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MA与HIV-Tat协同作用致大鼠相关脑区ROS、GSH-PX和SOD的变化 被引量：2
1
作者 曾晓锋 段晓飞 +1 位作者 张晶 李桢 《中国法医学杂志》 CSCD 2012年第6期431-433,437,共4页
目的观察甲基苯丙胺(MA)与HIV-Tat蛋白协同作用致大鼠相关脑区活性氧(ROS)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和超氧化物歧化酶(SOD)的变化,探讨协同作用对神经系统的影响。方法 50只健康雄性SD大鼠随机分为实验组:MA组(10mg/kg MA,每日两次... 目的观察甲基苯丙胺(MA)与HIV-Tat蛋白协同作用致大鼠相关脑区活性氧(ROS)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和超氧化物歧化酶(SOD)的变化,探讨协同作用对神经系统的影响。方法 50只健康雄性SD大鼠随机分为实验组:MA组(10mg/kg MA,每日两次腹腔注射,连续4d)、HIV-Tat组(10μg HIV-Tat注入大鼠脑纹状体)和MA+HIV-Tat组(按MA组注射MA 4d后按HIV-Tat组注入HIV-Tat);对照组:生理盐水腹腔注射或纹状体内注射。各组大鼠分别于注射结束后48h和7d处死,取各脑区脑组织制作匀浆;荧光分光光度计检测ROS含量,酶标仪检测GSH-PX和SOD吸光度,再根据蛋白质的浓度分别计算其活力。结果各实验组与对照组比较,各脑区ROS含量有不同程度增高,GSH-PX和SOD活力则有不同程度下降,差异具有统计学意义(P<0.05);其中MA+HIV-Tat组与MA组和HIV-Tat组比较,ROS含量升高显著,GSH-PX和SOD活力下降明显(P<0.01)。结论 MA和HIV-Tat协同作用能够产生大量的ROS,并降低GSH-PX和SOD的活力,揭示ROS、GSH-PX和SOD参与了MA与HIV-Tat的协同神经毒性作用。 展开更多
关键词 法医病理学 甲基苯丙胺 hiv-tat 氧化应激 抗氧化酶
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TAT蛋白转导结构域的研究进展 被引量：2
2
作者 岳立辉 郭娜 赵砚丽 《国际麻醉学与复苏杂志》 CAS 2009年第6期580-582,538,共4页
目前，应用基因重组技术人工合成治疗性蛋白质分子已经成为可能。但如何有效地将合成的蛋白质转运进入目标组织和细胞仍是当前需要解决的重大难题。蛋白转导结构域HIV-TAT的发现为体内外转运蛋白质进入细胞提供了新思路。近年来蛋白转... 目前，应用基因重组技术人工合成治疗性蛋白质分子已经成为可能。但如何有效地将合成的蛋白质转运进入目标组织和细胞仍是当前需要解决的重大难题。蛋白转导结构域HIV-TAT的发现为体内外转运蛋白质进入细胞提供了新思路。近年来蛋白转导结构域转运蛋白质进入细胞的有效性以及其在疾病治疗中的价值已经得到不断证实。现主要对蛋白转导结构域HIV-TAT的研究进展作一综述。 展开更多
关键词 蛋白转导结构域 hiv-tat
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BH3-HIV-TAT抗前列腺癌的活性
3
作者 韦华 郝晓柯 +2 位作者 苏明权 张建芳 刘家云 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2006年第4期272-276,共5页
目的:探讨人工合成的BH3-HIV-TAT肽对前列腺癌细胞株LNCaP增殖的影响。方法:以25、50、1000μmol/L的BH3-HIV-TAT处理LNCaP细胞12或24h,以激光共聚焦显微镜观察BH3-HIV-TAT肽的细胞定位;观察经BH3-HIV-TAT肽处理后,LNCap细胞凋亡过程中... 目的:探讨人工合成的BH3-HIV-TAT肽对前列腺癌细胞株LNCaP增殖的影响。