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NS基因克隆及人成骨肉瘤细胞和人胚胎肾细胞NS基因的表达 被引量：17
1
作者 刘思金 蔡子微 +2 位作者 胡国法 魏影允 劳为德 《牡丹江医学院学报》 2003年第2期5-7,共3页
目的 :研究nucleostemin(核干细胞因子 ,NS)基因在人成骨肉瘤细胞 (OS - 732 )和人胚胎肾细胞 (HEK -2 93)的表达情况 ,并克隆该基因的部分片段。方法 :以OS - 732细胞和HEK - 2 93细胞为实验材料 ,进行细胞总RNA的提取、反转录反应、PC... 目的 :研究nucleostemin(核干细胞因子 ,NS)基因在人成骨肉瘤细胞 (OS - 732 )和人胚胎肾细胞 (HEK -2 93)的表达情况 ,并克隆该基因的部分片段。方法 :以OS - 732细胞和HEK - 2 93细胞为实验材料 ,进行细胞总RNA的提取、反转录反应、PCR反应、NS基因片段的克隆及测序等。结果 :(1)提取的总RNA质量很高 ,基本上无降解 ;(2 )OS - 732细胞和HEK - 2 93细胞中均有NS基因的表达 ,并且在相同量底物的情况下 ,OS- 732细胞NS基因的表达量明显高于HEK - 2 93细胞 ;(3)将PCR产物成功地与pGEM -T克隆载体连接 ,构建为pGEM -T -NS质粒 ,测序结果表明NS基因片段序列与基因库中登陆的序列完全一致。结论 :本文成功地从OS - 732细胞和HEK - 2 93细胞克隆到NS基因片段 ,OS - 732细胞NS基因的表达量明显高于HEK- 2 展开更多
关键词 核干细胞因子 人成骨肉瘤细胞 NS 基因 克隆 胚胎 肾细胞 反转录反应 PCR反应
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矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的细胞抗氧化活性研究 被引量：13
2
作者 刘迪 张浩 +2 位作者 孙宏宇 冯宪敏 刘静波 《营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期293-297,共5页
目的研究矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(C3G)对H2O2诱导细胞氧化应激损伤的抗氧化作用,为其在人类植物膳食以及功能食品方面的应用提供实验依据。方法 MTS法考察C3G对HEK-293细胞的毒性/增殖作用;通过H2O2诱导的HEK-293细胞氧化应激模型,基于... 目的研究矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(C3G)对H2O2诱导细胞氧化应激损伤的抗氧化作用,为其在人类植物膳食以及功能食品方面的应用提供实验依据。方法 MTS法考察C3G对HEK-293细胞的毒性/增殖作用;通过H2O2诱导的HEK-293细胞氧化应激模型,基于细胞活力水平研究C3G对氧化应激细胞的保护作用;试剂盒检测细胞抗氧化酶类(CAT,SOD,GSH-Px)活性水平;细胞抗氧化活性(CAA)检测C3G对细胞的抗氧化作用。结果 1.25~20μmol/L C3G处理正常HEK-293细胞后对细胞活力无显著影响,确定该浓度对细胞无毒性/增殖作用;1.25~20μmol/L C3G预处理氧化应激细胞后,细胞活力显著高于损伤组,且具有浓度依赖效应;5、20μmol/L浓度C3G能显著提高氧化应激细胞CAT、SOD和GSH-Px活性;C3G能有效抑制AAPH自由基诱导的DCFH氧化,并呈现浓度依赖性降低,具有很强的细胞抗氧化能力。结论 C3G可通过提高细胞活力、增强抗氧化酶活性、抑制自由基氧化实现对细胞氧化应激损伤的保护作用。 展开更多
关键词 矢车菊素-3-O-葡萄糖苷 抗氧化 hek-293细胞 CAA
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HEK-293细胞复苏培养及冻存 被引量：4
3
作者 杨彪 梅晰凡 刘福强 《辽宁医学院学报》 CAS 2007年第6期1-3,共3页
目的通过对人胚肾293细胞的复苏培养及其冻存的研究,为进一步行干细胞标记实验奠定基础。方法复苏培养人胚肾293细胞,倒置显微镜观察人胚肾293细胞的生长状况,计算细胞贴壁率,绘制细胞生长曲线,冻存保留细胞。结果人胚肾293细胞在普通... 目的通过对人胚肾293细胞的复苏培养及其冻存的研究,为进一步行干细胞标记实验奠定基础。方法复苏培养人胚肾293细胞,倒置显微镜观察人胚肾293细胞的生长状况,计算细胞贴壁率,绘制细胞生长曲线,冻存保留细胞。结果人胚肾293细胞在普通培养条件下生长良好,6h后大部分细胞已经贴壁,8h细胞已完全贴壁。结论人胚肾293细胞采用改进方法复苏培养及冻存是简便可行的,为进一步行干细胞标记实验奠定了坚实的前期基础。 展开更多
