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ALDH2基因导入对K562细胞增殖和抗氧化损伤的影响 被引量:6
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作者 王季石 胡秀英 +4 位作者 方琴 谢建琼 杨远 崔欣 柴柏胜 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期721-725,共5页
目的 克隆人乙醛脱氢酶2(ALDH2)基因,研究ALDH2基因导入慢性粒细胞白血病细胞系K562细胞后对其增殖和抗氧化损伤的影响.方法 从肝细胞中克隆人ALDH2基因,构建真核表达载体,用脂质体法将其导入K562细胞中,用RT-PCR和Western blot法检测... 目的 克隆人乙醛脱氢酶2(ALDH2)基因,研究ALDH2基因导入慢性粒细胞白血病细胞系K562细胞后对其增殖和抗氧化损伤的影响.方法 从肝细胞中克隆人ALDH2基因,构建真核表达载体,用脂质体法将其导入K562细胞中,用RT-PCR和Western blot法检测ALD-H2基因的表达,锥虫蓝拒染法和MTT法检测转基因组细胞的增殖水平及对氧自由基引起的氧化损伤的反应;在此基础上,利用RT-PCR以及荧光分光光度法进一步检测氧自由基诱导后转基因组细胞中血红素加氧酶-1(HO-1)的表达和细胞内活性氧类(ROS)的产生.结果 成功克隆人ALDH2基因并将构建的真核表达载体转染K562细胞,RT-PCR和Western blot法检测到ALDH2的高表达.锥虫蓝拒染法和MTT结果显示转基因组细胞增殖水平明显高于对照组(P<0.05),经基因修饰的细胞对H2O2耐受性增高,H2O2的IC50值提高了7.8倍(IC50值分别为12.3μnol/L和1.4 μmol/L,P<0.01).HO-1的表达和ROS的产生随H2O2浓度的增大而增加,而一定浓度H2O2诱导后HO-1的表达和ROS的产生在转基因组中显著低于对照组(P<0.05).结论 ALDH2基因导人K562细胞后可增加对氧自由基引起的细胞损伤的耐受性,起到保护作用,该过程伴随着ROS水平以及HO-1表达的降低. 展开更多
关键词 基因 ALDH2 K562细胞 转导 遗传 氧化损伤 基因 ho-1 活性氧类
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HO-1基因启动子微卫星多态性与COPD易感性的研究 被引量:3
2
作者 马志明 张珍祥 +1 位作者 韩泽民 徐永建 《西安外事学院学报》 2007年第1期97-101,共5页
目的:探讨HO-1启动子微卫星多态性与COPD易感性的关系。方法:应用PCR技术结合聚丙烯酰胺凝胶电泳及硝酸银染色,根据年龄组及吸烟史对57例COPD患者和44例非COPD人群血红素加氧酶-1(HO-1)启动子微卫星多态性进行分析。结果:COPD组HO-1基... 目的:探讨HO-1启动子微卫星多态性与COPD易感性的关系。方法:应用PCR技术结合聚丙烯酰胺凝胶电泳及硝酸银染色,根据年龄组及吸烟史对57例COPD患者和44例非COPD人群血红素加氧酶-1(HO-1)启动子微卫星多态性进行分析。结果:COPD组HO-1基因启动子(GT)n大量重复序列(n】30)(L型等位基因)的频率(0.2105)显著高于对照组(0.0909)(P【0.05)而(GT)n小量重复序列(n【25)(S型等位基因)的频率(0.3158)显著低于对照组(0.4545)(P【0.05)。不同年龄组以及在吸烟指数【31PY时,两组人群HO-1启动子微卫星多态性分布未发现显著性差异(P】0.05),但当吸烟指数≥31PY时,COPD组L型等位基因频率显著高于对照组(P【0.05)。结论:①HO-1启动子(GT)n大量重复序列可能与大量吸烟人群的COPD易感性有关,可能在一定程度上参与了COPD的发病机制。②HO-1基因启动子微卫星多态性可作为一种遗传标记用于早期发现对COPD易感的高风险吸烟人群,对于预防COPD的发展具有重要意义。 展开更多
关键词 ho-1基因 微卫星多态性 COPD 易感性
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TNF-αⅠ型受体对小鼠脑血管内皮细胞iNOS和HO-1基因表达的影响 被引量:3
3
作者 张洁 邱劲 +4 位作者 娄晋宁 王小明 斯琴 吴其夏 郭恒怡 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2005年第6期507-511,共5页
