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番茄根特异表达基因LeGRP2启动子的克隆及其在拟南芥的表达分析 被引量：8
1
作者 李志邈 杨悦俭 +6 位作者 杨飞 叶青静 王荣青 阮美颖 周国治 姚祝平 Vong-Ling Ruan 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期1877-1882,共6页
目的克隆获得番茄根特异表达启动子,为利用基因工程技术创制番茄新种质奠定基础。方法利用Clontech公司的基因组步移(genome walking)技术,扩增番茄根特异表达基因LeGRP2的上游调控序列,并构建植物表达载体,利用农杆菌介导法转化拟南芥,... 目的克隆获得番茄根特异表达启动子,为利用基因工程技术创制番茄新种质奠定基础。方法利用Clontech公司的基因组步移(genome walking)技术,扩增番茄根特异表达基因LeGRP2的上游调控序列,并构建植物表达载体,利用农杆菌介导法转化拟南芥,以GUS为报告基因研究该调控序列的组织表达特异性。结果以番茄基因组DNA为模板,经过2次基因组步移,获得了LeGRP2基因上游1959bp的调控序列(GenBank登录号:EU262719),分析发现含有9个与根特异表达相关的顺式作用元件ROOTMOTIFTAPOX1。转基因拟南芥的组织化学染色分析表明,GUS基因主要在拟南芥的根部特异表达。结论克隆获得了番茄LeGRP2基因启动子,该启动子主要在转基因拟南芥根部表达GUS基因,具有较强的根表达特异性。 展开更多
关键词 番茄 根特异启动子 基因组步移 组织表达特异性
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花生Δ~9-硬脂酰-ACP脱氢酶基因启动子的克隆及功能分析 被引量：8
2
作者 石磊 苗利娟 +7 位作者 齐飞艳 张忠信 高伟 孙子淇 黄冰艳 董文召 汤丰收 张新友 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1629-1637,共9页
Δ~9-硬脂酰-ACP脱氢酶（SAD）是决定植物体内饱和脂肪酸与不饱和脂肪酸比值的关键酶。以花生品种豫花9326基因组DNA为模板,通过基因组步移技术,克隆到花生Δ~9-硬脂酰-ACP脱氢酶基因（Ah SAD）起始密码子ATG上游720 bp片段,利用5＇RAC... Δ~9-硬脂酰-ACP脱氢酶（SAD）是决定植物体内饱和脂肪酸与不饱和脂肪酸比值的关键酶。以花生品种豫花9326基因组DNA为模板,通过基因组步移技术,克隆到花生Δ~9-硬脂酰-ACP脱氢酶基因（Ah SAD）起始密码子ATG上游720 bp片段,利用5＇RACE方法获得了该基因的5＇UTR序列,通过序列比对确定720 bp片段为Ah SAD启动子区域。PLACE在线启动子预测分析表明,该序列具有真核生物启动子必需的核心元件TATA-box和CAAT-box,含有多个与光诱导和激素响应相关顺式序列元件。将Ah SAD启动子片段替换pBI121质粒中的CaMV35S启动子驱动下游GUS基因表达,构建植物表达载体pBI-PAh SAD。通过农杆菌介导法转化拟南芥和在花生不同组织中瞬时表达,利用GUS组织化学染色研究其表达特性。表明在拟南芥和花生受体中,AhSAD启动子主要调控下游基因在根、茎、叶片和子叶中表达,在花生的果针中也检测到GUS活性;拟南芥的茎生叶只有叶脉中具有GUS活性,而花生整个叶片中都具有GUS活性。 展开更多
关键词 花生 Δ9-硬脂酰-ACP脱氢酶基因(SAD) 启动子 基因组步移 GUS报告基因
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马尾松银松素合酶基因启动子区的克隆及特征分析 被引量：2
3
作者 王冰梅 郭晋隆 +2 位作者 叶冰莹 许莉萍 陈由强 《亚热带农业研究》 2008年第4期292-296,共5页
