基因工程药物宿主细胞蛋白的研究进展 被引量：4

1

作者 崔新玲 朱涛 应万涛 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1533-1541,共9页

根据宿主细胞蛋白(HCPs)的来源、影响因素等背景,综合近年来国内外在HCPs检测方面所取得的进展,重点介绍新型质谱技术在HCPs检测中的应用。HCPs的分析方法有免疫分析法(例如Western Blot和ELISA)或其他方法(例如电泳和质谱),目前最常用... 根据宿主细胞蛋白(HCPs)的来源、影响因素等背景,综合近年来国内外在HCPs检测方面所取得的进展,重点介绍新型质谱技术在HCPs检测中的应用。HCPs的分析方法有免疫分析法(例如Western Blot和ELISA)或其他方法(例如电泳和质谱),目前最常用的检测方法是ELISA法,但ELISA法存在很多问题与不足。新型检测技术,如邻位连接分析法(PLA)、生物传感器技术等也被用于HCPs检测,但这些方法难以推广使用。HCPs是产品质量控制的关键属性之一,其细胞丰度检测是药物放行并进行临床研究的重要参数。本文详细比较说明了各种HCPs检测方法的优缺点,基于质谱的蛋白质组学技术对HCPs进行定性与定量分析,目前已取得了较好的结果,弥补了ELISA方法的不足。 展开更多

关键词 基因工程药物 宿主细胞蛋白 免疫分析法 蛋白质组学 质谱

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质谱技术在单克隆抗体类药物宿主细胞残留蛋白检测中的应用进展

2

作者 于继伟 尹红锐 邵泓 《药物流行病学杂志》 CAS 2023年第4期458-465,共8页

单克隆抗体类药物是近年来生物制药领域增长率最快的一类生物技术药物,以其靶向性强、治疗效果明显等优势在癌症、自身免疫性疾病等领域应用广泛。宿主细胞残留蛋白(HCP)是其生产中无法去除且易引起免疫原性的一类工艺杂质,HCP含量测定... 单克隆抗体类药物是近年来生物制药领域增长率最快的一类生物技术药物,以其靶向性强、治疗效果明显等优势在癌症、自身免疫性疾病等领域应用广泛。宿主细胞残留蛋白(HCP)是其生产中无法去除且易引起免疫原性的一类工艺杂质,HCP含量测定是单抗药物质量控制中重要的一项指标。酶联免疫法(ELISA)是目前HCP检测最常用的方法,可以定量检测HCP的总量,但存在局限性。而质谱法作为一种高精密度高准确性的检测方法,已被应用于单克隆抗体类生物药物生产工艺中HCP的监测,可以与ELISA形成互补,弥补ELISA方法存在的不足,为生产条件优化、纯化效果验证提供了依据。文中将从样品前处理技术、分离技术以及数据采集技术3个方面介绍近年来质谱技术在单克隆抗体类药物HCP研究中的应用与进展,为后续质谱法应用于HCP检测研究提供了参考和指导。 展开更多

关键词 单克隆抗体类药物 宿主细胞残留蛋白 质谱 质量控制 检测方法

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抗狂犬病毒单克隆抗体中残留宿主细胞蛋白ELISA定量检测方法的验证