目的探讨TNFαⅠ型受体(TNFR1)对小鼠脑血管内皮细胞iNOS、HO1基因表达水平的影响。方法体外培养TNFR1基因敲除的小鼠脑血管内皮细胞(BVECTNFR1)和野生型小鼠脑血管内皮细胞(BVEC),分别给予5ngmLTNFα刺激24h后,用实时荧光定量PCR技术及... 目的探讨TNFαⅠ型受体(TNFR1)对小鼠脑血管内皮细胞iNOS、HO1基因表达水平的影响。方法体外培养TNFR1基因敲除的小鼠脑血管内皮细胞(BVECTNFR1)和野生型小鼠脑血管内皮细胞(BVEC),分别给予5ngmLTNFα刺激24h后,用实时荧光定量PCR技术及Westernblot方法检测两种细胞iNOS基因和HO1mRNA和蛋白表达量。结果给予TNFα刺激后,iNOSmRNA和蛋白表达仅在野生型脑血管内皮细胞内明显增高,而在受体敲除脑血管内皮细胞无明显变化。HO1mRNA和蛋白表达量在野生型小鼠脑血管内皮细胞和受体敲除小鼠脑血管内皮细胞均明显增高。结论TNFα可能作用于脑血管内皮细胞TNFR1,增加iNOS表达,HO1表达增高并非由TNFR1介导,而由TNFα的其他受体介导。 展开更多
关键词 脑血管内皮细胞 TNF-Α ho-1 Ⅰ型受体 小鼠 实时荧光定量PCR技术 TNFR1 基因表达水平 WESTEM INOS基因 mRNA iNOS表达 野生型 基因敲除 体外培养 blot 蛋白表达 受体介导 表达量 24h 种细胞 增高 细胞内
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70周龄长顺绿壳蛋鸡HO-1基因在不同组织中表达差异研究 被引量:3
4
作者 卜小雁 李辉 +3 位作者 施晓丽 师新彩 赵忠海 陈林 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第6期1762-1768,共7页
为研究HO-1基因在70周龄长顺绿壳蛋鸡不同组织中的表达差异,选取70周龄长顺绿壳蛋鸡9只(每种基因型3只),采集每只鸡的大脑、肝脏、肾脏、卵巢、输卵管和子宫组织,提取其总RNA进行反转录,利用实时荧光定量PCR方法检测样品中HO-1基因的表... 为研究HO-1基因在70周龄长顺绿壳蛋鸡不同组织中的表达差异,选取70周龄长顺绿壳蛋鸡9只(每种基因型3只),采集每只鸡的大脑、肝脏、肾脏、卵巢、输卵管和子宫组织,提取其总RNA进行反转录,利用实时荧光定量PCR方法检测样品中HO-1基因的表达水平,比较同一组织不同基因型及同一基因型不同组织间HO1基因mRNA的表达差异。结果表明,在同一组织不同基因型及同一基因型不同组织间HO-1基因的表达存在差异;其中HO-1基因在肝脏中表达量最高,且3种基因型间肝脏表达量存在极显著差异(P<0.01);白壳蛋鸡子宫中HO-1基因表达量极显著高于其他两种(P<0.01),纯合绿壳蛋鸡与杂合绿壳蛋鸡无显著差异(P>0.05)。 展开更多
关键词 长顺绿壳蛋鸡 ho-1基因 表达 实时荧光定量PCR
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体外诱导K562细胞尼洛替尼耐药及其机制的初步探讨 被引量:3
5
作者 王季石 杨畅 +6 位作者 方琴 韦四喜 陈埕 杨远 王娅婷 胡秀英 马丹 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期906-910,共5页
目的体外建立对尼洛替尼(nilotinib)耐药的白血病细胞株,并初步探讨其耐药机制。方法以尼洛替尼浓度递增的方法诱导人白血病细胞系K562细胞对其产生耐药株,命名为K562-RN,MTr法确定其耐药倍数。流式细胞术检测细胞凋亡。采用荧光... 目的体外建立对尼洛替尼(nilotinib)耐药的白血病细胞株,并初步探讨其耐药机制。方法以尼洛替尼浓度递增的方法诱导人白血病细胞系K562细胞对其产生耐药株,命名为K562-RN,MTr法确定其耐药倍数。流式细胞术检测细胞凋亡。采用荧光原位杂交(FISH)法检测K562-RN细胞中bcr-abl融合基因表达。实时荧光定量PCR(RQ—PCR)和Westernblot法检测bcr-abl、HO-1、mdrl、Bcl-2和caspase-3mRNA和相关蛋白在耐药和敏感细胞中的表达。结果成功建立了针对尼洛替尼耐药的人白血病细胞株K562-RN。尼洛替尼对K562、K562-RN细胞的半数抑制浓度(IC50值)分别为(12.320±1.720)μmol/L和(24.742±2.310)μmol/L,K562-RN细胞相对于K562细胞的耐药倍数为2.01倍,且对阿霉素、高三尖杉酯碱、鬼臼乙叉甙和伊马替尼具有不同程度的交叉耐药性。在不同浓度尼洛替尼诱导下,K562-RN细胞凋亡率均较K562细胞明显下降。FISH法分析结果显示K562-RN细胞中bcr—abl融合基因阳性率为92%。K562一RN细胞中bcr—ab1、HO-1mRNA及其相应蛋白高表达,而促凋亡基因caspase-3mRNA及蛋白呈低表达,与K562细胞相比表达水平差异有统计学意义(P〈0.05),多药耐药基因mdrl及其编码蛋白P—gP在K562-RN细胞中呈高表达。结论通过药物浓度递增法成功建立了对尼洛替尼耐药的人白血病细胞株K552一RN,初步探讨了其耐药机制可能与bcr-abl、HO-1及mdrl高表达,同时下调caspase-3mRNA及其蛋白的表达有关。 展开更多
