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丹参酮ⅡA增强HSV-tk/GCV旁观者效应及其与Cx43 mRNA表达的关系 被引量：23
1
作者 黄光琦 宋毅 +4 位作者 张洁 陆燕蓉 肖林 杨元 郭元彪 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期146-149,共4页
目的　研究丹参酮ⅡA(TanshinoneⅡA ,Tan)对HSV tk/GCV旁观者效应的增强作用及其与间隙连接蛋白Cx4 3转录表达的关系。方法　应用polybrene转染、荧光定量RT PCR等技术 ,观察Tan对宫颈癌细胞ME180 (ME)、ME/TK转化细胞旁观者效应及诱导... 目的　研究丹参酮ⅡA(TanshinoneⅡA ,Tan)对HSV tk/GCV旁观者效应的增强作用及其与间隙连接蛋白Cx4 3转录表达的关系。方法　应用polybrene转染、荧光定量RT PCR等技术 ,观察Tan对宫颈癌细胞ME180 (ME)、ME/TK转化细胞旁观者效应及诱导Cx4 3mRNA表达的作用。结果　在HSV tk/GCV系统中 ,Tan显著地提高了ME/TK细胞对GCV的敏感性。在 2 μg/mlGCV作用下 ,以1.3× 10 9mol/LTan与不加Tan的作用相比较 ,在ME与ME/TK不同比例混合细胞的各组中 ,细胞的存活率明显降低 ,差异均有显著性 (P <0 .0 5 )。并观察到Tan对GCV旁观者效应的增强作用 ,在一定范围内为 1.3× 10 -8mol/L和 1.3× 10 -9mol/L。RT PCR结果表明 ,经 1.3× 10 -8mol/L和 1.3× 10 -9mol/LTan处理的ME细胞 ,其Cx4 3mRNA的相对拷贝数比值增高约 8.83倍及 8.4 7倍。结论　在宫颈癌ME180细胞中 ,Tan在 1.3× 10 -8mol/L和 1.3× 10 -9mol/L范围内具有明显增强HSV tk/GCV旁观者效应的作用。Tan在转录水平诱导Cx4 3mRNA表达上调 ,与旁观者效应的增强作用密切相关。 展开更多
关键词 丹参酮ⅡA 旁观者效应 CX43 靼纯疱疹病毒-胸苷激酶基因 丙氧基鸟苷 自杀基因 基因治疗
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脂质体介导的HSV-TK基因治疗人膀胱癌 被引量：9
2
作者 叶传忠 陈仕平 +3 位作者 裴雪涛 冯凯 李梁 杨光 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期24-25,共2页
目的探讨HSV－TK基因/GCV系统对人膀胱癌细胞的杀伤作用．方法以潮霉素磷酸转移酶和HSV-HK的融合基因（HyTK）作为目的基因，利用阳离子脂质体将其转入膀胱癌细胞株，检测其表达及GCV对转基因细胞的杀伤作用。结果RT-PCR检测证实HyTK在... 目的探讨HSV－TK基因/GCV系统对人膀胱癌细胞的杀伤作用．方法以潮霉素磷酸转移酶和HSV-HK的融合基因（HyTK）作为目的基因，利用阳离子脂质体将其转入膀胱癌细胞株，检测其表达及GCV对转基因细胞的杀伤作用。结果RT-PCR检测证实HyTK在转基因细胞的表达，MTT法测定示GCV对EJ／HyTK细胞有明显的杀伤作用；其IC50值为2.4mg／L，而对其亲代EJ细胞无明显毒性（P＜005）。按不同比例混合EJ／HyTK细胞和亲代EJ细胞，发现GCV不仅能杀伤转入TK基因的细胞，而且对其周围未转基因的膀胱细胞存在旁观者效应。结论HSV－TK基因／GCV系统可作为膀胱癌基因治疗的一种有效方法。 展开更多
关键词 膀胱肿瘤 基因治疗 hsv-tk 脂质体
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HSV-tk/GCV体系的旁观者效应及其研究进展 被引量：5
3
作者 郭语彬 《国外医学（分子生物学分册）》 CSCD 1999年第4期249-252,共4页
单纯疱疹病毒胸苷激酶基因是研究得最多的一种自杀基因,它的一个显著特点是存在旁观者效应。其旁观者效应的机理比较复杂,体外和体内的机理各不一样,体外的旁观者效应主要与缝隙连接,凋亡有关;而体内的旁观者效应却主要与机体的免疫功... 单纯疱疹病毒胸苷激酶基因是研究得最多的一种自杀基因,它的一个显著特点是存在旁观者效应。其旁观者效应的机理比较复杂,体外和体内的机理各不一样,体外的旁观者效应主要与缝隙连接,凋亡有关;而体内的旁观者效应却主要与机体的免疫功能相关;本文还描述了该体系的远距离旁观者效应以及探讨提高旁观者效应的可能方法。 展开更多
关键词 hsv-tk 胸苷激酶 旁观者效应 hsv-tk/GCV体系