3

作者 赵晓瑞 叶星 +4 位作者 南建军 郭岚 徐玺丰 王倩 安晨 《国际生物制品学杂志》 CAS 2023年第6期328-332,共5页

目的验证抗狂犬病毒单克隆抗体(单抗)中残留宿主细胞蛋白(host cell protein,HCP)ELISA定量检测方法。方法使用商用中国仓鼠卵巢细胞HCP残留ELISA检测试剂盒,测定2种针对不同表位的抗狂犬病毒单抗原液中的残留HCP,并验证该方法的专属性... 目的验证抗狂犬病毒单克隆抗体(单抗)中残留宿主细胞蛋白(host cell protein,HCP)ELISA定量检测方法。方法使用商用中国仓鼠卵巢细胞HCP残留ELISA检测试剂盒,测定2种针对不同表位的抗狂犬病毒单抗原液中的残留HCP,并验证该方法的专属性、准确度、精密度、线性、耐用性、检测限及定量限。结果2种抗狂犬病毒单抗发酵液稀释10000倍后检出的HCP含量分别为31.42和19.36 ng/ml。制剂溶液、HEK293F和E.coli培养上清液中未检出HCP。3种浓度的HCP加标供试品的加标回收率均在80%~120%之间。3种浓度的HCP加标供试品重复性检测结果及中间精密度检测结果相对标准偏差均<20%。分别对3次残余HCP检测绘制四参数标准曲线,决定系数均>0.990。在一定范围内改变孵育时间和显色时间,HCP测定结果在合理的偏差范围内。检测限和定量限分别为2和3 ng/ml。结论抗狂犬病毒单抗中HCP残留量的ELISA定量检测方法专属性、准确度、精密度、线性及耐用性良好。 展开更多

关键词 抗狂犬病毒单克隆抗体 宿主细胞蛋白 酶联免疫吸附测定

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原代地鼠肾细胞疫苗中残余宿主细胞蛋白检测方法的建立及初步验证 被引量：4

4

作者 赵玉秀 张月兰 +6 位作者 王辉 韩霞 钟书声 马可 罗书荣 白江 赵兰英 《国际生物制品学杂志》 CAS 2010年第1期9-13,共5页

目的建立定量检测原代地鼠肾细胞（primary hamster kidney cell，PHKC）疫苗中残余宿主细胞蛋白含量的方法。方法制备PHKC蛋白免疫家兔，对获得的抗血清进行纯化并标记辣根过氧化物酶，通过优化各反应条件建立ELISA方法，同时进行方法... 目的建立定量检测原代地鼠肾细胞（primary hamster kidney cell，PHKC）疫苗中残余宿主细胞蛋白含量的方法。方法制备PHKC蛋白免疫家兔，对获得的抗血清进行纯化并标记辣根过氧化物酶，通过优化各反应条件建立ELISA方法，同时进行方法学验证。结果ELISA检测方法的最佳包被抗体质量浓度为6mg／L，酶标抗体工作浓度为1：2000，最佳检测区间为12．500～200．000μg／L，定量限度为23．250μg／L，准确度和精密度较佳。结论建立了一种简单、准确、可靠检测PHKC病毒性疫苗中宿主细胞蛋白残留量的ELISA双抗体夹心法。 展开更多

关键词 酶联免疫吸附测定 原代地鼠肾细胞 宿主细胞蛋白 方法

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不同外源基因拷贝数背景CHO细胞的宿主细胞蛋白种类的研究 被引量：2

5

作者 高侨 余垚 蔡洁行 《中国医药生物技术》 2020年第2期171-177,共7页

目的研究外源基因拷贝数、生产工艺、细胞多样性对宿主细胞蛋白表达的影响。方法构建空载体CHO K1细胞株,检测其外源基因拷贝数,根据拷贝数的低、中、高对细胞进行分类。使用不同的生产工艺测试低拷贝、中等拷贝和高拷贝的细胞群,观察... 目的研究外源基因拷贝数、生产工艺、细胞多样性对宿主细胞蛋白表达的影响。方法构建空载体CHO K1细胞株,检测其外源基因拷贝数,根据拷贝数的低、中、高对细胞进行分类。使用不同的生产工艺测试低拷贝、中等拷贝和高拷贝的细胞群,观察其宿主细胞蛋白表达之间的差异。最后将三个拷贝数水平的细胞群进行混合,再生产,观察其混合表达的宿主细胞蛋白与单独生产时表达宿主细胞蛋白的差异。结果研究结果显示,不同拷贝数背景的细胞群之间表达宿主细胞蛋白相差6%~13%。相同的细胞进行不同的工艺生产时,也因为基础培养基和补料的不同而使宿主细胞蛋白的种类不同。细胞多样性增加并不能引起宿主细胞蛋白表达的种类增多。结论宿主细胞蛋白的表达与外源基因拷贝数、生产工艺以及细胞群的多样性有关。 展开更多