关键词 尼洛替尼 K562细胞 抗药性 基因 ho-1
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血红素加氧酶–1促进萝卜芽苗菜下胚轴花青苷积累 被引量:3
6
作者 刘媛媛 陈沁 +3 位作者 李娜 田纪元 谢彦杰 崔瑾 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期507-514,共8页
以萝卜(Raphanus sativus L.)芽苗菜为材料,在白光下外源添加与血红素加氧酶–1(HO-1)相关的试剂为处理,以加水为对照,探究HO-1对花青苷合成的影响。结果表明,各个处理均不影响芽苗的鲜质量。与对照相比,添加HO-1诱导剂(Hemin)后下胚轴... 以萝卜(Raphanus sativus L.)芽苗菜为材料,在白光下外源添加与血红素加氧酶–1(HO-1)相关的试剂为处理,以加水为对照,探究HO-1对花青苷合成的影响。结果表明,各个处理均不影响芽苗的鲜质量。与对照相比,添加HO-1诱导剂(Hemin)后下胚轴中花青苷含量显著升高,HO-1抑制剂(ZnPP)及血红素降解产物(BR、CO、Fe^(2+))处理下花青苷含量均有所下降,其中抑制剂ZnPP处理后下降最多;经诱导剂Hemin处理后HO-1及花青苷合成途径中的调控基因PAP1和关键结构基因PAL、CHS、CHI、F3H、DFR的表达量以及PAL酶活性与对照相比都有显著提高。由此表明,血红素加氧酶–1(HO-1)通过上调花青苷合成途径关键基因表达量促进花青苷积累。 展开更多
关键词 萝卜芽苗菜 血红素加氧酶–1 花青苷 合成 基因表达
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siRNA抑制牛子宫内膜上皮细胞Nrf2基因的表达研究 被引量:1
7
作者 胡修忠 程蕾 +6 位作者 余婕 向敏 夏瑜 陶弼菲 周源 王定发 熊海谦 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第6期1567-1575,共9页
为探讨核因子E2相关因子(nuclear factor E2 related factor,Nrf2)基因沉默及激活后对牛子宫内膜上皮细胞的影响,本试验利用小分子干扰(siRNA)技术及Nrf2的激动剂叔丁基对苯二酚(tBHQ),分别从Nrf2基因的下调和上调表达来研究Nrf2对牛子... 为探讨核因子E2相关因子(nuclear factor E2 related factor,Nrf2)基因沉默及激活后对牛子宫内膜上皮细胞的影响,本试验利用小分子干扰(siRNA)技术及Nrf2的激动剂叔丁基对苯二酚(tBHQ),分别从Nrf2基因的下调和上调表达来研究Nrf2对牛子宫内膜上皮细胞中血红素加氧酶-1(HO-1)和Homebox A10(HOXA10)基因表达的影响。结果显示,经实时荧光定量PCR方法检测,在设计的2条siRNA序列(siRNA-1209和siRNA-1672)中,siRNA-1672在终浓度为75 nmol/L、作用时间24 h时抑制效果较好,抑制效率在80%以上;经Western blotting方法检测,Nrf2蛋白表达水平在转染后96 h极显著下降(P<0.01),而HO-1和HOXA10的mRNA表达量分别下降了60%和70%(P<0.01),蛋白表达量在96 h后极显著或显著下降(P<0.01;P<0.05)。此外,经CCK8方法检测,Nrf2基因表达沉默后,牛子宫内膜上皮细胞增殖能力减弱。而在tBHQ激活Nrf2试验中,经Western blotting方法检测,tBHQ终浓度为30μmol/L时Nrf2蛋白表达量最高,极显著高于对照组(P<0.01),且HO-1和HOXA10的蛋白表达量与对照组相比也明显上升。结果表明,本试验设计的siRNA-1672能特异性地抑制牛子宫内膜上皮细胞Nrf2的表达,而抑制Nrf2的表达会导致牛子宫内膜上皮细胞增殖能力下降,且Nrf2对牛子宫内膜上皮细胞HO-1和HOXA10基因表达存在调控作用。 展开更多
关键词 RNA干扰 子宫内膜上皮细胞 Nrf2基因 ho-1基因 hoXA10基因
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腺病毒介导HO-1基因转染对大鼠慢性移植肾病预防作用的实验研究 被引量:1
8
作者 戴卫华 吴雄飞 金锡御 《中华泌尿外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第S2期88-91,共4页
