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RNA干涉抑制宫颈癌CaSki细胞株HPV16 E6基因的研究 被引量：27
1
作者 牛晓宇 彭芝兰 王和 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第11期1257-1262,共6页
背景与目的:研究表明宫颈癌的发生发展与人乳头瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV)E6、E7癌基因密切相关,于是人们采用核酶或HPVE6、E7反义寡核苷酸抑制其表达来治疗宫颈癌,虽然取得了一定的效果,但仍面临基因抑制效率低、维持时间短、工... 背景与目的:研究表明宫颈癌的发生发展与人乳头瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV)E6、E7癌基因密切相关,于是人们采用核酶或HPVE6、E7反义寡核苷酸抑制其表达来治疗宫颈癌,虽然取得了一定的效果,但仍面临基因抑制效率低、维持时间短、工作量大、耗费多等问题。本研究采用最新的RNA干扰技术干扰宫颈癌CaSki细胞中HPV16E6转录,以了解其能否特异性抑制HPV16E6基因及其时效性如何。方法:设计合成针对HPV16E6的荧光标记siRNA,借脂质体转染宫颈癌CaSki细胞,通过荧光照片计数荧光细胞占所有细胞的比例计算转染效率;测定转染后不同时间点的细胞凋亡率;RT-PCR测定HPV16E6mRNA变化,Westernblot和流式细胞仪检测转染前后蛋白表达情况。结果:相差显微镜荧光照片显示细胞转染的效率为81%。HPV16E6siRNA转染细胞后24h、48h、5天凋亡率分别为7.7%、11.8%和37.4%,转染9天时凋亡率下降至12.6%。RT-PCR扩增结果显示,细胞转染前HPV16E6mRNA的量与siRNA阴性对照比较没有显著性差异,但转染后24h、48h、5天和9天分别减少了77%、83%、59%和41%;而作为内对照的β-actinmRNA在转染前后无变化。流式细胞仪定量测定HPV16E6蛋白,结果显示转染后24h、48h和5天,蛋白表达抑制率分别为79.7%、80.4%和71.3%;9天时抑制率有下降,但仍可达57. 展开更多
关键词 RNA干扰 hpv16 e6 宫颈肿瘤 CASKI细胞
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应用荧光定量聚合酶链方法检测宫颈组织中人乳头瘤病毒16E6基因 被引量：13
2
作者 马彩玲 李轶杰 +6 位作者 张富春 王国荃 郑玉建 开丽曼 热西旦 韩英 帕提古丽 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期469-473,共5页
目的　建立荧光定量聚合酶链 (FQ PCR)方法检测宫颈细胞中人乳头瘤病毒 16型(HPV16 )E6基因的方法。方法　以 2 2 0例新疆妇女宫颈不同病变组织DNA作为样本 ,人乳头瘤病毒 16型 (新疆株 )E6基因 (HPV16E6 ,AF32 785 1)作为扩增的靶基因 ... 目的　建立荧光定量聚合酶链 (FQ PCR)方法检测宫颈细胞中人乳头瘤病毒 16型(HPV16 )E6基因的方法。方法　以 2 2 0例新疆妇女宫颈不同病变组织DNA作为样本 ,人乳头瘤病毒 16型 (新疆株 )E6基因 (HPV16E6 ,AF32 785 1)作为扩增的靶基因 ,同时以人 β 肌动蛋白基因片段作为内参照 ,借助于设计的目的基因引物 ,两个特异的荧光探针 ,在筛选的FQ PCR优化反应体系中 ,同时对两个基因片段进行扩增 ,得到HPV16E6的相对含量。结果　对 β 肌动蛋白阳性的宫颈不同病变组织中HPV16E6阳性率及其相对含量进行统计分析 ,新疆妇女宫颈脱落细胞标本 96例中 ,HPV16E6阳性 3例 (3 3% ) ;宫颈癌蜡块组织 5 9例中HPV16E6阳性 4 9例 (83 0 % ) ;宫颈上皮内瘤变 (CIN)蜡块组织 6 5例中 ,HPV16E6阳性 2 8例 (75 7% ) ;宫颈炎蜡块组织 33例 ,HPV16E6阳性 2 8例 (93 3% )。HPV16E6的相对含量随病情加重呈上升趋势 ,二者呈显著正相关 ,相关系数为 0 83。结论　建立的FQ PCR检测宫颈不同病变组织内HPV16E6基因的方法 ,能反映单位细胞人乳头瘤病毒的复制情况 ,筛查宫颈癌患者 ,并可能应用于宫颈癌的风险评估和疗效观察。 展开更多
关键词 荧光定量聚合酶链法 宫颈肿瘤 人乳头瘤病毒16 e6基因 脱落细胞学检查
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HPV16 E6对宫颈癌E-cadherin表达水平和基因甲基化的影响 被引量：14
3
作者 李乐赛 李梅花 +1 位作者 张弦 陈亦乐 《湖南师范大学学报（医学版）》 2016年第4期1-3,4,共4页