关键词 CHO细胞 宿主细胞蛋白 外源基因拷贝数 生产工艺 多样性

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重组抗VEGF单抗工艺特异性宿主细胞蛋白质残留ELISA检测方法的建立与验证 被引量：2

6

作者 邓春平 梅雄 +1 位作者 王星 刘翠华 《中国医药生物技术》 2021年第6期506-511,共6页

目的建立重组抗VEGF单抗中CHO宿主细胞蛋白质(HCPs)残留的ELISA检测方法,并对方法进行验证。方法采用空载CHO细胞制备工艺特异HCPs,并进行二维电泳表征;采用二维电泳-Western blot(2D SDS-PAGE/Western blot)法对6种抗CHO HCPs多克隆抗... 目的建立重组抗VEGF单抗中CHO宿主细胞蛋白质(HCPs)残留的ELISA检测方法,并对方法进行验证。方法采用空载CHO细胞制备工艺特异HCPs,并进行二维电泳表征;采用二维电泳-Western blot(2D SDS-PAGE/Western blot)法对6种抗CHO HCPs多克隆抗体(C3、C6、C7、AB000103-A、AB000103-C、3G-0016-AF)识别重组抗VEGF单抗工艺特异性HCPs的覆盖率进行测定;选择覆盖率最高的多抗作为检测抗体,建立制品工艺特异性HCPs ELISA检测方法,并对方法的线性、基质干扰、稀释线性、灵敏度、精密度和准确性进行验证;此外对该方法与商业化通用检测方法进行了桥接对比研究。结果制备的工艺特异性HCPs蛋白质谱分布广泛;筛选得到覆盖率为59%的C6兔抗CHO HCPs多抗作为检测抗体,并建立了夹心ELISA检测法;该方法不受原液基质干扰,HCPs标准品在3.33~810 ng/ml浓度范围曲线拟合良好,原液在1~8倍范围内有良好的稀释线性;检测限0.075 ng/ml,定量限20 ng/ml;试验内和试验间变异系数均不超过10%;30、150及300 ng/ml浓度的HCPs标准品的回收率分别为107%、107%和95%;工艺特异性ELISA法测得的结果显著高于商业化通用检测方法。结论建立了重组抗VEGF单抗工艺特异性HCPs ELISA检测方法,该方法具有良好的检出率、灵敏度、精密度、准确性和线性,适用于该制品HCPs残留检测。 展开更多

关键词 重组抗VEGF单抗 CHO细胞 宿主细胞蛋白质 酶联免疫吸附法

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聚乙二醇双官能基异端修饰的研究进展 被引量：1

7

作者 张佳唯 廉明明 +3 位作者 石立旺 张大鹏 唐淑坤 彭海生 《中国医药生物技术》 2020年第2期209-215,177,共8页

聚乙二醇(PEG)是一种惰性、非致癌性聚合物,目前是修饰生物活性分子和纳米粒子表面的首选聚合物之一[1-2]。聚乙二醇已被证明可以增强疏水性药物、蛋白质、核酸、脂质体的溶解性、提高稳定性和延长循环时间[3-4]。此外,PEG还能通过增强... 聚乙二醇(PEG)是一种惰性、非致癌性聚合物,目前是修饰生物活性分子和纳米粒子表面的首选聚合物之一[1-2]。聚乙二醇已被证明可以增强疏水性药物、蛋白质、核酸、脂质体的溶解性、提高稳定性和延长循环时间[3-4]。此外,PEG还能通过增强渗透和保留(EPR)效应实现特异性肿瘤靶向治疗[5-6]。PEG现已成为生物技术和生物医学界关注的焦点,广泛应用于大分子与表面的连接、药物和脂质体的靶向性、纳米颗粒功能化等诸多领域[7-11]。 展开更多