关键词 人胚肾293细胞 细胞培养 冻存
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人参皂苷F2干预Caspase级联反应抑制H2O2诱导的细胞凋亡 被引量：6
4
作者 刘迪 张浩 +3 位作者 张寒雪 孙宏宇 郑美玉 冯宪敏 《现代食品科技》 EI CAS 北大核心 2020年第7期11-16,共6页
本研究探讨了人参皂苷F2对H2O2诱导人胚肾HEK-293细胞损伤的抗凋亡作用。利用试剂盒测定凋亡细胞Caspase-6和Caspase-9活性水平,应用WesternBlot检测凋亡细胞中Bcl-2凋亡家族(Bcl-2和Bax)与Caspase凋亡家族(CleavedCaspase-3和Cleaved P... 本研究探讨了人参皂苷F2对H2O2诱导人胚肾HEK-293细胞损伤的抗凋亡作用。利用试剂盒测定凋亡细胞Caspase-6和Caspase-9活性水平,应用WesternBlot检测凋亡细胞中Bcl-2凋亡家族(Bcl-2和Bax)与Caspase凋亡家族(CleavedCaspase-3和Cleaved PARP)的蛋白表达量。H2O2损伤细胞后,Caspase酶活力提高,促凋亡蛋白表达提高;1.25、5、20μmol/L F2预处理损伤细胞后,Caspase-6和Caspase-9活力呈浓度依赖性降低(p<0.05),当F2浓度达到20μmol/L时,Caspase-6活性降低了6.83 U/mg protein,Caspase-9活性降低了5.88U/mgprotein;CleavedCaspase-3和CleavedPARP蛋白表达量显著低于损伤组(p<0.05),随着F2浓度的升高,Cleaved Caspase-3表达量分别下降至280.90%、232.46%、185.26%,Cleaved PARP表达量随着F2浓度升高而降低至110.36%、85.85%、61.95%;F2高浓度组的Bcl-2/Bax比值(73.94%)较损伤组比显著提升(p<0.05)。表明人参皂苷F2可以抑制凋亡蛋白Caspase的活性,降低Bax促凋亡蛋白与Caspase家族上、中、下游蛋白的表达,通过调控Caspase级联反应抑制H2O2刺激引起的细胞凋亡。 展开更多
关键词 人参皂苷 抗凋亡 hek-293细胞 人参
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蜂王浆对顺铂诱导HEK-293细胞损伤的保护作用及其机制研究 被引量：5
5
作者 李佳 喻凯 +3 位作者 何雨轩 冯彤彤 王红 陆群 《毒理学杂志》 CAS CSCD 2020年第3期241-245,共5页
目的探讨蜂王浆对顺铂诱导人胚肾细胞损伤的保护作用及其可能的机制。方法将细胞分为损伤组(100μg/ml CDDP)、蜂王浆(RJ)不同剂量组(CDDP+25、50、100μg/ml RJ)和正常对照组(等量溶剂)。各组经处理后,通过CCK-8法检测细胞增殖活力,比... 目的探讨蜂王浆对顺铂诱导人胚肾细胞损伤的保护作用及其可能的机制。方法将细胞分为损伤组(100μg/ml CDDP)、蜂王浆(RJ)不同剂量组(CDDP+25、50、100μg/ml RJ)和正常对照组(等量溶剂)。各组经处理后,通过CCK-8法检测细胞增殖活力,比色法测定培养基乳酸脱氢酶(LDH)活性反映细胞损伤情况;Hoechst33342/PI双染法分析细胞凋亡情况;测定细胞活性氧(ROS)含量、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。结果与对照组比较,损伤组培养液中LDH活性增加,细胞损伤增加、增殖活力降低、凋亡增加,差异具有统计学意义(P<0.05);细胞内SOD、CAT和GSH-Px活性降低,ROS含量增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。25~100μg/ml浓度范围内RJ能明显改善这些指标,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01),且改善作用和浓度呈正相关(P<0.05)。结论 100μg/ml CDDP可通过氧化损伤诱导的HEK-293细胞凋亡,活力降低。25~100μg/ml浓度范围内RJ能增加胞内SOD、CAT和GSH-Px 3种抗氧化酶活性,降低ROS含量,减轻这种损伤。 展开更多
