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白屈菜红碱对变形链球菌葡糖基转移酶和细胞外水不溶性多糖的影响 被引量:16
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作者 程睿波 陈旭 +1 位作者 刘淑杰 张光和 《上海口腔医学》 CAS CSCD 2007年第3期324-327,共4页
目的:研究白屈菜红碱对变形链球菌葡糖基转移酶和细胞外水不溶性多糖合成的影响。方法:采用二倍稀释法,用含2%蔗糖的脑心浸萃液肉汤琼脂(BHI)液体培养基,将白屈菜红碱稀释为从390.6μg/ml到24.4μg/ml共计5个浓度的溶液,以BHI液体培养... 目的:研究白屈菜红碱对变形链球菌葡糖基转移酶和细胞外水不溶性多糖合成的影响。方法:采用二倍稀释法,用含2%蔗糖的脑心浸萃液肉汤琼脂(BHI)液体培养基,将白屈菜红碱稀释为从390.6μg/ml到24.4μg/ml共计5个浓度的溶液,以BHI液体培养基作为阴性对照组。加入变形链球菌菌液,厌氧培养24h后,将培养物离心,收集上清液,分为2份。一份提取葡糖基转移酶,采用考马斯亮蓝法和Somogyi法分别测定总蛋白和还原糖含量,计算酶活性和比活力大小;另一份上清液采用蒽酮法测定水不溶性多糖的含量。实验结果采用SPSS13.0软件包进行数据处理,总体均数之间的比较采用单因素方差分析,采用Pearson相关检验进行两组样本之间的相关分析。结果:随着白屈菜红碱溶液浓度的升高,葡糖基转移酶活性和水不溶性多糖含量逐渐降低,各组总体均数间均具有高度显著性差异(P<0.01),葡糖基转移酶各实验组与对照组酶活性及比活力之间均有高度显著性差异(P<0.01);除24.4μg/ml浓度组外,各实验组与对照组水不溶性多糖含量也均有高度显著性差异(P<0.01)。葡糖基转移酶活性和水不溶性多糖含量之间呈正相关关系(r=0.883,P<0.01)。结论:白屈菜红碱对变形链球菌葡糖基转移酶和细胞外水不溶性多糖的合成具有显著抑制作用。 展开更多
关键词 白屈菜红碱 变形链球菌 葡糖基转移酶 水不溶性多糖
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人参毛状根糖基转移酶的分离纯化及酶学性质研究 被引量:16
2
作者 陈欣 薛轶 +2 位作者 刘吉华 张剑 余伯阳 《药物生物技术》 CAS CSCD 2009年第1期50-54,共5页
首次从人参毛状根中提取分离了糖基转移酶,用SDS-PAGE测定其相对分子质量为56.6k。该酶以对羟基苯甲酸为底物时的Km=0.399nmol/L,Vmax=2.74nmol/min,反应的最适温度为45℃,最适pH值为8.0。该酶在60℃以下,pH4.0~10.0范围... 首次从人参毛状根中提取分离了糖基转移酶,用SDS-PAGE测定其相对分子质量为56.6k。该酶以对羟基苯甲酸为底物时的Km=0.399nmol/L,Vmax=2.74nmol/min,反应的最适温度为45℃,最适pH值为8.0。该酶在60℃以下,pH4.0~10.0范围内保持稳定。Na^+,K^+,Mg^2+Ca^2+,Zn^2+,Ag^+,Ba^2+对酶活力有抑制作用,Fe^2+和Cu^2+对酶活力有一定的促进作用,而Mn^2+和Co^2+对酶活力没有影响。 展开更多
关键词 糖基转移酶 人参毛状根 纯化 酶学性质
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柠檬提取物对变形链球菌葡糖基转移酶和细胞外多糖的影响 被引量:14
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作者 余志芬 张向宇 +1 位作者 汪大照 郭卯丁 《天津医科大学学报》 2010年第2期298-302,共5页
目的:探究天然植物成分(柠檬提取物)对变形链球菌葡糖基转移酶和细胞外多糖合成的影响。方法:采用二倍稀释法,用含2%蔗糖的胰蛋白胨大豆肉汤(TSB)将柠檬提取物稀释为从1.250μl/ml到0.039μl/ml共计6个浓度的溶液,以TSB液体培养基作为... 目的:探究天然植物成分(柠檬提取物)对变形链球菌葡糖基转移酶和细胞外多糖合成的影响。方法:采用二倍稀释法,用含2%蔗糖的胰蛋白胨大豆肉汤(TSB)将柠檬提取物稀释为从1.250μl/ml到0.039μl/ml共计6个浓度的溶液,以TSB液体培养基作为阴性对照组。加入变形链球菌菌液,采用Neson-Somogyi法测定培养6、18、24、48h培养物中的还原糖含量,计算出酶活性;同时采用蒽酮法测定培养6、18、24、48h培养物中的水不溶性多糖和水溶性多糖的含量。结果:随着柠檬提取物溶液浓度的升高,葡糖基转移酶活性和细胞外多糖含量逐渐降低,在各个时间点,从0.078μl/ml组到1.250μl/ml组,各实验组总体均数间均具有显著性差异(P<0.01),各实验组与对照组酶活性、水不溶性多糖含量和水溶性多糖含量都有显著性差异(P<0.01);葡糖基转移酶活性和水不溶性多糖含量之间呈正相关关系(r=0.825~0.963,P<0.01),葡糖基转移酶活性和水溶性多糖含量之间亦呈正相关关系(r=0.815~0.950,P<0.01),且葡糖基转移酶活性与水不溶性多糖含量、水溶性多糖含量的相关性具有显著性差异(t=4.37,P<0.01)。结论:柠檬提取物对变形链球菌葡糖基转移酶和细胞外多糖的合成具有显著抑制作用。 展开更多