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含HSV-TK基因的真核表达载体的构建及其在HepG2细胞中的表达(英文) 被引量：7
4
作者 张阳德 孙颖 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 2003年第22期6-11,21,共7页
目的　构建AFP增强子CMV启动子调控下的HSV -TK真核表达质粒用于肝细胞癌的靶向基因治疗。方法　采用PCR方法从HepG2细胞基因组DNA中扩增AFP基因增强子最小的功能片断 ,插入pcDNA3.1-LUC质粒的BglII位点 ,从而构建重组表达质粒 pAFP -LU... 目的　构建AFP增强子CMV启动子调控下的HSV -TK真核表达质粒用于肝细胞癌的靶向基因治疗。方法　采用PCR方法从HepG2细胞基因组DNA中扩增AFP基因增强子最小的功能片断 ,插入pcDNA3.1-LUC质粒的BglII位点 ,从而构建重组表达质粒 pAFP -LUC。HSV -TKcDNA全长序列替换pAFP -LUC质粒中EcoRI位点的LuciferasecDNA全序列构建重组表达质粒 pAFP -TK。质粒 pAFP -LUC采用脂质体法转染AFP阳性的肝癌细胞系HepG2及AFP阴性的非肝癌细胞系HeLa ,用Luciferase分析试剂盒分析Luciferase的表达情况。结果　PCR扩增所得AFP增强子片段的长度和序列通过琼脂糖凝胶电泳、DNA测序得到证实。采用限制性内切酶酶切及PCR方法证实质粒pAFP -LUC中插入的AFP增强子大小、位置及方向均正确。酶切后凝胶电泳分析证实HSV -TK已成功地定向克隆入真核表达载体中。Luciferase报道基因的表达受AFP增强子的调控 ,在AFP阳性肝癌细胞HepG2中高效表达 ,而在AFP阴性的HeLa细胞中表达很低 ,这种差异具有显著性 ,P <0 .0 5。结论　AFP增强子CMV启动子调控的HSV -TK真核表达质粒的构建及其在HepG2细胞中的特异性表达为肝细胞癌的靶向基因治疗提供了实验基础。 展开更多
关键词 肝细胞癌 HCC 单纯疱疹病毒胸苷激酶 hsv-tk 基因治疗 丙氧鸟苷 GCV
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CD-TK和HSV-TK两种自杀基因体系对前列腺癌细胞的杀伤作用 被引量：6
5
作者 张东青 许纯孝 +3 位作者 徐祗顺 马道新 张怀强 刘春生 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第8期812-815,共4页
背景与目的:自杀基因治疗是一种有前景的基因治疗方法,本实验通过观察单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpessimplexvirus-thymidinekinase,HSV-TK)和CD-TK两种自杀基因体系对前列腺癌细胞PC-3m的杀伤效果,探讨该基因治疗在前列腺癌治疗中的应用... 背景与目的:自杀基因治疗是一种有前景的基因治疗方法,本实验通过观察单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpessimplexvirus-thymidinekinase,HSV-TK)和CD-TK两种自杀基因体系对前列腺癌细胞PC-3m的杀伤效果,探讨该基因治疗在前列腺癌治疗中的应用价值。方法:应用逆转录病毒载体将HSV-TK基因和CD-TK融合基因分别转染PC-3m细胞,经RT-PCR鉴定后,MTT法检测丙氧鸟苷(ganciclovir,GCV)、5-氟胞嘧啶(5-flucytosine,5-FC)前体药物单一或联合应用对转染后PC-3m细胞的杀伤作用,以未转染的PC-3m细胞作对照。结果:GCV对转染后PC-3m细胞有较强的细胞毒作用,半数抑制浓度为8.34μg/ml,但旁观者效应不明显;5-Fc则有显著旁观者效应,当混育细胞中转染细胞比例是5%时即可出现;联合用药具有协同作用,两药相互作用指数小于1.0。结论:CD-TK自杀基因体系对前列腺癌细胞具有显著杀伤作用,明显优于单用HSV-TK基因体系,深入研究意义较大。 展开更多
关键词 CD—tk hsv—tk 自杀基因体系 前列腺癌 杀伤作用 癌细胞
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腺病毒介导单纯疱疹病毒胸苷激酶基因/更昔洛韦系统杀伤膀胱癌细胞的研究 被引量：4
6
作者 温端改 侯建全 +2 位作者 潘浩 严春寅 郭震华 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期562-563,共2页
