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纳米金抑制血管内皮细胞增殖的分子机制 被引量：11
1
作者 潘运龙 覃莉 +2 位作者 蔡继业 孙加升 邱思远 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1421-1423,共3页
目的观察纳米金能否抑制血管内皮细胞增殖，以及作用的分子机制。方法在96孔板内，无血清培养人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）24h，分别加入预先孵育过夜的纳米金（1000nmol/L）＋血管内皮生长因子（VEGF）165（10μg/L）、VEGF165各100... 目的观察纳米金能否抑制血管内皮细胞增殖，以及作用的分子机制。方法在96孔板内，无血清培养人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）24h，分别加入预先孵育过夜的纳米金（1000nmol/L）＋血管内皮生长因子（VEGF）165（10μg/L）、VEGF165各100μl,噻唑蓝（MTT）比色法观察纳米金对HUVEC增殖的影响。取3种浓度（250、500、1000nmol/L）纳米金各0．5m1，分别与碱性成纤维细胞生长因子（bFGF，10mg／L）0．5ml，4℃孵育24h；再加入过饱和浓度的肝素-琼脂糖凝胶，离心后用bFGF抗体检测上清液和沉淀物中bFGF含量变化。无血清培养HUVEC5孔，每孔加入VEGF165（10M／L）100μl；再加入不同浓度纳米金（125、250、500nmol/L），100μl，作用5min，用Western blot方法测定磷酸化PLC-γ1蛋白。用AFM（原子力显微镜）表征纳米金与VEGF165作用后粒径大小。结果纳米金＋VEGF165组与VEGF165组的增殖倍数分别为1．75和4．25，表明纳米金抑制HUVEC的增殖（t=14．421，P〈0．01）。纳米金能够与具有肝素结合位点的bFGF结合。VEGF165浓度不变（10μg/L），随着纳米金溶液浓度的增加，从125、250到500nmol/L，纳米金抑制PLC-γ1磷酸化越来越明显。AFM观察到纳米金与VEGF165作用后，粒径普遍大于30nm。结论纳米金与具有肝素结合位点的VEGF165结合，抑制了VEGF165的信号传导，从而抑制血管内皮细胞增殖。 展开更多
关键词 血管内皮细胞 增殖 纳米金 生长因子 肝素结合位点
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肝素与HIV-1膜表面蛋白gp120相互作用的预测和模拟 被引量：3
2
作者 阎作伟 胡远东 +1 位作者 李松 江涛 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2004年第3期522-525,392,共5页
用分子模拟软件研究肝素与 HIV-1膜表面蛋白 gp1 2 0的相互作用 .将肝素中的单糖、二糖和三糖片段作为探针对 gp1 2 0蛋白进行搜索 ,统计分析确定肝素结合区域 .用肝素六糖片段和结合区域进行反应分子对接 ,获得两种结合模式 .最终建立... 用分子模拟软件研究肝素与 HIV-1膜表面蛋白 gp1 2 0的相互作用 .将肝素中的单糖、二糖和三糖片段作为探针对 gp1 2 0蛋白进行搜索 ,统计分析确定肝素结合区域 .用肝素六糖片段和结合区域进行反应分子对接 ,获得两种结合模式 .最终建立的模型能够很好地解释肝素体外抑制 HIV-1的现象 。 展开更多
关键词 GP120 肝素结合区域 探针 分子对接
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山羊化脓隐秘杆菌重庆分离株CbpA肝素结合结构域鉴定 被引量：3
3
作者 沈克飞 许国洋 +4 位作者 胡瑞思 徐登峰 杨睿 付利芝 张素辉 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期173-180,共8页