银松素合酶(pinosylvin synthase,PS)是合成银松素类植物抗毒素的关键酶。本文根据前期工作所获得的PS基因序列,设计基因特异引物,利用连接介导的染色体步行技术,从马尾松总基因组中扩增PS基因上游的启动子区;通过PLAN-CARE等分析软件对... 银松素合酶(pinosylvin synthase,PS)是合成银松素类植物抗毒素的关键酶。本文根据前期工作所获得的PS基因序列,设计基因特异引物,利用连接介导的染色体步行技术,从马尾松总基因组中扩增PS基因上游的启动子区;通过PLAN-CARE等分析软件对5′侧翼区近700 bp进行启动子特征分析,预测启动子区调控元件。结果表明,在翻译起始密码子上游167 nt处可能存在TATA-box。此外还发现3个GATA-box(-260 nt、-295 nt、-386 nt和-295 nt)和若干个TGAC-like序列。 展开更多
关键词 银松素合酶 基因克隆 染色体步行 启动子分析
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斑节对虾亲环素A(cyclophilinA)基因的克隆及启动子序列分析 被引量：1
4
作者 王卫芳 邱丽华 +4 位作者 黄建华 张殿昌 苏天风 杨其彬 江世贵 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期324-331,共8页
通过同源克隆和RACE技术获得斑节对虾(Penaeus monodon)亲环素A(cyclophilin A,CYPA)的cDNA序列。根据已克隆的cDNA序列设计引物,利用染色体步移技术(Genomic DNA walking)从斑节对虾卵巢组织中克隆了CYPA基因的启动子和基因组DNA序列... 通过同源克隆和RACE技术获得斑节对虾(Penaeus monodon)亲环素A(cyclophilin A,CYPA)的cDNA序列。根据已克隆的cDNA序列设计引物,利用染色体步移技术(Genomic DNA walking)从斑节对虾卵巢组织中克隆了CYPA基因的启动子和基因组DNA序列。测序结果表明,斑节对虾亲环素A(PmCYPA)cDNA全长834bp,其中开放阅读框(open reading frame,ORF)为495bp,可编码164个氨基酸;5’非编码区为31bp,3’非编码区为308bp。从斑节对虾基因组文库中扩增的CYPA基因组DNA全长3181bp,其中包括启动子区域1173bp,1个内含子426bp,2个外显子序列:分别为101bp和399bp。在5’UTR上游区域有明显的启动子序列,包含一个GC盒和2个CAAT盒,同时还包含AP1、CRE等调控元件,符合真核生物典型的启动子特征。分析基因的结构表明所克隆的PmCYPA符合PPlase家族成员特征,属于此基因家族成员。 展开更多
关键词 斑节对虾 cyclophilinA基因 克隆 启动子 序列分析
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小金海棠MxYSL5启动子克隆技术的比较 被引量：1
5
作者 陈竹 王忆 +2 位作者 殷丽丽 张新忠 韩振海 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期95-101,共7页
分别利用3种基于PCR技术的染色体步移法克隆了小金海棠MxYLS5基因的启动子,并比较了这三个体系的扩增产物。3种体系都可以获得特异性扩增产物,但扩增条带的长度和数量均不同,其中利用Genome Walking Kit扩增出来的条带特异性较好长度最... 分别利用3种基于PCR技术的染色体步移法克隆了小金海棠MxYLS5基因的启动子,并比较了这三个体系的扩增产物。3种体系都可以获得特异性扩增产物,但扩增条带的长度和数量均不同,其中利用Genome Walking Kit扩增出来的条带特异性较好长度最长,而且特异性引物和简并引物的设计及退火温度的设置对3种体系的扩增产物起着关键的作用。基于PCR技术的染色体步移法为小金海棠MxYLS5基因启动子的克隆提供了一个稳定可靠的技术手段。 展开更多