目的 :探讨HPV 16 E6对宫颈癌组织和细胞中E-cadherin表达水平及基因甲基化状态的影响。方法 :检测20例宫颈鳞癌组织及12例正常宫颈组织中HPV16 E6、E-cadherin蛋白表达水平及E-cadherin甲基化率。采用Siha细胞构建HPV16 E6沉默细胞株,... 目的 :探讨HPV 16 E6对宫颈癌组织和细胞中E-cadherin表达水平及基因甲基化状态的影响。方法 :检测20例宫颈鳞癌组织及12例正常宫颈组织中HPV16 E6、E-cadherin蛋白表达水平及E-cadherin甲基化率。采用Siha细胞构建HPV16 E6沉默细胞株,检测si RNA E6对细胞E-cadherin m RNA和蛋白表达影响,以及E-cadherin甲基化状态。结果 :HPV16 E6蛋白在宫颈鳞癌组织中的表达高于正常宫颈组织,E-cadherin蛋白在宫颈鳞癌组织中的表达低于正常宫颈组织。正常宫颈组织均未扩增出E-cadherin基因甲基化条带;宫颈鳞癌组织中,E-cadherin基因甲基化检出率为65.0%。筛选得到HPV16 E6稳定下调的Siha细胞系。E-cadherin m RNA及蛋白表达在si RNA E6组均显著高于空载体组和空白对照组。E-cadherin基因甲基化扩增条带在si RNA E6组呈弱阳性,而在空载体组及空白对照组呈强阳性。结论 :HPV 16 E6可引起宫颈癌组织和细胞中E-cadherin基因甲基化,并可导致E-cadherin m RNA及蛋白的表达水平下调。 展开更多
关键词 子宫颈癌 人乳头状瘤病毒16 e6 e-钙黏蛋白 甲基化
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纳米雄黄混悬液诱导Siha细胞凋亡及对HPV16E6/E7表达的影响 被引量：12
4
作者 刘嵘 濮德敏 +3 位作者 赵立波 程艳香 尹伶 李天 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期54-58,共5页
目的：探讨纳米雄黄混悬液对人宫颈癌Siha细胞的抑制增殖、诱导凋亡作用及其对HPV16E6和E7致瘤基因的影响。方法：采用微射流法制备纳米雄黄混悬液,应用不同质量浓度（6.25,12.5,25,50 mg.L^-1）的纳米雄黄混悬液作用于Siha细胞不同时间... 目的：探讨纳米雄黄混悬液对人宫颈癌Siha细胞的抑制增殖、诱导凋亡作用及其对HPV16E6和E7致瘤基因的影响。方法：采用微射流法制备纳米雄黄混悬液,应用不同质量浓度（6.25,12.5,25,50 mg.L^-1）的纳米雄黄混悬液作用于Siha细胞不同时间（12,24,48,72 h）,光镜和透射电镜观察实验组（不同质量浓度的纳米雄黄混悬液处理组）和对照组（不加药物的细胞）细胞的形态学变化;琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞DNA Ladder形成;MTT比色法测定细胞生长抑制情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期改变;RT-PCR方法检测HPV16E6和E7的表达。结果：纳米雄黄混悬液25~50 mg.L-1处理Siha细胞48,72 h后,细胞存活率降低,凋亡增加,作用呈时间-剂量依赖关系。电镜显示细胞呈典型的凋亡形态学改变,琼脂糖凝胶电泳显示凋亡细胞DNA Ladder形成;流式细胞术检测证实细胞凋亡率与纳米雄黄混悬液作用浓度呈明显相关,与对照组相比,差异有极显著意义（P〈0.01）,且细胞呈G0-G1期阻滞。RT-PCR检测显示随着纳米雄黄混悬液作用浓度的增加,HPV16E6和E7的表达不同程度地受到抑制。结论：纳米雄黄混悬液对于Siha细胞具有诱导凋亡、抑制增殖的作用,其机制可能与其抑制HPV16E6和E7致瘤基因的表达有关。 展开更多
关键词 纳米雄黄混悬液 SIHA细胞 细胞凋亡 hpv16e6 hpv16e7
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新疆哈萨克族食管癌组织中HPV16E6、E7基因的检测与p53的关系 被引量：4
5
作者 卢晓梅 温浩 +3 位作者 刘辉 林仁勇 张亚楼 张月明 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期464-466,共3页