关键词 蜂王浆 hek-293细胞 顺铂 细胞凋亡 抗氧化
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埃他卡林新衍生物激活ATP敏感性钾通道的亚型选择性 被引量：4
6
作者 陈玉萍 潘志远 +1 位作者 崔文玉 汪海 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1427-1430,共4页
目的研究埃他卡林新衍生物对不同亚型KATP通道的选择性作用。方法在特异性表达Kir6.2/SUR1、Kir6.2/SUR2A、Kir6.1/SUR2B3种不同亚型KATP通道的HEK-293细胞模型上,分别给予0.1、1.0、10、100×10-6mol.L-1的埃他卡林新衍生物,研究... 目的研究埃他卡林新衍生物对不同亚型KATP通道的选择性作用。方法在特异性表达Kir6.2/SUR1、Kir6.2/SUR2A、Kir6.1/SUR2B3种不同亚型KATP通道的HEK-293细胞模型上,分别给予0.1、1.0、10、100×10-6mol.L-1的埃他卡林新衍生物,研究其作用前后DiBAC4(3)细胞荧光强度的变化,评价其对克隆表达的不同亚型KATP通道的选择性作用。结果7个埃他卡林新衍生物可激活KATP通道,其中衍生物(3)、(7)、(8)、(9)、(12)和(14)对3个亚型的KATP通道均具有激活作用,衍生物(7)对Kir6.2/SUR2A亚型的激活作用最强;衍生物(6)纳他卡林(natakalim)仅激活Kir6.1/SUR2B亚型,对Kir6.2/SUR2A和Kir6.2/SUR1亚型均无激活作用。结论纳他卡林为Kir6.1/SUR2B亚型高选择性开放剂。 展开更多
关键词 KATP通道 hek-293细胞 纳他卡林 埃他卡林衍生物
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羟基酪醇的抗氧化作用 被引量：4
7
作者 高凤 王林 +2 位作者 徐静 杨阳 张丹 《中国食物与营养》 2013年第7期71-73,共3页
目的:研究羟基酪醇(HT)对过氧化氢(H2O2)诱导人胚肾293(HEK-293)细胞氧化性损伤的保护作用。方法:以HEK-293细胞为靶细胞,分为空白对照组、H2O2损伤组(20μM)、HT低浓度(12.5μM)、中浓度(25μM)、高浓度(50μM),对H2O2损伤组预处理1h... 目的:研究羟基酪醇(HT)对过氧化氢(H2O2)诱导人胚肾293(HEK-293)细胞氧化性损伤的保护作用。方法:以HEK-293细胞为靶细胞,分为空白对照组、H2O2损伤组(20μM)、HT低浓度(12.5μM)、中浓度(25μM)、高浓度(50μM),对H2O2损伤组预处理1h。用免疫组化方法检测细胞内8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的表达水平;采用荧光探针2',7'-二氢二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)检测细胞内活性氧类(ROS)水平;以荧光法检测细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)水平。结果:与空白对照组比较,H2O2损伤模型组细胞内8-OHdG的表达升高、ROS水平增加、GSH水平下降(P<0.05,P<0.01)。HT预处理后HEK-293细胞内8-OHdG的表达明显降低,ROS水平降低,GSH水平升高。结论:HT通过抗氧化作用抑制细胞DNA的氧化性损伤,减轻H2O2对HEK-293细胞的损伤作用,从而产生保护作用。 展开更多
关键词 羟基酪醇 氧化性损伤 hek-293细胞
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矢车菊素-3-O-葡萄糖苷干预Caspase级联反应抑制H2O2诱导的细胞凋亡 被引量：4
8
作者 刘迪 于子翔 +3 位作者 张寒雪 孙宏宇 郑美玉 冯宪敏 《营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期369-373,共5页