关键词 启动子克隆 染色体步移 TAIL-PCR hiTail-PCR 小金海棠
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茶树硒营养代谢关键酶硒半胱氨酸甲基转移酶基因克隆及启动子结构分析 被引量：1
6
作者 王雅楠 陈晶晶 朱林 《中国农学通报》 CSCD 2013年第28期138-143,共6页
为探明茶树硒营养代谢关键酶基因硒半胱氨酸甲基转移酶(SMT,GenBank登录号:DQ480337)的表达调控规律,通过PCR和基因步移技术获得SMT的DNA全长和部分启动子序列,用PLACE、PlantCARE分析SMT内含子和启动子的序列,预测其顺式作用元件及功... 为探明茶树硒营养代谢关键酶基因硒半胱氨酸甲基转移酶(SMT,GenBank登录号:DQ480337)的表达调控规律,通过PCR和基因步移技术获得SMT的DNA全长和部分启动子序列,用PLACE、PlantCARE分析SMT内含子和启动子的序列,预测其顺式作用元件及功能。结果表明,SMT基因全长5473 bp,有7个外显子和6个内含子,内含子富含光响应元件、激素响应元件和抗逆性相关元件。通过基因步移法克隆得到的SMT启动子长375 bp,除了含核心启动子保守元件TATA-box和CAAT-box外,还有其他重要顺式作用元件,如光响应元件、低温响应元件和胚乳表达特异性元件等。植物硒营养代谢关键酶SMT启动子的克隆及结构分析为进一步揭示SMT基因的生物学功能和表达调控机制奠定了理论基础。 展开更多
关键词 富硒茶(嫩叶) 硒半胱氨酸甲基转移酶 启动子 基因组步移
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基于PCR的非酶连型基因组步移技术研究进展 被引量：1
7
作者 李旭娟 陈杨玲 +2 位作者 王海波 龚明 邹竹荣 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期193-199,共7页
基于PCR的基因组步移(或染色体步移)技术常用于克隆已知DNA片段的旁侧序列,是一项重要的的基因组学研究技术。根据原理可将其分为依赖酶连介导和不需酶连介导两大类。目前后者发展迅速,方法种类较多而且各具特色,但根据步移引物与模板DN... 基于PCR的基因组步移(或染色体步移)技术常用于克隆已知DNA片段的旁侧序列,是一项重要的的基因组学研究技术。根据原理可将其分为依赖酶连介导和不需酶连介导两大类。目前后者发展迅速,方法种类较多而且各具特色,但根据步移引物与模板DNA的结合特点,可将其统分为基于简并引物的或依赖特定位点的基因组步移技术。综述了当前主要或典型的非酶连PCR介导的基因组步移方法以及最新进展,以期为相关研究提供方法借鉴。 展开更多
关键词 非酶连 PCR 基因组步移 染色体步移
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巴氏杜氏藻八氢番茄红素合成酶侧翼调控序列的克隆与分析
8
作者 唐春晖 劳永民 姜建国 《现代食品科技》 EI CAS 北大核心 2012年第3期270-273,共4页
研究表明八氢番茄红素合成酶(PSY)是巴氏杜氏藻(Dunaliella bardawil)类胡萝卜素代谢途径中的第一个关键调节酶。本实验采用基于LA-PCR的基因组步移法分别设计两组基因特异引物pSP1-3及tSP1-3,克隆巴氏杜氏藻PSY(DbPSY)的启动子和终止... 研究表明八氢番茄红素合成酶(PSY)是巴氏杜氏藻(Dunaliella bardawil)类胡萝卜素代谢途径中的第一个关键调节酶。本实验采用基于LA-PCR的基因组步移法分别设计两组基因特异引物pSP1-3及tSP1-3,克隆巴氏杜氏藻PSY(DbPSY)的启动子和终止子序列,并利用在线启动子分析软件分析其保守调控序列。最后利用生物信息学方法分析预测DbPSY的蛋白质结构。分析结果表明,DbPSY启动子具有两个保守调控序列:BOXLCOREDCPAL和GT1GMSCAM4,其中BOXLCOREDCPAL受紫外光诱导,上调下游基因的表达,GT1GMSCAM4受盐调控,促进下游基因的表达。蛋白结构分析表明,DbPSY的N端在邻近物种间具有较大的多样性。我们推测DbPSY的微调与启动子保守序列及蛋白质N端序列的多样性相关。 展开更多