目的 探讨人乳头状瘤病毒(HPV)16型感染在新疆哈萨克族(哈族)食管癌发病中的作用,并分析HPV16感染与p53过表达之间的关系。方法 采用聚合酶链(PCR)技术.检测41例食管鳞状细胞癌组织中HPV16 E6与E7基因表达差异;用LSAB免疫组织化学方法分... 目的 探讨人乳头状瘤病毒(HPV)16型感染在新疆哈萨克族(哈族)食管癌发病中的作用,并分析HPV16感染与p53过表达之间的关系。方法 采用聚合酶链(PCR)技术.检测41例食管鳞状细胞癌组织中HPV16 E6与E7基因表达差异;用LSAB免疫组织化学方法分析p53蛋白的表达。结果 癌组织中HPV16 E6与E7基因阳性检出率分别为34.15％(14／41)和63.41％(26／41);用免疫组化检出p53蛋白阳性率分别在HPV16 E6阳性组(57.1％)与HPV16 E6阴性组(14.8％)间、HPV16 E7阳性组(42.3％)与HPV16 E7阴性组(6.7％)间均存在显著性差异(P<0.05);用PCR检出HPV16 E6、E7基因在食管癌的高分化组、中低分化组中的检出率分别为7.69％(1／13)、46.43％(13／28)和38.46％(5／13)、75.00％(21／28),差别均有统计学意义(P<0.05)。结论 提示p53基因突变与HPV16感染在哈族食管癌的发病过程中存在相互促进作用;另外,HPV16 E6与E7基因和哈萨克族食管癌病理组织学分级的生物学行为密切相关。 展开更多
关键词 食管肿瘤 癌 鳞状细胞 哈萨克族 P53蛋白 人乳头状瘤病毒16e6 人乳头状瘤病毒16e7
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新疆维、汉族宫颈鳞癌病变中HPV16 E6基因变异分析 被引量：8
6
作者 周瑾 刘伟 +4 位作者 桂俊豪 冯桂萍 王瑞 刘鸿春 卢静 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1273-1276,共4页
目的分析新疆地区维、汉族妇女宫颈鳞癌组织中HPV16型E6基因的变异情况。方法从新疆地区5例维吾尔族妇女和5例汉族妇女宫颈活检组织中提取病毒基因组DNA,经反向膜杂交检测确定为HPV16单一感染。采用PCR技术扩增HPV16E6基因片段,克隆到pU... 目的分析新疆地区维、汉族妇女宫颈鳞癌组织中HPV16型E6基因的变异情况。方法从新疆地区5例维吾尔族妇女和5例汉族妇女宫颈活检组织中提取病毒基因组DNA,经反向膜杂交检测确定为HPV16单一感染。采用PCR技术扩增HPV16E6基因片段,克隆到pUC18-T载体中进行DNA测序。结果成功克隆了HPV16E6基因,DNA测序结果表明,与德国标准株相比,10例宫颈鳞癌组织中共检出12种E6基因突变类型,包括107(T→C)、133(A→C)、168(C→G)、178(T→G)、310(T→C)、321(T→C)、341(T→C)、350(T→G)、375(A→G)、410(T→A)、499(G→T)和548(A→G),其中178(T→G)和350(T→G)的突变频率较高,均为30%(3/10)。汉族和维吾尔族标本中共有的突变包括178(T→G)和350(T→G),仅存在于汉族标本的突变为107(T→C)、133(A→C)、168(C→G)、310(T→C)和499(G→T),仅发生在维吾尔族标本的突变为321(T→C)、341(T→C)、375(A→G)、410(T→A)和548(A→G)。结论与德国标准株比较,新疆维吾尔族、汉族宫颈癌患者中HPV16E6基因存在新的变异,其中178(T→G)和350(T→G)型基因变异为热点突变;新疆地区宫颈癌的高发可能与HPV16E6基因突变有关。 展开更多
关键词 宫颈肿瘤 人乳头瘤病毒16 基因 hpv16e6 突变
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HPV16 E6、P21^(WAF1)、CDK2、Livin在宫颈癌中的表达及其意义 被引量：7
7
作者 孙峰 邢传平 +4 位作者 刘斌 哈小琴 王芳 柳红 曹晓哲 《中国体视学与图像分析》 2009年第1期28-32,共5页
目的探讨人乳头瘤病毒(HPV)16 E6、P21WAF1、CDK2、livin在宫颈癌中的表达及P21WAF1、CDK2、livin与E6的关系。方法采用免疫组化SP法检测HPV16 E6、P21 P21WAF1、CDK2、livin在20例宫颈癌、40例宫颈上皮内瘤变(CIN)及20例正常对照组中... 目的探讨人乳头瘤病毒(HPV)16 E6、P21WAF1、CDK2、livin在宫颈癌中的表达及P21WAF1、CDK2、livin与E6的关系。方法采用免疫组化SP法检测HPV16 E6、P21 P21WAF1、CDK2、livin在20例宫颈癌、40例宫颈上皮内瘤变(CIN)及20例正常对照组中的表达。应用图像分析软件分别对此四个因子的表达进行平均光密度分析。结果E6、P21WAF1、CDK2、livin蛋白于宫颈癌组高于CIN1-2组及正常组(P<0.05),CIN3组高于CIN1-2组及正常组(P<0.05),宫颈癌组与CIN3组之间差异无统计学意义(P>0.05),CIN1-2组与正常组之间差异无统计学意义(P>0.05)。E6分别与P21WAF1、CDK2、livin成正相关(相关系数r分别为0.706、0.713、0.711,P<0.05)。结论E6、CDK2与宫颈癌的发生、发展密切相关,E6、CDK2异常高表达可能是宫颈疾病恶变早期事件。livin可能成为宫颈癌潜在的治疗分子靶向。 展开更多