目的　探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 /更昔洛韦 (HSV tk/GCV )系统杀伤膀胱癌细胞的作用。方法　采用人巨细胞病毒早期蛋白启动子驱动HSV tk基因重组腺病毒 (Ad)载体 ,体外转染HTB9和ScanBER细胞 ,MTT法测定杀伤率 ,PCR检测Ad tk转染... 目的　探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 /更昔洛韦 (HSV tk/GCV )系统杀伤膀胱癌细胞的作用。方法　采用人巨细胞病毒早期蛋白启动子驱动HSV tk基因重组腺病毒 (Ad)载体 ,体外转染HTB9和ScanBER细胞 ,MTT法测定杀伤率 ,PCR检测Ad tk转染细胞中tk基因及腺病毒E1区基因。结果　GCV对转染的癌细胞有杀伤作用 ,感染复数 (MOI) 10 0时 ,10mg/LGCV杀伤 80 %的tk+细胞 ,而对未转染的细胞无杀伤作用。不同MOI的Ad tk转染两种细胞 ,其毒性与Ad tkMOI正相关 ,MOI 10 0时 ,15mg/LGCV杀伤 10 0 %的细胞 ,无GCV组未受抑制。PCR证实Ad tk转染细胞有tk基因 ,腺病毒E1区基因阴性。AnnexinV法证实杀伤效应与凋亡有关。结论　HSV tk/GCV系统是一种有效、安全治疗膀胱癌的新方法。 展开更多
关键词 膀胱肿瘤 基因治疗 hsv-tk 更昔洛韦 腺病毒
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六味地黄丸入血成分对自杀基因杀伤B16细胞的增效作用 被引量：6
7
作者 张广献 王苏萍 +3 位作者 曾玲 谭宇蕙 吴映雅 杜标炎 《中药新药与临床药理》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期153-158,共6页
目的探讨六味地黄丸主要入血成分对自杀基因系统(HSV-tk/GCV)杀伤黑色素瘤B16细胞的增效作用及作用机制。方法采用MTT法检测六味地黄丸主要入血成分丹皮酚、马钱素、莫诺苷、5-羟甲基-2-糠酸和獐牙菜苷5种化合物及其混合组分对HSV-tk/GC... 目的探讨六味地黄丸主要入血成分对自杀基因系统(HSV-tk/GCV)杀伤黑色素瘤B16细胞的增效作用及作用机制。方法采用MTT法检测六味地黄丸主要入血成分丹皮酚、马钱素、莫诺苷、5-羟甲基-2-糠酸和獐牙菜苷5种化合物及其混合组分对HSV-tk/GCV杀伤B16细胞的影响;入血成分混合组分处理脾淋巴细胞后培养上清对HSV-tk/GCV杀伤B16细胞的影响;荧光显微镜观察及流式细胞术结合荧光示踪法分析含药淋巴细胞上清对细胞间缝隙连接通讯(GJIC)功能的影响及Western blot分析缝隙连接蛋白(Cx43)表达;MTT法检测含药淋巴细胞上清对HSV-tk/GCV杀伤B16细胞的增敏作用。结果 HSV-tk/GCV联合丹皮酚、马钱素、莫诺苷、5-羟甲基-2-糠酸和獐牙菜苷5种化合物及5种化合物的混合组分,均未显示其对自杀基因的杀伤有直接增效作用;而混合组分处理脾淋巴细胞后培养上清对HSV-tk/GCV杀伤B16细胞具有协同增效作用,并呈一定的量效关系。含药淋巴上清可明显促进Cx43表达,改善B16细胞间缝隙通讯功能。含药淋巴上清对HSV-tk/GCV的B16细胞杀伤敏感性则无明显影响。结论六味地黄丸主要入血成分可能刺激脾淋巴细胞产生某些活性物质,并对HSV-tk/GCV杀伤B16细胞起增效作用,这些淋巴细胞产生的免疫活性物质可能才是六味地黄丸对肿瘤自杀基因疗法增效作用的药效物质基础;其增效机制可能与改善B16细胞间GJIC相关。 展开更多
关键词 六味地黄丸 hsv-tk GCV系统 B16细胞 旁杀伤
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腺病毒介导HSV-TK/CD基因对胆管癌体内体外的杀伤作用 被引量：6
8
作者 李梅生 梁力建 +1 位作者 黄洁夫 陈祖兵 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第12期1428-1429,共2页
目的　研究HSV TK /CD融合基因对胆管癌的杀伤作用。方法　腺病毒介导HSV TK /CD融合基因体外转染胆管癌细胞QBC93 9,与单自杀基因对照 ,四甲基偶氮唑蓝 (MTT )比色法测定肿瘤细胞生长抑制率 ,旁观者效应 ;构建胆管癌裸鼠模型 ,瘤内注... 目的　研究HSV TK /CD融合基因对胆管癌的杀伤作用。方法　腺病毒介导HSV TK /CD融合基因体外转染胆管癌细胞QBC93 9,与单自杀基因对照 ,四甲基偶氮唑蓝 (MTT )比色法测定肿瘤细胞生长抑制率 ,旁观者效应 ;构建胆管癌裸鼠模型 ,瘤内注射重组腺病毒 ,观察肿瘤生长情况。结果　与单一自杀基因转染组对照 ,双基因组表现出更强的抗肿瘤作用。当给予相同浓度的前体药物时 ,融合基因组 ,CD组和TK组的肿瘤细胞存活率分别为 3 .1%、3 2 .1%、5 5 .2 %。体内实验显示 ,融合基因组的肿瘤生长受到明显抑制 ,抑制率达 70 .7%。单自杀基因TK、CD组则分别为 41.2 %和 5 5 .7% ,差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。组织学检查可见实验组肿瘤发生明显坏死 ,这种现象在融合基因治疗组尤为明显。结论　与单自杀基因相比 ,HSV TK/CD融合基因在体内和体外都具有更强的抗肿瘤活性。 展开更多
