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青稞C4H基因的克隆及组织表达分析 被引量：15
1
作者 罗小娇 刘新春 +2 位作者 杨晓云 袁金娥 冯宗云 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期589-596,共8页
为揭示大麦中黄酮合成的分子调控机制,利用反转录PCR结合同源克隆和RACE技术首次从青稞(裸大麦)叶片中克隆获得肉桂酸-4-羟化酶基因(HvC4H)的全长cDNA序列(Genbank登录号:KF927086),总长度1951 bp,ORF为1518 bp,编码505个氨基酸,等电点P... 为揭示大麦中黄酮合成的分子调控机制,利用反转录PCR结合同源克隆和RACE技术首次从青稞(裸大麦)叶片中克隆获得肉桂酸-4-羟化酶基因(HvC4H)的全长cDNA序列(Genbank登录号:KF927086),总长度1951 bp,ORF为1518 bp,编码505个氨基酸,等电点PI=9.01,平均亲水指数(GRAVY)为-0.170,属于亲水性碱性蛋白,高级结构分析表明其具有细胞色素P450家族保守域及C4H特异的功能性活性位点。利用实时荧光定量PCR分析胚乳发育5个时期不同组织(茎、叶及子粒)的表达情况,结果显示HvC4H基因在青稞胚乳发育期的表达情况存在着明显的组织差异性,在茎中的表达量最高。本研究为通过调控C4H基因的表达从而提高大麦黄酮的含量奠定了分子生物学基础,对于改良大麦的品质、抗性、生长发育等性状具有重要意义。 展开更多
关键词 青稞(裸大麦) C4H基因 同源克隆 RACE 实时荧光定量PCR 胚乳发育期
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结缕草CBF基因的同源克隆及其转基因拟南芥的抗寒性验证 被引量：13
2
作者 冯勋伟 才宏伟 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1572-1578,共7页
结缕草是优良的暖季型草坪草之一,主要用于亚热带和热带地区的草坪种植。抗冷性是结缕草栽培范围的限制因子。本研究以日本最北部原产的结缕草品系为材料,根据其他植物的已知的抗寒基因CBF序列,通过同源克隆的方法获得结缕草中相对应的... 结缕草是优良的暖季型草坪草之一,主要用于亚热带和热带地区的草坪种植。抗冷性是结缕草栽培范围的限制因子。本研究以日本最北部原产的结缕草品系为材料,根据其他植物的已知的抗寒基因CBF序列,通过同源克隆的方法获得结缕草中相对应的同源基因ZjCBF;根据和其他已报告的CBF序列的比对结果,确定ZjCBF基因属于CBF转录因子家族基因中CBF1型基因。利用半定量PCR和实时定量PCR分析该基因在寒冷条件下的表达情况,发现ZjCBF基因受冷胁迫的诱导,在4℃处理6 h时表达量最高。在此基础上,本研究构建了该基因的过表达载体,并将其转化到拟南芥中,通过低温冷处理实验发现,不论是否经过冷驯化,转ZjCBF基因植株由于ZjCBF的过量表达均比野生型植株抗寒性强。 展开更多
关键词 结缕草 耐寒性 CBF转录因子 同源克隆 转基因拟南芥
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小麦3个NAC转录因子基因克隆与功能分析 被引量：11
3
作者 王凤涛 蔺瑞明 徐世昌 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期639-645,共7页