关键词 宫颈癌 上皮内瘤变 hpv16 e6 P21^WAF1 CDK2 LIVIN
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宫颈癌患者治疗前检测血清HPV16E6 mRNA和CK19 mRNA的临床意义 被引量：7
8
作者 杨琳琳 王薇 +2 位作者 张磊 张红平 杨宏英 《昆明医科大学学报》 CAS 2017年第1期23-26,共4页
目的检测宫颈癌患者治疗前外周血HPV16E6m RNA和CK19m RNA的表达,探讨其对宫颈癌的诊断意义及其与临床病理的相关性.方法对100例宫颈癌患者行治疗前外周血HPV16E6m RNA及CK19m RNA检测,以40例健康妇女为对照,分析其作为诊断参考的特异... 目的检测宫颈癌患者治疗前外周血HPV16E6m RNA和CK19m RNA的表达,探讨其对宫颈癌的诊断意义及其与临床病理的相关性.方法对100例宫颈癌患者行治疗前外周血HPV16E6m RNA及CK19m RNA检测,以40例健康妇女为对照,分析其作为诊断参考的特异性和敏感性,并对两者与宫颈癌临床病理特征的相关性进行分析.结果 HPV16E6m RNA、CK19m RNA检测诊断宫颈癌的特异性均为97.5%.HPV16E6m RNA、CK19m RNA升高用于治疗前诊断的敏感性分别为15%和39%,两者差异有统计学意义(P<0.05).HPV16E6m RNA升高与临床分期(P=0.012)、盆腔淋巴结转移(P=0.026)相关.CK19m RNA升高与深肌层浸润(P=0.031)、盆腔淋巴结转移(P=0.027)相关.结论外周血HPV16E6m RNA和CK19m RNA均是宫颈癌微转移有价值的肿瘤标志物;CK19m RNA在作为宫颈癌指标时,临床诊断价值优于HPV16E6m RNA. 展开更多
关键词 宫颈肿瘤 hpv16e6m RNA CK19m RNA 外周血
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HPV16 E6 下调 DHRS2 表达可介导宫颈上皮细胞的致癌转化
9
作者 杜秀蓉 陶沐珩 +4 位作者 贾永琴 伍婷婷 凌开建 王延洲 梁志清 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期715-724,共10页
目的探讨HPV16 E6对宫颈上皮细胞基因及信号通路的影响,筛选与致癌转化相关的基因。方法构建HPV16 E6感染的正常人宫颈上皮细胞(HUCEC)模型,进行转录组测序筛选差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),并进行基因本体(Gene ... 目的探讨HPV16 E6对宫颈上皮细胞基因及信号通路的影响,筛选与致癌转化相关的基因。方法构建HPV16 E6感染的正常人宫颈上皮细胞(HUCEC)模型,进行转录组测序筛选差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),并进行基因本体(Gene Ontology,GO)和京都基因和基因组(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析差异信号通路。采用RT-qPCR验证主要差异下调表达基因。对主要差异基因的蛋白结构与HPV16 E6蛋白进行分子对接预测分析,通过RT-qPCR及Western blot验证HUCEC细胞模型中主要差异基因表达情况,并采用RT-qPCR及Western blot实验在宫颈癌细胞系SiHa及CaSki中进一步验证差异基因的表达。结果共筛选出差异表达2倍以上的基因55个。本研究聚焦下调差异基因,结果表明:负调控的差异基因GO功能富集于氧化还原过程;KEGG富集分析主要与碳水化合物代谢及癌症等相关。10个差异基因mRNA下调表达趋势与测序结果基本一致。分子对接预测DHRS2与HPV16 E6蛋白存在相互作用。与对照组比较,HUCEC细胞模型中HPV16 E6下调DHRS2的mRNA(P<0.01)和蛋白(P<0.05)、ETV5的蛋白(P<0.01)表达;在SiHa、CaSki细胞系中,与对照组比较,DHRS2的mRNA及蛋白表达亦明显下调(P<0.05),并与P53蛋白表达趋势正相关。结论HPV16 E6可能通过下调DHRS2表达介导宫颈细胞致癌转化,促进宫颈癌发生。 展开更多
关键词 hpv16 e6 DHRS 2 宫颈上皮细胞 致癌转化 宫颈癌
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年轻妇女子宫颈癌组织人乳头状瘤病毒16E6基因变异与序列分析 被引量：6
10
作者 胡燕 朱燕英 +2 位作者 章圣辉 朱华 帅茨霞 《中华妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期696-698,共3页
