol induction in vitro differentiation ULTRASTRUCTURE neural stem cells neural regeneration
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抑制视网膜母细胞瘤结合蛋白2基因表达促进人脂肪基质细胞成骨向分化的研究 被引量:1
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作者 葛雯姝 周永胜 +3 位作者 冯海兰 马桂娥 刘云松 许永伟 《中华口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期148-152,共5页
目的 探讨视网膜母细胞瘤结合蛋白2(retinoblastoma binding protein 2,RBP-2)在人脂肪基质细胞(human adipose-derived stromal cell,hASC)成骨向分化中的作用.方法 设计靶向RBP-2小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)序列4对... 目的 探讨视网膜母细胞瘤结合蛋白2(retinoblastoma binding protein 2,RBP-2)在人脂肪基质细胞(human adipose-derived stromal cell,hASC)成骨向分化中的作用.方法 设计靶向RBP-2小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)序列4对,将相应寡核苷酸构建到慢病毒载体pLL 3.7中,于293T细胞进行病毒包装用于RBP-2基因敲低.采用RBP-2敲低效果好的两个siRNA序列进行病毒包装,并以非沉默siRNA的pLL 3.7质粒包装的慢病毒为对照组,感染hASC,培养第14天定量检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性并行ALP染色及茜素红矿化结节染色,检测hASC成骨向分化的差异.结果 成功构建RBP-2基因RNA干扰慢病毒载体并获得相应慢病毒.慢病毒感染hASC后,RBP-2 mRNA及蛋白表达均被明显抑制.RBP-2 siRNA-1组和RBP-2 siRNA-4组的敲低效果较好,以此两组感染hASC.成骨诱导培养第14天RBP-2 siRNA-1组和RBP-2 siRNA-4组ALP活性[(299.2±22.7)、(224.3±17.7)U/g]高于对照组[(129.9±12.9)U/g,P<0.05],RBP-2 siRNA-1组和RBP-2 siRNA-4组茜素红及ALP染色强于对照组.结论 成功构建的RBP-2 RNA干扰慢病毒能显著抑制RBP-2表达,并促进hASC向成骨细胞分化,即RBP-2可以抑制hASC的成骨向分化. 展开更多
关键词 RNA 小分子干扰 视网膜母细胞瘤蛋白质 慢病毒 人脂肪基质细胞
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低能量激光照射对人脂肪基质细胞增殖分化的影响 被引量:4
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作者 隋华欣 吕培军 +2 位作者 王宇光 王勇 孙玉春 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期337-343,共7页
目的:研究低能量激光照射(low level laser irradiation,LLLI)的照射剂量对人脂肪基质细胞(human adipose-derived stromal cells,h ASCs)增殖与分化作用的影响,为LLLI进一步在骨组织工程中的应用奠定基础。方法:将P4代h ASCs接种于孔板... 目的:研究低能量激光照射(low level laser irradiation,LLLI)的照射剂量对人脂肪基质细胞(human adipose-derived stromal cells,h ASCs)增殖与分化作用的影响,为LLLI进一步在骨组织工程中的应用奠定基础。方法:将P4代h ASCs接种于孔板中,24 h后利用半导体激光器(980 nm,100 m W^12 W)连续照射4 d。以增殖培养基为空白对照组(PM组),实验组接受2、4、6、8 J/cm^2的激光照射,连续7 d进行细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)增殖检测。