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基于肾脏尿酸转运的中药降尿酸活性成分筛选及评价——以菊苣酸为例 被引量:13
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作者 邹丽娜 王雨 +4 位作者 姜卓希 巨珊珊 张冰 林志健 杨婷 《世界中医药》 CAS 2021年第1期28-34,共7页
目的:基于肾脏尿酸转运环节,筛选及评价中药降尿酸活性成分,为阐释中药降尿酸物质基础提供理论和技术支撑。方法:以不同灌注压力进行大鼠离体肾脏灌流,通过肾小球滤过率、尿流率、葡萄糖重吸收率、钠离子重吸收率、钾离子重吸收率等评... 目的:基于肾脏尿酸转运环节,筛选及评价中药降尿酸活性成分,为阐释中药降尿酸物质基础提供理论和技术支撑。方法:以不同灌注压力进行大鼠离体肾脏灌流,通过肾小球滤过率、尿流率、葡萄糖重吸收率、钠离子重吸收率、钾离子重吸收率等评价肾功能,建立离体肾脏模型;设置尿酸组、菊苣酸组和丙磺舒组进行离体肾脏灌流,观察肾脏尿酸排泄情况,以菊苣酸示例应用离体肾脏灌流模型;设置对照组、尿酸组、苯溴马隆组、丙磺舒组及菊苣酸组,通过蛋白免疫印迹法检测高尿酸状态下HKC细胞GLUT9蛋白表达变化,及高尿酸状态下菊苣酸干预后的表达变化,结合离体肾脏灌流技术评价降尿酸活性成分。结果:在120 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)灌注压力下离体肾功能良好;菊苣酸在20~40 min、40~60 min均能提高肾脏清除率,增加肾脏尿酸排泄分数;且菊苣酸能够显著抑制高尿酸状态下HKC细胞的GLUT9蛋白表达。结论:该研究基于肾脏尿酸转运环节,应用离体肾脏灌流技术结合体外HKC细胞筛选并评价中药降尿酸活性成分,筛选出菊苣酸可能是菊苣通过促进尿酸排泄发挥降尿酸作用的活性成分,为抗高尿酸血症药物的研发奠定实验基础,为中药的开发和临床应用提供实验依据,以更好服务于临床。 展开更多
关键词 降尿酸 活性成分 离体肾脏灌流 hkc 筛选及评价
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JAK/STAT信号途径在高糖诱导肾小管上皮细胞转分化中的作用 被引量:2
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作者 赵松 史永红 段惠军 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期217-220,共4页
目的观察JAK/STAT信号途径对高糖诱导肾小管上皮细胞转分化的影响。方法体外培养人肾近曲小管上皮细胞株(HKC),分别给予高糖和JAK抑制剂AG490干预,Western印迹检测α-SMA、E-Cadherin及STAT1、STAT3、p-STAT1和p-STAT3的表达;ELISA法测... 目的观察JAK/STAT信号途径对高糖诱导肾小管上皮细胞转分化的影响。方法体外培养人肾近曲小管上皮细胞株(HKC),分别给予高糖和JAK抑制剂AG490干预,Western印迹检测α-SMA、E-Cadherin及STAT1、STAT3、p-STAT1和p-STAT3的表达;ELISA法测定上清液中TGF-β1、I型胶原的分泌,RT-PCR检测TGF-β1mRNA表达。结果与低糖组比较,高糖培养的HKC中α-SMA、p-JAK2、p-STAT1和p-STAT3表达明显上调;E-Cadherin表达明显下调;TGF-β1mRNA表达增加;上清液中TGF-β1、Ⅰ型胶原增加。AG490明显抑制α-SMA表达升高,减轻E-Cadherin表达;降低TGF-β1mRNA表达及TGF-β1、Ⅰ型胶原的分泌。结论JAK/STAT信号途径可能参与高糖诱导HKC转分化。 展开更多
关键词 hkc 转分化 细胞外基质 TGF-Β1
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下调HIPK2基因表达促进顺铂诱导的肾小管上皮细胞HKC凋亡 被引量:2
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作者 李佳垚 吴洁 邱玲 《基础医学与临床》 CSCD 2017年第7期1031-1036,共6页