关键词 柠檬提取物 变形链球菌 葡糖基转移酶 水不溶性多糖 水溶性多糖
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植物甾醇与三萜类皂苷生物合成基因调控的研究进展 被引量:13
4
作者 刘强 丛丽娜 张宗申 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2006年第19期4844-4846,共3页
植物甾醇和三萜类皂苷是2种具有调节生物体系免疫力,抗血糖过多,抗癌症等生理功能的植物次生代谢产物。它们在生物合成过程中有许多关键酶,如鲨烯合成酶(SS)、鲨烯氧化酶(SE)、氧化鲨烯环化酶(OSCs)和糖基转移酶(GT)等。综述了这些关键... 植物甾醇和三萜类皂苷是2种具有调节生物体系免疫力,抗血糖过多,抗癌症等生理功能的植物次生代谢产物。它们在生物合成过程中有许多关键酶,如鲨烯合成酶(SS)、鲨烯氧化酶(SE)、氧化鲨烯环化酶(OSCs)和糖基转移酶(GT)等。综述了这些关键酶在催化机理、基因克隆与表达调控方面的研究进展,并简要探讨了通过这些关键酶的代谢工程研究来增产植物甾醇和三萜类皂苷的广阔前景。 展开更多
关键词 植物甾醇 三萜类皂苷 鲨烯合成酶 鲨烯氧化酶 氧化鲨烯环化酶 糖基转移酶
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靶向融合防龋DNA疫苗pGJA-P免疫兔的实验研究 被引量:5
5
作者 贾荣 樊明文 +3 位作者 郭继华 边专 陈智 于飞 《中华口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期248-251,共4页
目的 体外检测靶向融合防龋DNA疫苗pGJA P的免疫反应性 ;与非靶向融合防龋DNA疫苗 pGLUA P进行比较 ,评价其增强疫苗免疫效能的能力。 方法 将 pGJA P转染CHO细胞 ,蛋白质免疫印迹实验检测重组蛋白抗体免疫反应性。分 5组免疫兔 :pGJ... 目的 体外检测靶向融合防龋DNA疫苗pGJA P的免疫反应性 ;与非靶向融合防龋DNA疫苗 pGLUA P进行比较 ,评价其增强疫苗免疫效能的能力。 方法 将 pGJA P转染CHO细胞 ,蛋白质免疫印迹实验检测重组蛋白抗体免疫反应性。分 5组免疫兔 :pGJA P经肌肉注射组 (A组 ) ;pGJA P经鼻黏膜免疫组 (B组 ) ;pGLUA P经肌肉注射 (C组 ) ;pGLUA P经鼻黏膜免疫组 (D组 )和pCI载体经股四头肌注射组 (E组 )。酶联免疫吸附实验检测血清及唾液中的特异性抗体。用收集的血清进行葡糖基转移酶 (GTF)合成水不溶性葡聚糖抑制实验。结果 pGJA P表达的重组蛋白可以与抗GTF抗体反应。A组血清特异性IgG抗体水平远高于C组 (P <0 0 1) ;B组唾液特异性IgA抗体水平显著高于D组 (P <0 0 1) ;A组同样诱导了高水平的唾液特异性IgA抗体。A组的免疫血清抑制GTF活性的能力最强。结论 pGJA P具备GTF的免疫反应性 ;并较pGLUA P有更强的诱导系统和黏膜免疫反应及抑制GTF的能力。 展开更多
关键词 靶向融合防龋DNA疫苗 pGJA-P 实验 免疫反应性 龋齿
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甜茶甙对变形链球菌葡糖基转移酶的影响 被引量:8
6
作者 何克新 黄丽微 +3 位作者 陈文霞 刘鸿雁 牙祖科 李志辉 《广东牙病防治》 2010年第5期230-233,共4页
