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糖基化对Caldicellulosiruptor sp.F32中内切型木聚糖酶热稳定性的影响 被引量:3
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作者 王灵 韩文杰 +3 位作者 孟冬冬 朱静 李福利 吕明 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期300-306,共7页
[目的]探讨糖基化对来自Caldicellulosiruptor sp.F32的GH11家族木聚糖酶的影响,揭示其工业应用价值。[方法]在大肠杆菌和毕赤酵母中表达木聚糖酶Xyn A及其催化模块Tm1。通过酶学性质对比,论证糖基化对酶学特征的影响。[结果]毕赤酵母... [目的]探讨糖基化对来自Caldicellulosiruptor sp.F32的GH11家族木聚糖酶的影响,揭示其工业应用价值。[方法]在大肠杆菌和毕赤酵母中表达木聚糖酶Xyn A及其催化模块Tm1。通过酶学性质对比,论证糖基化对酶学特征的影响。[结果]毕赤酵母分泌的p-Xyn A和p-Tm1可被糖基化修饰,而大肠杆菌表达的e-Xyn A和e-Tm1无法被修饰。糖基化未明显影响Xyn A的催化效率和热稳定性,但可提高Tm1的催化效率约1.5倍,而且在80℃、85℃下,pTm1的半衰期相对于e-Tm1分别提高了约1.5、2倍。另外,Tm1的热稳定性和酶活均显著高于Xyn A。通过对Tm1同源建模分析,两个糖基化位点(天冬酰胺N23、N189)可能对热稳定性有促进作用。[结论]酵母对Tm1的糖基化修饰可热稳定性和催化效率提高1.5~2倍,相比于Xyn A更适合工业应用。 展开更多
关键词 内切型β-1 4木聚糖酶 毕赤酵母 大肠杆菌 糖基化 热稳定性
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人血清对氧磷酶1在家蚕杆状病毒表达系统中的表达及活性检测
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作者 谭淑敏 李杰 +4 位作者 王小飞 舒特俊 陈剑清 张耀洲 于威 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期482-487,共6页
对氧磷酶1(paraoxonase 1,PON1)是生物体内存在的一种广谱的非专一性酯酶,在水解有机磷杀虫剂及降解神经毒剂中发挥重要作用。利用已构建的含人血清pon1基因的原核表达载体pET-28a-pon1,在E.coli中诱导表达人血清PON1,通过Ni-NTA亲和层... 对氧磷酶1(paraoxonase 1,PON1)是生物体内存在的一种广谱的非专一性酯酶,在水解有机磷杀虫剂及降解神经毒剂中发挥重要作用。利用已构建的含人血清pon1基因的原核表达载体pET-28a-pon1,在E.coli中诱导表达人血清PON1,通过Ni-NTA亲和层析纯化后制备兔多克隆抗体;利用Bac-to-Bac系统构建重组杆状病毒vBm-pon1,并感染家蚕5龄幼虫,经SDS-PAGE和Western blotting检测鉴定人血清PON1在蚕体内成功表达,并获得了纯度较高的重组人血清PON1。以对氧磷为底物,对2个表达系统获得的重组人血清PON1的酶活性进行检测,结果表明在家蚕幼虫体内表达并纯化的重组人血清PON1的酶活性要明显高于在E.coli中表达的人血清PON1蛋白。推测家蚕杆状病毒表达系统比原核表达系统多了糖基化、磷酸化等蛋白质修饰功能。进一步试验验证家蚕幼虫表达的重组人血清PON1去糖基化后其酶活性丧失,表明糖基修饰对于维持PON1的生物学功能至关重要。 展开更多
关键词 家蚕杆状病毒表达系统 人血清对氧磷酶1 酶活性 糖基化
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晚期糖基化终末产物可通过调节V-ATPase a3与ClC-7影响破骨细胞的泌酸功能 被引量:7
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作者 王海兴 李子卿 +5 位作者 肖胤勃 张紫机 张阳春 杨兴 李朝红 盛璞义 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2017年第12期1826-1832,共7页