目的探讨HIPK2对顺铂诱导的人肾小管上皮细胞(HKC)凋亡的影响。方法构建顺铂诱导的HKC细胞凋亡模型,实时荧光定量PCR和Western blot检测HIPK2的表达;设计合成2条HIPK2 siRNA干扰片段,通过脂质体转染HKC细胞,建立HIPK2干扰的细胞株;实时... 目的探讨HIPK2对顺铂诱导的人肾小管上皮细胞(HKC)凋亡的影响。方法构建顺铂诱导的HKC细胞凋亡模型,实时荧光定量PCR和Western blot检测HIPK2的表达;设计合成2条HIPK2 siRNA干扰片段,通过脂质体转染HKC细胞,建立HIPK2干扰的细胞株;实时荧光定量PCR和Western blot分别检测HIPK2 mRNA和蛋白的表达;再用顺铂处理细胞,Annexin V/PI检测细胞凋亡;Western blot检测Bax表达的影响。结果顺铂呈剂量依赖性诱导的HKC细胞凋亡过程中,HIPK2 mRNA和蛋白表达水平均明显下调(P<0.05);转染siRNA后可显著降低HIPK2在HKC细胞内mRNA和蛋白的表达(P<0.05),且HIPK2表达降低后会促进顺铂诱导的HKC细胞凋亡。结论HIPK2可抑制顺铂诱导的HKC细胞凋亡。 展开更多
关键词 HIPK2 hkc 凋亡 顺铂
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JAK/STAT1信号途径在低氧诱导肾小管上皮-间质转化中的作用 被引量:4
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作者 蒲霞 郭庆喜 +3 位作者 周鹏飞 曹灵 杨成万 孙兴旺 《泸州医学院学报》 2016年第1期34-37,共4页
目的:采用低氧培养HKC细胞株,检测HKC STAT 1、α-SMA以及HIF-1α的动态表达,探讨JAK/STAT信号转导途径在低氧诱导的肾小管上皮上皮-间质转化中的作用。方法:将对数生长期HKC随机分为常规培养组(A组),常规+Flu培养组(B组),低氧培养组(C... 目的:采用低氧培养HKC细胞株,检测HKC STAT 1、α-SMA以及HIF-1α的动态表达,探讨JAK/STAT信号转导途径在低氧诱导的肾小管上皮上皮-间质转化中的作用。方法:将对数生长期HKC随机分为常规培养组(A组),常规+Flu培养组(B组),低氧培养组(C组),低氧+Flu培养组(D组)4组。C组和D组采用三气培养箱低氧培养。分别在实验第1、3、6d观察细胞形态改变情况,免疫细胞化学检测HIF-1α、α-SMA以及STAT1表达。结果 :与A、B组比较,C、D组细胞生长缓慢,随着低氧培养时间的延长,细胞形态变细长,呈梭形。HIF-1α在A、B组表达极低,C、D组表达显著增强(P<0.05),各时间点差异无统计学意义。从第3 d开始C组STAT1、α-SMA表达显著高于A组(P<0.05)。与C组相比,D组各时间点STAT1表达显著降低(P<0.05),α-SMA从第3 d开始表达明显降低(P<0.05)。结论:低氧可能通过JAK/STAT1信号通路诱导肾小管上皮细胞发生表型转化,从而促进肾间质纤维化的发展。 展开更多
关键词 肾小管上皮细胞 EMT STAT1 低氧 Α-SMA
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高糖对肾小管上皮细胞系细胞因子表达的影响 被引量:1
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作者 赵松 史永红 段惠军 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2007年第11期1236-1240,共5页
目的观察高糖诱导肾小管上皮细胞中转化生长因子β1(TGF-β1)、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏素(E-Cadherin)的改变及酪氨酸激酶(JAK)抑制剂AG490对其的影响。方法体外培养人肾近曲小管上皮细胞系(HKC),分别给予高糖和AG490干预,采用... 目的观察高糖诱导肾小管上皮细胞中转化生长因子β1(TGF-β1)、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏素(E-Cadherin)的改变及酪氨酸激酶(JAK)抑制剂AG490对其的影响。方法体外培养人肾近曲小管上皮细胞系(HKC),分别给予高糖和AG490干预,采用免疫沉淀和Western blot检测JAK2磷酸化的表达;Western blot检测α-SMA、E-cadherin及信号蛋白STAT1、STAT3等的水平;ELISA法测定细胞上清液中TGF-β1和Ⅰ型胶原的分泌;RT-PCR检测TGF-β1mRNA表达。结果与低糖组比较,高糖培养HKC中α-SMA、p-JAK2、p-STAT1和p-STAT3表达明显上调,E-Cadherin表达明显下调,TGF-β1mRNA表达增加;细胞上清液中TGF-β1、Ⅰ型胶原分泌增加。AG490明显抑制高糖刺激HKC中α-SMA表达的升高,减轻E-Cadherin表达下降程度,降低TGF-β1mRNA表达及TGF-β1、Ⅰ型胶原的分泌。结论JAK/STAT信号途径可能参与高糖诱导的HKC中TGF-β1和细胞外基质的分泌。 展开更多