NAC类转录因子参与植物基因在不同条件、不同发育期的表达调控,在植物的发育、生长及对外界的各种生物和非生物因子的胁迫应答中起关键的调控作用。本研究对非亲和条锈菌小种CYR32侵染诱导的抗条锈病基因Yr5近等基因系Taichung29*6/Yr5... NAC类转录因子参与植物基因在不同条件、不同发育期的表达调控,在植物的发育、生长及对外界的各种生物和非生物因子的胁迫应答中起关键的调控作用。本研究对非亲和条锈菌小种CYR32侵染诱导的抗条锈病基因Yr5近等基因系Taichung29*6/Yr5的cDNA文库进行筛选及同源克隆,获得了小麦3个NAC类转录因子的cDNA序列。序列分析结果表明,这3个转录因子都具有DNA结合结构域,即NAC结构域,且氨基酸序列在该结构域的A、B、C、D和E5个亚区高度保守;同时发现这3个NAC类转录因子都有核定位信号及相关的转录调控功能区域。通过系统进化树分析,发现其中之一的TaNAC1属于NAC转录因子家族第Ⅰ组的NAP亚组,TaNAC3属于ATAF1亚组,TaNAC5属于NAM亚组;根据系统进化树和相关基因的功能分析,我们推测小麦转录因子TaNAC1、TaNAC3和TaNAC5可能参与植物生长发育调控或对生物、非生物胁迫作出的应答反应。 展开更多
关键词 小麦 NAC转录因子 近等基因系 同源克隆
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盐生杜氏藻cbr基因的克隆 被引量：8
4
作者 郑鸣 白林含 +4 位作者 马梵辛 贺庆华 蒋彦 曹毅 乔代蓉 《四川大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期590-593,共4页
首先对其他物种cbr/elip基因的同源序列进行相似性分析,设计一对简并引物,利用TR PCR技术获得一250bp的片段,经克隆测序分析发现其同D.bardwail的cbr基因有67.0%的同源性,然后再以此片段为模板设计引物,通过RACE技术构建盐生杜氏藻cbr... 首先对其他物种cbr/elip基因的同源序列进行相似性分析,设计一对简并引物,利用TR PCR技术获得一250bp的片段,经克隆测序分析发现其同D.bardwail的cbr基因有67.0%的同源性,然后再以此片段为模板设计引物,通过RACE技术构建盐生杜氏藻cbr基因的全长序列. 展开更多
关键词 同源先隆 简并引物 CBR RACE
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信号肽捕获系统的建立 被引量：7
5
作者 孙强 王冀姝 +3 位作者 李荣 周鹏 黄红艳 韩骅 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第4期379-384,共6页
细胞分泌性蛋白的分泌有赖于蛋白质Ｎ端的信号肽的存在。利用酵母建立了从ｃＤＮＡ文库中筛选编码信号肽的基因片段的遗传系统。为此，用一步基因破坏法对酿酒酵母ＥＧＹ４８基因组中的ｓｕｃ ２基因（编码酵母蔗糖转换酶）进行了定位... 细胞分泌性蛋白的分泌有赖于蛋白质Ｎ端的信号肽的存在。利用酵母建立了从ｃＤＮＡ文库中筛选编码信号肽的基因片段的遗传系统。为此，用一步基因破坏法对酿酒酵母ＥＧＹ４８基因组中的ｓｕｃ ２基因（编码酵母蔗糖转换酶）进行了定位突变，获得了无蔗糖转换酶表达的酵母株ＥＧＹ４８－△ ｓｕｃ。将无信号肽的ｓｕｃ ２成熟肽基因克隆于酵母乙醇脱氢酶（ＡＤＨ１）基因启动子下游，得到用于文库筛选的酵母真核表达载体。启动子与成熟肽基因之间为多克隆位点，用于插入待筛选的ｃＤＮＡ文库。用此载体转化酵母ＥＧＹ４８－△ ｓｕｃ，所得克隆可在以葡萄糖为碳源的培养基上生长，但不能在以棉子糖为碳源的培养基上生长；在ｓｕｃ ２成熟肽基因前分别插入ｓｕｃ ２信号肽基因片段或人ＩＬ－２受体α 链信号肽基因片段，然后转染ＥＧＹ４８－△ ｓｕｃ，所得克隆既能在以葡萄糖为碳源的培养基上生长，也能在以棉子糖为碳源的培养基上生长。表明构建的系统可用于筛选插入多克隆位点的ｃＤＮＡ片段是否具有编码信号肽的功能。 展开更多
关键词 蔗糖转换酶 同源重组 信号肽 基因克隆 分泌性蛋白 捕获系统
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紫花苜蓿赤霉素受体基因的克隆及表达分析 被引量：7
6
作者 陈敏 马琳 +3 位作者 贾聪俊 刘希强 龚攀 王赞 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期2159-2166,共8页