关键词 hsv-tk 融合基因 胆管癌 自杀基因 腺病毒介导 杀伤作用 体内 体外转染 基因组 抑制率
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腺病毒介导的HSV-tk基因治疗膀胱癌的研究 被引量：6
9
作者 侯建全 温端改 +2 位作者 郑志涛 严春寅 郭震华 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第7期866-868,共3页
目的观察腺病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSVtk)联合更昔洛韦(GCV)治疗膀胱癌的效果。方法构建膀胱癌SCaBER移植瘤模型,观察肿瘤注射重组腺病毒(Ad.tk)结合GCV治疗移植瘤的变化;免疫组织化学法(SP法)检测肿瘤内微血管密度(MVD)... 目的观察腺病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSVtk)联合更昔洛韦(GCV)治疗膀胱癌的效果。方法构建膀胱癌SCaBER移植瘤模型,观察肿瘤注射重组腺病毒(Ad.tk)结合GCV治疗移植瘤的变化;免疫组织化学法(SP法)检测肿瘤内微血管密度(MVD)和增殖细胞核抗原(PCNA)表达;PCR检测肿瘤及脏器内tk基因和腺病毒E1区表达。结果肿瘤内注射5×108pfu的Ad.tk/GCV可使肿瘤缩小或消失,治疗组肿瘤平均重量为0.21g,对照组分别为1.63g(HSVtk/PBS组)、1.69g(PBS/GCV组)、1.72g(PBS组),治疗组与对照组比较差异有显著性(P<0.01)。PCNA染色治疗组肿瘤细胞呈弱阳性(21.43%),对照组呈强阳性,分别为71.44%、65.81%、74.63%,差异有显著性(P<0.01)。MVD在治疗组明显低于对照组(P<0.01)。结论HSVtk/GCV系统治疗膀胱癌效果显著,其作用机制包括干扰DNA合成。 展开更多
关键词 腺病毒 介导 hsv-tk 基因治疗 膀胱癌 更昔洛韦
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联合应用胸苷激酶基因和胞嘧啶脱氨酶基因对MCF-7细胞的杀伤作用 被引量：5
10
作者 常新忠 王占民 +2 位作者 马道新 孙建芝 李志伟 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期192-194,i003,共4页
目的　研究双自杀基因 (胞嘧啶脱氨酶基因CD和胸苷激酶基因HSV tk)的应用对乳腺癌细胞的杀伤作用和旁观者效应。方法　脂质体法将CD和HSV tk双自杀基因转染入PA3 17细胞 ,用其病毒上清转染乳腺癌细胞MCF 7,G418筛选出阳性细胞MCF 7/CD +... 目的　研究双自杀基因 (胞嘧啶脱氨酶基因CD和胸苷激酶基因HSV tk)的应用对乳腺癌细胞的杀伤作用和旁观者效应。方法　脂质体法将CD和HSV tk双自杀基因转染入PA3 17细胞 ,用其病毒上清转染乳腺癌细胞MCF 7,G418筛选出阳性细胞MCF 7/CD +tk ,然后加入不同浓度的 5 氟胞嘧啶 (5 Fc)或 /和丙氧鸟苷 (GCV ) ,MTT法观察其杀伤作用 ;将不同比例的MCF 7/CD +tk和MCF 7细胞混合 ,联合应用 5 Fc和GCV杀伤 ,观察其旁观者效应。结果　单独应用 5 Fc或GCV均能对MCF 7/CD +tk细胞产生明显的杀伤效应 ,联合应用可以在较小的剂量下产生更大的杀伤作用 ;当阳性细胞比例达到 2 0 %时即可对半数混合细胞产生杀伤作用。结论　双自杀基因的应用对乳腺癌细胞具有明显的杀伤作用 ,其旁观者效应明显。 展开更多
关键词 联合应用 胸苷激酶基因 胞嘧啶脱氨酶基因 MCF-7细胞 杀伤作用 乳腺肿瘤 基因治疗
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不同药物敏感基因对人胰腺癌细胞PC-2的杀伤作用 被引量：5
11
作者 张雷 刘彤华 崔全才 《中华病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第6期412-415,共4页