方法:以25、50、1000μmol/L的BH3-HIV-TAT处理LNCaP细胞12或24h,以激光共聚焦显微镜观察BH3-HIV-TAT肽的细胞定位;观察经BH3-HIV-TAT肽处理后,LNCap细胞凋亡过程中核染色质的形态学变化;用流式细胞仪分析不同时间不同浓度的短肽对细胞凋亡程度和周期的影响;以MTS/PMS测定,分析短肽对LNCaP细胞的增殖是否有浓度依赖性的影响。结果:激光共聚焦检测结果显示BH3-HIV-TAT肽主要定位在细胞核内;LNCap细胞经短肽处理后,可观察到分为2期的细胞凋亡过程;流式细胞仪检测结果证实了短肽对细胞凋亡程度和周期的影响;MTS/PMS测定表明该短肽具有浓度依赖性的抗前列腺癌细胞的活性。结论:BH3-HIV-TAT肽可有效地诱导前列腺癌细胞株LNCaP的凋亡,从而影响其增殖,实验结果为癌症靶向性治疗提供了依据。 展开更多
关键词 BH3 hiv-tat LNCAP细胞 前列腺癌
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HIV-Tat蛋白转导域的研究进展
4
作者 林源 罗超 赵文力 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2009年第6期625-627,共3页
HIV-Tat蛋白转导域具有穿膜活性,能够将与之共价连接的多肽、蛋白、核酸等生物大分子快速而高效地转导入细胞内部,且对细胞无毒副作用,在药物转运及疾病治疗等领域有着广阔的应用前景。本文对HIV-Tat蛋白的结构、穿膜机制及转导域功能... HIV-Tat蛋白转导域具有穿膜活性,能够将与之共价连接的多肽、蛋白、核酸等生物大分子快速而高效地转导入细胞内部,且对细胞无毒副作用,在药物转运及疾病治疗等领域有着广阔的应用前景。本文对HIV-Tat蛋白的结构、穿膜机制及转导域功能的应用作一综述。 展开更多
关键词 hiv-tat 蛋白转导域 穿膜肽
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人乳头瘤病毒16E7限制性细胞毒性T淋巴细胞表位的穿膜肽疫苗设计及体外免疫学研究 被引量：6
5
作者 尹锐 郝飞 +1 位作者 郝进 杨希川 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期807-809,共3页
目的:利用穿膜肽人免疫缺陷病毒(HIV)-Tat49-57的穿膜能力,设计穿膜肽人乳头瘤病毒(HPV)16E7限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位(第49～57位氨基酸)的融合肽疫苗,并在体外研究其诱导特异性CTL的应答能力。方法:应用多肽固相合成技术,分... 目的:利用穿膜肽人免疫缺陷病毒(HIV)-Tat49-57的穿膜能力,设计穿膜肽人乳头瘤病毒(HPV)16E7限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位(第49～57位氨基酸)的融合肽疫苗,并在体外研究其诱导特异性CTL的应答能力。方法:应用多肽固相合成技术,分别合成含HIVTat49-57和人类白细胞抗原(HLA)-A2.1限制性CTL优势表位HPV16E749-57的18肽,和该CTL表位的9肽,并用一无关肽作对照,在体外用乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性试验分别检测了上述18肽和9肽在HLA-A2阳性健康者外周血单个核细胞(PBMC)中诱导的表位E749-57的特异性CTL活性。结果:经质谱分析,上述多肽成功合成,纯度均在95%以上。与9肽相比,18肽能在体外诱导出明显增强的特异性CTL活性(P<0.05)。结论:在HPV16E7HLA-A2.1限制性CTL表位(49～57)的N-末端加上HIV-Tat49-57序列,不会影响表位的提呈效率,而且在体外能有效激发针对E749-57特异性的CTL应答,为新型抗肿瘤及细胞内感染的多肽疫苗设计提供了新思路。 展开更多
关键词 穿膜肽 人免疫缺陷病毒-tat49-57 细胞毒性T淋巴细胞表位 人乳头瘤病毒16 肽疫苗
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HIV-Tat蛋白诱导神经细胞自噬的研究进展 被引量：1
6
作者 李娟 杨根梦 +3 位作者 仝品芬 李桢 曾晓锋 代解杰 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期269-273,共5页