目的探讨腺病毒介导HO-1基因转染对大鼠慢性移植肾病的预防作用。方法46只大鼠(F34420只,Lewis26只)分为3组:假手术组(Lewis6只,左肾单肾切除)、转空载体组(10只F344供肾给Lewis大鼠,转Ad腺病毒液)、转基因组(10只F344供肾给Lewis大鼠,... 目的探讨腺病毒介导HO-1基因转染对大鼠慢性移植肾病的预防作用。方法46只大鼠(F34420只,Lewis26只)分为3组:假手术组(Lewis6只,左肾单肾切除)、转空载体组(10只F344供肾给Lewis大鼠,转Ad腺病毒液)、转基因组(10只F344供肾给Lewis大鼠,转Ad-HO-1腺病毒)。术后1、2、3、4周WB法检测肾脏HO-1表达情况,术后4、8、12、16周检测血肌酐含量、术后16周比较大鼠体重、肾脏病理评分,免疫组化染色分析血管平滑肌α肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β1(TGF-β1)及血小板衍生生长因子B(PDGF-B)。结果3组间大鼠体重差异无统计学意义,假手术组血肌酐含量无显著变化,转基因组血肌酐含量升高程度低于转空载体组;HO-1蛋白在转染后1、2周表达最强,3、4周时逐渐减弱;转基因组病理Banff评分显著好于转空载体组;转基因组α-SMA、TGF-β1和PDGF-B表达吸光度值为(1.475±0.044)、(1.494±0.0.63)和(1.589±0.075),显著低于转空载体组。结论重组腺病毒介导HO-1基因转染对大鼠慢性移植肾病具有较好的预防作用,其机理可能与HO-1抑制α-SMA重塑及降低TGF-β、PDGF-B表达、抑制肾脏纤维化有关。 展开更多
关键词 血红蛋白氧化酶-1 基因转染 慢性移植肾病
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德州驴HO-1基因生物信息学分析及多克隆抗体制备
9
作者 胡乐玉 胡欣瑶 +6 位作者 李颖 赵盛淼 沈凤臻 王长法 李亮亮 王彤彤 任慧英 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期1499-1510,共12页
【目的】克隆德州驴血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)基因,对其进行原核表达及多克隆抗体制备,同时检测HO-1基因在德州驴不同组织中的表达情况,为后期研究HO-1基因功能提供支撑材料。【方法】参考GenBank中公布的马HO-1基因序列(... 【目的】克隆德州驴血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)基因,对其进行原核表达及多克隆抗体制备,同时检测HO-1基因在德州驴不同组织中的表达情况,为后期研究HO-1基因功能提供支撑材料。【方法】参考GenBank中公布的马HO-1基因序列(登录号:XM_023631135.1)设计特异性引物,从驴原代肺泡巨噬细胞(donkey primary alveolar macrophages,DPAMs)中提取RNA,反转录为cDNA后进行PCR扩增HO-1基因编码区(coding sequences,CDS),对测序所获序列与其他物种进行相似性比对并构建系统进化树;应用多种在线软件对HO-1基因编码蛋白进行生物信息学分析。将HO-1基因序列克隆至pCold-SUMO载体进行原核表达,经镍柱亲和层析纯化后,以重组的HO-1蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,利用ELISA和Western blotting检测多克隆抗体特异性及与抗原结合的最大稀释度。利用免疫组化试验检测德州驴4种组织中HO-1蛋白的表达水平。【结果】德州驴HO-1基因CDS区全长873 bp,编码290个氨基酸,其氨基酸序列与马的相似性最高,亲缘关系最近,与鸡的相似性最低,亲缘关系最远。德州驴HO-1蛋白是一种不稳定的亲水性蛋白,分子质量为33.04 ku,无信号肽,存在1个跨膜区,二级结构以α-螺旋为主。ELISA、Western blotting结果显示,针对HO-1制备的多克隆抗体与HO-1结合最大的稀释度为1∶102400,宿主HO-1蛋白可被制备的多克隆抗体识别。免疫组化结果显示,德州驴4种组织中均有效表达HO-1蛋白。【结论】本研究成功获得德州驴HO-1重组蛋白,并制备特异性多克隆抗体,为后续深入探究HO-1基因在马属动物感染病原过程中的作用提供参考依据。 展开更多
关键词 德州驴 ho-1基因 原核表达 多克隆抗体 组织表达
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HO-1 siRNA表达载体的构建及其稳定转染SGC7901细胞系的建立 被引量:1
10
作者 张涛 白芳云 白飞虎 《东南大学学报(医学版)》 CAS 2012年第5期542-545,共4页