关键词 人肾近曲小管上皮细胞系 细胞外基质 转化生长因子Β
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色彩准确还原——设计用显示器导购
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作者 ALONG(文/图) 《电脑知识与技术(经验技巧)》 2019年第6期51-53,共3页
在这个色彩斑斓的世界,每一幅美丽的画面都离不开设计师的努力。无论是正在学设计的大学生,还是在该领域就职的设计师,他们每天面对的学习课程、工作任务就是制图,这就要求显示器具有出色的显示效果。俗话说'术业有专攻',对于... 在这个色彩斑斓的世界,每一幅美丽的画面都离不开设计师的努力。无论是正在学设计的大学生,还是在该领域就职的设计师,他们每天面对的学习课程、工作任务就是制图,这就要求显示器具有出色的显示效果。俗话说'术业有专攻',对于设计制图用户而言,更专业的绘图显示器,不仅能够带来更好的使用体验,也会大大提升绘图工作效率。 展开更多
关键词 hkc 高分辨率
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春天里的精致与精彩——HKC H858试用心得
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作者 百变小妖 《大众硬件》 2006年第5期64-65,共2页
春天是万物复苏的季节,小花、小草、绿树、春风都显得那么优美.历经一个寒冬的储备,它们都把最美好的一面展现在我们的面前.让人心旷神怡.心动不已。惠科HKC H858可以说就像数码产品中的一缕春风.它的种种表现让我们惊奇.在细节方... 春天是万物复苏的季节,小花、小草、绿树、春风都显得那么优美.历经一个寒冬的储备,它们都把最美好的一面展现在我们的面前.让人心旷神怡.心动不已。惠科HKC H858可以说就像数码产品中的一缕春风.它的种种表现让我们惊奇.在细节方面处处流露出它的别具一格。今天.就让我们一起来感受它给我们带来的精致与精彩。 展开更多
关键词 hkc H858 数码产品 MP4 视频播放器 屏幕
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缓激肽对人角质形成细胞增殖凋亡及分化影响的实验研究
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作者 冉立伟 谭卫明 +3 位作者 谭升顺 张茹 曹振平 雷小兵 《中华烧伤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期289-292,共4页
目的观察缓激肽(BK)对体外培养的人角质形成细胞(HKC)增殖、凋亡和分化的影响并探讨其机制. 方法以1×10-4~1×10-9 mol/L BK作用于体外培养的HKC,采用噻唑蓝法、台盼蓝染色法观察到1×10-4 mol/L BK抑制作用最强,以此浓... 目的观察缓激肽(BK)对体外培养的人角质形成细胞(HKC)增殖、凋亡和分化的影响并探讨其机制. 方法以1×10-4~1×10-9 mol/L BK作用于体外培养的HKC,采用噻唑蓝法、台盼蓝染色法观察到1×10-4 mol/L BK抑制作用最强,以此浓度BK进行余下实验.当HKC达对数生长期后,一部分加入1×10-4mol/L BK作为实验组,另一部分不加BK作为对照组,分别培养24、48 h后采用流式细胞仪检测细胞早期凋亡情况及细胞周期,用链霉亲和素-生物素复合物(SABC)免疫细胞化学法检测HKC分化标志物角蛋白10(K10)及内披蛋白的表达情况.用含1×10-4mol/L BK的无血清培养基KC-SFM培养HKC作为实验组,对照组细胞仅加KC-SFM,分别用激光扫描共聚焦显微镜结合钙荧光探针Fluo-3/AM 技术检测细胞内游离Ca2+浓度即[Ca2+]i的变化. 结果与对照组比较,实验组G0/G1期细胞比例相对上升34.57%,S期相对下降58.91%,其细胞早期凋亡率为15.34%,明显高于对照组(5.60%,P<0.05).实验组HKC K10阳性细胞百分比为2.20%,明显低于对照组(6.89%,P<0.05).BK作用3 min后实验组HKC [Ca2+]i较对照组上升163.0%,之后开始下降,5 min后接近对照组.结论高浓度BK可抑制HKC周期进程、明显促进其凋亡及诱导[Ca2+]i升高,这可能是其使HKC体外生长受抑的部分机制.BK还可抑制表皮再生和HKC分化. 展开更多
关键词 缓激肽 角质形成 细胞增殖 细胞凋亡 细胞分化 hkc 角蛋白10
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无线的精彩,智能的快乐HKC智能家居系统