赤霉素受体(GID)是赤霉素信号转导途径的重要成员,直接影响着赤霉素对植物体效应的发挥。该研究利用同源克隆的方法,首次从紫花苜蓿中克隆得到1个赤霉素受体基因,命名为MsGID1b。序列分析发现,MsGID1b基因开放阅读框长度为1 053bp,编码... 赤霉素受体(GID)是赤霉素信号转导途径的重要成员,直接影响着赤霉素对植物体效应的发挥。该研究利用同源克隆的方法,首次从紫花苜蓿中克隆得到1个赤霉素受体基因,命名为MsGID1b。序列分析发现,MsGID1b基因开放阅读框长度为1 053bp,编码350个氨基酸,推测其蛋白质分子量为39.839kD,是一个无信号肽和跨膜结构的亲水性蛋白。序列比对结果表明,MsGID1b基因与蒺藜苜蓿MtGID1b基因的核苷酸序列相似性为98%,氨基酸序列相似性为99%,且具有HSL家族典型的HGG和GXSXG保守结构域及GA、DELLA蛋白结合位点。荧光定量PCR分析表明,MsGID1b基因在紫花苜蓿各组织中的表达丰度依次为:根>盛花>初花>茎>叶>荚果;经GA3、ABA、NaCl、PEG和黑暗诱导后该基因表达上调,尤其是在GA3诱导下,MsGID1b基因的表达量一直维持在较高水平,表明MsGID1b基因可能参与紫花苜蓿的抗逆调控。 展开更多
关键词 紫花苜蓿 GID1b 同源克隆 表达模式
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大肠杆菌重组工程 被引量：5
7
作者 白光兴 孙志伟 俞炜源 《生物技术通讯》 CAS 2003年第5期410-412,共3页
源于噬菌体的大肠杆菌同源重组系统不需要限制性内切酶和DNA连接酶就可以进行DNA克隆和亚克隆,还能快速地改造质粒、细菌人工染色体及细菌基因组染色体,是基因工程技术的一大突破,被称为重组基因工程或重组工程。该技术操作简单,效率较... 源于噬菌体的大肠杆菌同源重组系统不需要限制性内切酶和DNA连接酶就可以进行DNA克隆和亚克隆,还能快速地改造质粒、细菌人工染色体及细菌基因组染色体,是基因工程技术的一大突破,被称为重组基因工程或重组工程。该技术操作简单,效率较高,可望为功能基因组学研究提供一个有力的工具。 展开更多
关键词 同源重组 DNA克隆 大肠杆菌 重组工程
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野生大豆DREB基因cDNA的克隆与分析 被引量：5
8
作者 才华 朱延明 +2 位作者 柏锡 李勇 纪巍 《草业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期17-23,共7页
以野生大豆Glycine soja叶片总RNA为模板,根据其他双子叶植物DREBP/AP2结构域的保守氨基酸序列设计简并引物,通过降落和巢式PCR进行扩增,获得1条190 bp的cDNA片段。以此序列设计引物,采用RACE扩增3’和5’末端未知序列,最终克隆到野生大... 以野生大豆Glycine soja叶片总RNA为模板,根据其他双子叶植物DREBP/AP2结构域的保守氨基酸序列设计简并引物,通过降落和巢式PCR进行扩增,获得1条190 bp的cDNA片段。以此序列设计引物,采用RACE扩增3’和5’末端未知序列,最终克隆到野生大豆DREB全长基因(GsDREB)。该基因1 191bp编码395个氨基酸,基因内部没有内含子。氨基酸分析表明,其N-末端具有核定位信号(nuclear localiza-tion signal,NLS),并具有由58个氨基酸编码的、能够与DNA结合的保守区域-DREBP/AP2结构域。通过多序列比对分析,该基因与拟南芥Arabidopsis thalianaDREB2C氨基酸序列相似性最高,推测其为DREB2亚家族的成员。 展开更多
关键词 野生大豆 DREB 同源克隆 RACE 非生物胁迫
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小麦生长素结合基因TaABP1-D的克隆、功能标记开发及其与株高的关联 被引量：6
9