本研究旨在对山羊化脓隐秘杆菌重庆分离株的胶原结合蛋白(collagen-binding protein,Cbp)CbpA(CbpACQ)进行序列分析,鉴定其中2个潜在的肝素结合结构域NRB和B1。运用生物信息学软件分析CbpA-CQ基因及其编码产物。采用PCR扩增NRB和B1基因... 本研究旨在对山羊化脓隐秘杆菌重庆分离株的胶原结合蛋白(collagen-binding protein,Cbp)CbpA(CbpACQ)进行序列分析,鉴定其中2个潜在的肝素结合结构域NRB和B1。运用生物信息学软件分析CbpA-CQ基因及其编码产物。采用PCR扩增NRB和B1基因,将其克隆至原核表达载体pGEX-4T-1。融合蛋白GST-NRB和GST-B1在大肠杆菌DE3菌株中被诱导表达,使用Gluthathione-Sepharose 4B纯化。采用免疫印迹检测融合蛋白GST-NRB、GST-B1与HeLa细胞的黏附情况,以及肝素对融合蛋白黏附细胞的抑制情况。结果显示,重庆株CbpA有7个胶原结合蛋白B结构域,约占全长的55%,此结构域与化脓隐秘杆菌、链球菌属等细菌有同源性。重庆株CbpA与化脓隐秘杆菌的CbpA在进化树中聚集成一个进化支。从诱导菌裂解物上清中亲和纯化得到融合蛋白GST-NRB和GST-B1。GST-NRB、GST-B1呈剂量依赖性黏附HeLa细胞,肝素呈剂量依赖性抑制GST-NRB、GST-B1黏附HeLa细胞。结果表明尽管CbpA-CQ有很大变异性,但具有已知化脓隐秘杆菌CbpA的共同序列特征;其NRB和B1区域为肝素结合结构域。 展开更多
关键词 化脓隐秘杆菌 CbpA 黏附 肝素 肝素结合结构域
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纳米金阻断VEGF165信号传导并抑制裸鼠肝癌血管生成 被引量：3
4
作者 潘运龙 邱思远 +2 位作者 孙加升 覃莉 蔡继业 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期287-290,共4页
目的：探讨纳米金如何阻断VEGF165的信号传导，抑制裸鼠移植肝癌血管生成。方法：无血清培养人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC），加入血管内皮生长因子165（VEGF165），再加入不同浓度纳米金，作用5min，采用Western blot方法测定磷酸化PLC... 目的：探讨纳米金如何阻断VEGF165的信号传导，抑制裸鼠移植肝癌血管生成。方法：无血清培养人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC），加入血管内皮生长因子165（VEGF165），再加入不同浓度纳米金，作用5min，采用Western blot方法测定磷酸化PLC-γ1蛋白、6周龄Balb／c裸鼠20只，从裸鼠右腋皮下注入H22细胞。第5天，肿瘤形成约8mm大小，随机分为两组：实验组从肿瘤周围及瘤内注入纳米金，每天1次，连续8天；对照组用生理盐水处理。处死裸鼠时测量肿瘤体积及重量，免疫组化染色并计算肿瘤组织微血管密度。结果：VEGF165浓度不变（10μg，L），随着纳米金溶液浓度的增加（125、250、500nmol／L），纳米金抑制PLC-γ1磷酸化越来越明显。肝癌组织内微血管密度分别为，实验组14．27±1．08，对照组23．52±1．36，说明纳米金明显抑制了肝癌血管生成（P〈0．01）。结论：纳米金阻断VEGF165的信号传导，明显抑制裸鼠肝癌血管生成。 展开更多
关键词 纳米金 血管内皮生长因子 肝素结合位点 肝癌 抗血管生成
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SOD-肝素结合结构域融合蛋白的毕赤酵母重组菌株构建及表达
5
作者 叶芬 周建森 +1 位作者 郭静科 刘树滔 《福州大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2022年第1期132-138,共7页
利用基因工程技术将人源Cu,Zn-SOD与EC-SOD的C末端肝素结合结构域(HBD)的编码序列进行密码子优化并人工合成,然后电转化至毕赤酵母进行表达.单因素实验表明,与现有研究的一些重组EC-SOD相比,其比活力提高了1.30~3.78倍.正交分析得最佳... 利用基因工程技术将人源Cu,Zn-SOD与EC-SOD的C末端肝素结合结构域(HBD)的编码序列进行密码子优化并人工合成,然后电转化至毕赤酵母进行表达.单因素实验表明,与现有研究的一些重组EC-SOD相比,其比活力提高了1.30~3.78倍.正交分析得最佳摇瓶条件为诱导时间为5 d,初始pH值为5.2,诱导剂量的体积分数为1.0%,酶活可达1120.2 U·mL^(-1),是初始酶活的2.94倍;这些结果表明,SOD-HBD融合蛋白在一定程度上解决了重组EC-SOD表达量低的问题,为重组EC-SOD蛋白的推广与应用提供重要的物质基础条件. 展开更多
关键词 超氧化物歧化酶 肝素结合结构域 巴斯德毕赤酵母 构建 表达
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纤维连接蛋白C端肝素结合域多肽在毕赤酵母中的表达、纯化及鉴定 被引量：2
6