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作者 庄宏道 《现代音响技术》 2010年第10期-,共2页
关键词 无线 快乐 hkc
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简约朴实 HKC 2288A
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作者 悠然 黄新乐 《数码先锋》 2008年第9期52-53,共2页
HKC 2288A定位于商务应用,外观简约朴实,后置式的OSD按键设计颇有新意。除此之外,它拥有1000:1的对比度,350cd/m^2的亮度,提供D-Sub和DVI双接口。而1499元的市场低价。是其最大的卖点。
关键词 按键设计 后置式 窄边框设计 hkc 2288A 宽屏 高清影片 塑料材质 色阶 灰阶 明岩
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TURN ON YOUR RADIO Co-founder of HKCR Gavin Wong Talks About Building Communities
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作者 Bryan Grogan 《城市漫步(上海版、英文)》 2020年第2期28-29,共2页
We’ve been covering online radio more and more recently,as a number of new stations crop up around Greater China.One of the first to get off the ground was Hong Kong Community Radio(HKCR),which has been a vital stron... We’ve been covering online radio more and more recently,as a number of new stations crop up around Greater China.One of the first to get off the ground was Hong Kong Community Radio(HKCR),which has been a vital stronghold for underground music in the Fragrant Harbor since 2016.Founded by Gavin Wong,the mind behind essential Hong Kong label Absurd Trax,and Davy Law,who runs another excellent Hong Kong-based label,Neoncity Records,HKCR has become one of the most important music outlets in the Asia Pacific region.We spoke to Wong about the station. 展开更多
关键词 hkc China. TURN
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老瓶装新酒-430xp刷N2固件免卡看香港有线卫视
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作者 曾学权 《卫星电视与宽带多媒体》 2008年第5期62-64,共3页
随着2008年的到来网络上爆出了不少让卫视烧友们高兴的事情,数码反制共享的反反制插件,DM新的IMG、HKC的N2密匙公布、430N2的固件等等好不热闹,但确又是几多欢喜几多愁……我根据网络的公开软件和自己的应用体会写下此文或许对有4X0的... 随着2008年的到来网络上爆出了不少让卫视烧友们高兴的事情,数码反制共享的反反制插件,DM新的IMG、HKC的N2密匙公布、430N2的固件等等好不热闹,但确又是几多欢喜几多愁……我根据网络的公开软件和自己的应用体会写下此文或许对有4X0的朋友有所帮助。 展开更多
关键词 固件 hkc 中文版 新酒 软件 高频头 N2 卫视 卫星电视 香港
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TURN ON YOUR RADIO Co-founder of HKCR Gavin Wong Talks About Building Communities
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作者 Biyan Grogan 《城市漫步(GBA版)》 2020年第2期32-33,共2页