目的研究矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(C3G)对H2O2诱导人胚肾HEK-293细胞损伤的抗凋亡作用。方法通过检测caspase(半胱天冬酶)-6和caspase-9活性水平考察C3G对损伤细胞的影响,并采用Western blot法检测cleaved caspase-3、cleavedPARP、Bcl-2... 目的研究矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(C3G)对H2O2诱导人胚肾HEK-293细胞损伤的抗凋亡作用。方法通过检测caspase(半胱天冬酶)-6和caspase-9活性水平考察C3G对损伤细胞的影响,并采用Western blot法检测cleaved caspase-3、cleavedPARP、Bcl-2和Bax的蛋白表达量变化。结果H2O2损伤细胞后,凋亡相关蛋白酶活力提高,促凋亡蛋白表达提高;1.25、5、20μmol/L C3G预处理损伤细胞后,caspase-6和caspase-9活力显著低于损伤组(P<0.05),并呈浓度依赖性降低,cleaved caspase-3和cleaved PARP蛋白表达量均呈浓度依赖性下调,显著低于损伤组(P<0.05),Bcl-2/Bax比值较损伤组比显著提升(P<0.05)。结论矢车菊素-3-O-葡萄糖苷对H2O2诱导的HEK-293细胞损伤具有抗凋亡作用,其作用机制可能是通过调控caspase家族和Bcl-2家族凋亡蛋白,抑制caspase信号通路的级联反应来实现抗凋亡作用. 展开更多
关键词 矢车菊素-3-O-葡萄糖苷 抗细胞凋亡 hek-293细胞 半胱天冬酶
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氟康唑对豚鼠心室肌细胞I_K和在HEK-293细胞中表达的HERG钾通道的抑制作用 被引量：4
9
作者 韩圣娜 陈秋 +4 位作者 张雨 角灿武 毛讯 付润芳 张莉蓉 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期861-866,共6页
目的研究氟康唑对豚鼠心室肌细胞延迟整流钾电流(IK)和在HEK-293细胞中表达的HERG钾通道的抑制作用。方法应用酶解法消化豚鼠单个心室肌细胞,观察氟康唑对IK的影响;采用磷酸钙沉淀瞬时转染的方法将HERG基因表达于HEK-293细胞上,观察氟... 目的研究氟康唑对豚鼠心室肌细胞延迟整流钾电流(IK)和在HEK-293细胞中表达的HERG钾通道的抑制作用。方法应用酶解法消化豚鼠单个心室肌细胞,观察氟康唑对IK的影响;采用磷酸钙沉淀瞬时转染的方法将HERG基因表达于HEK-293细胞上,观察氟康唑对野生型HERG钾通道电流、激活和失活曲线的影响,以及氟康唑对Y652A和F656C突变型HERG钾通道的作用;IK和HERG电流的记录均采用全细胞膜片钳技术。结果氟康唑(0.01、0.1、1、3、10、30、100、300和1 000μmol.L-1)浓度依赖性地抑制IK和HERG钾电流,其IC50值分别为(68.1±21.6)μmol.L-1和(48.2±9.4)μmol.L-1,对HERG钾通道的电压依赖性激活和失活曲线无影响;与野生型(WT)比较,Y652A和F656C突变型可减弱氟康唑对HERG通道的阻断作用。结论氟康唑能阻断IK和HERG通道,Y652和F656是氟康唑与HERG通道结合的关键位点。 展开更多
关键词 氟康唑 延迟整流钾电流 HERG钾通道 膜片钳技术 hek-293细胞 心室肌细胞
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促红细胞生成素对顺铂诱导HEK-293细胞毒性的保护作用 被引量：3
10
作者 郭培培 郭豫 +1 位作者 高丽萍 郭卓雨 《江苏医药》 CAS 北大核心 2013年第18期2126-2128,F0003,共4页
目的研究促红细胞生成素(EPO)对顺铂(CDDP)诱导的人胚肾细胞(HEK-293)毒性的影响及其可能机理。方法体外培养HEK-293细胞,采用MTT法检测不同浓度CDDP、EPO对HEK-293细胞的作用,倒置显微镜观察细胞形态变化,硫代巴比妥酸法检测细胞丙二醛... 目的研究促红细胞生成素(EPO)对顺铂(CDDP)诱导的人胚肾细胞(HEK-293)毒性的影响及其可能机理。方法体外培养HEK-293细胞,采用MTT法检测不同浓度CDDP、EPO对HEK-293细胞的作用,倒置显微镜观察细胞形态变化,硫代巴比妥酸法检测细胞丙二醛(MDA)含量,比色法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性变化。结果 CDDP能明显抑制HEK-293细胞存活率,诱导细胞贴壁能力下降,增加MDA含量,降低SOD活性;而加入EPO后能明显改善这些状况。结论 EPO对CDDP诱导的HEK-293细胞损伤具有保护作用。其保护机制可能与其抗氧化活性、猝灭自由基的功能有关。 展开更多
