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新城疫病毒HN基因真核细胞定位表达的重组质粒的构建 被引量：2
1
作者 隋红 李曦 +4 位作者 张永欣 肖晶 符芳 李乐静 白玉贤 《国际免疫学杂志》 CAS 北大核心 2009年第4期258-262,共5页
目的构建定位表达于细胞不同部位的新城疫病毒HN（hemagglutinin—neuraminidase）基因。方法应用反转录聚合酶链反应（RT—PCR）技术，以新城疫病毒D90株RNA为模板，分别扩增出含有HN基因全长和不含终止子的HN基因片段，将克隆的HN基... 目的构建定位表达于细胞不同部位的新城疫病毒HN（hemagglutinin—neuraminidase）基因。方法应用反转录聚合酶链反应（RT—PCR）技术，以新城疫病毒D90株RNA为模板，分别扩增出含有HN基因全长和不含终止子的HN基因片段，将克隆的HN基因片段经双酶切后定向插入真核表达质粒pcDNA3．1（＋）中，经过定向插入组织凝血酶原激活物（tPA）的前导序列和／或A型流感病毒血凝素（HA）基因跨膜区（TM）片段进行修饰分别构建胞浆型、跨模型和分泌型DNA质粒。结果所有重组质粒经酶切和测序鉴定插入正确。经过体外转染真核细胞，间接免疫荧光和SDS．PAGE蛋白质电泳检测，证明构建的新城疫病毒HN基因定位表达于真核细胞的胞浆、胞膜和细胞外。结论成功构建了定位表达于细胞不同部位的HN蛋白的DNA质粒即胞浆型、跨模型和分泌型。 展开更多
关键词 新城疫病毒 血凝素神经氨酸酶 细胞定位 质粒构建
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