We’ve been covering online radio more and more recently,as a number of new stations crop up around Greater China.One of the first to get off the ground was Hong Kong Community Radio(HKCR),which has been a vital stron... We’ve been covering online radio more and more recently,as a number of new stations crop up around Greater China.One of the first to get off the ground was Hong Kong Community Radio(HKCR),which has been a vital stronghold for underground music in the Fragrant Harbor since 2016.Founded by Gavin Wong,the mind behind essential Hong Kong label Absurd Trax,and Davy Law,who runs another excellent Hong Kong-based label,Neoncity Records,HKCR has become one of the most important music outlets in the Asia Pacific region.We spoke to Wong about the station. 展开更多
关键词 hkc China. TURN
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雷公藤内酯醇对人肾小管上皮细胞抗原呈递功能的影响 被引量:27
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作者 李恒 刘志红 +2 位作者 戴春笋 刘栋 黎磊石 《肾脏病与透析肾移植杂志》 CAS CSCD 2001年第4期303-308,共6页
目的 :观察雷公藤内酯醇对炎症因子刺激下人肾近端小管上皮细胞 (HKC细胞 )抗原呈递能力和共刺激分子表达的影响。  方法 :以IFN γ(2 0 0 μg/L)和TNF α(2 0 μg/L)联合刺激HKC细胞或同时加入不同浓度的雷公藤内酯醇 ,采用流式细胞... 目的 :观察雷公藤内酯醇对炎症因子刺激下人肾近端小管上皮细胞 (HKC细胞 )抗原呈递能力和共刺激分子表达的影响。  方法 :以IFN γ(2 0 0 μg/L)和TNF α(2 0 μg/L)联合刺激HKC细胞或同时加入不同浓度的雷公藤内酯醇 ,采用流式细胞仪检测细胞表面主要组织相容性二类复合体 (MHC Ⅱ )、共刺激分子B7 1、B7 2及细胞间粘附分子 1(ICAM 1)表达情况。细胞内ICAM 1mRNA表达量采用半定量逆转录PCR法检测。  结果 :普通培养时HKC细胞低度表达MHC Ⅱ分子 ,大量表达ICAM 1分子 ,不表达B7 1和B7 2分子。IFN γ(2 0 0 μg/L)和TNF α(2 0 μg/L)联合刺激 2 4h后 ,小管细胞表面MHC Ⅱ ,ICAM 1,B7分子表达均显著增强 ,其中MHC Ⅱ变化最大。RT PCR显示ICAM 1mRNA表达也明显增加。雷公藤内酯醇可以剂量依赖性地抑制炎症因子引起的细胞MHC Ⅱ ,B7 1以及B7 2分子表达上调 ,但对刺激引起的ICAM 1蛋白及mRNA表达上调无明显影响。  结论 :雷公藤内酯醇可以抑制炎症因子刺激下人肾近端小管上皮细胞MHC Ⅱ及B7分子表达上调 。 展开更多
关键词 雷公藤内酯醇 肾近端小管上皮细胞 抗原呈递细胞 肾小管间质损伤 hkc细胞
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益肾软坚散含药血清拮抗马兜铃酸对人近端肾小管上皮细胞的作用 被引量:15
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作者 方静 谌贻璞 +1 位作者 杨彦芳 张媺 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期704-708,共5页