作者 乔麟轶 张磊 +3 位作者 张文萍 赵光耀 王玺 贾继增 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期2034-2041,共8页
生长素在植物生长发育过程中通过建立浓度梯度来调控植物的株型。ABP1(auxin binding protein)作为生长素受体,在质膜上相关生长素响应活动中起重要作用。本研究从普通小麦中国春基因组数据库中分离了TaABP1基因的基因组序列,根据基因... 生长素在植物生长发育过程中通过建立浓度梯度来调控植物的株型。ABP1(auxin binding protein)作为生长素受体,在质膜上相关生长素响应活动中起重要作用。本研究从普通小麦中国春基因组数据库中分离了TaABP1基因的基因组序列,根据基因组间序列差异将TaABP1定位于小麦第5同源群。在中国春中克隆得到TaABP1-D基因的gDNA和cDNA序列。TaABP1-D基因的开放阅读框为1887bp,编码205个氨基酸,含有ABP1蛋白典型的内质网滞留信号KDEL及Box区域。表达分析表明,TaABP1-D在普通小麦中国春拔节期的根、茎基部、茎上部和叶尖均有表达,相对表达量为叶尖>茎上部>根>茎基部,与小麦的株型发育关系密切。系统发育分析表明,ABP1基因在植物中较为保守,TaABP1-D是水稻OsABP1的直向同源基因。针对TaABP1-D基因上游调控区重复序列差异(GT)6/5开发了一个SSR标记,该标记在W7984×Opata85重组自交系(RIL)群体中对株高的表型变异解释率为9.7%,是一个与株高极显著关联的功能标记;其中对应高秆类型的等位变异属野生种特有,在栽培种中被淘汰,推测TaABP1-D基因在小麦驯化过程中可能经历了瓶颈效应。 展开更多
关键词 小麦 TaABP1-D基因 同源克隆 表达分析 功能标记 相关性分析
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小麦GDH1基因克隆及其功能标记开发 被引量：6
10
作者 李冰 张照贵 +1 位作者 王佳佳 李斯深 《山东农业科学》 2014年第10期6-11,共6页
谷氨酸脱氢酶（glutamate dehydrogenase,GDH）在植物体内催化合成谷氨酸的可逆反应,通过GDH固氮比谷氨酸合成酶途径更节省能量。在植物大多数组织中,GDH1是该基因家族中表达最高的基因,比其他GDH成员具有更为重要的作用。本研究从普通... 谷氨酸脱氢酶（glutamate dehydrogenase,GDH）在植物体内催化合成谷氨酸的可逆反应,通过GDH固氮比谷氨酸合成酶途径更节省能量。在植物大多数组织中,GDH1是该基因家族中表达最高的基因,比其他GDH成员具有更为重要的作用。本研究从普通小麦基因组中分离了TaGDH1基因在A、B、D染色体组的序列。针对TaGDH1a基因在基因组DNA序列1 900-1 983 bp位置存在的核苷酸差异设计了一个插入/缺失标记,同时将该标记定位在5A染色体上。 展开更多
关键词 小麦 TaGDH1 同源克隆 功能标记
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绵羊肺炎支原体Y98株未知基因Hsp70(DnaK)的克隆 被引量：6
11
作者 马春骥 李敏 +1 位作者 赵东 王玉炯 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1733-1737,1786,共6页
绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,MO)是绵羊传染性胸膜肺炎(Contagious ovine pleuropneumo-nia)的主要致病菌。热休克蛋白Hsp70也叫(DnaK),具有分子伴侣和免疫的作用。本试验以MO Y98基因组为模板,通过比对15种支原体Hsp70基... 绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,MO)是绵羊传染性胸膜肺炎(Contagious ovine pleuropneumo-nia)的主要致病菌。