目的合成Her-2环肽修饰的Heparosan多糖聚合物,制备阿霉素(doxorubicin,DOX)靶向聚合物胶束,并对其体外理化性质和靶向性进行评价。方法通过酰胺反应将Her-2环肽连接到Heparosan多糖-胱氨-维生素E琥珀酸酯(heparosan-cystamine-vitamin ...目的合成Her-2环肽修饰的Heparosan多糖聚合物,制备阿霉素(doxorubicin,DOX)靶向聚合物胶束,并对其体外理化性质和靶向性进行评价。方法通过酰胺反应将Her-2环肽连接到Heparosan多糖-胱氨-维生素E琥珀酸酯(heparosan-cystamine-vitamin E succinate,KSV)聚合物上,合成两亲性靶向聚合物(Her-2 peptide-heparosan-cystamine-vitamin E succinate,PKSV),并包载阿霉素制备还原敏感型主动靶向的给药系统(DOX/PKSV),考察胶束粒径、包封率、体外释放等制剂学性质,同时,选择Her-2受体低表达的MCF-7细胞和Her-2受体高表达的SK-BR-3细胞进行体外肿瘤靶向性进行评价。结果经Her-2环肽修饰的DOX/PKSV靶向聚合物胶束的为粒径约200 nm的均匀的球形粒子,zeta电位为(-23.84±1.43)mV,载药量为(11.22±1.04)%,具有良好的血清稳定性和还原敏感释药特性。体外细胞实验表明,相比于DOX/KSV胶束,DOX/PKSV胶束对SK-BR-3细胞表现出更强的细胞毒性和细胞摄取。结论DOX/PKSV胶束能够提高肿瘤靶向性,为Heparosan多糖的主动靶向递送系统的设计提供借鉴。展开更多
为了研究不同表达系统获得的携带绿色荧光抗HER2单链抗体(Anti-HER2-ScFv-GFP)是否既可靶向结合HER2阳性乳腺癌细胞表面,也可通过观察绿色荧光变化直接判断抗体结合乳腺癌细胞表面后细胞的动态变化,在前期成功构建两种表达系统的基础上...为了研究不同表达系统获得的携带绿色荧光抗HER2单链抗体(Anti-HER2-ScFv-GFP)是否既可靶向结合HER2阳性乳腺癌细胞表面,也可通过观察绿色荧光变化直接判断抗体结合乳腺癌细胞表面后细胞的动态变化,在前期成功构建两种表达系统的基础上,利用Ni^(2+)-NTA亲和层析法纯化来源于真核表达系统pFAST Bac to Bac HT A/Tn-5B1-4和原核表达系统pBAD His B/TOP10的融合蛋白Anti-HER2-ScFv-GFP,设置HER2阳性细胞SKBR3为实验组、HER2阴性细胞MCF7为对照组,分别与之混合24 h后,1×PBS洗脱细胞3次,激光共聚焦显微镜观察到两种不同表达系统获得的融合蛋白在HER2阳性细胞SKBR3表面分布均有绿色荧光,真核表达的蛋白结合效率明显高于原核表达的蛋白,SKBR3结合高浓度的融合蛋白后细胞表现出皱缩,绿色荧光明显增强,而两种不同来源的融合蛋白与HER2阴性MCF7混合后均易被洗脱。GFP标准品与SKBR3混合后也容易被洗脱。实验表明构建的携带绿色荧光抗HER2单链抗体同时具有靶向结合和报告作用两方面的功能。展开更多
文摘目的合成Her-2环肽修饰的Heparosan多糖聚合物,制备阿霉素(doxorubicin,DOX)靶向聚合物胶束,并对其体外理化性质和靶向性进行评价。方法通过酰胺反应将Her-2环肽连接到Heparosan多糖-胱氨-维生素E琥珀酸酯(heparosan-cystamine-vitamin E succinate,KSV)聚合物上,合成两亲性靶向聚合物(Her-2 peptide-heparosan-cystamine-vitamin E succinate,PKSV),并包载阿霉素制备还原敏感型主动靶向的给药系统(DOX/PKSV),考察胶束粒径、包封率、体外释放等制剂学性质,同时,选择Her-2受体低表达的MCF-7细胞和Her-2受体高表达的SK-BR-3细胞进行体外肿瘤靶向性进行评价。结果经Her-2环肽修饰的DOX/PKSV靶向聚合物胶束的为粒径约200 nm的均匀的球形粒子,zeta电位为(-23.84±1.43)mV,载药量为(11.22±1.04)%,具有良好的血清稳定性和还原敏感释药特性。体外细胞实验表明,相比于DOX/KSV胶束,DOX/PKSV胶束对SK-BR-3细胞表现出更强的细胞毒性和细胞摄取。结论DOX/PKSV胶束能够提高肿瘤靶向性,为Heparosan多糖的主动靶向递送系统的设计提供借鉴。
文摘为了研究不同表达系统获得的携带绿色荧光抗HER2单链抗体(Anti-HER2-ScFv-GFP)是否既可靶向结合HER2阳性乳腺癌细胞表面,也可通过观察绿色荧光变化直接判断抗体结合乳腺癌细胞表面后细胞的动态变化,在前期成功构建两种表达系统的基础上,利用Ni^(2+)-NTA亲和层析法纯化来源于真核表达系统pFAST Bac to Bac HT A/Tn-5B1-4和原核表达系统pBAD His B/TOP10的融合蛋白Anti-HER2-ScFv-GFP,设置HER2阳性细胞SKBR3为实验组、HER2阴性细胞MCF7为对照组,分别与之混合24 h后,1×PBS洗脱细胞3次,激光共聚焦显微镜观察到两种不同表达系统获得的融合蛋白在HER2阳性细胞SKBR3表面分布均有绿色荧光,真核表达的蛋白结合效率明显高于原核表达的蛋白,SKBR3结合高浓度的融合蛋白后细胞表现出皱缩,绿色荧光明显增强,而两种不同来源的融合蛋白与HER2阴性MCF7混合后均易被洗脱。GFP标准品与SKBR3混合后也容易被洗脱。实验表明构建的携带绿色荧光抗HER2单链抗体同时具有靶向结合和报告作用两方面的功能。