关键词 疏水性药物 生物活性分子 致癌性 脂质体 靶向性 肿瘤靶向治疗 提高稳定性 纳米颗粒

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重组葡激酶突变体K35R纯化过程中宿主菌菌体蛋白残余量的免疫分析 被引量：1

8

作者 贺进田 王改珍 +2 位作者 狄静芳 徐瑞光 宋后燕 《河北师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2006年第6期709-712,共4页

葡激酶突变体K35R（DGR）是双功能葡激酶突变体，是正在开发的治疗血栓性疾病的新药．为检测DGR纯化过程中宿主菌菌体蛋白的残留，建立了宿主菌菌体蛋白的免疫分析方法．用所制备的宿主菌菌体蛋白免疫新西兰兔，得到菌体蛋白的抗血清。... 葡激酶突变体K35R（DGR）是双功能葡激酶突变体，是正在开发的治疗血栓性疾病的新药．为检测DGR纯化过程中宿主菌菌体蛋白的残留，建立了宿主菌菌体蛋白的免疫分析方法．用所制备的宿主菌菌体蛋白免疫新西兰兔，得到菌体蛋白的抗血清。使用SDS—PAGE和基于抗血清的免疫印迹方法检测DGR纯化过程中菌体蛋白的去除．进一步建立了对宿主菌菌体蛋白灵敏的酶联免疫吸附测定（ELISA）方法，其检测线性范围是5-100μg/L，并用ELISA法定量测定了纯化过程中中间产物和纯化产品中菌体蛋白的含量． 展开更多

关键词 葡激酶 宿主菌菌体蛋白 酶联免疫吸附测定

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检测猪睾丸细胞蛋白残留量的间接ELISA的建立

9

作者 暴艳敏 樊得英 +5 位作者 冯玉萍 马桂兰 王家敏 马忠仁 李倬 乔自林 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1091-1096,共6页

为建立猪睾丸细胞疫苗生物制品中宿主细胞蛋白残留量的ELISA检测方法,制备了猪睾丸细胞多克隆抗体,优化了间接ELISA试验条件,建立了ELISA检测方法。Western-blot结果显示,制备的猪睾丸细胞蛋白多克隆抗体具有良好的特异性,抗体经过纯化... 为建立猪睾丸细胞疫苗生物制品中宿主细胞蛋白残留量的ELISA检测方法,制备了猪睾丸细胞多克隆抗体,优化了间接ELISA试验条件,建立了ELISA检测方法。Western-blot结果显示,制备的猪睾丸细胞蛋白多克隆抗体具有良好的特异性,抗体经过纯化后效价达1∶10 000。猪睾丸细胞蛋白的质量浓度为25-400ng/mL时线性关系良好。结果表明,用猪睾丸细胞蛋白建立的间接ELISA定量检测方法具有良好的线性关系、特异性和重复性。 展开更多

关键词 酶联免疫吸附试验 猪睾丸细胞 宿主细胞蛋白

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生物质谱在生物制品宿主细胞蛋白残留分析中的应用

10

作者 谢力琦 王静 +3 位作者 朱添怡 王佳馨 黄懿 乔亮 《质谱学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第2期193-200,共8页

宿主细胞蛋白(host cell proteins,HCPs)残留影响生物制品的质量和安全,是生物制品生产的关键质控要素。目前,HCPs残留的主要质控方法是酶联免疫吸附试验(ELISA),但该方法的准确性高度依赖于抗体的特异性,且无法获得HCPs的种类及其含量... 宿主细胞蛋白(host cell proteins,HCPs)残留影响生物制品的质量和安全,是生物制品生产的关键质控要素。目前,HCPs残留的主要质控方法是酶联免疫吸附试验(ELISA),但该方法的准确性高度依赖于抗体的特异性,且无法获得HCPs的种类及其含量分布信息,需要使用正交方法全面监测。而生物质谱技术无需依赖抗体即可实现HCPs的定性和定量分析,已逐渐成为除ELISA法外的主要分析表征方法,但质谱技术存在缺乏统一的操作流程和验证标准、高丰度药物信号抑制以及高昂的仪器成本等问题。本文总结了质谱法在生物制品HCPs分析中的工作流程及其应用进展,详细阐述了流程中涉及的样品准备、液相色谱分离、质谱数据采集、质谱数据分析和报告的开发原则和关键方法参数,并对未来的研究方向及挑战进行展望。 展开更多