热休克蛋白Hsp70也叫(DnaK),具有分子伴侣和免疫的作用。本试验以MO Y98基因组为模板,通过比对15种支原体Hsp70基因的序列并设计简并引物,分别利用同源克隆和染色体步移—Tail-PCR技术克隆到了四段Hsp70(DnaK)基因片断并进行了核苷酸序列测定。利用序列拼接软件对克隆的四段序列进行序列拼接,通过ORF Finder软件分析出了MO Y98的Hsp70的开放式阅读框架,预测分析该基因是由1 815bp组成,编码604个氨基酸。本试验于国内外首次克隆到了MO的Hsp70基因序列,为MO的抗原研究以及Hsp70的功能研究等奠定了基础。 展开更多
关键词 绵羊肺炎支原体 HSP70 同源克隆 TAIL-PCR
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小麦去甲基化酶基因DME-5B克隆与鉴定
12
作者 朱明一 李一政 +1 位作者 穆红梅 郭尚敬 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2024年第5期1403-1409,共7页
小麦DME蛋白和水稻中ROS1是一同类DNA去甲基化酶,ROS1对水稻糊粉层数有限制作用,DME在小麦中是否有相似功能未见报道。本研究采用同源克隆技术,在小麦中克隆出TraesDME-5B基因,并对其编码蛋白的理化性质及结构特征进行生物学特性分析,... 小麦DME蛋白和水稻中ROS1是一同类DNA去甲基化酶,ROS1对水稻糊粉层数有限制作用,DME在小麦中是否有相似功能未见报道。本研究采用同源克隆技术,在小麦中克隆出TraesDME-5B基因,并对其编码蛋白的理化性质及结构特征进行生物学特性分析,为研究去甲基化酶DME对小麦种子发育中糊粉层的影响进行初步探索。结果显示,TraesDME-5B全长5862 bp,编码1953个氨基酸,预测DME-5B蛋白为疏水蛋白,该蛋白的二级结构主要含有α-螺旋、无规卷曲等,其中无规则卷曲所占比例为60.73%,是DME-5B二级结构中最主要的构成元件,并且三级结构与二级结构预测结果高度一致。保守结构域分析显示,DME家族在禾本科植物进化过程中含有RRM_DME、ENDO3c superfamily和Perm-CXXC 3个保守结构域。结果表明,TraesDME-5B是小麦中一类DNA去甲基化酶,能够发挥DNA去甲基化作用。 展开更多
关键词 DNA去甲基化 小麦 同源克隆 TraesDME-5B
原文传递
小麦ramosa2基因的克隆与序列分析 被引量：4
13
作者 闫晓华 韩撵法 +3 位作者 张美祥 金伟波 郭蔼光 范三红 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期745-749,共5页
为了研究ramosa2基因在小麦中的功能,以普通小麦（Triticum aestivumL）中国春基因组为模板,玉米、高粱、水稻和大麦中ramosa2基因保守序列为参考设计引物,扩增到1条全长为771 bp的目的片段。序列分析表明,该核酸序列与高粱、玉米、水... 为了研究ramosa2基因在小麦中的功能,以普通小麦（Triticum aestivumL）中国春基因组为模板,玉米、高粱、水稻和大麦中ramosa2基因保守序列为参考设计引物,扩增到1条全长为771 bp的目的片段。序列分析表明,该核酸序列与高粱、玉米、水稻和大麦中ramosa2基因的同源性高达82.9%-95.2%;其预测编码的氨基酸序列与高粱、玉米、水稻和大麦ramosa2基因的氨基酸序列同源性达79.2%-95%。 展开更多
关键词 小麦 花序形态建成 ramosa2基因 同源克隆
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芸薹属植物MYBL2基因的克隆及其在A、B、C基因组中的PCR鉴别 被引量：1
14
作者 邹婷 刘丽莉 +6 位作者 向建华 周定港 吴金锋 李莓 李宝 张大为 严明理 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期416-429,I0001-I0020,共34页