目的:构建携带绿色荧光蛋白的HO-1基因siRNA表达载体,通过将载体转染入胃癌细胞株SGC7901筛选稳定转染细胞株。方法:参照前期工作,构建可用于筛选阳性克隆并带有绿色荧光的HO-1基因siRNA表达载体,采用脂质体转染法将载体转入SGC7901细胞... 目的:构建携带绿色荧光蛋白的HO-1基因siRNA表达载体,通过将载体转染入胃癌细胞株SGC7901筛选稳定转染细胞株。方法:参照前期工作,构建可用于筛选阳性克隆并带有绿色荧光的HO-1基因siRNA表达载体,采用脂质体转染法将载体转入SGC7901细胞中,并用G418进行阳性克隆筛选,获得稳定转染细胞系。结果:经酶切和测序验证,证实表达载体构建成功,将HO-1 siRNA表达载体转入SGC7901后,通过G418筛选获得稳定转染细胞系,经检测HO-1的表达水平明显低于为未转染的细胞。结论:本实验成功地构建了HO-1基因siRNA表达载体,筛选出HO-1基因沉默的稳定转染胃癌细胞系,为今后研究HO-1基因的作用机制提供了实验基础。 展开更多
关键词 胃癌 ho-1基因 SIRNA
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携带人血红素氧合酶-1基因重组腺病毒的构建及鉴定
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作者 姜大春 何国祥 +3 位作者 刘建平 张倩 唐兵 李德 《西南国防医药》 CAS 2009年第6期570-572,共3页
目的:构建人血红素氧合酶-1(hHO-1)重组腺病毒,为基因治疗心肌细胞缺氧性损伤提供可能。方法:将hHO-1 cDNA克隆于腺病毒穿梭质粒pSGCMV,得到重组质粒pSGCMV-hHO-1。采用位点特异性重组系统(Cre/Loxp)将pSGCMV-hHO-1与腺病毒骨架载体pBHG... 目的:构建人血红素氧合酶-1(hHO-1)重组腺病毒,为基因治疗心肌细胞缺氧性损伤提供可能。方法:将hHO-1 cDNA克隆于腺病毒穿梭质粒pSGCMV,得到重组质粒pSGCMV-hHO-1。采用位点特异性重组系统(Cre/Loxp)将pSGCMV-hHO-1与腺病毒骨架载体pBHGloxP△ E3通过Lipofectamine 2000共转染至293细胞,生成带有hHO-1基因的重组腺病毒载体Ad-hHO-1。重组腺病毒质粒在293细胞中扩增,氯化铯梯度离心纯化。结果:经酶切鉴定和测序证实载体构建的正确性,病毒滴度为2.0×1010pfu/ml。结论:成功构建带有hHO-1 cDNA的重组腺病毒,可用于对心肌细胞缺氧性损伤的基因治疗研究。 展开更多
关键词 重组腺病毒 载体 血红素氧合酶-1 基因 构建 鉴定
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腺病毒介导HO-1基因转染肾小管上皮细胞及对PBMC增殖影响的实验研究 被引量:1
12
作者 戴卫华 吴雄飞 金锡御 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第17期1756-1758,共3页
目的观察Ad-HO-1感染对HK-2细胞存活率的影响,探讨表达目的蛋白血红素氧化酶-1(HO-1)的HK-2细胞能否有效降低外周血单个核细胞(peripheral blood monoeuclear cell,PBMC)增殖反应活性。方法 Ad-HO-1按感染强度(multiplicity of infectio... 目的观察Ad-HO-1感染对HK-2细胞存活率的影响,探讨表达目的蛋白血红素氧化酶-1(HO-1)的HK-2细胞能否有效降低外周血单个核细胞(peripheral blood monoeuclear cell,PBMC)增殖反应活性。方法 Ad-HO-1按感染强度(multiplicity of infection,MOI)100、200和400分别转染人肾小管上皮细胞株(HK-2)3 h,转染2 d后观察绿色荧光蛋白的表达,转染2、4 d后进行活细胞计数(台盼蓝染色法)。激光共聚焦法检测HO-1和GFP蛋白在HK-2中的表达,WesternBlot检测HK-2细胞HO-1蛋白表达,3H-TdR法检测HK-2转染后抑制PBMC增殖能力。结果重组腺病毒Ad-HO-1(MOI200)感染HK-2细胞2 d后90%的细胞表达绿色荧光,2、4 d时活细胞百分率与对照组无显著差异。激光共聚焦检测表达GFP的细胞均表达HO-1蛋白,位置分布基本一致。Western blot检测显示HK-2感染Ad-HO-1后有能与HO-1单抗特异性结合的蛋白免疫印迹条带,对PBMC增殖能力有显著抑制作用。结论 Ad-HO-1能介导HO-1目的蛋白的表达,具有抑制PBMC增殖的生物学活性。 展开更多
关键词 血红素氧化酶-1 基因转染
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合成血红素加氧酶-1-shRNA载体的实验研究
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作者 宋远见 刘红芝 +5 位作者 杨冬芝 张璞 刘志安 裴冬生 宗志敏 魏贤勇 《广东化工》 CAS 2011年第7期21-21,27,共2页