目的研究甜茶甙对变形链球菌葡糖基转移酶的影响。方法实验组采用二倍稀释法,用胰蛋白胨-胰蛋白月示-酵母提取物液体培养基(tryptone-tryptose-yeast extract medium,TTY)将甜茶甙配制成50.00g/L、25.00g/L、12.50g/L、6.25g/L、3.13g/... 目的研究甜茶甙对变形链球菌葡糖基转移酶的影响。方法实验组采用二倍稀释法,用胰蛋白胨-胰蛋白月示-酵母提取物液体培养基(tryptone-tryptose-yeast extract medium,TTY)将甜茶甙配制成50.00g/L、25.00g/L、12.50g/L、6.25g/L、3.13g/L的溶液。对照组采用不含甜茶甙的TTY培养基。各组分别加入变形链球菌液,厌氧培养24h后离心、盐析得胞外葡糖基转移酶的粗酶,采用考马斯亮蓝法和Somogyi法分别测定总蛋白和还原糖含量,计算酶活力和比活力。结果50.00g/L、25.00g/L、12.50g/L、6.25g/L、3.13g/L甜茶甙溶液和对照组的酶活力分别为0.4775、1.1271、1.4193、6.6998、12.3490、13.9679mU。酶活力和比活力在各浓度组间差异均有统计学意义(P<0.05);除3.13g/L浓度组外,甜茶甙各浓度组与对照组酶活力、比活力、总蛋白含量之间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论甜茶甙对变形链球菌葡糖基转移酶有明显抑制作用。 展开更多
关键词 甜茶甙 变形链球菌 葡糖基转移酶
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甜茶苷对变形链球菌致龋能力的影响 被引量:9
7
作者 胡楠 熊兴耀 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1743-1746,共4页
目的研究甜茶苷对变形链球菌Streptococcus mutans致龋能力的影响。方法将变形链球菌菌液加入甜茶苷后于恒温厌氧环境下培养,测试其pH值变化、黏附率,运用碳氢化合物法测定其表面疏水率。采用Bradford法以Neson-samogyi分别测量总蛋白... 目的研究甜茶苷对变形链球菌Streptococcus mutans致龋能力的影响。方法将变形链球菌菌液加入甜茶苷后于恒温厌氧环境下培养,测试其pH值变化、黏附率,运用碳氢化合物法测定其表面疏水率。采用Bradford法以Neson-samogyi分别测量总蛋白的量以及还原糖的量,计算葡萄糖基转移酶(glucosyltransferase,GTF)活力,采用Anihrone法测量水不溶性葡聚糖(water-insoluble glucans,WIG)的量。结果加入甜茶苷的菌液pH变化值、黏附率、表面疏水率、GTF活力及WIG的量与对照组之间均有显著性差异(P<0.01)。结论甜茶苷对变形链球菌产酸能力、黏附能力、GTF活力及WIG合成具有显著抑制作用。 展开更多
关键词 甜茶苷 变形链球菌 黏附 葡萄糖基转移酶 水不溶性胞外多糖 致龋能力
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天然棕色棉葡萄糖苷转移酶基因Gh3GT的克隆与表达分析 被引量:5
8
作者 李明月 李艳军 +2 位作者 张新宇 杨会娜 孙杰 《分子植物育种》 CAS CSCD 2010年第4期665-672,共8页
本研究以发育18d的天然棕色棉及相同发育时期的白色棉近等基因系纤维细胞为材料,采用抑制性差减杂交结合RACE技术分离得到了一个葡萄糖苷转移酶基因的全长cDNA,命名为Gh3GT(GenBank登录号eu921265)。序列分析发现:该基因编码一条有450... 本研究以发育18d的天然棕色棉及相同发育时期的白色棉近等基因系纤维细胞为材料,采用抑制性差减杂交结合RACE技术分离得到了一个葡萄糖苷转移酶基因的全长cDNA,命名为Gh3GT(GenBank登录号eu921265)。序列分析发现:该基因编码一条有450个氨基酸残基组成的多肽,含有葡萄糖苷转移酶C-端所特有的保守的信号序列PSPG基序,属于植物中特有PSPG基序的UGT家族成员。推断的Gh3GT编码产物与其它糖苷转移酶同源性比对和系统发生分析表明:该糖苷转移酶与玫瑰Rh3GT(Rosa hybrida)、矮牵牛(Petunia hybrida)PhF3GT以及葡萄VvUFGT(Vitis vinifera)的相似性分别为51.30%、46.94%和45.85%,而与已知的陆地棉糖苷转移酶基因GhUGT1和GhUGT2一致性较低,仅为25.37%和12.14%。半定量RT-PCR分析表明:该基因在棕色棉纤维中的表达量明显高于其它组织及其近等基因系白色棉品种,且其在纤维中的表达规律与棕色棉的色素形成过程一致。 展开更多
关键词 棕色棉 葡萄糖苷转移酶 表达分析
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柠檬精油对表兄链球菌致龋毒力因子的影响 被引量:7
9
作者 史艳芬 张向宇 +2 位作者 韩慧 陈双璐 程维香 《中华口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期739-742,共4页