近年来，国内外报道年轻妇女宫颈癌的发病率有上升趋势，已经引起了妇科肿瘤学界的关注，而高危型人乳头状瘤病毒（human papilloma virus，HPV）亚型的持续感染是宫颈癌发生的主要原因，临床上以HPV16感染率最高。HPV16E6基因组是位于H... 近年来，国内外报道年轻妇女宫颈癌的发病率有上升趋势，已经引起了妇科肿瘤学界的关注，而高危型人乳头状瘤病毒（human papilloma virus，HPV）亚型的持续感染是宫颈癌发生的主要原因，临床上以HPV16感染率最高。HPV16E6基因组是位于HPV16全基因组早期基因区的第6个开放读码结构，在细胞癌变中起重要作用，是导致细胞转化和恶性表型维持所必需的主要转化基因。目前，已报道HPV16E6有多种型内变异体，且其分布具有明显的地域性，某些变异体与宫颈癌发病相关。 展开更多
关键词 人乳头状瘤病毒 宫颈癌组织 年轻妇女 序列分析 基因变异 hpv16e6 女子 全基因组
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HPV16E6和p53在口腔癌中的表达及相关性研究 被引量：6
11
作者 龙小佳 何力 +2 位作者 王璐 邱丽华 吴小红 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第21期2326-2329,共4页
目的探讨HPV16E6和抑癌基因p53在口腔癌中的表达,及其与口腔癌临床分期、病理分级的相关性。方法用免疫组织化学方法检测149例口腔癌、88例口腔癌癌前病变和49例癌周正常组织标本中HPV16E6和p53的表达,统计口腔癌不同临床分期和病理分级... 目的探讨HPV16E6和抑癌基因p53在口腔癌中的表达,及其与口腔癌临床分期、病理分级的相关性。方法用免疫组织化学方法检测149例口腔癌、88例口腔癌癌前病变和49例癌周正常组织标本中HPV16E6和p53的表达,统计口腔癌不同临床分期和病理分级中HPV16E6和p53的阳性表达率。结果口腔癌组织、口腔癌癌前病变组织和口腔癌癌周正常组织中HPV16E6的阳性表达率分别为79.9%(119/149)、38.6%(34/88)和2.0%(1/49),p53的阳性表达率分别为24.2%(36/149)、55.7%(49/88)和91.8%(45/49)。随着临床分期和病理分级的增加,HPV16E6阳性表达率明显增加,而p53阳性表达率却明显减少(P<0.05)。结论 HPV16E6蛋白的表达升高和p53蛋白的表达降低可能会导致口腔癌的发生和发展。检测患者口腔癌组织中HPV16E6和p53的表达可用于评定口腔癌的恶性程度。 展开更多
关键词 口腔癌 hpv16e6 P53
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HPV16E6与抑癌基因p53在口腔癌中的表达及临床意义 被引量：5
12
作者 李怀奇 武和明 +2 位作者 丁旭 叶金海 吴煜农 《上海口腔医学》 CAS CSCD 2017年第6期615-618,共4页
目的 :探讨HPV16E6基因和p53基因在口腔癌中的表达,以及口腔癌的病理分级和临床分期与HPV16E6基因及p53基因的相关性。方法:纳入173例口腔癌、98例口腔癌癌前病变以及79例癌周正常组织,采用免疫组织化学方法进行HPV16E6和p53表达水平检... 目的 :探讨HPV16E6基因和p53基因在口腔癌中的表达,以及口腔癌的病理分级和临床分期与HPV16E6基因及p53基因的相关性。方法:纳入173例口腔癌、98例口腔癌癌前病变以及79例癌周正常组织,采用免疫组织化学方法进行HPV16E6和p53表达水平检测,统计口腔癌、口腔癌癌前病变、癌周正常组织以及不同病理分级和临床分期的口腔癌中HPV16E6基因及p53基因的阳性表达情况,采用SPSS21.0软件包对数据进行χ2检验。结果:在口腔癌组织中,HPV16E6的阳性表达率为81.5%(141/173),p53的阳性表达率23.7%(41/173);在口腔癌癌前病变组织中,HPV16E6的阳性表达率为39.8%(39/98),p53的阳性表达率为57.1%(56/98);在口腔癌癌周正常组织中,HPV16E6的阳性表达率为2.5%(2/79),p53的阳性表达率为89.9%(71/79)。3组中HPV16E6的阳性表达率和p53的阳性率表达存在差异,其中,HPV16E6在口腔癌中的阳性表达率显著高于其他2组(P<0.05);而口腔癌中p53的阳性表达率显著低于其他2组。随着口腔癌患者临床分期和病理分级的增加,HPV16E6阳性表达率逐渐升高,而p53的阳性表达率则显著下降(P<0.05)。结论:HPV16E6蛋白和p53蛋白在口腔癌的发生与发展过程中可能发挥十分重要的作用。 展开更多
关键词 hpv16e6 P53 口腔癌