关键词 顺铂 促红细胞生成素 hek-293细胞
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醋酸铅对两种不同细胞遗传毒性的初步研究 被引量：2
11
作者 陈雪利 吴珏 杨超 《生物学杂志》 CAS CSCD 2015年第4期35-37,42,共4页
为探究醋酸铅对肝、肾细胞遗传毒性的影响,采用不同浓度的醋酸铅处理体外培养的人肝细胞WRL-68和人胚肾细胞HEK-293,分析其微核和核芽指标并测定了HEK-293细胞的活力。发现随醋酸铅浓度的增加,WRL-68细胞的微核率呈逐渐上升的趋势,其核... 为探究醋酸铅对肝、肾细胞遗传毒性的影响,采用不同浓度的醋酸铅处理体外培养的人肝细胞WRL-68和人胚肾细胞HEK-293,分析其微核和核芽指标并测定了HEK-293细胞的活力。发现随醋酸铅浓度的增加,WRL-68细胞的微核率呈逐渐上升的趋势,其核芽率则先升后降并在0.5μmol/L时达到最大值;而HEK-293细胞的微核率、核芽率2项指标都呈先上升后下降的趋势,并在浓度为125μmol/L时,达到峰值。采用MTT法研究HEK-293细胞活力的实验中发现,随醋酸铅浓度的增加及处理时间的延长,细胞活力呈现明显的剂量效应和时间效应。结果表明,醋酸铅对肝细胞及肾细胞具有遗传毒性可能是通过微核及核芽导致细胞的遗传物质丢失这一途径引起的。 展开更多
关键词 醋酸铅 WRL-68细胞 hek-293细胞 遗传毒性
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玉屏风水煎剂及其组分对大鼠肾脏组织及HEK-293细胞OAT1/3表达的影响 被引量：2
12
作者 闻泽强 李大朗 宋珏 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期1457-1462,共6页
目的探讨玉屏风水煎剂及其组分对大鼠肾脏组织及HEK-293细胞OAT1/3表达的影响。方法采用MTT法检测玉屏风及其组分水煎剂对HEK-293细胞存活率的影响;采用Western blot法和RT-PCR法检测各组水煎剂对大鼠肾脏及HEK-293细胞中OAT1/3蛋白及m... 目的探讨玉屏风水煎剂及其组分对大鼠肾脏组织及HEK-293细胞OAT1/3表达的影响。方法采用MTT法检测玉屏风及其组分水煎剂对HEK-293细胞存活率的影响;采用Western blot法和RT-PCR法检测各组水煎剂对大鼠肾脏及HEK-293细胞中OAT1/3蛋白及mRNA表达的影响。结果玉屏风、白术、防风水煎剂下调大鼠肾脏和HEK-293细胞中OAT1蛋白及mRNA表达(P<0.05,P<0.01),玉屏风及防风水煎剂下调大鼠肾脏及HEK-293细胞中OAT3蛋白及mRNA表达(P<0.05,P<0.01),白术水煎剂上调大鼠肾脏及HEK-293细胞OAT3蛋白及mRNA表达(P<0.05,P<0.01)。黄芪水煎剂对大鼠肾脏及HEK-293细胞中OAT1/3蛋白表达无抑制作用。结论玉屏风水煎剂对OAT1/3有明显的抑制作用,玉屏风的这种抑制作用可能跟其主要成分白术、防风有关。 展开更多
关键词 玉屏风水煎剂 大鼠肾脏 hek-293 OAT1/3
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基于miRNA-30的RNAi表达框架的构建及其有效性验证 被引量：1
13
作者 李亚红 赵丹丹 +3 位作者 李思佳 覃淇 邱彤彤 彭剑雄 《临床检验杂志》 CAS CSCD 2016年第8期625-629,共5页
目的构建基于人源性miRNA-30,针对EGFP基因的RNAi表达框架并验证其有效性。方法融合PCR构建RNAi表达框架,经凝胶电泳、测序比对及二级结构预测后,将该表达框架与p EGFP-N2质粒共转染A549、HCT116及HEK-293细胞,48 h后倒置荧光显微镜观察... 目的构建基于人源性miRNA-30,针对EGFP基因的RNAi表达框架并验证其有效性。方法融合PCR构建RNAi表达框架,经凝胶电泳、测序比对及二级结构预测后,将该表达框架与p EGFP-N2质粒共转染A549、HCT116及HEK-293细胞,48 h后倒置荧光显微镜观察EGFP的表达情况并用流式细胞仪检测平均荧光强度。结果凝胶电泳和测序比对均显示RNAi表达框架与设计的相符,二级结构预测显示,新型RNAi表达框架与人源性miRNA-30的二级结构高度相似;共转染该表达框架与p EGFP-N2质粒48 h后,倒置荧光显微镜观察结果显示,3种细胞的荧光强度均明显减弱,流式细胞仪检测结果显示,3种细胞中共转染组与单独转染组相比平均荧光强度的差异均有统计学意义(P<0.05)。结论新型RNAi表达框架构建成功,且能有效干扰EGFP在A549,HCT116和HEK-293细胞中的表达。 展开更多