背景:晚期糖基化终末产物对破骨细胞骨吸收功能的影响存在争议,作者的前期研究表明晚期糖基化终末产物作用于破骨细胞前体可显著抑制骨吸收功能,但关于其对破骨细胞泌酸功能的影响尚不明晰。目的:探究晚期糖基化终末产物对破骨细胞泌酸... 背景:晚期糖基化终末产物对破骨细胞骨吸收功能的影响存在争议,作者的前期研究表明晚期糖基化终末产物作用于破骨细胞前体可显著抑制骨吸收功能,但关于其对破骨细胞泌酸功能的影响尚不明晰。目的:探究晚期糖基化终末产物对破骨细胞泌酸功能的影响及其机制。方法:以15μg/L的RANKL对破骨细胞前体RAW 264.7进行定向诱导(正常组),实验组中另加入50-400 mg/L不等的晚期糖基化终末产物及对照用牛血清白蛋白(100 mg/L)。通过骨吸收实验验证晚期糖基化终末产物对骨吸收的抑制效应,并以吖啶橙染色观察晚期糖基化终末产物对破骨细胞泌酸功能的影响;进一步检测质子泵V-ATPase a3及氯离子通道ClC-7的表达情况,分析晚期糖基化终末产物影响破骨细胞泌酸的相关机制。结果与结论:(1)晚期糖基化终末产物组的骨吸收面积较正常组显著减少(P<0.05);(2)吖啶橙染色显示晚期糖基化终末产物组的红色荧光(620 nm)强度较正常组显著减少(P<0.05),抑制程度随着刺激浓度的增高而加重;(3)免疫细胞化学染色、蛋白质免疫印迹及PCR发现,晚期糖基化终末产物组的V-ATPase a3及ClC-7表达量均较正常组显著下降(P<0.05);(4)综上结果表明,晚期糖基化终末产物作用于破骨细胞前体可显著抑制破骨细胞的泌酸功能,其机制可能与晚期糖基化终末产物抑制了质子泵V-ATPase a3及氯离子通道ClC-7的表达相关。 展开更多
关键词 组织构建 骨细胞 糖基化终末产物 破骨细胞 骨吸收功能 氯离子通道ClC-7 吖啶橙染色 破骨细胞泌酸 国家自然科学基金
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糖化血红蛋白预测2型糖尿病并缺血性脑卒中患者再次脑血管事件价值 被引量:12
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作者 刘岩 乔洪波 常铮 《中华实用诊断与治疗杂志》 2015年第9期918-920,共3页
目的探讨糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin A1c,HbA1c)在预测2型糖尿病并缺血性脑卒中患者发生再次脑血管事件(recurrent cerebrovascular event,RCE)中的价值。方法 2型糖尿病并缺血性脑卒中患者146例,依据入院时HbA1c水平分为高... 目的探讨糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin A1c,HbA1c)在预测2型糖尿病并缺血性脑卒中患者发生再次脑血管事件(recurrent cerebrovascular event,RCE)中的价值。方法 2型糖尿病并缺血性脑卒中患者146例,依据入院时HbA1c水平分为高水平组(HbA1c≥6.0%)87例和正常组(HbA1c<6.0%)59例,比较2组入院次日空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)、餐后2h血糖(2hpostprandial plasma glucose,PPG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、三酰甘油(triacylglycerol,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein-cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein-cholesterol,HDL-C)水平和入院时神经功能损伤程度;2组均给予脱水、降压、改善脑循环、营养神经、控制血糖等治疗,连续治疗3周后评定疗效;随访24个月,统计RCE发生情况,比较发生RCE者和未发生RCE者入院时HbA1c水平。结果高水平组入院次日FPG[(8.94±2.33)mmol/L]、PPG[(13.07±3.82)mmol/L]、TC[(6.09±1.37)mmol/L]、TG[(1.92±0.53)mmol/L]、LDL-C[(4.11±1.13)mmol/L]水平高于正常组[FPG(6.72±2.61)mmol/L,PPG(9.36±4.11)mmol/L,TC(4.95±1.00)mmol/L,TG(1.14±0.33)mmol/L,LDL-C(2.98±1.05)mmol/L],HDL-C水平[(1.03±0.27)mmol/L]低于正常组[(1.45±0.34)mmol/L](P<0.05);高水平组入院时中重度神经功能损伤发生率(87.36%)高于正常组(38.98%)(P<0.05);2组连续治疗3周后,高水平组好转率(75.86%)低于正常组(94.92%)(P<0.05);随访24个月,146例中45例发生RCE,发生RCE者入院时HbA1c水平[(9.24±2.13)%]高于未发生RCE者[(6.07±1.86)%](P<0.05)。结论 HbA1c水平增高的2型糖尿病并缺血性脑卒中患者易发生RCE,检测入院时HbA1c水平有助于预测其发生RCE的风险。 展开更多