目的:研究益肾软坚散含药血清能否拮抗马兜铃酸(aristolochicacid,AA)诱发的人近端肾小管上皮细胞株(HKC)促纤维化效应。方法:用马兜铃酸钠盐(AA Na,40mg·L-1)加或不加10%大鼠含药血清与HKC细胞孵育,而后检测信使RNA(mRNA)和蛋白... 目的:研究益肾软坚散含药血清能否拮抗马兜铃酸(aristolochicacid,AA)诱发的人近端肾小管上皮细胞株(HKC)促纤维化效应。方法:用马兜铃酸钠盐(AA Na,40mg·L-1)加或不加10%大鼠含药血清与HKC细胞孵育,而后检测信使RNA(mRNA)和蛋白质表达。结果:大鼠含药血清能显著下调AA Na刺激后HKC细胞对转化生长因子β1(TGFβ1)、结缔组织生长因子(CTGF)和金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP1)mRNA及蛋白质的高表达(P<0.05),但对纤溶酶原激活物抑制物1(PAI1)mRNA及蛋白质高表达无显著作用(P>0.05)。结论:益肾软坚散含药血清可下调AA刺激的HKC细胞促细胞外基质(ECM)合成因子及抗ECM降解因子的表达。 展开更多
关键词 人近端肾小管上皮细胞 含药血清 马兜铃酸 软坚散 转化生长因子-β1(TGF-β1) 益肾 拮抗 金属蛋白酶组织抑制物 纤溶酶原激活物抑制物 细胞外基质(ECM) 肾小管上皮细胞株 结缔组织生长因子 hkc细胞 纤维化效应 蛋白质表达
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黄葵胶囊对阿霉素肾病肾组织炎症信号通路p38MAPK的干预作用 被引量:18
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作者 赵青 万毅刚 +4 位作者 孙伟 王朝俊 魏晴雪 陈好利 孟宪杰 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第19期2926-2934,共9页
目的:阐明黄蜀葵花(Abelmoschus manihot,AM)提取物制剂———黄葵胶囊(Huangkui capsule,HKC)调节阿霉素肾病(adriamycin-induced nephropathy,ADRN)模型p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路从而改... 目的:阐明黄蜀葵花(Abelmoschus manihot,AM)提取物制剂———黄葵胶囊(Huangkui capsule,HKC)调节阿霉素肾病(adriamycin-induced nephropathy,ADRN)模型p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路从而改善肾组织炎症性损伤的机制。方法:将19只SD大鼠随机分为假手术组、对照组和HKC组。对HKC组和对照组大鼠行右侧肾摘除术,并在4周内分2次经颈静脉注射阿霉素(adriamycin,ADR)建立ADRN模型。HKC组大鼠于第2次注射ADR后经灌胃给予HKC悬浊液,对照组和假手术组大鼠同时经灌胃给予蒸馏水,共干预4周。在HKC和蒸馏水干预前和干预后第1,2,3,4周末,分别称量大鼠体重,并检测24 h尿蛋白排泄量(24 h urinary protein excretion,Upro)。肾摘除术后第8周末处死全部大鼠,抽取血液,摘除左肾并称重,观察血清生化指标、肾小球形态特征、肾小球α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth mus-cle actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原(collagen typeⅠ)表达特征、肾小球巨噬细胞(macrophage,MΦ)浸润特征等,并且检测肾组织转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1,p38MAPK,磷酸化p38MAPK(phosphorylated p38MAPK,p-p38MAPK)蛋白相对表达量。结果:与对照组大鼠比较,HKC改善了模型鼠的蛋白尿和血清白蛋白(albumin,Alb),抑制了模型鼠系膜细胞(mesangialcell,MC)增殖、细胞外基质(extracellular matrix,ECM)及其胶原成分沉积,减轻了肾小球α-SMA,Ⅰ型胶原表达,减轻了肾小球ED1+,ED3+浸润,下调了模型鼠肾组织TGF-β1,p-p38MAPK蛋白表达。结论:HKC在体内具有减轻肾组织炎症性损伤的作用;HKC通过下调肾组织p38MAPK信号通路中关键信号分子———p-p38MAPK的蛋白表达,干预其相关信号通路的信号转导途径,减少肾组织内TGF-β1的表达和炎症细胞的浸润、活化,从而改善肾组织的炎症性损伤。 展开更多
关键词 黄葵胶囊 阿霉素肾病 炎症信号通路 P38MAPK 磷酸化P38MAPK
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Smad信号传递途径调节肾小管上皮细胞转分化实验 被引量:10