【目的】MYBL2负调控拟南芥花青素和原花青素的生物合成。从芸薹属6个物种的不同叶色材料中克隆MYBL2基因,分析其序列和表达模式,探究其在芸薹属植物花青素生物合成途径中的功能,为油菜的品质、抗逆性、观赏性等性状改良提供参考。【方... 【目的】MYBL2负调控拟南芥花青素和原花青素的生物合成。从芸薹属6个物种的不同叶色材料中克隆MYBL2基因,分析其序列和表达模式,探究其在芸薹属植物花青素生物合成途径中的功能,为油菜的品质、抗逆性、观赏性等性状改良提供参考。【方法】以芸薹属6个物种19份供试材料的总DNA为模板,同源克隆MYBL2基因,并进行多序列比对和进化树分析;对白菜、甘蓝型油菜、芥菜型油菜以及埃塞俄比亚芥的紫叶材料进行遮光处理,结合转录组和qRT-PCR分析MYBL2基因表达水平;对甘蓝、甘蓝型油菜、芥菜型油菜以及埃塞俄比亚芥紫、绿叶材料进行qRT-PCR分析MYBL2基因表达水平;根据克隆MYBL2-1和MYBL2-2序列的核苷酸变异位点设计特异性引物,开发能够区分MYBL2基因组来源的PCR标记。【结果】克隆获得MYBL2-1和MYBL2-2各9个同源基因共56个拷贝。其中,BcaMYBL2-1为首次获得,BcaMYBL2-1编码区序列全长为867 bp,包含2个内含子,分别为168和102 bp,编码198个氨基酸,分子量为22.69 kD,等电点(pI)为8.72。序列比对和进化分析表明,BcaMYBL2-1来源于B基因组。芸薹属6个物种MYBL2-1和MYBL2-2同源基因中,仅BraA07.MYBL2-1、BolC06.MYBL2-1和BcaMYBL2-1在不同叶色材料中存在序列差异。经遮光处理后,紫叶材料叶色变浅,在白菜紫宝5号中,BraA07.MYBL2-1和BraA02.MYBL2-2表达量分别为未遮光部分的0.7和0.4倍;在紫叶白花甘蓝型油菜中,BnaA07.MYBL2-1、BnaC06.MYBL2-1、BnaA02.MYBL2-2和BnaC02.MYBL2-2表达量分别为未遮光部分的0.4、0.5、0.4和0.4倍;在紫叶芥中,BjuA07.MYBL2-1、BjuB03.MYBL2-1、BjuA02.MYBL2-2和BjuB05.MYBL2-2表达量分别为未遮光部分的0.4、0.3、0.4和0.2倍;在紫秆埃芥中,BcaMYBL2-1、BcaB03.MYBL2-1和BcaC03.MYBL2-2表达量分别为未遮光部分的0.3、0.4和0.5倍,而BcaB05.MYBL2-2表达量为未遮光部分的2.4倍。对比芸薹属不同叶色材料MYBL2基因表达情况,结果表明,除了羽衣甘� 展开更多
关键词 芸薹属植物 MYBL2基因 同源克隆 基因表达 基因组PCR鉴别
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虎奶菇Mn-SOD提取、鉴定及基因的克隆 被引量：5
15
作者 杨加亮 田云恒 马爱民 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2020年第15期150-157,共8页
以虎奶菇菌丝为材料,提取、鉴定了虎奶菇锰超氧化物歧化酶,克隆虎奶菇锰超氧化物歧化酶基因。用液氮研磨、超声、硫酸铵沉淀和透析等方法提取虎奶菇Mn-SOD;WST-8法测定虎奶菇Mn-SOD酶活力;H2O2鉴定虎奶菇SOD的类型;用同源克隆、cDNA末... 以虎奶菇菌丝为材料,提取、鉴定了虎奶菇锰超氧化物歧化酶,克隆虎奶菇锰超氧化物歧化酶基因。用液氮研磨、超声、硫酸铵沉淀和透析等方法提取虎奶菇Mn-SOD;WST-8法测定虎奶菇Mn-SOD酶活力;H2O2鉴定虎奶菇SOD的类型;用同源克隆、cDNA末端快速扩增技术和融合引物与巢式PCR等方法从虎奶菇中克隆锰超氧化物歧化酶基因。结果表明,虎奶菇Mn-SOD酶活力为1.66个酶活力单位。酶经过H2O2处理后仍然有活性,与未处理无明显差异,表明虎奶菇中SOD主要是Mn-SOD。克隆获得了虎奶菇锰超氧化物歧化酶基因PtMn-SOD,其DNA序列全长1025 bp,开放阅读框全长为663 bp,编码220个氨基酸。序列分析与系统进化树表明,PtMn-SOD与属于侧耳属的糙皮侧耳(登录号:MH645359.1)关系较近。预测该蛋白质分子量为24.54 kDa,蛋白等电点为7.86。PtMn-SOD蛋白定位于线粒体,在线粒体中发挥功效。 展开更多