关键词 糖尿病并缺血性脑卒中 糖化血红蛋白 再次脑血管事件
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Synthesis of non-classical heteroaryl C-glycosides via Minisci-type alkylation of N‑heteroarenes with 4-glycosyl-dihydropyridines 被引量:2
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作者 Qingbing Wang Juan Duan +2 位作者 Pingping Tang Gong Chen Gang He 《Science China Chemistry》 SCIE EI CAS CSCD 2020年第11期1613-1618,共6页
A radical-mediated method was reported for diastereoselective synthesis of non-classical heteroaryl C-glycosides via Minisci-type alkylation of N-heteroarenes with 4-glycosyl-1,4-dihydropyridine(DHP)reagents.These DHP... A radical-mediated method was reported for diastereoselective synthesis of non-classical heteroaryl C-glycosides via Minisci-type alkylation of N-heteroarenes with 4-glycosyl-1,4-dihydropyridine(DHP)reagents.These DHP reagents serve as convenient precursors for various glycosyl radicals under the activation of single electron transfer(SET)oxidation by persulfate and visible light irradiation with or without photocatalyst. 展开更多
关键词 non-classical C-glycoside Minisci reaction 4-giycosyl-dihydropyridine
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缺失糖基磷脂酰肌醇锚的Doppel转基因小鼠的构建
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作者 李静 张洋 +4 位作者 于恒智 赵魁 张守峰 扈荣良 邓旭明 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第7期72-75,共4页
将缺失糖基磷脂酰肌醇(glycosyl phosphatidyl inositol,GPI)的Doppel的质粒(pDoppel1-155),用NotⅠ酶切,回收并纯化目的基因片段,通过显微注射,导入BALB/c小鼠受精卵的雄原核内,结果32只仔鼠出生,其中有6只PCR检测阳性。将其中1只F0代... 将缺失糖基磷脂酰肌醇(glycosyl phosphatidyl inositol,GPI)的Doppel的质粒(pDoppel1-155),用NotⅠ酶切,回收并纯化目的基因片段,通过显微注射,导入BALB/c小鼠受精卵的雄原核内,结果32只仔鼠出生,其中有6只PCR检测阳性。将其中1只F0代小鼠与正常小鼠交配,共获得21只F1代小鼠,经PCR检测,有10只仔鼠为阳性。对2只F1代PCR阳性小鼠脑组织进行RT-PCR检测,其中1只为阳性。采集3只F1代PCR阳性小鼠脑组织进行Westernblotting检测,在小鼠脑组织能够表达17ku的Doppel1-155蛋白。本研究为进一步深入研究Doppel蛋白在体内的生物学特性提供了转基因动物模型。 展开更多
关键词 糖基磷脂酰肌醇 DOPPEL 转基因 小鼠
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