目的探讨柠檬精油降低表兄链球菌(Streptococcus sobrinus,Ss)致龋力的相关机制。方法自行提取柠檬精油,纸片扩散法测定柠檬精油对Ss的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC),将柠檬精油倍比稀释为小于MIC的4个... 目的探讨柠檬精油降低表兄链球菌(Streptococcus sobrinus,Ss)致龋力的相关机制。方法自行提取柠檬精油,纸片扩散法测定柠檬精油对Ss的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC),将柠檬精油倍比稀释为小于MIC的4个质量浓度组(分别为0.281、0.563、1.125、2.250∥L实验组),以胰蛋白胨酵母液体培养基作为对照组。加入10^8 CFU/ml的Ss菌悬液,厌氧培养6、18、24、48h。Neson—Somogyi法测定各时间点的还原糖量,计算葡糖基转移酶(glucosyltmnsfemse,GTF)活性;乳酸一丙酮酸连续检测法测定各时间点乳酸脱氢酶(1actatedehydrogenase,LDH)活性;蒽酮法测定各时间点水不溶性多糖(waterinsolubleglucan,WIG)的含量;pH计测定培养液各时间点pH值,计算实验前和各时点的pH差值(ApH)。结果在同一时点随着柠檬精油质量浓度的升高,GTF、LDH活性、WIG含量及ApH值均逐渐降低,各实验组与对照组间差异均有统计学意义(P〈0.01),GTF、LDH、WIG及ApH的最高值均出现在对照组,分别为(6.71±0.61)mIU、(135.8±1.7)U/L、(47.15±5.12)mg/L及(2.67±0.01);最低值均出现在最高质量浓度(2.250egL)实验组,分别为(0.39±0.07)mIU、(95.0±5.4)U/L、(2.44±0.38)mg/L及(0.61±0.01)。结论低于MIC的柠檬精油仍具有抑制SsGTF、LDH活性的作用,导致WIG合成减少,细菌产酸量降低。 展开更多
关键词 链球菌属 葡糖转移酶类 乳酸脱氢酶 柠檬精油
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杜仲糖基转移酶基因EuCGT1克隆及序列分析 被引量:7
10
作者 李永捷 董旋 赵德刚 《山地农业生物学报》 2014年第4期27-35,共9页
本研究以杜仲(Eucommia ulmoides)7月雌株新生幼枝的树皮为材料,根据杜仲转录组测序数据中筛选的一个糖基转移酶基因(CGT)片段信息设计引物,采用SMART RACE技术,克隆了5’-端1432bp和3’-端535 bp cDNA片段,测序拼接后获得全长1 583 bp... 本研究以杜仲(Eucommia ulmoides)7月雌株新生幼枝的树皮为材料,根据杜仲转录组测序数据中筛选的一个糖基转移酶基因(CGT)片段信息设计引物,采用SMART RACE技术,克隆了5’-端1432bp和3’-端535 bp cDNA片段,测序拼接后获得全长1 583 bp的杜仲CGT的cDNA序列。分析结果表明,该cDNA开放阅读框长1 464 bp,编码487个氨基酸,命名为EuGT基因。EuGT在NCBI中经blastn比对,显示序列与甜橙和草莓的UDP-葡萄糖基转移酶基因同源性分别为72%和67%;推测的氨基酸序列经blastp和CDD比对,显示序列与UDP-葡萄糖类黄酮3-O-糖基转移酶-6同源,其中含有UDP-葡萄糖基转移酶的保守域(pfam00201),初步推测EuCGT1蛋白属于糖基转移酶家族。本研究克隆的EuGT基因是首次从杜仲中克隆的糖基转移酶家族基因。以EuCGT1基因构建的植物表达载体pSH-35S-EuCGT1采用农杆菌介导法遗传转化烟草,获得了含EuCGT1基因的转基因烟株,移栽生长1个月的转基因烟草植株在表型上与野生型烟草无明显差异。 展开更多
关键词 杜仲 糖基转移酶 RACE技术
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微生物葡聚糖蔗糖酶的研究进展 被引量:6
11
作者 刘丽娜 姜静 赵丹 《生物技术》 CAS 2020年第5期504-510,共7页
该文综述了葡聚糖蔗糖酶(Glucansucrase,EC 2.4.1.5)研究的最新进展,包括微生物来源的GTF结构及催化机理,并概述了GTF在葡聚糖、低聚糖以及糖苷合成领域应用的新进展。在此基础上阐述了异源表达GTF提高其活力、产率及稳定性的相关研究... 该文综述了葡聚糖蔗糖酶(Glucansucrase,EC 2.4.1.5)研究的最新进展,包括微生物来源的GTF结构及催化机理,并概述了GTF在葡聚糖、低聚糖以及糖苷合成领域应用的新进展。在此基础上阐述了异源表达GTF提高其活力、产率及稳定性的相关研究。以期为GTF在相关领域开展研究提供参考。 展开更多
关键词 葡糖基转移酶 双置换反应机制 转糖苷反应 异源表达