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作者 李瑾 王宁宁 +4 位作者 谭若云 郑东辉 任胜利 王笑云 杨俊伟 《肾脏病与透析肾移植杂志》 CAS CSCD 2005年第3期230-234,共5页
目的:研究转化生长因子β1(TGFβ1)诱导人肾小管上皮细胞(HKC)转分化作用与其细胞内信号传递途径的关系。方法:以细胞间粘连蛋白(Ecadherin)和α平滑肌肌动蛋白(αSMA)作为肾小管上皮细胞转分化的观察指标,借助细胞培养、蛋白印迹和基... 目的:研究转化生长因子β1(TGFβ1)诱导人肾小管上皮细胞(HKC)转分化作用与其细胞内信号传递途径的关系。方法:以细胞间粘连蛋白(Ecadherin)和α平滑肌肌动蛋白(αSMA)作为肾小管上皮细胞转分化的观察指标,借助细胞培养、蛋白印迹和基因转染等方法,检测TGFβ1引发的Smad信号途径的变化,和TGFβ1诱导的肾小管上皮细胞转分化作用。将含有Smad7基因表达质粒转染HKC细胞,观察高表达的Smad7蛋白对TGFβ1作用的影响。结果:实验结果表明①TGFβ1作用HKC细胞10min即可磷酸化HKC细胞内Smad2/3蛋白,而且此作用可持续48h以上;②TGFβ1作用HKC细胞6h即可下调Ecadherin蛋白的表达,24h后能诱导该细胞表达αSMA,其作用呈明显的剂量依赖关系;③转染Smad7表达质粒的HKC细胞,可拮抗TGFβ1诱导HKC细胞表达αSMA以及下调Ecadherin蛋白表达的作用;④应用特异性MAP激酶抑制剂(PD98059和SC68376)和PI3激酶抑制剂(Wortmannin)均不能拮抗TGFβ1的作用。结论:TGFβ1诱导的上皮细胞转分化作用是依赖其引发的Smad信号途径,阻断该信号传递途径则能够拮抗TGFβ的作用。 展开更多
关键词 肾小管上皮细胞转分化 信号传递途径 实验 α-平滑肌肌动蛋白 hkc细胞 人肾小管上皮细胞 cadherin 转化生长因子β SMAD7蛋白 SMAD2/3 α-SMA 激酶抑制剂 调节 分化作用 基因表达质粒 剂量依赖关系 TGF 信号途径 细胞表达
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靶向抑制人SREBP-1基因对高糖刺激下人肾小管上皮细胞脂滴形成的影响 被引量:10
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作者 郝军 石宏 +2 位作者 赵松 任韫卓 段惠军 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期371-377,共7页
目的构建人SREBP-1基因的shRNA载体并转染人肾小管上皮细胞(HKC)明确是否沉默SREBP-1基因的表达可减轻高糖环境引起的细胞内脂滴形成。方法设计两对针对人SREBP-1基因的干扰靶序列及短链寡核苷酸和线性化的pGenesil-1质粒进行连接,筛选... 目的构建人SREBP-1基因的shRNA载体并转染人肾小管上皮细胞(HKC)明确是否沉默SREBP-1基因的表达可减轻高糖环境引起的细胞内脂滴形成。方法设计两对针对人SREBP-1基因的干扰靶序列及短链寡核苷酸和线性化的pGenesil-1质粒进行连接,筛选鉴定并最终命名为pGenesil-1-SREBP1-1和pGenesil-1-SREBP1-2。体外培养人肾小管上皮细胞并随机分组,采用阳离子脂质体法转染细胞后给予高糖刺激48h,在倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,半定量RT-PCR和Westernblot分析目标基因表达丰度的变化,并采用油红O染色检测细胞内脂滴。结果经酶切及测序鉴定证明构建的重组载体pGenesil-1-SREBP1-1、pGenesil-1-SREBP1-2序列正确;转染HKC细胞后均可表达绿色荧光;RT-PCR和Westernblot显示pGenesil-1-SREBP1-1、pGenesil-1-SREBP1-2能够有效抑制高糖环境下HKC细胞SREBP-1的表达,与阴性质粒对照组相比,差异有统计学意义。进一步研究发现在HKC细胞内,SREBP-1基因表达沉默明显抑制了脂肪酸合成酶(FAS)的转录,细胞内脂滴明显减少。结论有效沉默高糖刺激下HKC细胞SREBP-1的基因表达可通过抑制FAS转录而减少细胞内脂滴形成。 展开更多
关键词 固醇调节元件结合蛋白-1 人肾小管上皮细胞 RNA干扰 短发夹状干扰RNA 脂滴形成 脂肪酸合成酶
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胰岛素样生长因子-I对体外培养的肾小管上皮细胞表型转化的作用 被引量:4