HIV-Tat蛋白是由HIV-1病毒感染细胞后分泌的反式转录激活因子,在HIV感染神经损害中发挥重要作用,是引起艾滋病相关脑病的重要致病因子。自噬即自我吞噬,主要作用是供给机体营养,但异常自噬则引起细胞死亡。HIV-Tat蛋白可以诱导神经细胞... HIV-Tat蛋白是由HIV-1病毒感染细胞后分泌的反式转录激活因子,在HIV感染神经损害中发挥重要作用,是引起艾滋病相关脑病的重要致病因子。自噬即自我吞噬,主要作用是供给机体营养,但异常自噬则引起细胞死亡。HIV-Tat蛋白可以诱导神经细胞自噬,从而使细胞死亡,但引起自噬的机制及信号转导通路不清楚。本文主要从HIV-Tat蛋白诱导神经细胞自噬的机制、信号转导通路等方面进行综述,旨在为进一步研究HIV-Tat蛋白与细胞自噬的关系及寻找新的治疗药物靶点提供参考。 展开更多
关键词 hiv-tat蛋白 细胞自噬 调节机制 信号转导通路 hiv
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GLUT1在甲基苯丙胺与HIV-Tat蛋白协同诱导大鼠血脑屏障通透性改变中的作用研究 被引量：1
7
作者 张冬先 曾柏瑞 +3 位作者 何永旺 杨根梦 曾晓锋 李桢 《河南科技大学学报（医学版）》 2019年第2期146-149,共4页
目的观察甲基苯丙胺(METH)与HIV-Tat蛋白协同诱导大鼠血脑屏障通透性的改变,探讨GLUT1在METH与HIV-Tat蛋白协同诱导血脑屏障通透性改变中的作用。方法40只雄性SD大鼠随机分成4组,对照组(每日10mL·kg^-1生理盐水)、METH组、HIV-Tat... 目的观察甲基苯丙胺(METH)与HIV-Tat蛋白协同诱导大鼠血脑屏障通透性的改变,探讨GLUT1在METH与HIV-Tat蛋白协同诱导血脑屏障通透性改变中的作用。方法40只雄性SD大鼠随机分成4组,对照组(每日10mL·kg^-1生理盐水)、METH组、HIV-Tat蛋白组、METH+HIV-Tat蛋白组。建立血脑屏障损伤的大鼠模型:采用腹腔注射METH(每日10mg·kg^-1)和尾静脉注射HIV-Tat蛋白(每日400ng·kg^-1)的方法。模型建成功后检测各组脑区伊文思蓝(EB)的含量,并通过Western-Blotting和免疫组织化学观察各组脑中GLUT1表达情况。结果与对照组相比,METH组、HIV-Tat蛋白组和METH+HIV-Tat蛋白组脑组织的EB含量明显增加;分别与METH组和HIV-Tat组相比,METH+HIV-Tat蛋白组脑组织内EB含量明显升高。此外,免疫组化和WB结果显示,与对照组相比,METH组、HIV-Tat蛋白组和METH+HIV-Tat蛋白组表达GLUT1的水平不同程度降低(P<0.01);分别与METH组和HIV-Tat蛋白组相比,METH+HIV-Tat蛋白组GLUT1的表达水平明显降低(P<0.05)。结论METH和HIV-Tat蛋白可协同作用诱导大鼠血脑屏障通透性发生改变,而GLUT1在METH和HIV-Tat蛋白的协同作用中可起调节作用。 展开更多
关键词 甲基苯丙胺 hiv-tat蛋白 血脑屏障 葡萄糖转运体
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甲基苯丙胺与HIV-Tat蛋白协同改变大鼠血脑屏障通透性的氧化应激作用机制 被引量：1
8
作者 曾柏瑞 陈波 +5 位作者 胡霄 张冬先 李桢 李利华 瞿勇强 曾晓锋 《昆明医科大学学报》 CAS 2015年第3期13-17,共5页
目的观察甲基苯丙胺与HIV-Tat蛋白协同对大鼠血脑屏障的作用机制.方法雄性SD大鼠每天2次腹腔注射给予MA10 mg/kg的同时尾静脉注射给予HIV-Tat 400 ng/kg,连续7 d,给药结束24 h后随机取10只大鼠尾静脉注射伊文思蓝检测脑组织EB含量,随机... 目的观察甲基苯丙胺与HIV-Tat蛋白协同对大鼠血脑屏障的作用机制.方法雄性SD大鼠每天2次腹腔注射给予MA10 mg/kg的同时尾静脉注射给予HIV-Tat 400 ng/kg,连续7 d,给药结束24 h后随机取10只大鼠尾静脉注射伊文思蓝检测脑组织EB含量,随机取5只大鼠断颈取脑,用于SOD活力、GSH和MDA含量的测定.