关键词 八氢番茄红素合成酶 巴氏杜氏藻 基因组步移 启动子 保守调控序列
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硅胶破碎法抽提真菌染色体DNA 被引量：4
9
作者 张桂敏 唐文杰 +1 位作者 班静 马立新 《湖北大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2006年第1期69-71,共3页
在进行基因组步行PCR克隆真菌木聚糖酶基因的研究中,探索并建立了一套可在普通分子生物学实验室采用的高得率、高质量真菌染色体DNA的抽提方法.采用液氮研磨和硅胶破碎相结合提高染色体DNA得率,采用亚精胺法纯化提高DNA的纯度.抽提的染... 在进行基因组步行PCR克隆真菌木聚糖酶基因的研究中,探索并建立了一套可在普通分子生物学实验室采用的高得率、高质量真菌染色体DNA的抽提方法.采用液氮研磨和硅胶破碎相结合提高染色体DNA得率,采用亚精胺法纯化提高DNA的纯度.抽提的染色体DNA用琼脂糖凝胶电泳、限制酶切、PCR反应及紫外吸收光谱等方法进行了鉴定,结果显示此方法可以获得分子量大、样品纯的染色体DNA,可有效地用于PCR扩增,并能被限制酶有效地消化. 展开更多
关键词 真菌 基因组步行PCR法 染色体DNA 提取方法
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盐穗木盐相关转录因子HcSCL13基因启动子的克隆及活性初步分析 被引量：3
10
作者 樊寿德 王艳 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期131-138,共8页
为探明盐穗木盐相关转录因子基因Hc SCL13的表达调控规律,利用基因组步移法成功克隆获得该基因2 200 bp的启动子序列。Plant CARE数据库分析结果表明,该启动子不仅含有启动子区的核心元件CAAT-box和TATA-box,还包含多个与逆境应答有关... 为探明盐穗木盐相关转录因子基因Hc SCL13的表达调控规律,利用基因组步移法成功克隆获得该基因2 200 bp的启动子序列。Plant CARE数据库分析结果表明,该启动子不仅含有启动子区的核心元件CAAT-box和TATA-box,还包含多个与逆境应答有关的顺式调控元件。将克隆获得的Hc SCL13转录因子基因启动子序列定向替换p BI121载体上的35S启动子,构建融合表达载体并转染模式植物拟南芥,对转基因拟南芥进行GUS组织化学染色。结果显示转基因拟南芥整株被染色,提示该启动子具有表达活性且可能为组成型启动子。 展开更多
关键词 盐穗木转录因子HcSCL13基因 染色体步移 启动子克隆 元件及启动活性分析
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谷子弯孢菌海藻糖酶基因(ClTRE)及其启动子的克隆和序列分析 被引量：2
11
作者 谢夏青 李志勇 +3 位作者 马继芳 刘磊 董志平 董金皋 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期154-159,共6页
海藻糖代谢调控真菌生长、发育及致病性,为了进一步研究海藻糖代谢在谷子弯孢病菌中的功能,对海藻糖酶基因及其启动子进行了克隆。根据植物病原真菌海藻糖酶基因的保守序列设计简并引物,扩增得到海藻糖酶基因同源序列。通过RACE技术,首... 海藻糖代谢调控真菌生长、发育及致病性,为了进一步研究海藻糖代谢在谷子弯孢病菌中的功能,对海藻糖酶基因及其启动子进行了克隆。根据植物病原真菌海藻糖酶基因的保守序列设计简并引物,扩增得到海藻糖酶基因同源序列。通过RACE技术,首次在谷子弯孢病菌中克隆得到了海藻糖酶基因(ClTRE)全长cDNA序列。