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作者 杨继红 郑法雷 +3 位作者 吴华 苏震 段琳 李艳 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2005年第5期459-464,共6页
目的探讨胰岛素样生长因子-I(IGF-I)对体外培养的肾小管上皮细胞(HKC)表型转化的作用及IGF-I和TGF-β1之间有无协同作用。方法分为4组:(1)无血清对照组;(2)阳性对照组TGF-β1(8μg/L);(3)IGF-I(1、10、50和250μg/L)组;(4)IGF-I(50μg/L... 目的探讨胰岛素样生长因子-I(IGF-I)对体外培养的肾小管上皮细胞(HKC)表型转化的作用及IGF-I和TGF-β1之间有无协同作用。方法分为4组:(1)无血清对照组;(2)阳性对照组TGF-β1(8μg/L);(3)IGF-I(1、10、50和250μg/L)组;(4)IGF-I(50μg/L)+TGF-β1(8μg/L)和IGF-I(250μg/L)+TGF-β1(8μg/L)联合作用组。采用免疫荧光和免疫组化双染色法、流式细胞仪和酶联免疫吸附法观察HKC胞质中抗原角蛋白、钙黏蛋白、波形蛋白和-αSMA的表达,检测细胞培养上清液纤连蛋白和Ⅰ型胶原的浓度。结果IGF-I(50、250μg/L)能诱导HKC细胞表达波形蛋白、-αSMA,失去角蛋白和钙黏蛋白的表达;使-αSMA阳性的HKC细胞数显著高于阴性对照组。联合作用组-αSMA阳性的细胞数明显高于IGF-1或TGF-β1单用组,但无协同作用;IGF-I(10、50、250μg/L)组培养上清液纤连蛋白、Ⅰ型胶原的浓度明显升高,有剂量和时间依赖性。结论IGF-I能诱导肾小管上皮细胞发生表型转化;IGF-I和TGF-β1对诱导HKC转化无协同作用。 展开更多
关键词 胰岛素样生长因子-I 体外培养 细胞表型转化 α-SMA TGF-β1 IGF-I 肾小管上皮细胞 酶联免疫吸附法 细胞培养上清液 协同作用 钙黏蛋白 波形蛋白 纤连蛋白 阳性对照组 流式细胞仪 hkc细胞 IGF-1 时间依赖性 TGFβ1 双染色法
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他克莫司对转化生长因子-β诱导的肾小管上皮细胞转分化的抑制作用及对核因子-κB活性的影响 被引量:5
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作者 杨继红 郑法雷 +3 位作者 吴华 苏震 段琳 李艳 《肾脏病与透析肾移植杂志》 CAS CSCD 2004年第2期124-128,共5页
目的 :探讨他克莫司 (FK5 0 6 )对转化生长因子 β(TGF β)诱导的肾小管上皮细胞转分化的作用 ,及其与核因子 κB(NF κB)活性变化的关系。  方法 :以人类肾脏近曲小管上皮细胞株 (Humankidneycell,HKC)为研究对象 ,分为以下 4组 :... 目的 :探讨他克莫司 (FK5 0 6 )对转化生长因子 β(TGF β)诱导的肾小管上皮细胞转分化的作用 ,及其与核因子 κB(NF κB)活性变化的关系。  方法 :以人类肾脏近曲小管上皮细胞株 (Humankidneycell,HKC)为研究对象 ,分为以下 4组 :①阴性对照组 ;②TGF β(8ng/ml)组 :③FK5 0 6 (0 1、1、10、5 0ng/ml)组 :④TGF β(8ng/ml) +FK5 0 6(0 1、1、10、5 0ng/ml)组。应用形态学、间接免疫荧光法 ,免疫组化技术和酶联免疫吸附法观察FK5 0 6对TGF β诱导的HKC细胞转分化的作用、细胞培养上清液纤连蛋白、I型胶原的变化及FK5 0 6对HKC细胞NF κB活性的影响。  结果 :FK5 0 6 (1,10 ,5 0ng/ml) +TGF β组比TGF β组诱导的HKC细胞E 钙粘蛋白和细胞角蛋白表达有所增强 ,波形蛋白和α 平滑肌肌动蛋白 (α smoothmuscleactin ,α SMA)的表达比TGF β组减弱 (P <0 0 5 ) ,同时HKC细胞NF κB的活性比TGF β组减弱 (P <0 0 5 ) ,培养上清液纤连蛋白及I型胶原的浓度比TGF β组降低 (P <0 0 5 ) ;FK5 0 6 (1、10、5 0ng/ml)使基础状态下HKC细胞NF κB的活性明显下降 (P <0 0 5 )和上清液中纤连蛋白及I型胶原的水平明显降低 (P <0 0 5 )。  结论 :①FK5 0 6剂量依赖性地抑制TGF 展开更多
关键词 他克莫司 转化生长因子-Β 肾小管上皮细胞 细胞分化 抑制作用 核因子-κB 细胞活性 FKS06 免疫组化
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