目的比较单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶（ＨＳＶＴＫ）／丙氧鸟苷（ＧＣＶ）和胞嘧啶脱氨基酶（ＣＤ）／５氟胞嘧啶（５ＦＣ）两系统对人胰腺癌ＰＣ２细胞的杀伤作用。方法构建表达ＨＳＶＴＫ和ＣＤ基因的重组逆转录病毒载体... 目的比较单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶（ＨＳＶＴＫ）／丙氧鸟苷（ＧＣＶ）和胞嘧啶脱氨基酶（ＣＤ）／５氟胞嘧啶（５ＦＣ）两系统对人胰腺癌ＰＣ２细胞的杀伤作用。方法构建表达ＨＳＶＴＫ和ＣＤ基因的重组逆转录病毒载体，将其直接导入胰腺癌细胞；噻唑蓝法检测转化细胞对前体药物的敏感度及５０％细胞受抑制时的药物浓度，即ＩＣ５０值，并对旁观者效应进行观察比较。结果ＨＳＶＴＫ基因转化细胞ＩＣ５０值为（１０６±０１２）μｍｏｌ／Ｌ，比未转化细胞下降５５８倍；ＣＤ基因转化细胞ＩＣ５０值为（３３００±０９５）μｍｏｌ／Ｌ，比未转化细胞下降２５８倍；混合细胞中含１０％的转化细胞时，ＨＳＶＴＫ／ＧＣＶ系统的生长抑制率为３９％，ＣＤ／５ＦＣ系统为５０３％。结论两系统对胰腺癌细胞ＰＣ２均有很好的杀伤和抑制细胞生长作用，ＨＳＶＴＫ／ＧＣＶ系统的治疗指数较高。 展开更多
关键词 胰腺肿瘤 PC-2细胞 hsv-tk GCV CD 5-FC
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HSV-tk基因和IL-12基因抑制VEGF的表达及对鼻咽癌荷瘤裸鼠模型放射增敏作用的实验研究
12
作者 周玉华 朱欠元 +1 位作者 曾友根 李宝金 《中国医学创新》 CAS 2023年第19期24-27,共4页
目的:研究HSV-tk基因和IL-12基因抑制血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达对鼻咽癌荷瘤裸鼠模型放射增敏作用。方法:建立鼻咽癌荷瘤裸鼠模型,将42只成瘤鼠随机分成IL-12组、IL-12+放射治疗组、HSV-tk/GCV... 目的:研究HSV-tk基因和IL-12基因抑制血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达对鼻咽癌荷瘤裸鼠模型放射增敏作用。方法:建立鼻咽癌荷瘤裸鼠模型,将42只成瘤鼠随机分成IL-12组、IL-12+放射治疗组、HSV-tk/GCV组、HSV-tk/GCV+放射治疗组、IL-12+HSV-tk/GCV组、IL-12+HSV-tk/GCV+放射治疗组、空白对照组、每组6只。采用瘤内注射分别给予相对应的重组腺病毒液(AdKDR-tk)、重组逆转录腺病毒液IL-12及生理盐水,24 h后重复注射1次。次日起HSV-tk/GCV组、HSV-tk/GCV+放射治疗组、IL-12+HSV-tk/GCV组、IL-12+HSV-tk/GCV+放射治疗组连续10 d每天腹腔内注射GCV 100 mg/(kg·d),连续10 d。各放射治疗组第3周开始给予6MV-X照射,每天2 Gy,连续5 d。治疗结束后处死裸鼠,检测裸鼠肿瘤质量及肿瘤生长抑制率,免疫组织化学法检测肿瘤微血管密度及VEGF阳性细胞灰度值。结果:IL-12+HSV-tk/GCV+放射治疗组裸鼠瘤体质量明显低于IL-12组、IL-12+放射治疗组、HSV-tk/GCV组、HSV-tk/GCV+放射治疗组,差异均有统计学意义(P<0.05)。IL-12+HSV-tk/GCV+放射治疗组的肿瘤生长抑制率最高,达71.7%。IL-12+HSV-tk/GCV+放射治疗组微血管密度均低于其他各组,VEGF阳性细胞灰度值均高于其他各组(P<0.05)。结论:HSV-tk基因和IL-12基因联合应用在鼻咽癌荷瘤裸鼠模型放疗中可抑制移植瘤的生长,为鼻咽癌的放疗产生增敏作用。 展开更多
关键词 血管内皮生长因子 鼻咽癌 放射治疗 hsv-tk 基因 IL-12 基因
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HSV-TK/GCV系统对人肺癌细胞株的杀伤效应 被引量：2
13
作者 宋毅 刘兆雄 +1 位作者 黄光琦 肖林 《华西药学杂志》 CAS CSCD 2004年第3期165-167,共3页