序列分析表明,该基因最大开放阅读框为2 037 bp,编码679个氨基酸;二级结构预测表明,该蛋白含约40.48%的α螺旋,12.99%的延伸串,6.5%的β转角,40.03%的不规则卷曲;蛋白保守结构域分析发现其含有海藻糖酶特有的保守位点,与其他植物病原真菌中海藻糖酶基因有51%-86%同源性;利用SignalP3.0软件预测谷子弯孢海藻糖酶蛋白具有信号肽。通过染色体步移技术克隆得到其上游启动子序列,利用TFSEARCH软件分析含有多个与逆境胁迫相关的顺式作用元件,初步推测该基因与逆境胁迫相关。谷子弯孢病菌ClTRE基因及其启动子的克隆,为进一步研究该基因在病菌致病中作用以及以该基因为靶位点的化学防控奠定基础。 展开更多
关键词 谷子弯孢病菌 海藻糖酶 基因克隆 染色体步移 生物信息学
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棉铃虫中肠P450 CYP6B6基因5′上游序列的克隆及序列分析 被引量：2
12
作者 张雷 张学涛 +2 位作者 马纪 李芬 刘小宁 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期127-133,共7页
已证实2-十三烷酮等植物次生物质的胁迫会诱导棉铃虫(Helicoverpa armigera)CYP6B6基因的过量表达[1]。为探明棉铃虫P450 CYP6B6基因的表达调控机制,根据棉铃虫中肠P450 CYP6B6基因cDNA序列(GenBank登录号:AY950636),运用基因组步移的... 已证实2-十三烷酮等植物次生物质的胁迫会诱导棉铃虫(Helicoverpa armigera)CYP6B6基因的过量表达[1]。为探明棉铃虫P450 CYP6B6基因的表达调控机制,根据棉铃虫中肠P450 CYP6B6基因cDNA序列(GenBank登录号:AY950636),运用基因组步移的方法获得其5′上游区的序列,用启动子区的分析软件进行比对分析,结果得到棉铃虫P450 CYP6B6基因5′上游区域1 333 bp的基因片段。分别运用NNPP v.2.2和TRANSFAC v.6.0预测转录起始位点及分析了转录因子结合位点,结果显示,该序列不仅包括TATA盒等这一类核心结构序列,还含有多个转录因子的结合位点,如GATA-1、Dfd、C/EBP、HSF、cytR和AhR(芳香烃受体化合物应答元件)等。该结果为深入研究棉铃虫P450 CYP6B6的表达调控机制及其参与杀虫剂抗性的研究奠定分子基础。 展开更多
关键词 棉铃虫 细胞色素P450 CYP6B6基因 基因组步移 5′上游区域
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生防细菌NCD-2中抑菌功能相关基因的定位及克隆 被引量：10
13
作者 郭庆港 李社增 +1 位作者 鹿秀云 马平 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2007年第6期190-194,共5页
枯草芽孢杆菌NCD-2菌株是一株有效防治棉花黄萎病的细菌,它通过产生抑菌物质达到对大丽轮枝菌的抑制作用。以该菌株作为有效成分的微生物农药已通过国家农药登记。通过原生质体转化法将含有转座子mini-Tn10的质粒pHV1249转入枯草芽孢杆... 枯草芽孢杆菌NCD-2菌株是一株有效防治棉花黄萎病的细菌,它通过产生抑菌物质达到对大丽轮枝菌的抑制作用。以该菌株作为有效成分的微生物农药已通过国家农药登记。通过原生质体转化法将含有转座子mini-Tn10的质粒pHV1249转入枯草芽孢杆菌NCD-2中,获得转化子。对转化子通过高温诱导转座子转座,获得4 000个NCD-2菌株的突变子。对这些突变子进行对大丽轮枝菌的抑菌作用测定,筛选到2株抑菌作用增强的突变子和4株抑菌作用降低的突变子。采用染色体步移技术对此6个突变子中转座子插入位点基因的侧翼序列进行克隆和测序,结合枯草芽孢杆菌168菌株的全基因组序列对测序结果进行序列同源性和基因定位分析,结果表明:抑菌作用增强的2个突变子中,转座子插入到一个功能未知的基因内部,此基因与枯草芽孢杆菌168菌株中的yvoA基因的同源性为98%;抑菌作用降低的4个突变子中,转座子插入位点对应于枯草芽孢杆菌168菌株中的phoP基因内部,插入位点的侧翼序列与枯草芽孢杆菌168菌株中的phoP基因的同源性达到98%。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 转座子mini-Tn10 染色体步移法 大丽轮枝菌 双调控系统