余下2只大鼠快速断颈取脑,戊二醛-锇酸溶液固定前额叶皮质部分,透射电镜观察结构变化.结果与正常对照组相比,实验组脑组织中EB含量不同程度增加,提示实验组血脑屏障通透性增加(P<0.05);MDA含量升高、SOD活力和GSH含量不同程度降低,提示实验组氧化应激反应增强(P<0.05).MA+Tat组与MA组、Tat组相比,EB含量升高明显,提示MA与HIV-Tat蛋白联用能协同增加血脑屏障通透性;MDA含量显著升高,SOD活力、GSH含量明显下降,提示MA与HIV-Tat蛋白联用能协同增强大鼠脑组织氧化应激反应(P<0.01);NAC+MA+Tat组与MA+Tat组相比,EB含量降低,提示NAC能一定程度拮抗MA与HIV-Tat蛋白对血脑屏障通透性的影响(P<0.01);MDA含量下降,SOD活力、GSH含量明显升高,反映NAC能在一定程度拮抗MA与HIV-Tat蛋白对大鼠脑内氧化应激反应增强作用(P<0.01).各实验组在电镜下观察到血脑屏障一系列超微结构改变,如脑微血管内皮细胞肿胀变薄,血管周围胶质细胞和星形胶质细胞肿胀,胞饮小泡增加等,这些改变以MA+Tat组最为显著.结论 MA和HIV-Tat蛋白能改变血脑屏障通透性,两者具有协同作用,协同作用机制可能与氧化应激有关. 展开更多
关键词 血脑屏障 甲基苯丙胺 hiv-tat蛋白 氧化应激 N-乙酰半胱胺酸
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从噬菌体抗体库中筛选抗HIV-Tat蛋白单链抗体 被引量：1
9
作者 邵锴 姜海燕 +4 位作者 张国利 岳玉环 朱平 吴广谋 刘瑞田 《中国实验诊断学》 2008年第5期592-594,共3页
目的从Tomlinson(I+J)噬菌体抗体库中筛选人源化抗HIV-Tat蛋白单链抗体(scFv)并进行鉴定。方法以HIV-Tat蛋白为抗原,通过"吸附-洗脱-扩增"过程从噬菌体抗体库中筛选特异性抗Tat蛋白单链抗体,对其进行基因序列测定,并检测其抗... 目的从Tomlinson(I+J)噬菌体抗体库中筛选人源化抗HIV-Tat蛋白单链抗体(scFv)并进行鉴定。方法以HIV-Tat蛋白为抗原,通过"吸附-洗脱-扩增"过程从噬菌体抗体库中筛选特异性抗Tat蛋白单链抗体,对其进行基因序列测定,并检测其抗原结合活性。结果经过筛选,获得了1株能与Tat蛋白特异性结合的阳性克隆,经检索kabat数据库,发现其轻、重链可变区分别属于VκⅠ型、VHⅢ型。结论利用噬菌体抗体库技术可以不经过免疫制备出高特异性的人源化抗Tat蛋白单链抗体。 展开更多
关键词 噬菌体抗体库 hiv-tat蛋白 单链抗体
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甲基苯丙胺与HIV-Tat蛋白协同损伤血脑屏障的研究进展
10
作者 黄俭 何永旺 +6 位作者 李娟 杨根梦 许悦 李媛媛 刘柳 曾晓锋 李桢 《生命科学》 CSCD 北大核心 2019年第11期1200-1205,共6页
血脑屏障(blood brain barrier,BBB)是维持中枢神经系统(central nervous system,CNS)内外环境稳定的结构,在保护CNS免受外界危险因素刺激中发挥着重要作用。甲基苯丙胺(methamphetamine,METH)滥用对人类免疫缺陷病毒(human immunodefic... 血脑屏障(blood brain barrier,BBB)是维持中枢神经系统(central nervous system,CNS)内外环境稳定的结构,在保护CNS免受外界危险因素刺激中发挥着重要作用。甲基苯丙胺(methamphetamine,METH)滥用对人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染者的BBB具有协同损害作用,极大提高了艾滋病相关神经认知障碍(HIV-associated neurocognitive disorders,HAND)及艾滋病痴呆(HIV-associated dementia,HAD)的发生率。现将对METH与HIV-Tat蛋白损伤BBB的研究进展进行综述,旨在为进一步研究两者协同损伤BBB提供参考,并为相关治疗药物的研发提供依据。 展开更多