根据Genebank提供的大鼠HO-1(Hmoxl,血红素加氧酶-1)基因序列,参照RNA干扰序列设计原则,设计针对HO-1的4个RNA干扰序列,定向克隆至表达载体pGPU6-GFP-Neo中,最后采用BamH I和Pst I酶切凝胶电泳鉴定。鉴定结果显示成功合成了荷载HO-1-sh... 根据Genebank提供的大鼠HO-1(Hmoxl,血红素加氧酶-1)基因序列,参照RNA干扰序列设计原则,设计针对HO-1的4个RNA干扰序列,定向克隆至表达载体pGPU6-GFP-Neo中,最后采用BamH I和Pst I酶切凝胶电泳鉴定。鉴定结果显示成功合成了荷载HO-1-shRNA的表达载体。 展开更多
关键词 合成 ho-1基因 SHRNA表达质粒
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转染血红素氧化酶-1基因大鼠肝细胞系BRL体外抗凋亡作用
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作者 陈国勇 曲青山 +1 位作者 孙建军 钱建民 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2006年第4期713-715,共3页
目的:探讨血红素氧化酶1(hemeoxygenase,HO1)基因转染对大鼠肝细胞系BRL的抗凋亡作用。方法:体外培养的BRL细胞转染HO1基因后(对照组采用转染空载体pcDNA3的BRL细胞),应用RTPCR检测肝细胞系BRL中HO1基因的表达。用肿瘤坏死因子α(TNFα... 目的:探讨血红素氧化酶1(hemeoxygenase,HO1)基因转染对大鼠肝细胞系BRL的抗凋亡作用。方法:体外培养的BRL细胞转染HO1基因后(对照组采用转染空载体pcDNA3的BRL细胞),应用RTPCR检测肝细胞系BRL中HO1基因的表达。用肿瘤坏死因子α(TNFα)刺激细胞,采用流式细胞仪(FACS)进行细胞计数,TUNEL染色等方法检测细胞的凋亡情况。结果:转染的肝细胞系BRL中均有HO1mRNA表达。转染HO1的BRL细胞经TNFα诱导凋亡后,细胞凋亡率(55.42%±3.12%)明显低于同等刺激下转染pcDNA3的BRL细胞(81.29%±3.08%)(P<0.05)。结论:BRL肝细胞系中HO1表现出较强的抗凋亡能力,为以细胞凋亡为主要病理表现的肝脏缺血再灌注损伤的临床治疗提供了新思路。 展开更多
关键词 血红素氧化酶-1基因 凋亡 肿瘤坏死因子 转染 大鼠
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脂多糖对离体大鼠胸主动脉和肺组织HO-1mRNA及蛋白表达的影响
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作者 刘源 吴新民 +1 位作者 刘莉平 朱姜华 《中华麻醉学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期108-111,共4页
目的 观察离体大鼠胸主动脉和肺组织脂多糖(Lipopoysaccharide,LPS)孵育后血红素氧合酶-1(HO-1)mRNA及蛋白表达时间依从性的变化。方法24只Wistar大鼠颈椎脱臼处死,取其胸主动脉和肺组织,随机分成四组:对照组(n=6),实验组包括LPS3... 目的 观察离体大鼠胸主动脉和肺组织脂多糖(Lipopoysaccharide,LPS)孵育后血红素氧合酶-1(HO-1)mRNA及蛋白表达时间依从性的变化。方法24只Wistar大鼠颈椎脱臼处死,取其胸主动脉和肺组织,随机分成四组:对照组(n=6),实验组包括LPS3、8、24组(均为n=6),分别与LPS(1μg/ml)孵育3、8、24h。采用蛋白免疫杂交(Western blot)和半定量聚合酶链反应(RT-PCR)分别测定HO-1蛋白和mRNA表达。结果 与对照组相比,胸主动脉HO-1蛋白表达LPS3组即达最高值(P<0.05),LPS8和LPS24组仍处于较高水平(P<0.05);肺组织HO-1蛋白表达LPS3组已开始升高(P<0.05),LPS8组达最高水平(P<0.01),LPS24组有下降趋势,但仍与对照组有差异(P<0.05)。与对照组相比,胸主动脉HO-1mRNA表达LPS3组即达最高值(P<0.05),LPS8组较LPS3组无明显变化(P>0.05),而LPS24组则恢复至初始水平;肺组织HO-1mRNA表达LPS3组开始升高(P<0.05),LPS8组达到最大值(P<0.01),LPS24组回到基础水平(P>0.05)。结论 脂多糖可以明显促进大鼠胸主动脉和肺组织HO-1mRNA及蛋白表达,且两种组织表现出不同的时间依从性变化,可能与感染性休克体肺循环不同变化的病生理机制有关。 展开更多
关键词 感染性休克 实验研究 病理生理 脂多糖 离体大鼠 胸主动脉 肺组织 ho-1mRNA 蛋白表达