关键词 虎奶菇 锰超氧化物歧化酶 酶活 同源克隆 融合引物与巢式PCR
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编码蛋白激酶的人类新基因NEK8的电子克隆 被引量：5
16
作者 黄超群 翟倩婷 +1 位作者 周嘉梁 吴士良 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2004年第5期389-393,396,共6页
目的 :克隆人类基因组中小鼠NEK8基因的同源物。方法 :用同源筛选策略 ,以小鼠NEK8基因作为信息探针 ,在GenBank数据库中进行TBLASTN分析 ,将获得的高度同源的EST用VECTORNTⅠ软件拼接成重叠群。利用BLAT分析确定NEK8基因的基因组结构... 目的 :克隆人类基因组中小鼠NEK8基因的同源物。方法 :用同源筛选策略 ,以小鼠NEK8基因作为信息探针 ,在GenBank数据库中进行TBLASTN分析 ,将获得的高度同源的EST用VECTORNTⅠ软件拼接成重叠群。利用BLAT分析确定NEK8基因的基因组结构以及染色体定位。利用SMART网上分析工具进行结构域预测 ,利用Unigene数据库进行表达谱分析。结果 :电子克隆到人类NEK8新基因cDNA序列 ,长度为 2 85 8bp ,含完整的ORF ,编码一条 6 92个氨基酸的多肽 ,被预测的分子量为 74 8KDa ,等电点 8 0 4。定位在染色体 17q11 2 ,由 15个外显子和 14个内含子组成。其编码蛋白含有一个苏氨酸 /丝氨酸蛋白激酶结构域 ,与NEK家族成员有较高的同源性。电子表达谱分析显示NEK8基因在胎盘 ,胃 ,结肠 ,眼 ,胰腺 ,骨骼 ,肾 ,子宫等组织中表达。结论 :电子克隆到编码苏氨酸 展开更多
关键词 新基因 小鼠 蛋白激酶 编码蛋白 人类 表达谱 结肠 电子克隆 结构域 内含子
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龙眼胚性愈伤组织肌动蛋白基因(actin)片段的克隆与序列分析 被引量：1
17
作者 邵巍 赖钟雄 +2 位作者 陈义挺 蔡英卿 林玉玲 《中国农学通报》 CSCD 2008年第3期40-43,共4页
采用同源克隆方法从龙眼胚性愈伤组织分离肌动蛋白基因(actin)。通过保守区和3’RACE扩增,分别获得347bp和837bp的特异片段,经过序列拼接得到895bp的龙眼actin基因3’端序列。与多种植物的肌动蛋白基因进行同源性比较,该片段的核苷酸序... 采用同源克隆方法从龙眼胚性愈伤组织分离肌动蛋白基因(actin)。通过保守区和3’RACE扩增,分别获得347bp和837bp的特异片段,经过序列拼接得到895bp的龙眼actin基因3’端序列。与多种植物的肌动蛋白基因进行同源性比较,该片段的核苷酸序列同源性多在80%以上,氨基酸序列同源性大于90%,具有高度保守性。可作为龙眼体胚发生过程中基因表达分析的内参。 展开更多
关键词 龙眼胚性愈伤组织 同源克隆 肌动蛋白基因
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鸭梨GAPDH基因家族的克隆及其表达特征 被引量：4
18
作者 闫洪波 葛文雅 +2 位作者 程玉豆 何近刚 关军锋 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2012年第9期181-186,共6页