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利用昆虫-杆状病毒表达系统制备HPV16E6蛋白 被引量：5
13
作者 郑瑾 任斐 +2 位作者 余翔 来宝长 王一理 《西北大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期775-778,共4页
目的利用昆虫-杆状病毒表达系统高效表达HPV16E6蛋白。方法将HPV16E6基因克隆入供体质粒pFastBac-HTb,然后再重组入杆状病毒基因组;用带有目的基因的杆状病毒转染昆虫(Sf-9)细胞,27℃培养72 h,收集被转染细胞,SDS-PAGE,Western-blot分... 目的利用昆虫-杆状病毒表达系统高效表达HPV16E6蛋白。方法将HPV16E6基因克隆入供体质粒pFastBac-HTb,然后再重组入杆状病毒基因组;用带有目的基因的杆状病毒转染昆虫(Sf-9)细胞,27℃培养72 h,收集被转染细胞,SDS-PAGE,Western-blot分析鉴定表达蛋白。结果SDS-PAGE分析显示所表达蛋白分子量约为24KD,Western-blot结果表明表达产物为HPV16E6蛋白。结论利用昆虫杆状病毒表达系统获得HPV16E6蛋白的高效表达。 展开更多
关键词 昆虫杆状病毒表达系统 重组DAN技术 hpv16e6
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HPV16 E6小干扰RNA与宫颈癌细胞中E6 p53 p21关系的研究 被引量：4
14
作者 官立丽 彭芝兰 牛晓宇 《中国实用妇科与产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期517-519,共3页
目的探讨HPV16E6小干扰RNA(siRNA)与宫颈癌CaSki细胞中E6、p53、p21之间的关系。方法2004年9月至2005年3月于四川大学华西第二医院,应用化学合成针对HPV16E6的siRNA借脂质体转染CaSki细胞,实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和流... 目的探讨HPV16E6小干扰RNA(siRNA)与宫颈癌CaSki细胞中E6、p53、p21之间的关系。方法2004年9月至2005年3月于四川大学华西第二医院,应用化学合成针对HPV16E6的siRNA借脂质体转染CaSki细胞,实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和流式细胞术检测E6siRNA转染前后细胞中HPV16E6、p53、p21mRNA及其蛋白表达的变化。结果转染24h,E6mRNA的表达显著低于空白组(P<0.05)。各时间点p53、p21mRNA的表达差异无显著性意义(P>0.05)。转染48h,E6蛋白表达明显下调,p53、p21蛋白表达相应升高。结论HPV16E6siRNA能特异、高效地沉默宫颈癌细胞E6mRNA的表达,减少对野生型p53的降解,恢复p53蛋白的功能活性。RNA干扰(RNAi)技术可为HPV感染相关性疾病提供一种新的特异性基因治疗方法。 展开更多
关键词 siRNA 宫颈癌 hpv16 e6 实时荧光定量RT-PCR P53 P21
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宫颈鳞癌组织中HPVE6与野生型p53和PinX1表达的关系及其临床意义 被引量：5
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作者 王婉 黄团明 +2 位作者 王滨 闫晓欢 郑英如 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期782-786,共5页
目的探讨宫颈鳞癌、宫颈鳞癌癌旁及正常宫颈组织中HPV E6、野生型p53及Pin X1表达及其关系。方法收集第三军医大学大坪医院野战外科研究所妇产科2013年3月至2014年2月17例宫颈鳞癌患者宫颈鳞癌、宫颈鳞癌癌旁组织,选取10例正常宫颈组织... 目的探讨宫颈鳞癌、宫颈鳞癌癌旁及正常宫颈组织中HPV E6、野生型p53及Pin X1表达及其关系。方法收集第三军医大学大坪医院野战外科研究所妇产科2013年3月至2014年2月17例宫颈鳞癌患者宫颈鳞癌、宫颈鳞癌癌旁组织,选取10例正常宫颈组织作为对照。采用Real-Time PCR、Western blot、免疫组织化学方法检测3组组织中HPV E6、野生型p53和Pin X1的mRNA、蛋白的表达及分布。结果宫颈鳞癌组织中mRNA及蛋白水平结果均显示HPV E6的表达水平显著高于癌旁组织(P<0.01),而野生型p53和Pin X1的表达水平明显低于癌旁及正常组织(P<0.05)。相关性分析提示:宫颈鳞癌组织中野生型p53(R=-0.605,P<0.01)和Pin X1(R=-0.496,P<0.05)表达水平的下降与HPV E6的表达水平升高存在负相关,野生型p53与Pin X1的表达呈正相关(R=0.824,P<0.01)。结论宫颈鳞癌组织中HPV E6表达上调与野生型p53、Pin X1的表达负相关,Pin X1的表达与野生型p53密切相关,HPV E6可能通过抑制野生型p53、Pin X1导致宫颈鳞癌的发生、发展。 展开更多