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长穗偃麦草DREB类基因EeAP2.2的克隆与序列分析 被引量：9
14
作者 默韶京 刘桂茹 郎明林 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期764-769,共6页
结合RACE和Genome Walking技术从十倍体长穗偃麦草中克隆了AP2家族的一个全长cDNA序列,命名为Ee-AP2.2。序列分析表明,该基因具有一个837bp的开放阅读框,编码279个氨基酸残基,含有一个保守的AP2结构域,是AP2大家族的一个新成员。该基因... 结合RACE和Genome Walking技术从十倍体长穗偃麦草中克隆了AP2家族的一个全长cDNA序列,命名为Ee-AP2.2。序列分析表明,该基因具有一个837bp的开放阅读框,编码279个氨基酸残基,含有一个保守的AP2结构域,是AP2大家族的一个新成员。该基因编码的氨基酸序列与GenBank已有的普通小麦AP2家族两个同源基因编码蛋白TaDREB1和TaDREBW50(登录号分别为:AAL01124.1和AAY44605.1)具有98%的氨基酸序列一致性,与大麦AP2蛋白HvDREB1-a(登录号AAY25517.1)、高羊茅AP2蛋白FaDREB2A(登录号CAG30547.1)及水稻OsDREB2.2(登录号AY064403)的氨基酸序列一致性分别为93%、86%和69%。说明该基因与小麦AP2家族基因的同源性最高。本研究除获得了长穗偃麦草一个重要抗逆转录因子基因EeAP2.2的全长cDNA序列外,也提供了一种快速、有效克隆功能基因的方法。 展开更多
关键词 长穗偃麦草 DREB RACE genomE walking 基因克隆
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2种PCR方法扩增盐藻肌动蛋白基因3’旁侧序列比较 被引量：6
15
作者 姜国忠 谢华 +2 位作者 郭玉忠 范天黎 薛乐勋 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2004年第1期41-44,共4页
目的 :比较扩增盐藻肌动蛋白基因 3’旁侧序列的 2种PCR方法。方法 :用pvuⅡ、EcoRⅤ和StuⅠ 3种限制性内切酶消化盐藻基因组DNA后 ,供 2种PCR用 ,一种是连接介导法PCR(LMPCR) ,与用人工合成的适配子相连并用适配子引物和盐藻肌动蛋白... 目的 :比较扩增盐藻肌动蛋白基因 3’旁侧序列的 2种PCR方法。方法 :用pvuⅡ、EcoRⅤ和StuⅠ 3种限制性内切酶消化盐藻基因组DNA后 ,供 2种PCR用 ,一种是连接介导法PCR(LMPCR) ,与用人工合成的适配子相连并用适配子引物和盐藻肌动蛋白基因特异引物扩增未知序列 ;另一种是反向PCR(IPCR) ,酶切后的DNA自身环化做模板 ,用 2对基因特异引物反向扩增。结果 :2轮PCR后 ,LMPCR中得到大量的非特异扩增产物 ,测序结果发现许多产物是由适配子引物AP2单独扩增引起。而反向PCR在得到pvuⅡ和StuⅠ消化的自连文库中扩增得到 2 .5kb特异产物 ,经测序发现 ,片段两侧为基因特异引物 ,部分序列与已知序列相一致。Southern也进一步证实了IPCR扩增片段来源于盐藻基因组DNA。结论 :IPCR技术在克隆基因旁侧序列时优于LMPCR方法。 展开更多
关键词 反向PCR 连接介导法PCR 盐藻 肌动蛋白 旁侧序列cDNA 简并引物