关键词 宿主细胞蛋白 生物质谱 生物制品 质量控制

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疫苗制品中Vero细胞残余蛋白含量检测方法的建立 被引量：19

11

作者 王辉 张月兰 +5 位作者 过琴媛 贾丽丽 钟书声 赵玉秀 马可 罗书荣 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第12期937-939,947,共4页

目的建立疫苗制品中Vero细胞残余蛋白含量检测方法。方法制备Vero细胞蛋白抗原参考品,免疫家兔,提纯抗体作为包被抗体并以酶标记,建立酶联免疫检测系统。用Vero细胞蛋白抗原参考品绘制定量标准曲线,并对各项指标进行验证。结果提纯后抗... 目的建立疫苗制品中Vero细胞残余蛋白含量检测方法。方法制备Vero细胞蛋白抗原参考品,免疫家兔,提纯抗体作为包被抗体并以酶标记,建立酶联免疫检测系统。用Vero细胞蛋白抗原参考品绘制定量标准曲线,并对各项指标进行验证。结果提纯后抗体纯度达90%以上,抗体效价为1∶64,Westernblot分析显示,提纯抗体与Vero细胞蛋白抗原参考品中绝大部分蛋白成分均能特异性结合。确定最佳抗体包被浓度为10μg/ml,酶标抗体的工作浓度为1∶1000。Vero细胞蛋白抗原参考品定量范围为12.5～800.0ng/ml时,线性关系良好,r=0.997,该方法特异性、精密度及准确度良好。将试剂于4、25和37℃分别放置3周,检测同一定量参考品和样品中Vero细胞蛋白抗原含量,差异无显著意义。结论已建立了用ELISA检测疫苗制品中Vero细胞残余蛋白含量的方法。 展开更多

关键词 酶联免疫吸附试验 疫苗 VERO细胞 宿主细胞蛋白

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蛋白A亲和层析法纯化单克隆抗体工艺的优化 被引量：10

12

作者 陈泉 卓燕玲 +6 位作者 许爱娜 咸漠 彭馨莹 杨元生 张海波 年锐 张巍 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期807-818,共12页

治疗性单克隆抗体药物已成为生物医药领域市场最主要的产品类别。蛋白A亲和层析作为第一步捕获抗体蛋白最为有效的手段仍然在现有单克隆抗体纯化平台中占据主导地位。在本研究中,首先开发了一种基于低p H处理抗体细胞回收液的新型细胞... 治疗性单克隆抗体药物已成为生物医药领域市场最主要的产品类别。蛋白A亲和层析作为第一步捕获抗体蛋白最为有效的手段仍然在现有单克隆抗体纯化平台中占据主导地位。在本研究中,首先开发了一种基于低p H处理抗体细胞回收液的新型细胞液回收技术,该技术能有效去除宿主相关污染物(非组蛋白宿主杂质蛋白、组蛋白、DNA、蛋白聚合物等),同时保证较高的抗体回收率。通过该技术有效预处理后,蛋白A纯化效率可提高10倍左右,并且有效避免了抗体洗脱液中和后浊度的上升,大大减轻了后续蛋白纯化的压力。同时我们也对酸性处理中各种宿主杂质去除机制进行了研究。然后,预处理的洗脱液再经一步Capto adhere色谱纯化,非组蛋白宿主杂质蛋白降低至5 ppm、DNA小于1 ppb、组蛋白降低至检测限以下、蛋白聚合物小于0.01%。总过程抗体蛋白收率87%。该两步法抗体纯化技术可有效集成至当前主流抗体纯化平台,具有良好的大规模应用价值。 展开更多