关键词 宫颈鳞癌 hpv e6 野生型P53 PinX1
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两株宫颈癌细胞株中HPV_(16)E_6/E_7蛋白的表达 被引量：2
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作者 范余娟 彭芝兰 牛晓宇 《现代预防医学》 CAS 2004年第4期507-508,共2页
目的 :探索及检测宫颈癌细胞株 Caski、 Si Ha细胞内 HPV1 6 (16型人乳头瘤病毒 ) E6 /E7蛋白含量 ,筛选宫颈癌基因治疗研究的合适细胞株。方法 :用间接免疫荧光染色及流式细胞术检测 Caski、 Si Ha宫颈癌细胞株中 HPV1 6 E6 、 HPV1 6E... 目的 :探索及检测宫颈癌细胞株 Caski、 Si Ha细胞内 HPV1 6 (16型人乳头瘤病毒 ) E6 /E7蛋白含量 ,筛选宫颈癌基因治疗研究的合适细胞株。方法 :用间接免疫荧光染色及流式细胞术检测 Caski、 Si Ha宫颈癌细胞株中 HPV1 6 E6 、 HPV1 6E7蛋白含量 (荧光强度值 )。结果 :Caski细胞中 HPV1 6 E6 、 HPV1 6 E7蛋白含量分别为 :2 0 .72± 6 .35、 5 6 .80± 4 .30 ;Si Ha细胞中 HPV1 6 E6 、E7蛋白含量分别为 :1.77± 0 .75、 4 9.2 7± 8.0 6。 2细胞株间 HPV1 6 E7蛋白表达量无明显差异 (P>0 .0 5 )。结论 :Caski、Si Ha宫颈癌细胞株中 HPV1 6 E6 、E7蛋白的表达是不平行的。Caski细胞适用于以 HPV1 6 E6 ,HPV1 6 E7蛋白为观察对象的研究 ,Si Ha细胞可用于 HPV1 6 E7蛋白的研究 ,但不适宜用于以 HPV1 6 E6 蛋白为观察对象的研究。 展开更多
关键词 宫颈癌 癌细胞 hpv16e6 hpv16e7 基因表达
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HPV16 E6对ZEB1介导的宫颈癌细胞上皮间质转化的促进作用 被引量：4
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作者 赵文君 左娜 +1 位作者 葛彩云 蔡红兵 《武汉大学学报（医学版）》 CAS 2018年第5期693-698,共6页
目的：探讨宫颈癌细胞中HPV16E6病毒蛋白对E盒结合锌指蛋白1（ZEB1）及其介导的上皮间质转化（EMT）的影响。方法：构建HPV16E6质粒并转染至宫颈癌细胞C33A（E6-C33A组）,同时设置Control-C33A组;设计合成靶向E6特异性shRNA,使Siha细胞... 目的：探讨宫颈癌细胞中HPV16E6病毒蛋白对E盒结合锌指蛋白1（ZEB1）及其介导的上皮间质转化（EMT）的影响。方法：构建HPV16E6质粒并转染至宫颈癌细胞C33A（E6-C33A组）,同时设置Control-C33A组;设计合成靶向E6特异性shRNA,使Siha细胞中E6低表达（shE6-Siha组）,设置Control-Siha组。划痕实验比较各组细胞迁移情况;荧光定量PCR和Western Blot检测EMT相关指标（E-cadherin、vimentin）及ZEB1的表达;生物信息学方法预测HPV16E6和ZEB1的三级结构及二者的相互作用,免疫共沉淀进行验证。结果：划痕实验显示E6-C33A组细胞迁移能力显著高于Control-C33A组;而shE6-Siha组细胞迁移能力显著低于Control-Siha组;与Control-C33A组相比,E6-C33A组中ZEB1、vimentin的表达量明显升高,E-cadherin表达则降低;与Control-Siha组相比,shE6-Siha组ZEB1、vimentin表达下降,E-cadherin表达升高。免疫共沉淀证明HPV16E6与ZEB1存在相互作用。结论：HPV16E6可促进ZEB1的表达,诱发宫颈癌细胞的EMT。 展开更多
关键词 宫颈癌 hpv16 e6 e盒结合锌指蛋白1 上皮-间质转化
原文传递
宫颈癌和癌前病变中Aurora A表达及与HPV16感染的关系 被引量：4
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作者 滑芳 谢磊 +4 位作者 李义飞 葛静 茹秀丽 刘晶 李月萍 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第35期38-41,共4页
