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题名南海深海新颖低温脂肪酶的克隆、表达及酶学性质鉴定
被引量：2
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作者
曹莹莹
邓盾
张云
孙爱君
夏方亮
胡云峰
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机构
中国科学院南海海洋研究所中国科学院热带海洋生物资源与生态重点实验室广东省海洋药物重点实验室
中国科学院大学
滨州市食品药品检验检测中心
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出处
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第3期43-52,共10页
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基金
国家自然科学基金青年科学基金(21302199)
中国科学院战略性先导科技专项(XDA11030404)
+1 种基金
中国科学院重点部署项目(KGZD-EW-606)
广州市科技计划项目(201510010012)资助项目
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文摘
从南海深海放线菌Pseudonocardia antitumoralis SCSIO 01299中克隆一个脂肪酶基因lipase B5。lipase B5基因片段大小为972bp,编码的蛋白质具有323个氨基酸残基并与Pseudonocardia sp.HH130629-09中假定脂肪酶有98%的同源性。以p ET28a（＋）为载体,将重组质粒转化到E.coli BL21（DE3）中,实现lipase B5高效表达,并利用Ni-NTA亲和层析纯化lipase B5。Lipase B5最适反应底物为对硝基苯酚癸酸酯（p-NPD）,最适温度为30℃,最适反应p H为7.5。Lipase B5催化p-NPD水解反应的活性达到140.14U/mg,Vmax和Km分别为109.8μmol/min、0.976mmol/L,催化橄榄油的活力为32.019 7U/mg。Lipase B5在p H7.5~8.5保持良好的p H稳定性;在10～20℃低温下保持较高的酶活力,在10~40℃内具有温度稳定性。Lipase B5对大部分金属离子有很好的耐受性,低浓度的Li^＋、Mg^2＋对该酶活性有促进作用。Lipase B5对高浓度的Na Cl有很好的耐受性,在100mmol/L的Na Cl存在下,酶活性大约保持在103%。Lipase B5对多种短链醇类有机溶剂和表面活性剂有很好的耐受性,Triton X-100、Tween-80和Tween-20对lipase B5酶有激活作用。
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关键词
深海低温脂肪酶
金属离子耐受性
盐耐受性
有机溶剂耐受性
表面活性剂耐受性
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Keywords
Deep-sea psychrophile lipase
Resistance to metal ions
halotolerant enzyme
Resistance to organic solvents
Resistance to surfactants
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分类号
Q55
[生物学—生物化学]
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