目的　观察单纯疱疹病毒胸苷激酶基因HSV -TK/GCV系统对人肺癌细胞H4 4 6的体外杀伤作用。方法　利用脂质体(lipofectin)将重组逆转录病毒载体pLXSN -TK导入包装细胞PA317,G4 18筛选至抗性克隆出现 ,收获病毒液。加入聚凝胺感染H4 4 6细... 目的　观察单纯疱疹病毒胸苷激酶基因HSV -TK/GCV系统对人肺癌细胞H4 4 6的体外杀伤作用。方法　利用脂质体(lipofectin)将重组逆转录病毒载体pLXSN -TK导入包装细胞PA317,G4 18筛选至抗性克隆出现 ,收获病毒液。加入聚凝胺感染H4 4 6细胞 ,并筛选出含TK基因的H4 4 6细胞。观察GCV对H4 4 6和不同比例混合的H4 4 6、H4 4 6 /TK的杀伤作用及旁观者效应。结果　经电镜及PCR检测证实TK基因已导入PA317、H4 4 6细胞。H4 4 6 /TK细胞对GCV的敏感性明显高于H4 4 6细胞 ;随着TK+ 细胞比例的增加 ,存活率进一步减低 ,提示GCV不仅杀死TK+ 细胞 ,也杀死混合培养的未转导TK基因的H4 4 6细胞 ,表明HSV -TK基因转导的H4 4 6细胞具有明显的旁观者效应。结论　HSV -TK/GCV系统赋予人肺癌细胞对GCV的高敏感性及旁观者效应。 展开更多
关键词 hsv-tk GCV系统 肺癌细胞 杀伤效应 丙氨基鸟苷 旁观者效应
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HSV-TK/GCV自杀基因系统对人胰腺癌细胞的作用 被引量：1
14
作者 王静 鲁晓瑄 +2 位作者 张丽珊 陈道桢 李淑锋 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2004年第7期498-501,共4页
目的　运用自杀基因系统HSV TK/GCV治疗人胰腺癌细胞SW1990的实验研究 ,并证实旁观者效应。方法　通过脂质体介导的基因转移方法将含有单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 (her pessimplexvirusthymidinekinasegene ,HSV TK)的复制缺陷型逆转录... 目的　运用自杀基因系统HSV TK/GCV治疗人胰腺癌细胞SW1990的实验研究 ,并证实旁观者效应。方法　通过脂质体介导的基因转移方法将含有单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 (her pessimplexvirusthymidinekinasegene ,HSV TK)的复制缺陷型逆转录病毒载体GINaTK导入包装细胞PA317,然后利用细胞产生的假病毒颗粒感染人胰腺癌细胞系SW 1990细胞。在SW 1990 /TK细胞培养物中加入抗病毒前药GCV ,观察GCV对该细胞的杀伤作用及旁观者效应。结果　实验表明GCV对SW1990 /TK有显著的抑制及杀灭作用 ,同时表现出强烈的旁观者效应。结论　HSV TK/GCV自杀基因系统对胰腺癌细胞有生长抑制及杀伤作用 。 展开更多
关键词 hsv-tk GCV 自杀基因 基因系统 胰腺癌 癌细胞 细胞培养
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丹参酮ⅡA对HSV-TK/GCV系统治疗肺癌细胞株的影响 被引量：3
15
作者 宋毅 袁淑兰 +1 位作者 黄光琦 肖林 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期429-431,共3页
目的　观察并探讨丹参酮 A(Tan A)对逆转录病毒载体介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV- TK/GCV)系统对治疗人小细胞肺癌细胞株的影响。方法　用逆转录病毒感染 H4 4 6细胞 ,筛选出含 TK基因的 H4 4 6细胞 (H4 4 6 /TK)。用丙氧鸟苷 (... 目的　观察并探讨丹参酮 A(Tan A)对逆转录病毒载体介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV- TK/GCV)系统对治疗人小细胞肺癌细胞株的影响。方法　用逆转录病毒感染 H4 4 6细胞 ,筛选出含 TK基因的 H4 4 6细胞 (H4 4 6 /TK)。用丙氧鸟苷 (GCV)及 Tan A处理不同比例混合的 H4 4 6、H4 4 6 /TK细胞 ,用 MTT比色法检测细胞存活率。结果　重组逆转录病毒滴度为 3.2× 10 5cfu/ml,电镜观察证实 HSV- TK基因已导入H4 4 6细胞。H4 4 6 /TK细胞对 GCV的敏感性明显高于 H4 4 6细胞 ,并存在旁观者效应 ;Tan A与 GCV共同作用下的肿瘤细胞对 GCV的敏感性大大增强 ,在不同比例混合的 H4 4 6、H4 4 6 /TK细胞中 ,加入 Tan A组和不加丹参酮组相比较 ,其存活率有显著性差异 (P<0 .0 5 )。结论　 Tan A能显著增强 HSV- TK/GCV系统的旁观者效应。 展开更多
关键词 hsv-tk 丹参酮ⅡA 丙氧鸟苷 旁观者效应