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搜风祛痰法对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化不稳定斑块HO-1和TLR4表达的影响 被引量:5
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作者 魏伟超 宫丽鸿 安毅 《中国中医急症》 2014年第7期1218-1221,共4页
目的观察搜风祛痰中药复方稳斑汤对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化(AS)不稳定斑块动物模型的影响。方法 6~8周龄ApoE基因敲除小鼠制备AS不稳定斑块模型,分别给予阿托伐他汀以及不同剂量稳斑汤干预1个月,正常组采用生理盐水灌胃1个月。... 目的观察搜风祛痰中药复方稳斑汤对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化(AS)不稳定斑块动物模型的影响。方法 6~8周龄ApoE基因敲除小鼠制备AS不稳定斑块模型,分别给予阿托伐他汀以及不同剂量稳斑汤干预1个月,正常组采用生理盐水灌胃1个月。取小鼠主动脉组织HE染色进行病理学观察,并采用免疫组化和RT-PCR技术检测HO-1和TLR4的表达水平。结果各组小鼠腹主动脉组织中HO-1的表达水平治疗组明显高于对照组(P<0.01),各组小鼠腹主动脉组织中TLR4的表达水平治疗组明显低于对照组(P<0.01)。结论 Apo E基因敲除小鼠AS不稳定斑块的形成与炎症因子密切相关,搜风祛痰中药复方稳斑汤可能通过调节HO-1和TLR4的表达而干预AS斑块形成及破裂。 展开更多
关键词 痰风理论论治 APOE基因敲除小鼠 AS 不稳定斑块 ho-1 TLR4
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血红素加氧酶-1基因在三氧化二砷诱导食管癌EC9706细胞凋亡过程中的表达 被引量:5
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作者 马会敏 金国平 +1 位作者 王献伟 单杰 《河南医学研究》 CAS 2007年第2期118-120,共3页
目的:检测三氧化二砷(As2O3)诱导食管癌EC9706细胞凋亡过程中血红素加氧酶-1(HO-1)基因的表达,探讨HO-1的表达与化疗药物诱导肿瘤细胞凋亡的内在联系。方法:以食管癌EC9706细胞系作为研究模型,3μmol/L AS2O3作用于EC9706细胞,镜下观察... 目的:检测三氧化二砷(As2O3)诱导食管癌EC9706细胞凋亡过程中血红素加氧酶-1(HO-1)基因的表达,探讨HO-1的表达与化疗药物诱导肿瘤细胞凋亡的内在联系。方法:以食管癌EC9706细胞系作为研究模型,3μmol/L AS2O3作用于EC9706细胞,镜下观察细胞形态变化;MTT法绘制细胞生长曲线;以RT-PCR方法检测HO-1mRNA的表达。结果:As2O3作用于EC9706细胞4 h即可检测到HO-1基因表达升高,12 h表达水平升至最高,24 h回落到正常水平。结论:As203诱导EC9706细胞凋亡过程中,HO-1基因表达升高,呈时间依赖性变化,可能起到短暂的对抗氧化应激作用。 展开更多
关键词 食管癌EC9706细胞 血红素加氧酶-1 基因表达 三氧化二砷诱导凋亡
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Ngn2调节Nrf2/HO-1对脑缺血模型大鼠脑微结构、角质细胞活性的影响 被引量:3
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作者 王明盛 崔焕喜 +4 位作者 崔红凯 裴观辉 李道广 闫海清 张平 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2023年第33期5298-5303,共6页
背景:研究显示,血红素氧化酶1(heme oxidase-1,HO-1)在脑缺血再灌注损伤中具有重要作用;核因子E2相关因子2(nuclear factor-erythroid2-related factor2,Nrf2)能减轻脑缺血再灌注损伤,其作用是通过调控下游抗氧化蛋白实现的;推测Nrf2/H... 背景:研究显示,血红素氧化酶1(heme oxidase-1,HO-1)在脑缺血再灌注损伤中具有重要作用;核因子E2相关因子2(nuclear factor-erythroid2-related factor2,Nrf2)能减轻脑缺血再灌注损伤,其作用是通过调控下游抗氧化蛋白实现的;推测Nrf2/HO-1在脑部疾病中均有一定的调控作用。目的:探究神经源素2(neurogenin 2,Ngn2)通过调节Nrf2/HO-1对脑缺血大鼠脑微结构、角质细胞活性的影响。