关键词 蛋白A 单克隆抗体 纯化 细胞回收液 酸性沉淀 宿主杂质蛋白 组蛋白 DNA

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两种亲和层析方法纯化兔抗CHO细胞蛋白多克隆抗体的比较 被引量：9

13

作者 杜洪桥 朱蓉 +1 位作者 徐葛林 严家新 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2011年第8期968-970,共3页

目的比较两种亲和层析法纯化兔抗CHO细胞蛋白多克隆抗体的效果。方法制备可溶性CHO细胞蛋白,免疫家兔,获得兔免疫血清,采用蛋白A亲和层析和抗原偶联亲和层析两种方法分别纯化兔抗CHO细胞蛋白抗体,ELISA测定抗体效价;SDS-PAGE分析抗体纯... 目的比较两种亲和层析法纯化兔抗CHO细胞蛋白多克隆抗体的效果。方法制备可溶性CHO细胞蛋白,免疫家兔,获得兔免疫血清,采用蛋白A亲和层析和抗原偶联亲和层析两种方法分别纯化兔抗CHO细胞蛋白抗体,ELISA测定抗体效价;SDS-PAGE分析抗体纯度;Western blot分析抗体的特异性。结果兔IgG经蛋白A亲和层析纯化后,ELISA效价约为1∶106,抗体纯度达81.3%;经抗原偶联亲和层析纯化后,ELISA效价可达1∶107,抗体纯度达80.6%。两种方法纯化的抗体特异性均较好。结论抗原偶联亲和层析法更适合纯化兔抗CHO细胞蛋白多克隆抗体。 展开更多

关键词 亲和层析 宿主细胞蛋白 多克隆抗体

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确定性筛选设计在Purcise Q膜纯化抗体的应用

14

作者 胡晔 廖敏 《生物化工》 CAS 2024年第1期75-78,90,共5页

目的:通过确定性筛选设计(DSD)方法建立单抗的Purcise Q膜阴离子交换工艺,进一步降低残留宿主细胞蛋白(HCP)含量。方法:将亲和层析洗脱过滤液作为样品,进行Purcise Q膜层析,选取上样pH、上样电导、载量、流速、峰收集条件5个因子为输入... 目的:通过确定性筛选设计(DSD)方法建立单抗的Purcise Q膜阴离子交换工艺,进一步降低残留宿主细胞蛋白(HCP)含量。方法:将亲和层析洗脱过滤液作为样品,进行Purcise Q膜层析,选取上样pH、上样电导、载量、流速、峰收集条件5个因子为输入因子,以回收率、HCP去除率、多聚体含量为输出响应值,使用确定性筛选设计DOE模型进行实验。结果:在实验参数范围内,多聚体含量没有明显的变化,HCP含量显著降低。上样电导和载量显著影响HCP去除率,而载量、流速和峰收集条件则显著影响层析回收率。利用JMP的模拟实验功能获得了稳健工艺参数组合(上样电导3 ms/cm、载量300 g/L、流速25 MV/min、峰收集50 mAU/mm),进一步利用决策树机器学习方法自动获得设计空间(上样电导3.0~3.6 ms/cm、载量300~460 g/L、流速5~25 MV/min、峰收集50~180 mAU/mm)。结论:确定性筛选设计实验方法适用于膜层析的工艺开发,能够一段式快速获得稳健工艺参数组合和设计空间,对于工艺放大、工艺转移和降低生产风险极具指导意义。 展开更多

关键词 确定性筛选设计 Purcise Q膜层析 宿主细胞蛋白 设计空间 稳健工艺参数

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不同方法测定基因工程药物中中国仓鼠卵巢细胞蛋白残留量的比较与分析 被引量：4

15

作者 侯继锋 程雅琴 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 2002年第4期168-170,共3页