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花生β-1,3-葡聚糖酶基因启动子的克隆及功能分析 被引量：10
16
作者 王合春 陈新利 +3 位作者 隋炯明 毕英娜 王晶珊 乔利仙 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期864-870,共7页
植物β-1,3-葡聚糖酶属于一种重要的植物病程相关蛋白(PR蛋白),容易受到激发子的诱导而积累。用1.5 mmol/L水杨酸(SA)对花生品种花育20号幼苗进行诱导处理0.5、12、24、36、48和72 h后,提取RNA进行荧光定量检测β-1,3-葡聚糖酶基因(Ah-G... 植物β-1,3-葡聚糖酶属于一种重要的植物病程相关蛋白(PR蛋白),容易受到激发子的诱导而积累。用1.5 mmol/L水杨酸(SA)对花生品种花育20号幼苗进行诱导处理0.5、12、24、36、48和72 h后,提取RNA进行荧光定量检测β-1,3-葡聚糖酶基因(Ah-Glu)的表达量。结果表明,经诱导24 h后β-1,3-葡聚糖酶基因的表达量达到最高,是未经SA诱导的1.8倍。根据前期已克隆的花生β-1,3-葡聚糖酶基因序列(GenBank JQ801335),在其5'端设计3个嵌套的特异性引物扩增其上游启动子序列。以花育20号基因组DNA为模板,利用TAIL-PCR方法,扩增得到973 bp的花生β-1,3-葡聚糖酶基因启动子片段,在NCBI网站注册序列号为GenBank KC290400,并命名为Ah-Glu-Pro。PLACE和PlantCARE在线预测分析表明,Ah-Glu-Pro序列中含有TATA-box和CAAT-box等核心元件,还含有病原菌及水杨酸响应的顺式调控元件。根据Ah-Glu-Pro序列设计上下游引物,采用普通PCR法从花育20号扩增得到931 bp的启动子序列,命名为Ah-Glu-P。将Ah-Glu-P取代pCAMBIA1301质粒中的CaMV35S启动子,构建植物表达载体pCAMBIA1301-Ah-Glu-P。通过农杆菌介导法将pCAMBIA1301-Ah-Glu-P转化洋葱表皮细胞,经5 mmol/L SA诱导处理48 h后进行GUS染色。结果表明:经SA诱导后的洋葱表皮细胞GUS组织化学染色显示为蓝色,未经SA诱导的洋葱表皮细胞GUS组织化学染色未显示蓝色,说明Ah-Glu-P是一个可被诱导的启动子,可能含有对SA响应的顺式调控元件。 展开更多
关键词 花生 β-1 3-葡聚糖酶基因(Ah-Glu) 诱导型启动子 染色体步移 表达载体
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棉铃虫细胞色素P450 CYP9A12基因5′-上游区的克隆及序列分析 被引量：8
17
作者 周颖君 杨亦桦 +1 位作者 武淑文 吴益东 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期120-125,共6页
细胞色素P450基因CYP9A12的过量表达已被证实与棉铃虫Heliocverpa armigera对拟除虫菊酯的抗性相关。为探明棉铃虫CYP9A12基因的表达调控机理,根据棉铃虫CYP9A12基因cDNA全长的5′-末端核苷酸序列,采用基因组步移方法,获得CYP9 A12的5′... 细胞色素P450基因CYP9A12的过量表达已被证实与棉铃虫Heliocverpa armigera对拟除虫菊酯的抗性相关。为探明棉铃虫CYP9A12基因的表达调控机理,根据棉铃虫CYP9A12基因cDNA全长的5′-末端核苷酸序列,采用基因组步移方法,获得CYP9 A12的5′-上游区序列(总长为3575bp)。与cDNA序列进行比对,表明在起始密码子上游3bp处有一长为2124bp的内含子。利用NNPP分析软件预测出转录起始位点,与根据CYP9A12全长cDNA序列推测的结果是一致的。TFSEARCH 1.3软件分析转录因子结合位点的结果显示,该序列不仅包含启动子的核心结构序列——TATA-box和CAAT-box,亦包含多个转录因子结合位点,如GATA-1,CdxA,Dfd等。本研究结果为深入研究棉铃虫CYP9A12的表达调控机制及其参与杀虫剂抗性的分子机理奠定了一定基础。 展开更多