关键词 甲基苯丙胺 hiv-tat蛋白 血脑屏障 氧化应激 神经炎症
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HIV-Tat蛋白神经毒性机制的研究进展
11
作者 李艳明 常友良 +1 位作者 李桢 曾晓锋 《现代生物医学进展》 CAS 2011年第S2期5193-5196,共4页
HIV-Tat蛋白是人类免疫缺陷病毒-1型(HIV-1)基因编码的一种被称为反式转录激活因子,是HIV转录和复制所必须的一个很重要的调控蛋白。HIV感染细胞的早期即表达该蛋白,Tat蛋白能够由被感染细胞合成并释放到细胞外,脑脊液和血清中,能改变... HIV-Tat蛋白是人类免疫缺陷病毒-1型(HIV-1)基因编码的一种被称为反式转录激活因子,是HIV转录和复制所必须的一个很重要的调控蛋白。HIV感染细胞的早期即表达该蛋白,Tat蛋白能够由被感染细胞合成并释放到细胞外,脑脊液和血清中,能改变非感染细胞的结构和功能,特别是对神经元的结构与功能,从而促进艾滋病(AIDS)脑病的发生和发展,也就是说在中枢神经系统,HIV病毒对于神经系统的损伤多为间接损伤,主要依靠其合成蛋白,如Tat蛋白。Tat蛋白进入脑后,可以选择性地对中枢神经细胞产生毒性作用,引起神经元的凋亡,导致中枢神经系统发生病理性改变,如艾滋病痴呆(HAD)和艾滋病相关性脑炎(HIVE),然而HIV-Tat蛋白的神经毒性机制并不完全清楚。本综述将讨论HIV-Tat蛋白神经毒性及其可能的机制,为将来的研究和艾滋病脑病的防治提供更加有利的方向。 展开更多
关键词 hiv-tat蛋白 神经毒性 凋亡
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甲基苯丙胺与HIV-Tat蛋白协同致大鼠纹状体NMDA受体NR2B亚基和iNOS的表达
12
作者 李艳明 郑艳珍 +6 位作者 张冬先 李娟 杨根梦 何永旺 周一卿 曾晓锋 李桢 《昆明医科大学学报》 CAS 2017年第7期1-6,共6页
目的观察甲基苯丙胺(MA)与HIV-Tat蛋白协同作用致大鼠相关脑区N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体NR2B亚基和诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)的表达变化,探讨MA与HIV-Tat协同作用对神经系统的影响.方法 50只健康雄性SD大鼠随机分为实验组:MA组(10 ... 目的观察甲基苯丙胺(MA)与HIV-Tat蛋白协同作用致大鼠相关脑区N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体NR2B亚基和诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)的表达变化,探讨MA与HIV-Tat协同作用对神经系统的影响.方法 50只健康雄性SD大鼠随机分为实验组:MA组(10 mg/kg MA,每日2次腹腔注射,连续4 d)、HIV-Tat组(10μg HIV-Tat注入大鼠脑纹状体)和MA+HIV-Tat组(按MA组注射MA 4 d后按HIV-Tat组注入HIV-Tat);对照组:生理盐水腹腔注射或纹状体内注射.各组大鼠分别于注射结束后48 h和7 d处死,麻醉后用多聚甲醛灌注,取出脑组织并固定,石蜡包埋,作冠状切面,用免疫组化和蛋白免疫印迹法对中毒大鼠纹状体中NMDA受体NR2B亚基和iNOS的表达进行观察,并进行图像分析,测量其平均光密度值,与对照组比较并进行统计学分析.结果各实验组与对照组比较,纹状体内NMDA受体NR2B亚基和iNOS的表达均有不同程度增高,差异具有统计学意义(P<0.05);其中MA+HIV-Tat组与MA组、HIV-Tat组比较,NMDA受体NR2B亚基和iNOS的表达显著增高(P<0.05).结论 MA与HIV-Tat蛋白的共同作用能够显著增加NMDA受体NR2B亚基和iNOS的表达,揭示NMDA受体NR2B亚基和iNOS参与了MA与HIV-Tat蛋白的协同神经毒性机制. 展开更多
关键词 甲基苯丙胺 hiv-tat蛋白 NMDA受体NR2B亚基 诱导型一氧化氮合成酶 神经毒性