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pEGFP-AFP-TK重组真核表达载体的构建及在PEG-PEI/Fe_3O_4纳米磁流体介导下转染肝癌细胞 被引量：4
16
作者 贾萌 彭健 +4 位作者 周健 陈伟 赵劲风 潘一峰 张阳德 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2008年第3期473-477,共5页
目的:构建甲胎蛋白(AFP)启动子介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)重组真核表达载体,并检测其在AFP阳性肝癌细胞株的特异性表达。方法:PCR扩增AFP基因启动子、HSV-TK基因,将上述片段插入EGFP-N1载体的多克隆位点,构建pEGFP-AFP-TK重组... 目的:构建甲胎蛋白(AFP)启动子介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)重组真核表达载体,并检测其在AFP阳性肝癌细胞株的特异性表达。方法:PCR扩增AFP基因启动子、HSV-TK基因,将上述片段插入EGFP-N1载体的多克隆位点,构建pEGFP-AFP-TK重组表达载体,通过包裹PEG-PEI/Fe3O4纳米磁流体,经其介导,转染AFP阳性肝癌细胞株HepG2和AFP阴性肝癌细胞株SMMC7721,利用增强型绿色荧光蛋白及Western blotting法检测目的基因在2种细胞系中的表达。结果与结论:肝癌特异性真核表达载体pEGFP-AFP-TK构建成功。利用增强型绿色荧光蛋白及Western blotting法可以检测到嵌合AFP启动子的pEGFP-AFP-TK重组真核表达载体能够特异性在AFP阳性的肝癌细胞株表达,而在AFP阴性的肝癌细胞株中基本不表达。 展开更多
关键词 甲胎蛋白启动子 单纯疱疹病毒胸苷激酶 自杀基因 PEG—PEI/Fe3O4纳米磁流体
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肿瘤基因治疗中的基因显像 被引量：2
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作者 穆传杰 《国外医学（放射医学核医学分册）》 1999年第3期128-131,共4页
基因显像是肿瘤基因治疗的先导性工作，特别是在药物敏感性基因治疗时为了明确转导的标志基因的定位和分布、基因高表达及其持续时间，以便确定最佳给药时间。介绍了国际上在药物敏感性基因治疗研究中所采用几对标志基因和标志基质如Ｈ... 基因显像是肿瘤基因治疗的先导性工作，特别是在药物敏感性基因治疗时为了明确转导的标志基因的定位和分布、基因高表达及其持续时间，以便确定最佳给药时间。介绍了国际上在药物敏感性基因治疗研究中所采用几对标志基因和标志基质如ＨＳＶ１－ｔｋ／ＡＣＶ或ＧＣＶ，ＨＳＶ１－ｔｋ／ＦＩＡＵ或ＦＦＵｄＲ等进行基因显像的原理、结果及其应用前景。 展开更多
关键词 基因治疗 基因显像 hsv-tk 肿瘤
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全反式维甲酸增强HSV-TK/GCV对BIU-87细胞旁观者效应的观察 被引量：2
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作者 罗顺文 叶钢 +2 位作者 张荣贵 江永浩 刘为池 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期385-387,共3页
目的　体外观察全反式维甲酸 (all transretinoicacid ,ATRA)对BIU -87细胞缝隙连接细胞间通讯 (gapjunctionintercellularcommunication ,GJIC)及旁观者效应的影响。方法　用染料划痕标记技术观察ATRA对BIU- 87细胞GJIC功能的影响 ,MT... 目的　体外观察全反式维甲酸 (all transretinoicacid ,ATRA)对BIU -87细胞缝隙连接细胞间通讯 (gapjunctionintercellularcommunication ,GJIC)及旁观者效应的影响。方法　用染料划痕标记技术观察ATRA对BIU- 87细胞GJIC功能的影响 ,MTT法观察ATRA处理后HSV TK/GCV对BIU- 87细胞旁观者效应的变化。结果　ATRA显著改善BIU- 87细胞GJIC功能 ,并提高HSV -TK/GCV的旁观者杀伤作用。结论　ATRA可以改善BIU -87细胞间通讯功能 ,可能是ATRA增强HSV 展开更多
关键词 膀胱癌 全反式维甲酸 缝隙连接细胞问通讯 hsv-tk
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HSV-TK/CD20双自杀基因系统慢病毒载体的构建及应用 被引量：2