目的探讨宫颈病变组织中Aurora A表达及与HPV-16 E6感染的关系。方法采用半定量RT-PCR方法检测204例宫颈组织中Aurora A及HPV-16 E6的表达。结果①HPV-16 E6的表达水平在CINⅡ、Ⅲ及宫颈鳞癌明显高于慢性宫颈炎和CINⅠ(P<0.05);②Aur... 目的探讨宫颈病变组织中Aurora A表达及与HPV-16 E6感染的关系。方法采用半定量RT-PCR方法检测204例宫颈组织中Aurora A及HPV-16 E6的表达。结果①HPV-16 E6的表达水平在CINⅡ、Ⅲ及宫颈鳞癌明显高于慢性宫颈炎和CINⅠ(P<0.05);②Aurora A的表达水平在CINⅡ、Ⅲ及宫颈鳞癌明显高于慢性宫颈炎和CINⅠ,但在宫颈鳞癌与CINⅡ、Ⅲ中的表达差异无统计学意义(P>0.05);③Aurora A mRNA在HPV16阳性组的表达明显高于阴性组(P<0.05)。结论 HPV-16 E6表达与宫颈病变的进展相关;Aurora A的表达与宫颈癌的发生、发展及与HPV-16感染密切相关。Aurora A有望成为宫颈癌早期诊断、治疗的生物学指标。 展开更多
关键词 宫颈癌 hpv16 e6 逆转录聚合酶链反应 AURORA A
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HPV16 E6基因在大肠杆菌中的表达 被引量：3
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作者 胡仁建 蔡家利 +5 位作者 范开 谢敏 刘卫超 吴鹏 吴敏 闫永娇 《重庆工学院学报（自然科学版）》 2009年第1期59-61,共3页
在大肠杆菌中表达HPV16 E6重组蛋白.利用自行构建的重组质粒pET28a(+)-HPV16 E6,经IPTG诱导表达HPV16 E6重组蛋白.实验结果表明,重组质粒pET28a(+)-HPV16 E6在大肠杆菌中经IPTG诱导成功表达出HPV16 E6重组蛋白.HPV16E6重组蛋白的制备为... 在大肠杆菌中表达HPV16 E6重组蛋白.利用自行构建的重组质粒pET28a(+)-HPV16 E6,经IPTG诱导表达HPV16 E6重组蛋白.实验结果表明,重组质粒pET28a(+)-HPV16 E6在大肠杆菌中经IPTG诱导成功表达出HPV16 E6重组蛋白.HPV16E6重组蛋白的制备为宫颈组织中HPV16型感染的早期诊断和宫颈癌治疗性疫苗的研制奠定了物质基础. 展开更多
关键词 hpv16e6 质粒 peT28a(+) IPTG
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siRNA抑制HPV16E6基因对鼻咽癌细胞生物学特性的影响 被引量：4
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作者 沈娜 张潜英 +2 位作者 陈鸿雁 余晓燕 叶琳 《重庆医学》 CAS CSCD 2008年第20期2263-2265,共3页
目的通过RNA干扰(RNA interfering,RNAi)技术干扰E6癌基因的表达,探讨小干扰RNA(small interferirngRNA,siRNA)对鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)HNE-1细胞生物学特性的影响。方法针对人乳头瘤病毒(humanpapilloma vinus,HPV)16 E... 目的通过RNA干扰(RNA interfering,RNAi)技术干扰E6癌基因的表达,探讨小干扰RNA(small interferirngRNA,siRNA)对鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)HNE-1细胞生物学特性的影响。方法针对人乳头瘤病毒(humanpapilloma vinus,HPV)16 E6基因设计合成4条siRNA,利用lipofectamineTM2000脂质体转染鼻咽癌HNE-1细胞。通过半定量逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)及Western blot检测转染后细胞E6 mRNA和蛋白变化,采用MTT检测转染后癌细胞的生长增殖情况,流式细胞仪PI染色法检测细胞的凋亡率。结果转染有效siRNA后,PT-PCR及Western blot结果显示,HNE-1细胞E6基因mRNA和蛋白的表达明显降低,抑制率分别为66.3%、56.7%。MTT法检测显示,细胞的生长增殖受到明显抑制。流式细胞仪检测细胞凋亡,发现凋亡率增加。结论siRNA可以有效干扰鼻咽癌HNE-1细胞内HPV16E6基因的表达,从而诱导肿瘤细胞的凋亡。 展开更多
关键词 SIRNA hpv16e6 RNAI 凋亡 鼻咽癌
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