当细胞达到70%的融合后将一半细胞更换为成骨培养基(osteogenic medium,OM),根据培养基及累计接受的激光总能量密度分为6组:PM、OM、PM+LLLI2 J/cm^2、OM+LLLI2 J/cm^2、PM+LLLI4 J/cm^2、OM+LLLI4 J/cm^2。于第7天进行碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色及定量检测,于第14、21天进行矿化沉积检测,于第7、14天进行实时定量PCR检测成骨相关基因的表达,探究低能量激光对h ASCs成骨分化的影响,结果采用SPSS 19.0软件进行统计学分析。结果:PM+LLLI_(4J/cm^2)组细胞增殖速率最快,OM各组的ALP染色均呈阳性表达,且染色深度随激光能量密度的增高而加重。第14天时,OM各组随激光照射能量升高,矿化结节体积明显增大、数目增多;第21天时,OM组间茜素红染色结果无明显差异。ALP及茜素红定量结果均与相应染色结果趋势一致。h ASCs实时定量PCR结果提示,LLLI可促进ALP和Runx2的表达,且促进作用与照射剂量呈正相关。结论:LLLI具有促进h ASCs增殖分化的作用,且在一定剂量范围内,这种促进作用会随照射剂量的增大而加强,当达到峰值后随照射剂量的增大而减弱。 展开更多
关键词 低能量激光照射 人脂肪基质细胞 细胞增殖 细胞分化 组织工程
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脂肪组织是骨、软骨、软组织缺损组织工程再建的理想干细胞来源(英文) 被引量:3
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作者 刘云松 周永胜 谭建国 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 2007年第3期217-224,149,共9页
目的验证人脂肪基质细胞是否具有向成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞分化的能力,从而为骨、软骨、软组织再建寻找一种理想的干细胞来源。方法分别用成骨向分化培养基(DMEM+10%FBS+地塞米松+维生素C+β-甘油磷酸)、软骨向分化培养基(DMEM+1%... 目的验证人脂肪基质细胞是否具有向成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞分化的能力,从而为骨、软骨、软组织再建寻找一种理想的干细胞来源。方法分别用成骨向分化培养基(DMEM+10%FBS+地塞米松+维生素C+β-甘油磷酸)、软骨向分化培养基(DMEM+1%FBS+胰岛素+维生素C+转化生长因子β1)及脂肪向分化培养基(DMEM+10%FBS+地塞米松+胰岛素+吲哚美辛+异丁基甲基黄嘌呤)诱导人脂肪基质细胞向成骨细胞、软骨细胞及脂肪细胞分化。用vonKossa和碱性磷酸酶染色鉴定成骨细胞分化,而软骨细胞分化和脂肪细胞分化分别用Alcianblue染色和油红O染色显示。成骨细胞、软骨细胞以及脂肪细胞特异相关或标志基因的表达用RT-PCR检测。结果体外实验表明,人脂肪基质细胞在定向分化诱导剂的作用下可分别向成骨细胞、软骨细胞及脂肪细胞分化。结论人脂肪基质细胞中包含有多向分化能力的干细胞,可用于今后骨、软骨、软组织的组织工程再建。 展开更多
关键词 人脂肪基质细胞 成骨细胞 软骨细胞 脂肪细胞 分化
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Notch信号在人脂肪源间充质干细胞成脂中的作用 被引量:3
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作者 袁伟 李作农 +2 位作者 曾瑞霞 包双江 李德华 《解剖科学进展》 2017年第6期626-629,633,共5页
目的通过研究Notch在hADSCs成脂中的作用,为肥胖提供新的药物靶点。方法分离脂肪抽吸液中的hADSCs并进行成脂诱导。RT-qPCR分析成脂中Notch1、Notch2、DLL1和DLL3的表达;DAPT抑制Notch信号,Western-blot检测NICD、p-PI3K/PI3K和p-Akt/Ak... 目的通过研究Notch在hADSCs成脂中的作用,为肥胖提供新的药物靶点。方法分离脂肪抽吸液中的hADSCs并进行成脂诱导。RT-qPCR分析成脂中Notch1、Notch2、DLL1和DLL3的表达;DAPT抑制Notch信号,Western-blot检测NICD、p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt、PPARγ的表达。结果所分离的细胞可成功诱导成脂。Notch1、Notch2、DLL1和DLL3表达水平在成脂过程中逐渐降低;10μM DAPT可显著降低NICD的表达水平,PPARγ表达水平升高,p-PI3K/PI3K与p-Akt/Akt表达水平均降低。同时使用PI3K/Akt激活剂IGF-1后,PPARγ表达水平下降。结论 Notch信号抑制可通过降低PI3K/Akt通路的活性促进hADSCs成脂。 展开更多