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作者 家婷 张涛 +9 位作者 邹强 郑武燕 赵日 欧阳寒梅 曹倩 朱榕 王茂庆 叶鑫宇 刘佳慧 李华 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期711-717,共7页
目的构建同时表达单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)和RQR8膜蛋白双自杀可控开关的Jurkat细胞,使之可通过更昔洛韦药物(GCV)或利妥昔单抗(RTX)实现可控性细胞消除。方法 RQR8膜蛋白小分子含利妥昔单抗识别的模拟表位和抗CD34单抗表位。合成... 目的构建同时表达单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)和RQR8膜蛋白双自杀可控开关的Jurkat细胞,使之可通过更昔洛韦药物(GCV)或利妥昔单抗(RTX)实现可控性细胞消除。方法 RQR8膜蛋白小分子含利妥昔单抗识别的模拟表位和抗CD34单抗表位。合成编码RQR8及HSV-TK的基因,构建慢病毒共表达载体pLV-RQR8-T2A-TK;脂质体Lipofectamine3000转染Jurkat细胞,流式荧光抗CD34单抗检测RQR8的表达,通过磁珠筛选获得RQR8+TK+Jurkat细胞;分别加入GCV或RTX检测自杀可控开关功能:CCK8法检测加药后细胞增殖情况,Annexin-V/PI检测细胞凋亡情况。结果慢病毒载体pLV-RQR8-T2A-TK酶切片段大约1 670 bp,测序进一步证实外源片段插入正确。慢病毒感染Jurkat细胞,感染率为45.21%,磁珠纯化得到99.4%纯度的RQR8+TK+Jurkat。GCV对RQR8+TK+Jurkat具有细胞毒性作用,GCV浓度为40μmol/L时,其存活率为(52.11±7.04)%,IC50为20.66μmol/L。80μmol/L GCV作用RQR8+TK+Jurkat细胞72 h后凋亡率达(41.28±2.78)%。在血清(含补体)存在情况下,320μg/ml RTX可通过补体介导的细胞杀伤作用杀伤RQR8+TK+Jurkat,其存活率为(29.64±4.52)%。结论双自杀可控开关慢病毒载体pLV-RQR8-T2A-TK构建成功,加入GCV或RTX可通过2种不同路径成功杀伤细胞,达到细胞清除目的,提高了安全性,为临床治疗过继免疫不良反应提供多种选择。 展开更多
关键词 自杀基因 hsv-tk CD20 RQR8 利妥昔单抗 更昔洛韦
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四环素调控HSV-tk基因在HeLa细胞内表达及抗肿瘤作用 被引量：2
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作者 王茜 杜珍武 +1 位作者 马青山 张桂珍 《中国实验诊断学》 2014年第9期1396-1398,共3页
目的探讨应用四环素调控单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)基因在HeLa细胞内表达及抗肿瘤作用。方法将含有四环素阻遏蛋白基因的质粒载体pcDNA6/TR与含有四环素反应元件及HSV-tk基因的质粒载体pcDNA3.1-TetO2-TKI先后稳定转染HeLa细胞,给予... 目的探讨应用四环素调控单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)基因在HeLa细胞内表达及抗肿瘤作用。方法将含有四环素阻遏蛋白基因的质粒载体pcDNA6/TR与含有四环素反应元件及HSV-tk基因的质粒载体pcDNA3.1-TetO2-TKI先后稳定转染HeLa细胞,给予不同浓度的四环素类似物强力霉素,应用RT-PCR检测细胞内HSV-tk基因表达,应用MTT法测定转染HSV-tk基因的HeLa细胞对不同浓度无氧鸟苷(GCV)杀伤的敏感性。结果转染两种质粒载体的HeLa细胞经不同浓度的强力霉素作用48h后,RT-PCR结果显示,随着强力霉素浓度的增大,HSV-tk基因表达量逐渐增加,强力霉素4μg/ml时,基因表达的水平达到高峰;加入强力霉素后,该细胞对GCV杀伤细胞的敏感性增加。结论本研究成功地应用四环素基因表达调控系统调控了HSV-tk基因在HeLa细胞内表达及杀伤肿瘤功能,为进一步探讨自杀基因杀伤肿瘤的可调控性提供理论基础。 展开更多
关键词 四环素 基因表达调控 hsv-tk 基因 HELA 细胞
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