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脑脊液来源人类免疫缺陷病毒tat真核表达载体的构建及鉴定
13
作者 刘利锋 乔录新 +4 位作者 李庆 李莉 李威 吴昊 陈德喜 《北京医学》 CAS 2014年第6期433-435,F0003,共4页
目的探讨脑脊液来源人类免疫缺陷病毒(HIV)tat真核表达载体的构建,并研究TAT蛋白在真核细胞的表达。方法从脑脊液中扩增出HIV tat基因,构建pcDNA-tat真核表达载体,所构建载体经酶切和测序鉴定。将构建的表达载体转染293T细胞系,通过免... 目的探讨脑脊液来源人类免疫缺陷病毒(HIV)tat真核表达载体的构建,并研究TAT蛋白在真核细胞的表达。方法从脑脊液中扩增出HIV tat基因,构建pcDNA-tat真核表达载体,所构建载体经酶切和测序鉴定。将构建的表达载体转染293T细胞系,通过免疫荧光检测TAT蛋白的表达。结果成功扩增tat基因,酶切和测序结果证实正确构建了表达载体pcDNA-tat,免疫荧光证实所构建载体能在293T细胞中有效表达HIV TAT目的蛋白。结论成功构建真核表达载体pcDNA-tat,为了解HIV在中枢神经系统的潜伏机制奠定实验基础。 展开更多
关键词 脑脊液 人类免疫缺陷病毒 tat基因 载体构建 鉴定
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穿膜肽HIV Tat蛋白的研究进展 被引量：6
14
作者 尹锐 郝飞 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第B06期77-81,共5页
经数十年的研究发现HIV—ITat蛋白的转导域具有穿膜活性,能将外源性的生物学分子如多肽、寡核苷酸、DNA、蛋白、质粒甚至颗粒性物质携带入多种哺乳动物活细胞质膜及核膜,并且对细胞不会产生毒副作用。尽管其穿膜途径的具体机制,目前尚... 经数十年的研究发现HIV—ITat蛋白的转导域具有穿膜活性,能将外源性的生物学分子如多肽、寡核苷酸、DNA、蛋白、质粒甚至颗粒性物质携带入多种哺乳动物活细胞质膜及核膜,并且对细胞不会产生毒副作用。尽管其穿膜途径的具体机制,目前尚不十分清楚,但却不影响其在生命科学研究领域,包括基础研究和临床研究中的应用。HIV-ITat蛋白转导域的发现及应用,为生物学研究领域开辟了一条新的探索途径。 展开更多
关键词 穿膜肽 hiv tat 细胞内在化
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水牛iPS细胞转录因子Sox2及协助蛋白HA2-TAT的原核表达 被引量：1
15
作者 伏彭辉 石德顺 +2 位作者 邓彦飞 刘金凤 刘庆友 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1157-1161,共5页
为探讨干细胞转录因子与穿膜肽融合表达蛋白对水牛体细胞诱导重编程的可行性,本试验对水牛iPS细胞转录因子Sox2与细胞穿膜肽HIV TAT进行融合表达,以获得具有自主穿膜功能的Sox2蛋白,建立非转基因水牛iPS生产技术体系。首先人工合成了HA2... 为探讨干细胞转录因子与穿膜肽融合表达蛋白对水牛体细胞诱导重编程的可行性,本试验对水牛iPS细胞转录因子Sox2与细胞穿膜肽HIV TAT进行融合表达,以获得具有自主穿膜功能的Sox2蛋白,建立非转基因水牛iPS生产技术体系。首先人工合成了HA2-TAT序列,并将pET-32a(+)质粒改造为pET-HA2-TAT基础表达载体,再通过双酶切定向克隆将水牛Sox2基因插入pET-HA2-TAT得到原核表达载体pET-NLS-Sox2-TAT;重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,用SDS-PAGE电泳和Western blot检测融合蛋白表达,再用Ni 2+柱进行纯化融合蛋白。结果表明,成功表达了融合蛋白HA2-TAT(24 400)和NLS-Sox2-TAT(57 700);纯化蛋白NLS-Sox2-TAT在咪唑浓度为365.30mmol/L时,出现蛋白洗脱峰,经Western blot验证表达的融合蛋白具有免疫原性。 展开更多
关键词 水牛 SOX2 hiv tat 融合表达