作者 陈小芳 陈显凌 +2 位作者 邹起练 吴勇 陈元仲 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1265-1273,共9页
为在毕赤酵母中表达纤维连接蛋白C端肝素结合域(Fibronectin C-terminal heparin-binding domainFNCHBD)多肽并研究其功能,通过PCR技术扩增FNCHBD目的基因,将目的基因与T载体连接,经测序正确后,插入pAo815SM酵母表达载体增加基因拷贝数... 为在毕赤酵母中表达纤维连接蛋白C端肝素结合域(Fibronectin C-terminal heparin-binding domainFNCHBD)多肽并研究其功能,通过PCR技术扩增FNCHBD目的基因,将目的基因与T载体连接,经测序正确后,插入pAo815SM酵母表达载体增加基因拷贝数,然后酶切克隆入酵母表达载pPIC9K;将重组质粒Sal I酶切线性化后转化毕赤酵母菌株,筛选工程菌,经甲醇诱导表达,用SDS-PAGE检测发酵上清液,表明有重组蛋白FNCHBD多肽的高表达,表达产物通过离心、超滤、离子交换层析纯化,纯化产物通过SDS-PAGE、Western blotting印迹、质谱及肝素亲和层沉析对表达产物进行鉴定。结果表明利用酵母工程菌成功表达和纯化了FNCHBD多肽,多肽的分子量接近32 kDa,纯化产物的纯度可达95%以上,能被FN多克隆抗体特异识别且具有多肽肝素结合活性,为后续结构及功能的研究奠定基础。 展开更多
关键词 纤维连接蛋白 肝素结合域 毕赤酵母 表达纯化
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纤维连接蛋白治疗败血症的研究进展 被引量：1
7
作者 郑雪萍 陈元仲 《医学综述》 2009年第10期1445-1448,共4页
败血症是临床危重症，严重者可引起休克、弥散性血管内凝血和多器官功能衰竭。纤维连接蛋白是一种高分子质量多功能糖蛋白，它能调节单核-巨噬细胞系统的作用，在清除细菌性颗粒、激活凝血因子、纤维蛋白、微粒体、胶原碎屑及免疫复合... 败血症是临床危重症，严重者可引起休克、弥散性血管内凝血和多器官功能衰竭。纤维连接蛋白是一种高分子质量多功能糖蛋白，它能调节单核-巨噬细胞系统的作用，在清除细菌性颗粒、激活凝血因子、纤维蛋白、微粒体、胶原碎屑及免疫复合物等方面起非特异调理作用。纤维连接蛋白同时还具有维持血管通透性作用，从而发挥抗感染、抗败血症的作用。 展开更多
关键词 纤维连接蛋白 内毒素血症 败血症 内毒素 细胞因子 细胞结合域多肽 肝素结合域多肽
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一种用于肿瘤药物治疗的新型人源性穿膜肽的优化及其应用 被引量：1
8
作者 李思 翟逸舟 +2 位作者 陆玉婷 王富军 赵健 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期40-49,共10页
细胞穿膜肽（cell-penetrating peptide,CPP）作为一种体内大分子药物跨膜运输载体被广泛研究和应用。中期因子Midkine（MK）是人体的一种带有肝素结合域（heparin-binding domain,HBD）的生长因子。报道了MK中HBD的部分富含碱性氨基酸... 细胞穿膜肽（cell-penetrating peptide,CPP）作为一种体内大分子药物跨膜运输载体被广泛研究和应用。中期因子Midkine（MK）是人体的一种带有肝素结合域（heparin-binding domain,HBD）的生长因子。报道了MK中HBD的部分富含碱性氨基酸的基因序列（命名为MK-S0）与绿色荧光蛋白（EGFP）基因融合表达后,能将EGFP有效地转运入胞内,且其穿膜转运效率高于经典穿膜肽Tat。将MK-S0序列进一步突变优化改造得到的midkine-mutantΔ4（MK-Δ4）,其穿膜效率比天然序列来源的MK-S0提高16倍以上,且MK-Δ4的穿膜转运作用适用于多种肿瘤细胞。穿膜机制分析研究结果显示,MK-Δ4可与细胞表面硫酸乙酰肝素结合,随之以巨胞饮形式内吞入胞。采用MTT方法检测的细胞生长抑制试验结果显示,连接有MK-Δ4的苦瓜来源的核糖体失活蛋白MAP30比单独的MAP30对HeLa肿瘤细胞的药效可提升5.8倍,大大提高了这种药物蛋白抑杀肿瘤细胞的效果。由此表明,源于MK的这种经过突变改造的MK-Δ4,可作为一种新型高效的细胞穿膜肽,将药物蛋白有效运输到细胞内发挥抗肿瘤效应。 展开更多
关键词 中期因子 肝素结合域 细胞穿膜肽 药物运输 抗肿瘤药物
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