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Cold Stress-induced Glucosyltransferase CsUGT78A15 is Involved in the Formation of Eugenol Glucoside in Camellia sinensis 被引量:6
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作者 Mingyue Zhao Binbin Cai +12 位作者 Jieyang Jin Na Zhang Tingting Jing Jingming Wang Yuting Pan Zixiang Zhou Yifan Zhao Yingying Feng Feng Yu Mengting Zhang Yating Li Zhonghua Liu Chuankui Song 《Horticultural Plant Journal》 SCIE 2020年第6期439-449,共11页
Eugenol is a natural phenolic compound known for its health-promoting properties and its ability to add a floral scent to tea plants.Plant eugenol glycosides have been identified and shown to make important contributi... Eugenol is a natural phenolic compound known for its health-promoting properties and its ability to add a floral scent to tea plants.Plant eugenol glycosides have been identified and shown to make important contributions to fruit floral quality.However,the details of their biosynthesis and metabolism in tea plants are still unknown.Here,eugenol glucoside was unambiguously identified as a native metabolite in the tea plant,and its biosynthesis was shown to be induced by low temperature treatment.Through the analysis of UGTs induced by low temperature,the glycosyltransferase CsUGT78A15 was identified in tea,and its encoded protein was shown to catalyze the glucosylation of eugenol.Vmax/Km ratios showed that eugenol was the most suitable substrate for CsUGT78A15.Sugar donor preference analysis showed that CsUGT78A15 had a higher selectivity for glucose,followed by galactose and glucuronic acid.The expression of CsUGT78A15was correlatedwith the accumulation of eugenol glucoside in different tissues and genotypes of tea.Down-regulation of CsUGT78A15 led to a decreased eugenol glucoside content under cold stress,indicating that CsUGT78A15 plays an important role in the biosynthesis of eugenol glucoside under cold stress.The identification of eugenol glucoside in the tea plant and the discovery of a cold stress-induced eugenol glucosyltransferase in tea provide the foundation for the improvement of tea flavor under cold stress and the biotechnological production of eugenol glucoside. 展开更多