关键词 棉铃虫 细胞色素P450 CYP9A12 基因组步移 5′-上游区
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青枯菌拮抗菌2-Q-9的分子鉴定及抑菌相关基因的克隆 被引量：8
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作者 张旭 陈武 +2 位作者 杨玉婷 黎定军 黄三文 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期233-236,共4页
通过16SrDNA碱基序列的测定和同源性分析,鉴定青枯菌拮抗菌2-Q-9与桥石短芽孢杆菌(Brevibacillus choshinensis)亲缘关系最近,其16SrDNA序列提交GenBank,登录号为FJ613127.根据已测得的该拮抗菌外泌抗菌肽氨基酸序列中的一段设计简并引... 通过16SrDNA碱基序列的测定和同源性分析,鉴定青枯菌拮抗菌2-Q-9与桥石短芽孢杆菌(Brevibacillus choshinensis)亲缘关系最近,其16SrDNA序列提交GenBank,登录号为FJ613127.根据已测得的该拮抗菌外泌抗菌肽氨基酸序列中的一段设计简并引物,利用染色体步移法得到全长序列780bp,经测序和BLAST比对分析表明,该基因属于CodY家族,与已鉴定的转录因子抑制剂CodY(ZP_01171531)的同源性最高;表现在氨基酸水平的相似性为77%,其序列全长已提交GenBank,登录号为FJ613128. 展开更多
关键词 烟草青枯病 拮抗菌 分子鉴定 染色体步移
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抗除草剂转基因大豆插入拷贝数及其旁侧序列分析 被引量：7
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作者 仇有文 高学军 +3 位作者 张明辉 敖金霞 袁肖寒 刘营 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期31-35,共5页
目的:确定抗除草剂转基因大豆外源基因拷贝数和其插入位点侧翼序列。方法:采用绝对定量PCR法测定转EPSPS基因大豆中外源基因拷贝数,内参照基因标准曲线选用大豆凝集素(Lectin)基因为标准品,外源基因标准曲线以含EPSPS基因的阳性质粒为... 目的:确定抗除草剂转基因大豆外源基因拷贝数和其插入位点侧翼序列。方法:采用绝对定量PCR法测定转EPSPS基因大豆中外源基因拷贝数,内参照基因标准曲线选用大豆凝集素(Lectin)基因为标准品,外源基因标准曲线以含EPSPS基因的阳性质粒为标准品。采用基因组步移技术和巢式PCR方法确定抗除草剂转基因大豆插入位点旁侧序列。结果:抗除草剂转基因大豆外源基因的拷贝数为1。CaMV35S上游扩增887bp,NOS下游扩增1 340bp。结论:明确了EPSPS外源基因在转基因大豆中为单拷贝,转基因大豆插入位点附近大豆基因组发生了DNA重排。 展开更多
关键词 抗除草剂转基因大豆 旁侧序列 拷贝数 基因组步移 接头PCR
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坛紫菜胞质型抗坏血酸过氧化物酶基因的克隆及特征分析 被引量：6
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作者 张晓龙 杨锐 +3 位作者 仪茜茜 孙雪 吴晓微 王亚军 《海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期165-174,共10页
关键词 抗坏血酸过氧化物酶 坛紫菜 RACE 基因组步移 克隆
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