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用酵母双杂交筛选与HIV Tat相互作用的宿主因子 被引量：1
16
作者 路艳芳 刘为勇 +3 位作者 乔龙 汪峰 侯红艳 孙自镛 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期398-401,共4页
目的通过酵母双杂交试验筛选与HIV Tat蛋白相互作用的宿主因子。方法对构建的pGBKT7-tat进行自激活和半乳糖苷试验。运用酵母双杂交实验以HIV Tat作为诱饵,与人均一化基因库进行初筛。对筛选出来的阳性克隆进行测序分析。结果构建的pGBK... 目的通过酵母双杂交试验筛选与HIV Tat蛋白相互作用的宿主因子。方法对构建的pGBKT7-tat进行自激活和半乳糖苷试验。运用酵母双杂交实验以HIV Tat作为诱饵,与人均一化基因库进行初筛。对筛选出来的阳性克隆进行测序分析。结果构建的pGBKT7-tat无自激活特性和细胞毒性,然后进行酵母双杂交试验。结果发现在DDO/X/A平板上出现47个阳性的蓝色斑点,在QDO/X/A平板上进行进一步筛选,对再次出现的8个蓝色斑点进行测序。在GenBank中对相互作用的人体基因进行BLAST分析,根据基因注释推测其在病毒与机体相互作用过程中可能发挥的作用。结果测出5个不同的基因,这5个不同的基因分别为羧肽酶N、酪氨酸磷酸酶受体M、ATP1B1、锌指蛋白MYM2和锌指蛋白MYM5。结论本研究新筛选出羧肽酶、酪氨酸磷酸酶受体和ATP1B1病程相关蛋白及两个锌指蛋白等5种功能蛋白与HIV Tat相互作用,为进一步研究HIV Tat蛋白功能提供依据。 展开更多
关键词 酵母双杂交 hiv tat 蛋白质相互作用 天然免疫 病毒复制
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HIV Tat蛋白与单核细胞表达辅助受体CCR5和感染HIV病毒相互关系的研究
17
作者 杨益大 郑临 +2 位作者 吕国才 陈亚岗 Maria Salvato 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2004年第6期532-534,545,共4页
目的 :研究 HIV Tat蛋白对单核细胞表达 HIV辅助受体 CCR5的影响 ,并观察 Tat蛋白对单核细胞感染嗜单核细胞 HIVBa-L病毒的影响。方法 :以流式细胞仪方法测定单核细胞表面表达的 CCR5 ,单核细胞表达分泌的HIV gag p2 4蛋白由 ELISA方法... 目的 :研究 HIV Tat蛋白对单核细胞表达 HIV辅助受体 CCR5的影响 ,并观察 Tat蛋白对单核细胞感染嗜单核细胞 HIVBa-L病毒的影响。方法 :以流式细胞仪方法测定单核细胞表面表达的 CCR5 ,单核细胞表达分泌的HIV gag p2 4蛋白由 ELISA方法检测。结果 :HIV Tat蛋白能增加单核细胞表达 CCR5 ,此作用能被多克隆 Tat蛋白抗体所抑制 ;同时 HIV Tat蛋白能明显增加嗜单核细胞 HIV病毒 (HIVBa-L)感染单核细胞 ,表现为 HIV gag p2 4蛋白表达明显增加。结论 :HIV Tat蛋白增加单核细胞表面 CCR5受体的表达 ,并增加 HIVBa-L感染单核细胞 ,表明HIV Tat蛋白在 HIV感染和发病中起着十分重要的作用。 展开更多
关键词 hiv tat蛋白 辅助受体CCR5 单核细胞 感染
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HIV-Tat蛋白转导域在医学研究中的应用 被引量：8
18
作者 丁劲 马斌 +1 位作者 刘军 薛采芳 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2003年第6期6-8,13,共4页
HIV Tat蛋白转导域 (proteintransductiondomain ,PTD)是新近发现的一种在蛋白转导过程中能高效穿过生物膜的结构域 ,它能将与其共价连接的多肽、蛋白质及DNA等分子跨膜导入几乎所有的组织和细胞 ,甚至可以通过血脑屏障 ,转导效率很高... HIV Tat蛋白转导域 (proteintransductiondomain ,PTD)是新近发现的一种在蛋白转导过程中能高效穿过生物膜的结构域 ,它能将与其共价连接的多肽、蛋白质及DNA等分子跨膜导入几乎所有的组织和细胞 ,甚至可以通过血脑屏障 ,转导效率很高而且对细胞没有损伤。TAT融合蛋白系统被认为是一种很有前途的运载工具 。 展开更多