方法:SPF级雄性SD大鼠55只,随机取10只为健康组不进行干预;其余大鼠建立脑缺血模型,将建模成功的40只大鼠随机分为4组:其中模型组大鼠脑内注射生理盐水;Ngn2组大鼠脑内注射Ngn210 mg/kg;Nrf2/HO-1组脑内注射HO-1及Nrf2激动剂莱菔硫烷各10 mg/kg;联合调节组脑内注射Ngn2并联合Nrf2/HO-1组用药,均连续给药3 d。分数各向异性图像观察脑微结构,苏木精-伊红染色观察脑组织的病理形态,TUNEL法检测神经胶质细胞凋亡,免疫印迹和PCR分别检测Nrf2、HO-1的蛋白及mRNA表达。结果与结论:(1)与健康组比较,模型组大鼠脑组织中梗死灶周围皮质、梗死核心相对分数各向异性值表达较低(P<0.05);与模型组比较,Ngn2组及Nrf2/HO-1组上述表达升高(P<0.05);联合调节组上述表达高于Ngn2组及Nrf2/HO-1组(P<0.05);(2)模型组大鼠大量损伤神经元,细胞稀疏,排列紊乱,大量浸润;Ngn2组与Nrf2/HO-1组损伤侧神经元好转,仍见神经细胞缺失紊乱及细胞黏附;联合调节组脑组织神经细胞坏死减轻,浸润改善;(3)与健康组比较,模型组大鼠神经胶质细胞凋亡较高(P<0.05);与模型组比较,Ngn2组及Nrf2/HO-1组神经胶质细胞凋亡降低(P<0.05);联合调节组神经胶质细胞凋亡低于Ngn2组及Nrf2/HO-1组(P<0.05);(4)与健康组比较,模型组大鼠脑组织Ngn2mRNA及Nrf2、HO-1的蛋白和mRNA表达较低(P<0.05);与模型组比较,Ngn2组、Nrf2/HO-1组Ngn2 mRNA及Nrf2、HO-1的蛋白和mRNA表达升高(P<0.05);联合调节组Ngn2 mRNA及Nrf2、HO-1的蛋� 展开更多
关键词 脑缺血 Ngn2基因 核因子E2相关因子2 血红素氧化酶1 Nrf2/ho-1 脑微结构 角质细胞活性
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搜风祛痰中药复方对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化不稳定斑块HO-1和PPARγ表达的影响 被引量:4
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作者 迟映雪 宫丽鸿 《中国中医急症》 2015年第1期4-6,55,共4页
目的观察搜风祛痰中药复方对Aop E基因敲除小鼠动脉粥样硬化(AS)不稳定斑块血红素氧化酶(HO-1)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的影响。方法将造模成功的Apo E基因敲除小鼠,分别给予阿托伐他汀以及低剂量、中剂量、高剂量稳斑... 目的观察搜风祛痰中药复方对Aop E基因敲除小鼠动脉粥样硬化(AS)不稳定斑块血红素氧化酶(HO-1)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的影响。方法将造模成功的Apo E基因敲除小鼠,分别给予阿托伐他汀以及低剂量、中剂量、高剂量稳斑汤干预,模型对照组采用生理盐水灌胃。给药13周后,取腹主动脉脉,取小鼠主动脉组织HE染色进行病理学观察,并采用免疫组化和RT-PCR技术检测HO-1和PPARγ的表达水平。结果各组小鼠腹主动脉组织中HO-1和PPARγ的表达水平治疗组明显高于模型对照组(P<0.01)。结论搜风祛痰中药复方稳斑汤可能通过影响HO-1和PPARγ的表达而干预AS斑块形成及破裂。 展开更多
关键词 搜风祛痰中药复方 APOE基因敲除小鼠 AS 不稳定斑块 ho-1 PPARΓ
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血红素加氧酶-1基因多态性对新生儿高胆红素血症的影响 被引量:3
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作者 王瑞 方小燕 刘杰波 《中外医疗》 2018年第4期196-198,共3页
目的血红素加氧酶(heme oxygenase,HO),其HO-1是分解亚铁血红素的重要限速酶,HO-1基因5’端(GT)n二核苷酸长度多态性对HO-1基因转录具有调控作用,对胆红素生成有重要作用,也是导致新生儿高胆红素血症的重要因素。但在不同人群中,HO-1启... 目的血红素加氧酶(heme oxygenase,HO),其HO-1是分解亚铁血红素的重要限速酶,HO-1基因5’端(GT)n二核苷酸长度多态性对HO-1基因转录具有调控作用,对胆红素生成有重要作用,也是导致新生儿高胆红素血症的重要因素。但在不同人群中,HO-1启动子基因型多态性对高胆红素血症的影响,结果却不尽相同。 展开更多
关键词 血红素加氧酶-1 新生儿高胆红素血症 (GT)n重复序列 ho-1基因启动子
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