关键词 Camellia sinensis EUGENOL glucosyltransferase Cold stress
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多萜醇磷酸β-葡萄糖基转移酶的活性和底物特异性分析
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作者 栗瑞杰 胡芸 +2 位作者 尚尔菲 高晓冬 王宁 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1833-1844,共12页
内质网(endoplasmic reticulum,ER)是蛋白质折叠和质量控制的主要场所,其内部驻留的分子伴侣能够帮助新生多肽链形成正确的三级结构。部分分子伴侣通过特异性识别葡萄糖基化的N-寡糖结构与糖肽结合,进而促进相应蛋白的折叠。作为ER腔内... 内质网(endoplasmic reticulum,ER)是蛋白质折叠和质量控制的主要场所,其内部驻留的分子伴侣能够帮助新生多肽链形成正确的三级结构。部分分子伴侣通过特异性识别葡萄糖基化的N-寡糖结构与糖肽结合,进而促进相应蛋白的折叠。作为ER腔内葡萄糖基化反应的糖基供体,体外获取多萜醇磷酸葡萄糖(dolichol phosphate glucose,Dol-P-Glc)或其类似物对解析N-寡糖生物合成途径及糖蛋白质量控制体系具有重要意义,一直受到科学家们的关注。本研究以化学合成的一系列多萜醇(dolichol)类似物作为底物,对大肠杆菌表达的阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalis)来源的多萜醇磷酸β-葡萄糖基转移酶E(dolichyl-phosphateβ-glucosyltransferase E,Alg5E)进行了研究。结果表明该重组蛋白在体外具有较强的催化活性,可以识别不同链长的脂肪醇,底物中脂肪醇碳链越长其酶促反应进程越快,且对脂肪醇中异戊二烯的支链甲基表现出偏好性。研究还确认了重要的天冬氨酸-任意氨基酸-天冬氨酸(aspartate-anyresidue-aspartate,DXD)基序与二价金属离子的结合是该酶发挥催化功能的关键。上述工作为多萜醇寡糖(dolichol-linked oligosaccharide,DLO)合成途径中葡萄糖基转移酶Alg6、Alg8和Alg10的研究打下了基础。 展开更多
关键词 葡萄糖基转移酶 N-糖基化 多萜醇 底物特异性
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变形链球菌葡糖基转移酶催化活性区的分子克隆及表达 被引量:5
14
作者 夏伟 王成龙 +4 位作者 董洁 高亚萍 杨光 邵宁生 刘洪臣 《中华老年口腔医学杂志》 2005年第4期193-195,共3页
目的:克隆变形链球菌葡糖基转移酶中催化活性区(CAT)的基因片段,并在大肠杆菌中表达。方法:通过PCR技术克隆CAT的基因片段并通过蛋白重组融合表达技术使其在大肠杆菌中表达。结果:成功克隆了CAT的基因片段,并在大肠杆菌中得到其融合蛋... 目的:克隆变形链球菌葡糖基转移酶中催化活性区(CAT)的基因片段,并在大肠杆菌中表达。方法:通过PCR技术克隆CAT的基因片段并通过蛋白重组融合表达技术使其在大肠杆菌中表达。结果:成功克隆了CAT的基因片段,并在大肠杆菌中得到其融合蛋白的表达。结论:成功克隆葡糖基转移酶CAT基因并获得其融合蛋白的表达,为后续研究奠定了基础。 展开更多
关键词 变形链球菌 葡糖基转移酶 克隆 分子克隆
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黄绿蜜环菌生物转化合成天麻素体系的葡萄糖基转移酶初步研究 被引量:6
15
作者 刘晓杰 董亚晨 +3 位作者 冯宇 章海锋 何国庆 陈启和 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第10期120-124,共5页
黄绿蜜环菌是药用植物天麻的共生菌。研究发现黄绿蜜环菌能催化对羟基苯甲醇合成天麻素,该过程实际上是对羟基苯甲醇的转糖基反应。本文建立了一种该体系中葡萄糖基转移酶酶活测定方法,并对该葡萄糖基转移酶的最适反应温度、热稳定性、... 黄绿蜜环菌是药用植物天麻的共生菌。研究发现黄绿蜜环菌能催化对羟基苯甲醇合成天麻素,该过程实际上是对羟基苯甲醇的转糖基反应。本文建立了一种该体系中葡萄糖基转移酶酶活测定方法,并对该葡萄糖基转移酶的最适反应温度、热稳定性、最适pH和酸碱稳定性等酶学性质进行初步研究。研究结果表明该糖基转移酶最适反应温度50℃,在30℃下酶活稳定性最高,最适反应pH6,在pH6~7范围内酶活稳定最好。 展开更多