关键词 hiv-tat蛋白转导域 人免疫缺陷病毒反式激活蛋白 生物膜 运载工具 目的蛋白
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HIV-1 Tat蛋白的生物学特性及其致病效应 被引量：9
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作者 滕竞飞 潘卫 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2009年第4期406-410,共5页
Tat蛋白是HIV-1编码的重要调控蛋白,在病毒复制和感染致病中起重要作用。在感染细胞内,Tat蛋白与多种细胞分子相互作用,启动病毒基因组的转录,促进转录延伸,从而激活和促进病毒复制;分泌和释放至细胞外的Tat蛋白,具有独特的穿膜功能,可... Tat蛋白是HIV-1编码的重要调控蛋白,在病毒复制和感染致病中起重要作用。在感染细胞内,Tat蛋白与多种细胞分子相互作用,启动病毒基因组的转录,促进转录延伸,从而激活和促进病毒复制;分泌和释放至细胞外的Tat蛋白,具有独特的穿膜功能,可到达宿主多个部位,作用于多种细胞,产生多样的Tat蛋白胞外活性,如参与免疫抑制、神经系统损伤及卡波济肉瘤形成等致病过程,被称为"病毒毒素"。本文对Tat蛋白的生物学特性及其致病效应作一综述。 展开更多
关键词 hiv-1 tat 反式激活 内化 免疫抑制 神经毒 KAPOSI肉瘤
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含HIV-1 Tat基因重组反转录病毒表达载体构建与表达Tat蛋白功能检测 被引量：8
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作者 卢春 黄丽 曾怡 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第9期691-695,共5页
目的　构建含HIV 1Tat基因重组反转录病毒表达载体及评价表达Tat蛋白的功能。方法　使用HindⅢ将HIV 1Tat1 0 1 蛋白编码基因从pEV质粒中切出 ,插入到表达质粒LZRSpBMN Z中 ,构建成重组反转录病毒表达质粒LZRS Tat1 0 1 。采用磷酸钙转... 目的　构建含HIV 1Tat基因重组反转录病毒表达载体及评价表达Tat蛋白的功能。方法　使用HindⅢ将HIV 1Tat1 0 1 蛋白编码基因从pEV质粒中切出 ,插入到表达质粒LZRSpBMN Z中 ,构建成重组反转录病毒表达质粒LZRS Tat1 0 1 。采用磷酸钙转染法将重组质粒LZRS Tat1 0 1 转染进含反转录病毒env、gal和pol编码基因的包装细胞phoenix(ФNX)中 ,嘌呤霉素筛选获得稳定细胞系。免疫组化 (IHC)染色检查Tat在临时转染和稳定转染ФNX细胞中的表达水平。收集临时转染和稳定转染包装细胞分泌的病毒上清 ,并分别感染 2 93细胞 ,Westernblot检测Tat在 2 93中表达。与此同时 ,收集感染 2 93细胞培养上清 ,加入到HL3T1细胞 (HeLa HIV 1 LTR CAT报告基因 )中 ,共培养 72h后收集细胞 ,提取蛋白作CAT活性检测。结果　①含Tat1 0 1 基因重组反转录病毒表达质粒转染包装细胞后 ,Tat在临时转染ФNX中表达水平显著高于在稳定转染中的水平 ;②临时转染病毒感染 2 93细胞 ,Tat在感染细胞中得到了表达 ,且分泌至上清中的Tat蛋白能够激活靶细胞HL3T1中HIV 1的LTR启动子 ,使得其下游的CAT基因得到表达。结论　重组LZRS Tat1 0 1 反转录病毒能够在其感染靶细胞中表达Tat蛋白 ,且表达蛋白具有转录激活功能。 展开更多
关键词 hiv-1tat 基因重组 反转录病毒表达载体 表达 tat蛋白 检测 转录激活
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