关键词 人脂肪源间充质干细胞 成脂 NOTCH
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腺病毒与慢病毒载体对人脂肪间充质干细胞转导效率及基因表达的差异 被引量:2
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作者 李丹 乔群 +1 位作者 王晓军 钱建平 《中国美容医学》 CAS 2009年第3期342-345,共4页
目的:比较重组腺病毒、慢病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白对体外培养的人脂肪来源干细胞(hADSCs)的转导效率和外源基因表达差异。方法:原代分离培养hADSCs并鉴定,应用Ad5F35-EGFP及LV-EGFP以MOI=0、25、50、100、200、400、800感染hADS... 目的:比较重组腺病毒、慢病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白对体外培养的人脂肪来源干细胞(hADSCs)的转导效率和外源基因表达差异。方法:原代分离培养hADSCs并鉴定,应用Ad5F35-EGFP及LV-EGFP以MOI=0、25、50、100、200、400、800感染hADSCs,在1、3、7、14、21天应用荧光显微镜、流式细胞仪观察检测表达EGFP细胞阳性率。MTT法检测转导对hADSCs增殖的影响。VonKossa染色、油红O染色检测体外诱导转导EGFP的hADSCs向成骨及成脂方向分化能力。结果:hADSCs细胞表面标记CD31、CD34、CD45、CD106和HLA-DR阴性,CD29、CD44、CD49d、CD105、CD166阳性。荧光显微镜观察Ad5F35-EGFP感染hADSCs后(1~7天)可见EGFP高表达,此后逐渐减弱;LV-EGFP感染hADSCs后21天,仍可见EGFP高表达。流式细胞仪检测Ad5F35-EGFP、LV-EGFP对hADSCs转导效率与MOI值呈正相关。MTT显示Ad5F35-EGFP在高MOI值(800)检测A值与对照组相比差异显著(P<0.01)。转导EGFP的hADSCs经体外诱导14天可向成骨、成脂方向分化。结论:与腺病毒相比,慢病毒能够更为安全、有效地感染体外培养hADSCs,并长期表达外源基因,是研究基因修饰hADSCs的理想载体。 展开更多
关键词 人脂肪间充质干细胞 基因治疗 腺病毒 慢病毒
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人脂肪间充质干细胞成功诱导分化为脂肪细胞
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作者 王媛春卉 单伟 +1 位作者 林妹珠 毕淑华 《解剖科学进展》 2016年第4期423-425,428,共4页
目的分离培养人脂肪间充质干细胞(h ADSCs),探讨h ADSCs生长特性及分化为脂肪细胞的能力。方法采用Ⅰ型胶原酶消化和贴壁筛选联合培养方法,从人腹部吸脂术所抽取的脂肪组织中分离培养间充质干细胞,传代,绘制其生长曲线,免疫细胞化学染... 目的分离培养人脂肪间充质干细胞(h ADSCs),探讨h ADSCs生长特性及分化为脂肪细胞的能力。方法采用Ⅰ型胶原酶消化和贴壁筛选联合培养方法,从人腹部吸脂术所抽取的脂肪组织中分离培养间充质干细胞,传代,绘制其生长曲线,免疫细胞化学染色检测细胞表面标志物以鉴定所分离细胞;利用三联诱导法诱导人脂肪间充质干细胞向脂肪细胞分化,并进行油红O染色鉴定,显微镜下观察。结果原代人脂肪源间充质干细胞贴壁生长,为形态相对均一的梭形细胞,呈平行排列生长,生长曲线呈"s"型分布,间充质干细胞相关标志物CD44、CD49d高表达,而CD34、CD106则呈阴性。三联诱导法成功诱导人脂肪源间充质干细胞向脂肪细胞分化,诱导7d后镜下可见脂滴的出现,12d后最为显著,油红O染色脂滴着红色。结论 h ADSCs经过体外扩增及成脂诱导成功分化为脂肪细胞,可成为组织工程理想种子细胞。 展开更多
关键词 人脂肪间充质干细胞 体外分化 脂肪细胞
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