关键词 糖基转移酶 天麻素 酶活测定 酶学性质
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香豆素类化合物的生物合成关键酶及活性研究进展
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作者 吕华伟 梁慧敏 +2 位作者 朱梦迪 王鸿 李行诺 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第14期3693-3705,共13页
香豆素是一类以苯骈α-吡喃环为母核的天然产物,许多香豆素衍生物具有多种药理活性,如抗菌、抗炎、抗肿瘤、抗凝血、抗骨质疏松、杀虫等,在医药、农业领域发挥了重要作用。香豆素衍生物的开发利用一直备受关注。随着基因测序技术的成熟... 香豆素是一类以苯骈α-吡喃环为母核的天然产物,许多香豆素衍生物具有多种药理活性,如抗菌、抗炎、抗肿瘤、抗凝血、抗骨质疏松、杀虫等,在医药、农业领域发挥了重要作用。香豆素衍生物的开发利用一直备受关注。随着基因测序技术的成熟以及合成生物学的快速发展,香豆素衍生物的生物合成研究已取得许多重要进展,也日益受到国内外学者的关注。该文综述了目前已报道的香豆素衍生物的生物合成关键酶,如细胞色素P450酶(cytochrome P450 enzyme,CYP450)、异戊烯基转移酶(prenyltransferase,PT)、UDP-葡萄糖基转移酶(UDP-glucosyltransferase,UGT)等,并对其在抗肿瘤、抗炎、抗氧化、抗菌等方面的药理活性进行系统总结,期望为香豆素衍生物的生物合成研究及其药用潜力的进一步挖掘提供参考价值。 展开更多
关键词 香豆素 细胞色素P450酶 异戊烯基转移酶 葡萄糖基转移酶 生物活性
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葡萄风信子花青素3-O-葡糖基转移酶基因的克隆及其表达分析 被引量:6
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作者 杜灵娟 陈凯利 刘雅莉 《草业科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期2235-2244,共10页
花青素3-O-葡糖基转移酶(3GT)是花青素苷合成最后一步的关键酶,可把不稳定的花青素催化成花青素苷。本研究利用PCR技术从蓝色葡萄风信子‘亚美尼亚’(Muscari armeniacum)中克隆到一个3GT基因(Ma3GT),Ma3GT cDNA全长1 377bp,编码458个... 花青素3-O-葡糖基转移酶(3GT)是花青素苷合成最后一步的关键酶,可把不稳定的花青素催化成花青素苷。本研究利用PCR技术从蓝色葡萄风信子‘亚美尼亚’(Muscari armeniacum)中克隆到一个3GT基因(Ma3GT),Ma3GT cDNA全长1 377bp,编码458个氨基酸,与其他植物的3GT蛋白序列相似性达55%~64%。进化分析表明,Ma3GT与单子叶植物3GT聚为一类,与小苍兰(Freesia hybrida)、荷兰鸢尾(Iris hollandica)3GT亲缘关系最近。荧光定量PCR分析发现,Ma3GT在‘亚美尼亚’花(S_4)中高表达,在叶片中微量表达,根和鳞茎中几乎不表达,在‘白丽人’及‘粉日出’各个组织中均不表达。在‘亚美尼亚’中,Ma3GT的转录表达受花发育调控,开花早期(S_1)几乎不表达,随着花发育表达量逐渐增加,至完全开放的时期(S_4)达到最高峰。此外,Ma3GT在不同品种的花中转录表达不同,在蓝色品种‘亚美尼亚’中高表达,而在白色品种‘白丽人’和粉色品种‘粉日出’中几乎不表达。本研究为进一步研究Ma3GT基因在葡萄风信子花瓣呈色中的功能及其花色分子育种提供基因资源和依据。 展开更多
关键词 葡萄风信子 花青素苷 Ma3GT RT-PCR 糖基转移酶 糖基化 花色
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烟草糖基转移酶基因NtGT3的克隆与生物信息学分析 被引量:5
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作者 任学良 李立芹 +2 位作者 许力 郭玉双 鲁黎明 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第1期23-30,共8页