关键词 RNAI 人工miRNA表达框架 A549细胞 HCT116细胞 hek-293细胞
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镰形棘豆总黄酮抗肾癌分子作用机制的网络药理学初探 被引量：2
14
作者 彭岩枫 郭阳 +3 位作者 刘海瑞 周怡 张晓凤 张得钧 《华西药学杂志》 CAS CSCD 2022年第6期623-630,共8页
目的利用网络药理学和分子对接方法研究镰形棘豆总黄酮(TFOF)抗肾癌的分子机制。方法通过SEAdatabase、SwissTarget Prediction和TargetNet数据库预测TFOF的相关靶点。从DisGeNET、NCBI、GeneCards、OMIM和GeneCLip3数据库收集与肾癌相... 目的利用网络药理学和分子对接方法研究镰形棘豆总黄酮(TFOF)抗肾癌的分子机制。方法通过SEAdatabase、SwissTarget Prediction和TargetNet数据库预测TFOF的相关靶点。从DisGeNET、NCBI、GeneCards、OMIM和GeneCLip3数据库收集与肾癌相关的靶点,通过靶点映射确定活性化合物作用于炎症的靶点。利用Cytoscape3.7.2软件,构建药物-化合物-疾病-靶点蛋白互作网络图。借助Omicshare和Metascape开放平台对交集靶点进行GO及KEGG富集分析。检测活性化合物对TNF-α诱导特殊转染的人胚胎肾293细胞(HEK-293细胞)中NF-κB抑制率的影响,以验证其抗肿瘤活性。通过Autodock软件对核心化合物和核心靶点进行分子对接验证。结果靶点映射确定了460个镰形棘豆黄酮类化合物与炎症的共同靶点,其中,关键靶点8个(包括AKT1、TNF、SRC、VEGFA、EGFR等)。KEGG富集结果显示:TFOF的抗炎机制主要为调控cAMP信号通路、癌症中的微小RNA、VEGF信号通路等。分子对接显示核心成分与核心靶点对接良好。体外实验表明:7-羟基黄酮、2′,4′-二羟基查尔酮这两种化合物可显著抑制TNF-α活化HEK-293细胞中NF-κB的释放,具有明显的抗肾癌作用。结论镰形棘黄酮类化合物通过“多成分-多靶点-多通路”发挥抗肾癌作用,该作用可能与其对cAMP信号通路、癌症中的微小RNA、VEGF信号通路等的调控有关。 展开更多
关键词 镰形棘豆总黄酮 肾癌 镰形棘豆 网络药理学 分子对接 7-羟基黄酮 NF-ΚB 2′ 4′-二羟基查尔酮 人胚胎肾293细胞
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扩增和纯化携带肌浆网钙ATP酶重组腺病毒的实验方法
15
作者 范平 魏琴 +1 位作者 段明军 侯月梅 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期53-56,共4页
目的:通过扩增和纯化rAd.SERCA2a,为转SERCA2a基因研究提供实验基础,并为建立基因库提供稳定可靠的实验方法。方法:用100μL 1.9×1012 pfu/ml rAd.SERCA2a感染HEK293细胞,出现细胞病变效应时收获细胞,经物理反复冻融方法及两步氯... 目的:通过扩增和纯化rAd.SERCA2a,为转SERCA2a基因研究提供实验基础,并为建立基因库提供稳定可靠的实验方法。方法:用100μL 1.9×1012 pfu/ml rAd.SERCA2a感染HEK293细胞,出现细胞病变效应时收获细胞,经物理反复冻融方法及两步氯化铯超速离心方法获得纯化的rAd.SERCA2a,紫外分光光度计比色法测定病毒DNA质粒数。结果:rAd.SERCA2a成功在HEK293细胞表达呈现绿色荧光,纯化的rAd-SERCA2a-GFP DNA质粒数为1.3±0.58×1012 pfu/mL,OD260/OD280比值为1.57±0.49(n=50)。结论:建立了稳定可靠的借助HEK293细胞培养扩增rAd.SERCA2a的实验方法,纯化后的高效价的SERCA2a基因的重组腺病毒可直接用于心力衰竭的实验研究,对重组腺病毒携带其他基因的扩增与提纯方法也具有一定的参考价值。 展开更多
关键词 hek293细胞 腺病毒 SERCA2A 扩增 纯化
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含hITF启动子的荧光素酶报告质粒的构建及活性检测 被引量：1