【目的】从鸭梨中克隆GAPDH基因家族,筛选合适的鸭梨内参基因。【方法】采用同源克隆的方法,克隆鸭梨GAPDH基因家族,用半定量PCR方法分析4个鸭梨GAPDH基因在鸭梨幼叶、花蕾、盛花期花瓣、幼果期果肉和成熟期果心,以及幼果期、膨大期、... 【目的】从鸭梨中克隆GAPDH基因家族,筛选合适的鸭梨内参基因。【方法】采用同源克隆的方法,克隆鸭梨GAPDH基因家族,用半定量PCR方法分析4个鸭梨GAPDH基因在鸭梨幼叶、花蕾、盛花期花瓣、幼果期果肉和成熟期果心,以及幼果期、膨大期、成熟期和褐变期果心的表达特征。【结果】从鸭梨中成功克隆出了4个GAPDH基因,分别命名为PbGAPDHa、PbGAPDHb、PbGAPDHc1和PbGAPDHc2。其中PbGAPDHa和Pb-GAPDHb是由一个共同的祖先基因倍增进化来的,主要在鸭梨的幼叶中表达,其蛋白定位在质体;而PbGAPDHc1和PbGAPDHc2是一个基因的2种拷贝形式,在鸭梨的花、幼叶、果实等组织中表达量基本一致,在不同发育时期的果心中表达量也相近,其蛋白定位在细胞质。【结论】PbGAPDHc1和PbGAPDHc2适合作为鸭梨的内参基因。 展开更多
关键词 鸭梨 3-磷酸甘油醛脱氢酶 同源基因克隆 半定量分析 基因进化
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拟南芥HGO基因启动子与GUS融合表达载体的构建及转化鉴定 被引量：4
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作者 蔡薇 支添添 任春梅 《作物研究》 2017年第3期256-259,共4页
HGO基因编码的尿黑酸1,2双加氧酶催化酪氨酸降解途径中的倒数第三步。本研究构建了拟南芥HGO基因启动子与GUS的融合表达载体,采用农杆菌介导法转化拟南芥获得转基因株系。经GUS组织化学染色鉴定,证明拟南芥HGO基因启动子与GUS的融合表... HGO基因编码的尿黑酸1,2双加氧酶催化酪氨酸降解途径中的倒数第三步。本研究构建了拟南芥HGO基因启动子与GUS的融合表达载体,采用农杆菌介导法转化拟南芥获得转基因株系。经GUS组织化学染色鉴定,证明拟南芥HGO基因启动子与GUS的融合表达载体成功构建且能正常启动GUS基因的表达,为深入研究拟南芥HGO基因的表达特征创建了有价值的材料。 展开更多
关键词 拟南芥 HGO 启动子 同源重组 基因克隆
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华山新麦草穗发芽抗性相关基因AIP2的克隆及其序列分析 被引量：4
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作者 陈真真 贺晓岚 +6 位作者 刘红 赵继新 王亮明 昝凯 武军 杨群慧 陈新宏 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期30-36,共7页
为了挖掘和利用华山新麦草(Psathyrostachys huashanica,2n=14,NsNs)的优良基因,拓宽小麦穗发芽抗性基因资源,以华山新麦草为材料,采用同源克隆的方法克隆AIP2基因,利用生物信息学软件分析其基因结构及功能。结果表明,从华山新麦草中成... 为了挖掘和利用华山新麦草(Psathyrostachys huashanica,2n=14,NsNs)的优良基因,拓宽小麦穗发芽抗性基因资源,以华山新麦草为材料,采用同源克隆的方法克隆AIP2基因,利用生物信息学软件分析其基因结构及功能。结果表明,从华山新麦草中成功克隆AIP2基因,该基因的开放阅读框为840bp,编码279个氨基酸残基,结构域预测结果显示AIP2蛋白含有完整的Ring保守域,属于锌指环家族成员。AIP2的gDNA含5个外显子,4个内含子,华山新麦草AIP2氨基酸序列与感穗发芽小麦品种中优9507的AIP2氨基酸序列的相似性为84%,与中优9507相比缺失了44个氨基酸,与抗穗发芽的乌拉尔图小麦的AIP2氨基酸序列的相似性为80%,华山新麦草和乌拉尔图小麦都有氨基酸缺失,推测这些缺失的氨基酸可能与华山新麦草穗发芽抗性强有很大关系。本研究为小麦穗发芽抗性改良提供了新的候选基因。 展开更多
关键词 华山新麦草 AIP2基因 同源克隆 序列分析
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