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HBV X蛋白反式调节基因XTP11的克隆化研究 被引量：4
1
作者 李进 刘妍 +4 位作者 成军 纪冬 宫曼 张玲霞 陈菊梅 《中西医结合肝病杂志》 CAS 2005年第2期85-87,90,共4页
目的:应用寡核苷酸基因芯片技术及生物信息学分析,筛选并克隆乙肝病毒X蛋白(HBxAg)反式激活新型靶基因。方法:以HBxAg表达质粒pcDNA 3 1(-) X转染HepG2细胞,以空载体pcDNA 3. 1(-)为平行对照,提取mRNA并进行寡核苷酸基因芯片分析。... 目的:应用寡核苷酸基因芯片技术及生物信息学分析,筛选并克隆乙肝病毒X蛋白(HBxAg)反式激活新型靶基因。方法:以HBxAg表达质粒pcDNA 3 1(-) X转染HepG2细胞,以空载体pcDNA 3. 1(-)为平行对照,提取mRNA并进行寡核苷酸基因芯片分析。对于所获基因片段序列分析表明,其中之一为新型基因片段,与GenBank中注册的已知功能基因序列没有同源性。通过序列同源性搜索和比对和电子拼接,根据基因起始密码子的Kozak规则和终止密码子下游保守的多聚腺苷酸信号序列,确定新型基因序列。从转染了pcDNA 3 . 1(-) X的HepG2细胞提取总RNA ,以逆转录聚合酶链反应(RT- PCR)技术,扩增获得该新基因的全长序列,并测序证实。结果:该新基因命名为XTP11,在GenBank中注册,注册号为AY740 5 2 0。该基因的编码序列全长为13 44个核苷酸(nt) ,编码产物由44 8个氨基酸残基(aa)组成。结论:HBxAg反式激活新型靶基因XTP11的筛选与克隆,为进一步研究HBxAg反式激活作用的分子生物学机制奠定基础。 展开更多
关键词 反式调节基因 克隆化研究 HBV 逆转录聚合酶链反应 pcDNA3 hbxag 生物信息学分析 乙肝病毒X蛋白 HepG2细胞 分子生物学机制 基因芯片技术 反式激活作用 寡核苷酸 基因片段 基因序列 序列同源性 终止密码子 氨基酸残基 表达质粒
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乙型肝炎病毒X蛋白反式激活基因XTP13的克隆
2
作者 宫嫚 成军 +6 位作者 纪冬 刘妍 郭江 张黎颖 王建军 张健 李筠 《传染病信息》 2005年第4期177-179,共3页
目的克隆乙型肝炎病毒(HBV)X 蛋白反式激活新型靶基因。方法以 HBV X 蛋白表达质粒 pcDNA3 1(-)-X转染 HepG2细胞,以空载体 pcDNA3.1(-)为平行对照,提取总 RNA 进行逆转录,对产物行基因表达谱芯片分析,确定新基因编码序列后,以逆转录多... 目的克隆乙型肝炎病毒(HBV)X 蛋白反式激活新型靶基因。方法以 HBV X 蛋白表达质粒 pcDNA3 1(-)-X转染 HepG2细胞,以空载体 pcDNA3.1(-)为平行对照,提取总 RNA 进行逆转录,对产物行基因表达谱芯片分析,确定新基因编码序列后,以逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术扩增新基因序列。结果获得新基因的全长序列,并测序证实,命名为 X 蛋白反式激活蛋白13(XTP13)。结论成功克隆 XTP13,为进一步阐明 HBxAg 在 HBV 感染中的分子生物学机制奠定基础。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 X抗原 反式激活
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HBxAg增加p53蛋白在肝癌细胞内积聚 被引量：14
3
作者 朱明华 戴益民 詹甸洲 《中华病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期31-34,共4页
目的进一步研究ＨＢＶｘ基因产物ＨＢｘＡｇ与ｐ５３蛋白的相互关系，探讨其在原发性肝癌发生中的作用机制。方法以肝癌细胞株Ｈｅｐ３Ｂ为靶细胞，应用薄层层析法做报道基因氯霉素乙酰转移酶（ＣＡＴ）试验与ｐ５３和ＨＢｘ基因共转染... 目的进一步研究ＨＢＶｘ基因产物ＨＢｘＡｇ与ｐ５３蛋白的相互关系，探讨其在原发性肝癌发生中的作用机制。方法以肝癌细胞株Ｈｅｐ３Ｂ为靶细胞，应用薄层层析法做报道基因氯霉素乙酰转移酶（ＣＡＴ）试验与ｐ５３和ＨＢｘ基因共转染，并构建了地塞米松诱导表达的ＨＢｘ基因质粒，用免疫荧光法观察ＨＢｘＡｇ表达对细胞内ｐ５３蛋白的影响。结果应用ＨＢｘ基因与ｐ５３和ｐＧ１３ＣＡＴ共转染，随ＨＢｘ量的增加而ＣＡＴ信号增强，免疫组化显示，当ＨＢｘＡｇ与ｐ５３蛋白在细胞内结合形成复合物后，ｐ５３蛋白进入胞核部分受阻滞，胞浆内ｐ５３蛋白含量增加。结论ＨＢｘＡｇ与ｐ５３存在蛋白质蛋白质结合的关系，使ｐ５３蛋白正常的负调节功能降低或失活，在ＨＢＶ感染相关的原发性肝癌发生中具有重要意义。 展开更多
关键词 肝肿瘤 P53基因 hbxag HBVX
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树实验肝癌发生过程中IGF-Ⅱ、HBxAg、p21和p53蛋白的表达 被引量：2