目的对不同中国仓鼠卵巢 (CHO)细胞蛋白检测试剂盒进行比较分析以确定最佳检测方法。方法用4种不同的CHO细胞蛋白检测试剂对 32批用CHO细胞表达的基因工程产品原液进行检测 ;用标准品替换方法分析 3批红细胞生成素供试品 ;并对 2种CHO... 目的对不同中国仓鼠卵巢 (CHO)细胞蛋白检测试剂盒进行比较分析以确定最佳检测方法。方法用4种不同的CHO细胞蛋白检测试剂对 32批用CHO细胞表达的基因工程产品原液进行检测 ;用标准品替换方法分析 3批红细胞生成素供试品 ;并对 2种CHO细胞蛋白标准品和 4种供试品进行SDS PAGE分析。结果不同的检测方法之间的结果存在较大的偏差 ;同一检测试剂盒替换标准品后测得结果有较大差异 ;标准品的组成成分和比例存在较大差异。 展开更多

关键词 卵巢细胞 宿主细胞蛋白 基因工程药物原液 酶联免疫吸附试验 测定方法 蛋白残留量

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重组人粒细胞集落刺激因子宿主蛋白质含量的测定 被引量：3

16

作者 贾茜 王彦芳 +3 位作者 张丽芳 焦艳晴 郝爱鱼 董爱华 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 2004年第4期228-230,共3页

目的根据重组人粒细胞集落刺激因子 (rhG CSF)的生产工艺 ,建立宿主蛋白质 (HCP)含量的测定方法。方法用不含rhG CSF基因的空质粒转染E .coli宿主 (BL2 1) ,按rhG CSF的生产工艺进行发酵、纯化、制备HCP。常规法免疫家兔 ,制备抗HCP多... 目的根据重组人粒细胞集落刺激因子 (rhG CSF)的生产工艺 ,建立宿主蛋白质 (HCP)含量的测定方法。方法用不含rhG CSF基因的空质粒转染E .coli宿主 (BL2 1) ,按rhG CSF的生产工艺进行发酵、纯化、制备HCP。常规法免疫家兔 ,制备抗HCP多抗血清 ,经纯化后 ,过碘酸钠法标记辣根过氧化物酶 (HRP) ,建立双抗夹心酶标记免疫吸附测定 (ELISA)法测定HCP在rhG CSF原液中的含量。结果所建HCP测定方法能够测定 7.8～ 2 5 0ng/ml范围内的HCP。结论重组蛋白质药物宿主蛋白质含量测定应依据不同的工艺 ,制定不同的方法。 展开更多

关键词 重组人粒细胞集落刺激因子 宿主蛋白质 酶标记免疫吸附测定法 抗宿主蛋白质多抗

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生物制品中宿主残留蛋白的风险分析和检测方法 被引量：4

17

作者 杜洪桥(综述) 严家新(审校) 《国际生物制品学杂志》 CAS 2012年第2期82-86,共5页

新版《中华人民共和国药典》对生物制品的质量要求更高，其中对残留宿主细胞蛋白（HCP）在生物制品中含量的要求也越来越严格。目前HCP研究领域进展迅速。此文对生物制品中宿主残留蛋白的风险分析和检测方法作一综述。

关键词 生物制品 宿主细胞蛋白 风险分析 系统生物学

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鸡抗CHO细胞蛋白的IgY消长规律及其制备的试验研究 被引量：2

18

作者 杜洪桥 朱蓉 +1 位作者 徐葛林 严家新 《微生物学免疫学进展》 2011年第3期24-28,共5页

采用五种免疫程序分别免疫来亨鸡以制备抗体;ELISA检测不同免疫方案鸡抗体水平变化规律。结果显示,不同免疫程序接种来亨鸡后抗体产生水平不同。末针免疫28d后,4针低剂量肌肉免疫组抗体水平显著低于4针高剂量肌肉免疫组(P<0.01);3针... 采用五种免疫程序分别免疫来亨鸡以制备抗体;ELISA检测不同免疫方案鸡抗体水平变化规律。结果显示,不同免疫程序接种来亨鸡后抗体产生水平不同。末针免疫28d后,4针低剂量肌肉免疫组抗体水平显著低于4针高剂量肌肉免疫组(P<0.01);3针低剂量肌肉免疫组抗体水平显著低于3针高剂量肌肉免疫组(P<0.01);肌肉免疫组抗体水平低于皮下免疫组(P<0.05)。所有组均在末针免疫20d后出现抗体高峰,抗体水平可持续30d以上;SDS-PAGE结果显示纯化IgY纯度可达99%,抗体ELISA效价大于1∶105。 展开更多