为了给烟草糖基转移酶的生物学功能研究奠定基础,根据在GenBank上登录的烟草糖基转移酶基因NtGT3的CDS序列,以烟草栽培品种K326为材料,采用PCR的方法,对目的基因进行克隆,并测序。根据测序的结果,采用各类分析软件,对所获得的DNA片段进... 为了给烟草糖基转移酶的生物学功能研究奠定基础,根据在GenBank上登录的烟草糖基转移酶基因NtGT3的CDS序列,以烟草栽培品种K326为材料,采用PCR的方法,对目的基因进行克隆,并测序。根据测序的结果,采用各类分析软件,对所获得的DNA片段进行生物信息学分析。结果通过PCR的方法,成功克隆了烟草糖基转移酶基因NtGT3的全长CDS序列。生物信息学分析结果表明,该基因CDS全长1 449 bp,所编码的蛋白质包含482个氨基酸。其分子量为54.15 ku,等电点为5.53。在二级结构上,α-螺旋和无规则卷曲为蛋白的主要结构形式。在三级结构上,具有42%的α-螺旋以及15%的β-折叠。NtGT3蛋白是一个亲水性蛋白质,含有2个糖基化位点,不含信号肽。NtGT3蛋白广泛分布于细胞中,在细胞膜、微体、高尔基体及内质网膜的分布分别达到了79%、31.9%、30%及20%。功能结构域分析结果证实,该蛋白包含有糖基转移酶家族的功能保守域PLN03015,属于GTB类型的糖基转移酶超级家族。同源性分析结果表明,NtGT3蛋白与枸杞、睡茄、甘薯、可可、猕猴桃、杨树、葡萄、野生大豆及拟南芥等的糖基转移酶有较高的序列相似性。NtGT3基因的成功克隆,为该基因功能的深入研究提供了理论支撑。 展开更多
关键词 烟草 糖基转移酶 基因
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烟草糖基转移酶基因NtGT5a的克隆及原核表达 被引量:5
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作者 钟晓武 付强 +4 位作者 邹颉 赵杰宏 林世锋 郭玉双 任学良 《烟草科技》 EI CAS 北大核心 2014年第7期69-74,84,共7页
为揭示烟草糖基转移酶的活性及生物学功能,从烟草栽培品种中克隆了烟草糖基转移酶基因NtGT5a,基于GenBank的烟草糖基转移酶基因NtGT5a的核苷酸序列(GenBank登录号AB176523),设计并合成特异性引物,以红花大金元叶片总RNA为模板,通过RT-PC... 为揭示烟草糖基转移酶的活性及生物学功能,从烟草栽培品种中克隆了烟草糖基转移酶基因NtGT5a,基于GenBank的烟草糖基转移酶基因NtGT5a的核苷酸序列(GenBank登录号AB176523),设计并合成特异性引物,以红花大金元叶片总RNA为模板,通过RT-PCR方法获得了烟草糖基转移酶基因NtGT5a的cDNA片段。序列分析表明,该基因编码区为1458 bp,编码485个氨基酸残基,推测的蛋白分子量为54.21 kDa,理论等电点为5.41。通过构建重组表达载体pCold-SUMO-NtGT5a,并转化大肠杆菌BL21(DE3),在15Ⅲ下经0.2 mmol/L IPTG诱导22 h表达产生了SUMO-NtGT5a重组蛋白。重组蛋白部分以包涵体形式存在,部分以可溶性蛋白形式存在。将重组蛋白的可溶性组分经过Ni-NTA柱层析纯化和凝胶过滤层析,用SUMO蛋白酶切除SUMO标签,再用镍柱纯化获得了高纯度的NtGT5重组蛋白。 展开更多
关键词 烟草 糖基转移酶 基因 蛋白酶
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糖基转移酶GL24971对灵芝多糖合成的影响 被引量:4
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作者 陈云 赵丽婷 +3 位作者 顾正华 李由然 石贵阳 丁重阳 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2021年第23期1-7,共7页
灵芝作为一种典型的食药用真菌,其多糖是主要的活性物质之一,应用广泛。在多糖合成的途径中,糖基转移酶发挥着重要的作用。为探究葡萄糖基转移酶基因GL24971的过表达对灵芝多糖的影响,通过聚乙二醇转化法将过表达质粒转化至原生质体,用... 灵芝作为一种典型的食药用真菌,其多糖是主要的活性物质之一,应用广泛。在多糖合成的途径中,糖基转移酶发挥着重要的作用。为探究葡萄糖基转移酶基因GL24971的过表达对灵芝多糖的影响,通过聚乙二醇转化法将过表达质粒转化至原生质体,用潮霉素抗性筛选,得到转化菌株。结果表明,转化菌株T1与T2的单位菌体胞外多糖最大产量分别为0.07、0.06 mg/mg,分别提高了132.4%、70.0%,而胞内多糖产量均为0.03 mg/mg,分别降低了10.7%、37.4%;其次,几丁质和β-1,3-葡聚糖含量降低;单糖组成中,半乳糖的比例减少,甘露糖的比例增加,但仍然以葡萄糖为主。研究结果为灵芝多糖产量的提高提供了新的思路,有利于促进多糖合成途径的进一步完善,也为后续研究灵芝中其余的糖基转移酶提供了参考。 展开更多
关键词 灵芝 葡萄糖基转移酶 过表达 多糖
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