4
作者 苏建家 严瑞琪 +2 位作者 覃国忠 黄定瑞 杨春 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 1998年第5期484-487,I064,共5页
目的：探讨ＨＢＶ与ＡＦＢ１协同致肝癌作用机制。方法：用免疫组化观察５３只树鼠句肝及肝癌组织ＩＧＦ－Ⅱ、ＨＢｘＡｇ、ｐ２１及ｐ５３蛋白表达。结果：接受ＨＢＶ和ＡＦＢ１的树鼠句肝癌诱发率和ＩＧＦ－Ⅱ、ＨＢｘＡｇ、ｐ２１检... 目的：探讨ＨＢＶ与ＡＦＢ１协同致肝癌作用机制。方法：用免疫组化观察５３只树鼠句肝及肝癌组织ＩＧＦ－Ⅱ、ＨＢｘＡｇ、ｐ２１及ｐ５３蛋白表达。结果：接受ＨＢＶ和ＡＦＢ１的树鼠句肝癌诱发率和ＩＧＦ－Ⅱ、ＨＢｘＡｇ、ｐ２１检出率分别为５２．９％、８２．４％、５２．９％及２９．４％；只感染ＨＢＶ的分别为１１．１％、２２．２％、１１．１％和１１．１％；仅摄入ＡＦＢ１的分别为１５．８％、２６．３％及１５．８％（ｐ２１）；空白对照无肝癌及上述基因蛋白表达。带瘤肝ＩＧＦ－Ⅱ、ＨＢｘＡｇ及ｐ２１检出率均显著高于无瘤者，而表达这３种基因蛋白的动物肝癌发生率也均明显高于阴性者。突变的ｐ５３蛋白表达仅见于７例（５８．３％）中低分化的肝癌。结论：ＨＢＶ与ＡＦＢ１共同激发这些基因的异常表达可能是其协同致肝癌机制之一。 展开更多
关键词 肝癌 肿瘤发生 hbxag IGF-Ⅲ P21基因 P53基因
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乙型肝炎病毒X蛋白上调白细胞介素-18基因的表达 被引量：2
5
作者 刘蔚 王建军 +4 位作者 成军 张连峰 纪冬 刘妍 郭江 《中西医结合肝病杂志》 CAS 2004年第3期145-148,共4页
目的 :了解乙型肝炎病毒 (HBV )X蛋白 (HBxAg)与白细胞介素 18(IL 18)基因表达的关系 ,研究HBxAg在HBV致病的分子生物学机制中的作用。 方法 :聚合酶链反应 (PCR)扩增人IL 18基因启动子DNA ,命名为IL 18P。以T A克隆法 ,将IL 18P基因... 目的 :了解乙型肝炎病毒 (HBV )X蛋白 (HBxAg)与白细胞介素 18(IL 18)基因表达的关系 ,研究HBxAg在HBV致病的分子生物学机制中的作用。 方法 :聚合酶链反应 (PCR)扩增人IL 18基因启动子DNA ,命名为IL 18P。以T A克隆法 ,将IL 18P基因片段连入载体pGEM T。将获得的质粒 pGEM T IL 18P ,与报告质粒pCAT3 basic分别用KpnⅠ和BglⅡ双酶切后构建IL 18启动子报告基因表达载体 pCAT3 IL 18P ,以重组表达质粒pCAT3 IL 18P和HBxAg表达载体 pcDNA HBxAg瞬时转染HepG2细胞 ,以转染 pCAT3basic的HepG2细胞为阴性对照 ,48小时后收获细胞。用酶联免疫吸附法 (ELISA)检测细胞中氯霉素乙酰转移酶 (CAT)的表达活性 ,以了解乙型肝炎病毒X蛋白对IL 18基因表达的影响。结果 :构建的报告基因表达载体 pCAT3 IL 18P经过序列分析和酶切鉴定正确。真核表达载体pcDNA3 1(阴性 ) X和 pCAT3 IL 18P共转染的HepG2细胞的CAT表达活性是pCAT3空载体的 6 2倍 ,是 pCAT3 IL 18P的 1 17倍。 结论 :乙型肝炎病毒X蛋白可上调IL 18启动子的转录活性 ,促进IL 18基因表达。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 X蛋白 HBV hbxag 上调白细胞介素-18 基因表达 IL-18 基因片段
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广西肝癌组织中P^（53）蛋白和乙肝病毒免疫学标志物的检测 被引量：1
6
作者 罗丹 刘启福 +3 位作者 苏建家 覃国忠 覃柳亮 段小娴 《广西医科大学学报》 CAS 1996年第4期1-3,共3页
用免疫组化法测定广西２９例人肝癌及其癌旁组织中的Ｐ５３蛋白、ＨＢｓＡｇ和ＨＢｘＡｇ。４４．８％肝癌病例为Ｐ５３蛋白阳性，其癌内及癌旁Ｐ５３蛋白的检出率分别为２７．６％和２８．６％。２１％的肝癌内及８５．７％的癌旁肝组... 用免疫组化法测定广西２９例人肝癌及其癌旁组织中的Ｐ５３蛋白、ＨＢｓＡｇ和ＨＢｘＡｇ。４４．８％肝癌病例为Ｐ５３蛋白阳性，其癌内及癌旁Ｐ５３蛋白的检出率分别为２７．６％和２８．６％。２１％的肝癌内及８５．７％的癌旁肝组织中可见到ＨＢｓＡｇ。３１％的癌内及７５％的非癌肝组织呈ＨＢｘＡｇ阳性。Ｐ５３蛋白阳性的１３例病例有１１例（８４．６％）可同时检测出ＨＢｓＡｇ和ＨＢｘＡｇ。结果显示：广西肝癌与Ｐ５３基因突变、乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染关系密切。 展开更多
关键词 P53蛋白 HBSAG hbxag 肝肿瘤
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