关键词 中国仓鼠卵巢细胞 卵黄抗体 宿主细胞蛋白

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补料优化降低抗体生产过程中宿主细胞蛋白残留的研究 被引量：1

19

作者 支文标 李巍巍 +2 位作者 李士杭 陶菊红 Strubbe Steven 《现代生物医学进展》 CAS 2020年第9期1656-1662,共7页

目的:通过上游工艺中补料培养基优化以降低单克隆抗体生产中的宿主细胞蛋白(HCP)水平。方法:本文在3 L反应器的工艺开发过程中考察了不同的商品化补料培养基和细胞接种密度对HCP水平的影响,筛选出最优条件后,进行了补料工艺的优化和金... 目的:通过上游工艺中补料培养基优化以降低单克隆抗体生产中的宿主细胞蛋白(HCP)水平。方法:本文在3 L反应器的工艺开发过程中考察了不同的商品化补料培养基和细胞接种密度对HCP水平的影响,筛选出最优条件后,进行了补料工艺的优化和金属离子的添加试验,最后将优化后的工艺放大至200 L中试规模。结果:在小试阶段发现Cellvento 4Feed可以显著降低HCP,同时CuSO4可以进一步促进HCP降低的水平,最终将工艺放大至200 L中试进行生产并取得了相似的结果,验证了工艺的稳定性和可放大性,中试规模的HCP水平相比最初的工艺降低了65%左右。结论:补料培养基优化可以有效降低细胞对HCP的比生产速率,使收获液中整体的HCP水平显著下降。 展开更多

关键词 宿主细胞蛋白 补料优化 工艺放大 抗体生产 蛋白残留

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Vero细胞疫苗生产过程中宿主细胞蛋白含量分析 被引量：1

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作者 田博 丁志芬 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2005年第5期418-421,共4页

目的了解Vero细胞疫苗中间产品中宿主细胞蛋白(Host cell protein,HCP)的含量变化。方法模拟Vero细胞疫苗生产工艺流程,制备Vero细胞HCP,免疫家兔制备Vero细胞HCP免疫血清,经Protein ASepharose CL-4B亲和层析,制备纯化的抗Vero细胞HCPI... 目的了解Vero细胞疫苗中间产品中宿主细胞蛋白(Host cell protein,HCP)的含量变化。方法模拟Vero细胞疫苗生产工艺流程,制备Vero细胞HCP,免疫家兔制备Vero细胞HCP免疫血清,经Protein ASepharose CL-4B亲和层析,制备纯化的抗Vero细胞HCPIgG,通过SDS-PAGE和Western blot分析Vero细胞乙型脑炎疫苗及Vero细胞SARS疫苗各中间产品的蛋白、HCP及病毒抗原成分的含量变化。结果Vero细胞乙型脑炎疫苗和Vero细胞SARS疫苗中间产品中均存在一定量HCP,不同的纯化工艺均可以去除大部分HCP,随着生产工艺的进行,疫苗中间产品中HCP的含量逐渐降低,病毒成分的纯度逐渐增高,但纯化后产品中仍存在少量HCP。结论Vero细胞乙型脑炎疫苗和Vero细胞SARS疫苗均存在一定量HCP。 展开更多

关键词 Vero细胞疫苗 中间产品 宿主细胞蛋白 细胞疫苗 细胞蛋白 含量分析 生产过程 VERO细胞 宿主 SEPHAROSE

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