16
作者 王臻 王林 +3 位作者 万千雪 金星 梁光萍 彭曦 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期1024-1027,共4页
目的构建含有人肠三叶因子(intestinal trefoil factor,hITF)启动子的荧光素酶表达载体,并检测启动子活性。方法采用PCR技术从LS-174T细胞基因组DNA中扩增出长约2.5kb的含hITF基因启动子片段(-2331/+53),而后在此基础上构建了10个不同... 目的构建含有人肠三叶因子(intestinal trefoil factor,hITF)启动子的荧光素酶表达载体,并检测启动子活性。方法采用PCR技术从LS-174T细胞基因组DNA中扩增出长约2.5kb的含hITF基因启动子片段(-2331/+53),而后在此基础上构建了10个不同长度的启动子序列至pGL-3basic荧光素酶表达载体,然后将这些重组质粒转染HEK-293细胞并在48h后检测其荧光素酶活性。结果插入的hITF启动子片段测序结果显示正确,-500/+53,-400/+53和-300/+53片段活性介于0.023～0.026之间,-200/+53,-100/+53和-50/+53活性介于0.0032～0.0042之间,明确了最小活性功能域位于-300/+53区域,-300/-200区域对hITF转录起始起关键性作用。结论成功构建了含hITF启动子的萤火虫荧光素酶报告基因质粒,鉴定出人肠三叶因子(hITF)启动子活性位于-300/-200区域。 展开更多
关键词 肠三叶因子 启动子 pGL-3basic hek-293细胞
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Endo G基因过表达对镉诱导HEK-293细胞凋亡影响 被引量：1
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作者 周凤云 潘杨滨 +4 位作者 何志娟 毛伟平 李文秀 刘宣宣 徐翀 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1322-1326,共5页
目的观察细胞凋亡因子核酸内切酶G(endonuclease G,Endo G)基因过表达在镉诱导人胚胎肾细胞HEK-293凋亡中的影响。方法从人肝癌细胞系(human hepatocarcinoma cells,HepG 2)中提取RNA,经逆转录获取互补DNA cDNA),通过聚合酶链反应(PCR)... 目的观察细胞凋亡因子核酸内切酶G(endonuclease G,Endo G)基因过表达在镉诱导人胚胎肾细胞HEK-293凋亡中的影响。方法从人肝癌细胞系(human hepatocarcinoma cells,HepG 2)中提取RNA,经逆转录获取互补DNA cDNA),通过聚合酶链反应(PCR)扩增Endo G基因,与pcDNA 3.0相连,构建pcDNA 3.0-Endo G真核表达载体,转染HEK-293细胞,并结合不同浓度氯化镉处理细胞;通过蛋白印迹实验(Western blot)验证基因过表达,吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)双染法及流式细胞术(FCM)检测Endo G基因过表达对镉诱导HEK-293细胞凋亡的影响,噻唑蓝法(MTT)检测细胞存活率。结果成功构建pcDNA 3.0-EndoG真核表达载体,Endo G基因扩增片段大小约1 100 bp;该载体转染细胞后,Endo G成功过表达,使HEK-293细胞凋亡率>37%,且随氯化镉浓度增加,Endo G表达量先上升后下降。结论 Endo G以诱导细胞早期凋亡和晚期凋亡为主要形式。 展开更多
关键词 氯化镉 pcDNA 3.0 真核表达 核酸内切酶G(Endo G) hek-293细胞 凋亡
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GATA5抑制EpCAM表达对肾癌HEK-293细胞系的影响
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作者 刘诚 石嵩 +1 位作者 陈文 关建民 《山东第一医科大学（山东省医学科学院）学报》 2021年第8期579-583,共5页
目的研究GATA5对肾癌HEK-293细胞系增殖调控及对细胞重编程因子EpCAM表达的影响。方法构建pTT5-GATA5表达载体并进行基因序列测序验证;四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖率;细胞划痕实验检测细胞划痕修复情况;实时定量反转录-聚合酶链... 目的研究GATA5对肾癌HEK-293细胞系增殖调控及对细胞重编程因子EpCAM表达的影响。方法构建pTT5-GATA5表达载体并进行基因序列测序验证;四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖率;细胞划痕实验检测细胞划痕修复情况;实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测基因mRNA表达;蛋白免疫印迹(Western Blot)检测蛋白表达。结果GATA5抑制HEK-293细胞增殖;GATA5抑制HEK-293细胞划痕修复;GATA5抑制EpCAM的mRNA和蛋白表达。结论GATA5可以抑制肾癌细胞HEK-293细胞的增殖率并抑制EpCAM表达。 展开更多
关键词 GATA5 EPCAM hek-293细胞 肾癌
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全反式维甲酸通过Sp1/Sp3位点调节HEK-293细胞中CD2AP基因的表达
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作者 高珊 徐华国 +5 位作者 金蕊 邱灵芝 朱亮华 蒋莉 庄丽丽 周国平 《江苏医药》 CAS 北大核心 2013年第9期999-1002,共4页
目的研究全反式维甲酸(ATRA)对人胚胎肾HEK-293细胞中CD2相关蛋白(CD2AP)基因表达的影响。方法 ATRA作用HEK-293细胞后,采用RT-PCR和Western blot分别检测CD2AP mRNA及其蛋白的表达。将构建的不同Sp1/Sp3位点的定点突变、巢式缺失突变的... 目的研究全反式维甲酸(ATRA)对人胚胎肾HEK-293细胞中CD2相关蛋白(CD2AP)基因表达的影响。方法 ATRA作用HEK-293细胞后,采用RT-PCR和Western blot分别检测CD2AP mRNA及其蛋白的表达。将构建的不同Sp1/Sp3位点的定点突变、巢式缺失突变的CD2AP启动子质粒转染HEK-293细胞,检测报告质粒的荧光素酶活性。结果 ATRA明显上调HEK-293细胞中CD2AP mRNA和蛋白水平(P<0.05)。缺失突变及点突变研究显示,Sp1/Sp3-A、C位点在介导ATRA上调CD2AP过程中发挥重要作用。结论 ATRA通过Sp1/Sp3结合位点诱导HEK-293细胞中CD2AP的表达;ATRA对CD2AP基因缺陷肾病患者可能有治疗作用。 展开更多
关键词 全反式维甲酸 hek-293细胞 CD2相关蛋白
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烟酰胺对白介素-1β诱导HEK-293细胞凋亡的保护作用
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作者 周建国 杨操 +3 位作者 杨述华 谢卯 黄吉军 熊蠡茗 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第14期1061-1066,共6页
目的研究烟酰胺对白介素-1β(IL-1β)诱导HEK-293细胞凋亡的保护作用及机制。方法体外培养HEK-293细胞,将HEK-293细胞分成6组,在培养基内加不同浓度的IL-1β、烟酰胺干预。干预3 d后噻唑蓝(MTT)检测、Annexin V-PI染色、caspase-3、8、... 目的研究烟酰胺对白介素-1β(IL-1β)诱导HEK-293细胞凋亡的保护作用及机制。方法体外培养HEK-293细胞,将HEK-293细胞分成6组,在培养基内加不同浓度的IL-1β、烟酰胺干预。干预3 d后噻唑蓝(MTT)检测、Annexin V-PI染色、caspase-3、8、9活性检测、细胞内活性氧簇(ROS)水平、ATP浓度及线粒体膜电位检测。结果应用烟酰胺的MTT吸光度明显升高,凋亡细胞比例明显降低,caspase-3、8、9活力降低,ATP浓度明显增加,ROS水平明显减少;线粒体膜电位红绿荧光比值明显增加。结论体外条件下,烟酰胺促进HEK-293细胞的增殖并抑制IL-1β诱导的HEK-293细胞凋亡,其对细胞凋亡的保护作用可能主要通过保护线粒体功能从而改善细胞线粒体能量代谢来实现。 展开更多
关键词 烟酰胺 hek-293细胞 白细胞介素-1Β 凋亡 能量代谢 线粒体
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